凝血讲义2019-10-28-精品文档

免疫学测定

从理论上讲，免疫学测定不可能全部取代功能 测定。因为免疫学测定的仅是该因子的抗原性， 只能表明体内存在该因子，但却不能说明其是 否有生物活性，而功能测定则是测该因子在凝 血或纤溶中的生理生化功能。
化学测定

理论根据是：许多凝血、抗凝及纤溶因 子本身是水解酶，可以用人工合成含有 该酶酶切位点并带有色原（指示剂）的 寡肽作为底物，用常规的生化比色法加 以测定。国内外已有一些合成的底物用 于测定，诸如ATⅢ、凝血酶、FⅨ、 FⅩa，以及纤溶酶等等。
血 栓 与 止 血 检 测
血栓与止血检测
一、止血、凝血和纤溶机制
二、凝血及纤溶实验室检测进展
四、目前开展血凝项目的临床意义 五、常见分析错误的原因分析
血 栓 与 止 血 检 测
一、止血、凝血和纤溶机制 （一）血管壁的作用 1 . 血管的收缩（神经反射；内皮素、血管 紧张素；TXA2、5-HT）。 2. 血小板的激活（表达并释放血管性血友病因 子vWf，导致血小板在损伤部位黏附和聚集）。 3. 启动内、外源凝血（因子Ⅻ的激活和组织因子 TF的释放）。 4. 局部血黏度增高。
三、凝血及纤溶实验质控



质量是医学检验工作的生命线，是当今医学检验工作 中的关键问题 凝血与纤溶检验质量，关键在于诊断试剂。 以往，大量凝血检测试剂由于各实验室自行制备，手 工操作难以达到规定的质量标准和全国、全球标准化， 也难以达到室内、室间质控的要求 为此WHO和血栓和止血委员会（ICTH）制定了一些 标准或提供少数统一的标准品供各国校准各种试剂和 方法。国内市场上能购到的商品试剂来源，国外主要 有美国、法国；国内有天津、上海、北京、福建等。
纤维 蛋白
凝血 因子
降解为X、Y、D、E等碎片，生成D-D、r-r二聚体。上述 碎片多聚体统称为FDP
抗血小板聚集及抗血液凝固作用
二、凝血及纤溶实验室检测进展


血液凝固是一个复杂的生理生化代谢过程 实质是通过一系列酶促反应，使血浆中呈液态 的纤维蛋白原转变成固态的纤维蛋白丝，因而 凝血是属于生理生物化学范畴的课题 涉及血液学、分子生物学和免疫学等诸多领域 由于这些相关学科研究的日益深入，不断地给 凝血的理论和实践注入新的内容，因此，在测 定方法学上也由过去精密度低的方法过渡到精 密度高的方法。
(weak)
Fibrinogen
X 与 止 血 检 测
（四）抗凝血系统的作用
1.细胞抗凝作用：包括单核巨噬细胞、肝细 胞、血管内皮细胞 2.体液抗凝作用
抗凝血酶Ⅲ （AT-Ⅲ） 蛋白C和蛋白S 肝素介导下 灭活凝血酶、FⅨa、FⅩa、 FⅪa、FⅫa 灭活FⅤa、FⅧa 激活纤溶系统
功能测定


PT测定是检测凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的过 筛试验，要用统一标有国际敏感指数(ISI)的凝 血活酶试剂，在抗凝治疗监控和决定用药剂量 时，一定要用国际标准化比率(INR)报告 APTT是公认较好的检测“内源性”凝血因子 缺陷的过筛试验，基本上可用于代替了过去的 凝血时间测定，凝血时间的测定不管是玻片法 还是试管法，都过于粗糙，敏感性太差。以前 用于个别凝血因子缺乏的一些“纠正”试验以 及所谓的“凝血活酶生成”试验，都因操作繁 琐，敏感性不高，已经淘汰
血 栓 与 止 血 检 测
（三）凝血因子的作用 (目前至少有14种) • 包括12个经典的凝血因子（因子I-XIII,除因 子VI)以及激肽释放酶原（PK）、高分子量激肽 原(HMWK). • 除因子IV（Ca2+）外，其他均为蛋白质 • 除因子III(TF)外，其他均存在于血浆中 • 整个凝血过程分三期： 凝血活酶形成期 凝血酶形成期 纤维蛋白形成期
凝血及纤溶检测方法


凝血及纤溶检测项目越来越多， 目前应用的实验大体分为：筛筛选试验 和确证试验 方法学上又可分为三大类： 功能测定 免疫学测定 化学测定
功能测定


即传统的最终以出现纤维蛋白作为判断 依据的方法 如凝血酶原时间（PT）、活化的部分凝 血活酶时间（APTT）、凝血酶时间 （TT），以及用各种缺乏因子血浆测定 某一凝血因子含量的方法等
TFPI
灭活TF/Ⅶa、FⅩa
血 栓 与 止 血 检 测
（五）纤维蛋白溶解（纤溶）系统的作用
组织型纤溶 酶原激活物 （ α2-AP） 降解 （t-PA） 尿激酶型纤 溶酶原激活物 (u-PA)
纤溶酶原激活抑 抑制物－PAI１、 PAI2 α２抗纤 纤溶酶
激活 纤溶酶原 （PLG）
纤溶酶 （PL）
纤维蛋 白原
Intrinsic XII,XI,IX,VIII (APTT)
Extrinsic-VII (PT)
Common Path (TT) FX FXa
Prothrombin Thrombin
Fibrinogen Fibrin
Intrinsic Pathway
Extrinsic Pathway
血 栓 与 止 血 检 测
（三）凝血因子的作用 1 .外源性凝血途径 2 .内源性凝血途径 3 .凝血共用途径 注意
① 12个凝血因子除FⅢ、FⅣ、和 部分 FⅧ外，主要产生于肝脏。 ② FⅡ、FⅦ、FⅨ、FⅩ是维生素K依赖因子 ③ 血友病（甲、乙、丙）三种分别缺少FⅧ、 FⅨ、FⅪ，均影响内源性凝血途径。
免疫学测定


是近年来发展最快的检测方法，其原理是以纯 化的被检物质为抗原，制备相应的抗体，然后 用抗原抗体反应原理对被检物质进行定性或定 量测定 其方法采用ELISA、胶乳微粒凝集、火箭电泳 等方法。对许多新发现的抗凝因子，纤溶和纤 溶抑制因子，纤维蛋白原裂解，纤维蛋白原和 纤维蛋白降解产物，凝血酶原活化等过程中被 切下的小肽，如我们目前开展的FDP、D-二聚 体等的测定，基本上都用免疫学方法检测
血 栓 与 止 血 检 测
（二）血小板的作用 1. 形成血小板血栓(白色血栓)，机械性修复受 损血管。 2.血管受损→GPⅠb →经vWf → 粘附 3. 释放血小板第三因子（PF3）直接参与凝血反 应。 4. 活化血小板在前激肽释放酶及高分子量激肽 原存 在的条件下，直接激活FⅫ及FⅪ。 5. ADP(来自红细胞)、凝血酶、胶原→血小板 →GPⅡb/Ⅲa →结合Fg
IX XI XIIa HKa XIa IXa
TF Pathway
TF-VIIa
PL PL VIIIa
(Tenase)
X
Prothrombin
PL
XIII
X a Va (Prothrombinase)
Protein C, Protein S, Antithrombin III
Thrombin
Fibrin