人非小细胞肺癌裸鼠原位种植转移模型的建立实验具体步骤及方法
人肺腺癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立
有 利 于后 续 体 内实 验 。 【 键词 】裸 鼠 ；动 物模 型 ；Ｓ Ｃ Ａ １细胞 株 ； 肺腺 癌 关 Ｐ —一 【 图 分 类号 】 Ｒ ３ ；Ｒ７ ４ ２ 【 中 ３２ ３ ． 文献 标 识 码】 Ａ 【 章 编 号 １ １ ０ — ６ ０ ２ １ ） １０ ８ — ３ 文 ０ ２２ ０ （ ０ ０ ０ — ０ ００
ａ ｏ ｔ（ ９ ２ ± ３ ８ ） ｍｍ ｎ （ ４ ９ ± ２ ７ ） ｍｍ ｅ ｐ ｃ ｉ ｅｙ ２ ａ ｓ ｌｔ ｒ ｎ ｈ ｖ ｒ ｇ ｏ ｕ ｆ ｈ ｍ ｓｃ ｌｕ ａ ｅ ｏ ｂ ｕ １． ０ ．５ ａ ｄ １． ４ ．８ ｒ ｓ ｅ ｔ ｌ ８ ｄ ｙ ａ ｅ ，ａ ｄ ｔ ｅ ａ ｅ ａ ｅｖ ｌ ｍｅｏ ｅ ｗａ ａ ｃ ｌｔ ｄ ｔ ｖ ｔ ｂ ｂ ｕ ２ １ ４ １ ｅ ａ ｏ ｔ（ ４ ． ０± １ ２ ７ ７ ） ｍｍ。 Ｔｈ ｖ ． ７± ０ ６ ｇ Ｍ ｏ ｔ ｔａ ｓ ｌ ｎ ｅ ３． ２ ． ｅ ａ ｅ ａ ｅ ｗｅ ｇ ｔ ｗａ ａｃ ｌｔ ｄ ｔ ｅ ａ ｏ ｔ １ ３ ． ） ． ｓ ｒ ｎ ｐ ａ ｔ ｄ
关于人胃癌裸鼠原位移植和转移模型的建立及其生物学特性观察
关于人胃癌裸鼠原位移植和转移模型的建立及其生物学特性观察【摘要】目的建立一种能很好模拟人体内生物学行为的胃癌裸小鼠原位移植和转移模型。
方法采用人胃癌SGC-7901细胞株在裸鼠皮下经反复传5代形成实体瘤的完整组织块，建立人胃癌裸小鼠原位移植生长和转移模型16个。
观察所建立的模型肿瘤生长状况、移植成功率和自发转移的发生率，常规H-E染色光镜下观察胃癌原位移植瘤、胃癌淋巴结转移和肝转移情况。
电镜下观察肿瘤超微结构及免疫组化S-P法检测肿瘤诱导型环氧化酶-2（COX-2）。
结果胃癌裸鼠原位移植块再次原位移植的原位成瘤率达100％（16/16），淋巴结广泛转移率为87.5%（14/16），肝转移发生率为75.0％（12/16），腹腔积液形成率为12.5%（2/16）。
结论原位移植和转移模型均具有人胃癌自然生长过程的特点，具有人胃癌的生物学活性。
【关键词】胃肿瘤肿瘤细胞原位移植疾病模型裸小鼠Abstract： Objective To develop a nude mouse model of human gastric cancer that can mimic its natural human biologic activities. Methods Human gastric cancer cell line SGC-7901 was cultured in nude mice repeatedly for 5 generations to get the subcutaneous solid tumor， which was then emulsified and orthotopicly inplanted into the anterior wall of the stomach in 16 nude mice. The tumor growth characters， tumor-take rate and metastatic rate were studied grossly， the transplanted tumor and its lymphatic and hepatic metastases， after routine H-E staining; the ultrastructures， by electron microscopy; and COX-2， by immunohistochemical method． Results The tumor-take rate was 100％（16/16）， the rates of metastasis to lymph nodes and liver were 87.5％（14/16） and 75.0％（12/16） respectively， the rate of ascites formation was 12.5%（2/16）. Conclusion The model of human stomach cancer established is qualified， exhibiting natural growth characters and biological activities.Key words: stomach neoplasms; orthotopic thansplantation; disease model; nude mouse既往胃癌动物模型的建立多采用皮下接种方式，虽然这种移植方式简单易行，肿瘤的生长情况也便于观察，且在一定程度上也近似地模拟了原有肿瘤的形态学、生物学及生物化学特性；然而接种于裸小鼠皮下组织毕竟属于异位移植，脱离了其起源组织器官的微环境，因此在实验中移植瘤的某些行为常不同于患者原发恶性肿瘤的生物学行为。
裸鼠荧光原位移植非小细胞肺癌模型转移相关microRNAs的研究_王蓉
×实验研究Ø裸鼠荧光原位移植非小细胞肺癌模型转移相关microRNAs的研究王蓉1,2,束永前1,21.南京医科大学第一附属医院肿瘤科,江苏南京2100292.南京医科大学肿瘤中心,江苏南京210029Metastasis-associated microR N As in n on-small cell lu ng cancer u sin g fluorescentorth otopic implantation mouse modleW A N G Rong1,2,SH U Yong-qian1,21.D ep ar tment of Oncology,F irs t A f f iliated H os p ital w ith N anj ing Medical Univers ity,N anj ing210029,P.R.China2.Oncolog y Center,N anj ing M edical Univer sity,N anj ing210029,P.R.China=摘要>目的:筛选与非小细胞肺癌(N SCLC)转移相关的micro RN A s,为研究其在转移过程中发挥的作用提供理论基础。
方法:用荧光转染的人NSCL C细胞株H460皮下成瘤后原位移植于裸鼠左肺获取原发灶与转移灶组织标本。
通过m-i croR NA芯片检测和R T-PCR验证筛选与转移相关的差异micr oRN A s,并对其做生物信息学分析。
结果:N SCLC有转移原发灶比无转移原发灶(A组)上调的micro R-N As共17个,下调的7个;转移灶比转移原发灶(B组)上调的microR NA s共20个,下调的16个。
A组中表达上调的有miR-10b和miR-144,下调的有miR-9、miR-31和miR-34b;B组中表达下调的有miR-25、miR-92a、miR-202和miR-326,它们可能受转录因子AP-1、p53、STATs和NF-J B等调控,作用于RAR B、RASSF1和E2F-1等靶基因,发挥调控细胞增殖周期、细胞发育过程、DN A和RNA代谢及信号传导通路的作用,促进肿瘤生长和转移。
裸鼠皮下移植瘤实验造模步骤
裸鼠皮下移植瘤实验造模步骤顾名思义，这种模型的建立是将肿瘤细胞或肿瘤组织直接种植在小鼠的皮下。
种植的点也有讲究，一般选择血运淋巴回流丰富的腹股沟和腋窝。
可根据实验设计选择移植点，统一移植点的位置，除了遵守实验统一的条件外，待肿瘤成熟后收集肿瘤时留下照片证据也显得美观。
裸鼠（Balb/c 鼠，无毛发， T 淋巴细胞缺陷）是比较常见和常用的实验用鼠，尤其是在皮下移植瘤肿瘤模型的建立中起到重要作用。
裸鼠移植瘤模型的建立具有建立周期短、成瘤率高、易于操作、成本低的优点。
当然，这种肿瘤模型也有缺陷，即不能很准确的模拟正常人体肿瘤发生发展的过程。
☞肿瘤细胞移植时的简要步骤首先准备好要移植的肿瘤细胞（细胞量根据不同肿瘤略有不同，我们所用的前列腺癌细胞系每个移植点一般选择1x106 左右；肿瘤细胞可与基质胶 1:1 混匀后用 1 ml 注射器吸取，基质胶能够给肿瘤细胞提供营养环境，有助于肿瘤细胞生长）。
戴无菌手套后，将小鼠用左手大拇指和食指捏住颈部皮肤，然后将鼠尾用左手无名指和小指固定于左手大鱼际。
将腋窝或腹股沟用75% 酒精消毒3 次。
右手持吸有肿瘤细胞和基质胶混合液的注射器，在腹股沟或腋窝的位置，45 度斜角进针，注意不要突破腹膜，将针头保持于皮下位置。
然后近水平位置将针头几乎完全插入皮下，将混有基质胶的肿瘤细胞注射入皮下（肿瘤细胞量约1x106），快速退针，左手食指轻压针孔约1 min 后将小鼠放回饲养笼中，注意将小鼠侧放于垫料上，放置其不适呕吐时呕吐物误入呼吸道引起窒息。
2～3 h 后观察小鼠是否苏醒。
如果是利用肿瘤组织（人体肿瘤标本或小鼠移植瘤传代）建立裸鼠皮下移植瘤模型，则需要首先将肿瘤组织用无菌PBS（或1640 培养基）洗涤3 次，然后在无菌平皿上切成或用无菌剪刀剪成<1 mm3体积的小块（种植前可裹基质胶）备用。
将小鼠用水合氯醛麻醉后平卧于解剖板上，四肢用胶带固定，将腋窝或腹股沟用 75% 酒精消毒 3 次，然后用眼科剪剪开约 0.5 cm 小口，小镊子将皮下筋膜与皮肤分开，然后将肿瘤组织放入贴近腹股沟或腋窝的深部，每个位置放置 2～3 块肿瘤组织，注意不同组间统一放置肿瘤组织块数以保持一致。
个体化裸鼠荷人肺癌肿瘤模型的建立
499
doi:10.3969/j.issn.0253-9896.2012.05.026
个体化裸鼠荷人肺癌肿瘤模型的建立
王晓东 孙大强△ 李 志 白 悦
摘要 目的：建立人肺癌个体化可传代组织块动物模型。方法：组织块移植组将直径 2 mm 的人肺癌新鲜标本癌 组织块移植于 BALB/C 裸鼠背部皮下组织内，每例人肺癌新鲜标本均移植入 5 只裸鼠体内，成瘤者为第 1 代。取第 1 代 移植瘤组织块以相同方法每例标本移植于另 5 只 BALB/C 裸鼠背部皮下组织内，成功者为第 2 代。重复上述传代方法 得到第 3 代移植瘤。将人肺癌细胞株 A549、H1795 分别移植于 BACL C 裸鼠背部皮下组织内，成瘤达 500 mm3后取癌 组织块。分别取实验组的原代人肺癌肿瘤及第 1、2、3 代移植瘤部分组织，及作为对照的细胞系移植瘤组织，固定于 10%福尔马林溶液中，石蜡包埋、切片、HE 染色，光镜下观察比较其形态异同。结果：组织块移植组瘤细胞不仅保留 了人肺癌细胞的异型性，还保持原有排列结构；而作为对照的细胞系移植瘤细胞失去了原有的排列结构，仅保留了癌 细胞的异型性。结论：利用不同患者的手术切除肺癌标本所建立的裸鼠荷人肺癌肿瘤模型具有个体化特征，为肺癌 个体化治疗的研究提供依据。
病理诊断 鳞状细胞癌 鳞状细胞癌
腺癌 腺癌 鳞状细胞癌 腺癌 鳞状细胞癌 鳞状细胞癌 腺癌 腺癌 鳞状细胞癌 鳞状细胞癌 腺癌 鳞状细胞癌
瘤细胞生长失去了原有的排列结构，只保持了细胞 异型性的一致，见图 1~4。
3 讨论 肺癌是对人类威胁最大的疾病之一。肺癌动
物模型的建立是研究癌变机制、抗癌药检测、癌分 子生物学极其重要的手段。利用肺癌细胞株种植 于裸鼠及 SCID 小鼠进行异种肿瘤移植已经成为建 立肺癌动物模型的主要方法。目前已建成的各种 肺癌细胞株，近年我国已建成很多肿瘤细胞系，并 获得越来越广泛的应用 。 [6-7] 但在使用这些细胞系 时，应持特别审慎态度，主要是应考虑到这些细胞 在长期传代中是否有发生遗传性改变的可能。众 所 周 知 ，长 期 传 代 细 胞 系 染 色 体 核 型 常 是 不 稳 定 的，另外也可能发生如基因突变、基因易位或缺失 等变化，其结果可能导致细胞产生生物学性状上的 变动。以近年建成的各种肺癌细胞系为例，都已传 代少则几十，多则百代以上后，才确认建成了细胞 系，这就很难保证细胞从初代到建成时的性状仍是 一致的。本研究利用人肺癌组织块种植的模型成 瘤后的癌组织细胞，不仅保留了原代癌细胞的异型 性，还保留了细胞排列顺序的一致性。而细胞的结 构和排列顺序是其生物学行为的基础，因此本研究 的动物模型对于进一步的个体化治疗的研究更 有效。
人乳腺癌的裸鼠移植模型的制作讨论(一)2024
人乳腺癌的裸鼠移植模型的制作讨论（一）引言概述：人乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，研究人乳腺癌的病理机制和新型治疗方法对于提高乳腺癌患者的治疗效果具有重要意义。
裸鼠移植模型作为一种重要的实验模型，在研究人乳腺癌中起着关键的作用。
本文将讨论人乳腺癌裸鼠移植模型的制作方法和相关注意事项。
正文：1. 选择裸鼠种类：- 了解裸鼠种类的特点和应用范围- 考虑使用的乳腺癌细胞系和裸鼠种类的适配性- 考虑裸鼠的耐受性和维护成本等因素2. 人乳腺癌细胞系的选取：- 选择与研究需求匹配的人乳腺癌细胞系- 考虑细胞系的来源、传代数和特殊基因改造等因素- 确保细胞系的纯净性和生长状态3. 裸鼠移植模型的建立：- 麻醉裸鼠并准备手术场所和器械- 选择合适的手术方法：正常组织移植、原位肿瘤移植等- 控制操作时间和温度，在手术中保证裸鼠的生命安全4. 裸鼠移植后的观察和评价：- 监测裸鼠移植部位的肿瘤生长情况- 测定肿瘤体积和质量等指标- 运用影像学和组织学等方法评估移植肿瘤的特征和转移能力5. 实验数据的分析与解释：- 对裸鼠移植模型进行数据统计和分析- 比较不同实验组间的差异和相关性- 结合其他实验结果和临床数据解释实验结果的意义总结：人乳腺癌裸鼠移植模型的制作是研究乳腺癌病理机制和治疗方法的重要实验手段。
通过选择合适的裸鼠种类和人乳腺癌细胞系，进行细致的手术操作和观察评价，以及对实验数据的严谨分析，可以获得可靠的实验结果，并进一步深入了解乳腺癌的发生发展机制，为治疗提供理论依据。
但在使用裸鼠移植模型进行实验时，也需遵守伦理和动物保护的原则，确保实验的科学性和可行性。
《2024年人绒癌裸鼠原位移植瘤模型、转移瘤模型的构建及二氢杨梅素对裸鼠转移瘤生长的影响》范文
《人绒癌裸鼠原位移植瘤模型、转移瘤模型的构建及二氢杨梅素对裸鼠转移瘤生长的影响》篇一一、引言人绒癌是一种常见的恶性肿瘤，其发生和转移给临床治疗带来了巨大的挑战。
为了更好地研究人绒癌的生物学特性和治疗策略，建立有效的动物模型至关重要。
裸鼠作为实验动物，因其生理构造与人类相似，成为建立人绒癌移植瘤模型的首选动物。
本文旨在探讨人绒癌裸鼠原位移植瘤模型及转移瘤模型的构建方法，并分析二氢杨梅素对裸鼠转移瘤生长的影响。
二、人绒癌裸鼠原位移植瘤模型及转移瘤模型的构建1. 实验材料与方法（1）细胞株：选用人绒癌细胞株。
（2）裸鼠：选取健康的裸鼠作为实验动物。
（3）建模方法：通过将人绒癌细胞注射到裸鼠体内，构建原位移植瘤模型及转移瘤模型。
2. 模型构建过程（1）原位移植瘤模型构建：将人绒癌细胞注射到裸鼠子宫内，待肿瘤生长至一定大小后，进行相关指标的检测。
（2）转移瘤模型构建：通过静脉注射、腹腔注射等方式，将人绒癌细胞注射到裸鼠体内，待肿瘤发生转移后，观察并记录转移情况。
三、二氢杨梅素对裸鼠转移瘤生长的影响1. 实验材料与方法（1）二氢杨梅素：购买高质量的二氢杨梅素。
（2）实验分组：将裸鼠随机分为实验组和对照组，实验组裸鼠给予二氢杨梅素治疗。
（3）观察指标：观察并记录两组裸鼠的转移瘤生长情况。
2. 实验结果与分析（1）实验组裸鼠给予二氢杨梅素治疗后，转移瘤生长速度明显减缓，肿瘤体积较对照组小。
（2）通过病理学检查发现，实验组裸鼠的肿瘤细胞凋亡率较高，表明二氢杨梅素具有抑制肿瘤细胞生长的作用。
（3）进一步分析发现，二氢杨梅素可能通过抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭等途径，发挥抗肿瘤作用。
四、结论本文成功构建了人绒癌裸鼠原位移植瘤模型及转移瘤模型，为研究人绒癌的生物学特性和治疗策略提供了有效的动物模型。
此外，研究发现二氢杨梅素对裸鼠转移瘤生长具有明显的抑制作用，可能通过抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭等途径发挥抗肿瘤效果。
人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型的建立实验具体步骤及方法
人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型的建立实验具体步骤及方法先用组织学完整的新鲜人肝癌组织接种于裸鼠皮下，形成皮下移植瘤，然后用此移植瘤组织再接种于裸鼠肝内，建立肝原位移植瘤模型（间接肝原位移植瘤模型），并将其与直接肝原位移植瘤模型、皮下移植瘤模型和腹腔内移植瘤模型作比较。
一、间接肝原位移植瘤模型的制备1. 用新鲜的肝癌外科手术切除标本（来自长海医院，患者为1名47岁男性，病理诊断：肝左叶肝细胞癌，粗梁型，Ⅱ级），在Hanks液中，去除坏死组织和非癌组织后切成1～2 mm3小块。
2. 取2块瘤组织，在离体40 min内用粗针头植入裸鼠腰背部皮下，待皮下移植瘤长到直径约1 cm时切取肿瘤，在Hanks液中，去除坏死组织后切成1～2 mm3小块，裸鼠用戊巴比妥钠腹腔麻醉后，行左上腹横切口，暴露肝脏。
3. 取上述2块瘤组织，在离体40 min内用粗针头植入裸鼠肝右叶深部实质内，全层关腹。
二、直接肝原位移植瘤模型的制备1. 同一例新鲜肝癌手术切除标本，处理方法同皮下移植，裸鼠处理同间接肝原位移植，取2块瘤组织，在离体40 min内用粗针头直接植入裸鼠肝右叶深部实质内。
2. 皮下移植瘤模型和腹腔内移植瘤模型的制备。
三、病理检查和相关指标检测1. 解剖和组织学检查（1）所有裸鼠接种后，分组分笼饲养，自由进食，每天观察1～2次。
（2）当裸鼠处于全身衰竭状态时处死并作大体解剖，对接种瘤和转移瘤分别进行观察、测量，记录肿瘤侵袭和转移情况，重要器官（主要为肝和肺）经10%中性甲醛固定后，常规石蜡制片，光学显微镜检查。
2. 周围血甲胎蛋白(AFP)检测处死前，均采用摘眼球采血的方法获得血液，用生化法检测AFP的分泌量。
3. 瘤细胞DNA含量分析留取部分移植瘤标本采用流式细胞术进行DNA含量分析。
注意事项目前，肝癌的复发和转移仍然是其术后长期存活的主要障碍。
为了研究肿瘤的转移机制，建立接近于人体的肿瘤动物模型显得尤为重要。
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人非小细胞肺癌裸鼠原位种植转移模型的建立实验具体步骤及方法
将表达GFP的质粒pRNAT-U6/Neo转染人肺腺癌细胞A549，G418筛选获得稳定表达GFP细胞，对比转染前后细胞的生长活性和成瘤性。
将转染后细胞原位种植裸鼠预定标准处死。
HE染色和免疫组化检测转移灶的位置和数目。
利用KODAK IS2000MM系统检测肿瘤播散情况。
一、实验材料准备
1. BALB/c nu/nu裸鼠40只，雄性，4-6周龄，体重18-20 g，无特定病原体(SPF)级饲养。
2. 肺腺癌细胞株A549，用含10%小牛血清的RPMI 1640培养基(美国Gibcobrl公司)，5% CO237℃培养，常规传代。
3. 质粒和筛选药物质粒pRNAT-U6/Neo(美国Genscript公司)，携带Neomycin耐药基因供筛选，在CMV启动子控制下编码cGFP作为转染标记物。
G418(美国Promega公司)800 μg/ml初筛后200 ug/ml维持筛选。
二、细胞的转染
1. 哺乳动物磷酸钙转染系统(美国Promega公司)，按照操作指南将质粒pRNAT-
U6/Neoo转入A549细胞，转染后24~48 h荧光显微镜下观察转染效率。
2. 后培养液内加G418筛选获得稳定转染。
3. 利用平板克隆形成试验测定细胞克隆形成率>10%后，有限稀释法获得表达GFP阳性细胞。
4. 1月后收获转染细胞，常规传代培养，培养液中加G418(200 ug/ml)维持筛选。
5. 测定转染后A549细胞增殖动力学指标，对比转染前后A549细胞生长曲线，检测转染后细胞的生长活性是否受转染的影响。
6. 待细胞增殖达一定数量后，裸鼠皮下注射转染前后细胞，记录成瘤时间，用公式
V=1/2x长x宽计算肿瘤体积，对比转染前后两组裸鼠的瘤体大小以检测成瘤性是否有差别。
三、人肺腺癌A549裸鼠原位种植模型的建立
1. 取转染后细胞，用不含血清的RMPI 1640培养液冲洗2次并调整细胞最终浓度为
5x106/0.2 ml备用。
2. 用0.5%的戊巴比妥钠(50 mg/kg)(中国医药上海化学试剂公司)腹腔注射麻醉裸鼠，用26号针头吸取细胞悬液0.2 ml注射入裸鼠左侧胸腔，注射过程中注意控制刺入针头的深度。
3. 整个操作过程在细胞收获后半小时内完成，严格遵循无菌原则。
4. 注射后在KODAK IS2000MM下确认原位种植成功，注射部位为胸腔。
5. 注射后继续饲养，隔天观察一次并记录体重。
6. 当裸鼠出现精神萎靡、呼吸短促、弓背并明显消瘦，体重较注射Et减轻20%时，颈椎脱位术处死裸鼠。
7. 开胸观察，取出器官，用10%甲醛固定保存。
四、检查项目
1. 转染后细胞荧光显微镜成像转染后24～48 h荧光显微镜下观察，确认转染成功。
单克隆化过程中镜下观察细胞克隆生长情况。
2. 活体GFP标记成像检测应用KODAK IS2000MM进行活体荧光成像，确认注射部位为胸腔，后间断应用以活体确认瘤细胞的远处转移。
3. 解剖学与组织学检查处死的裸鼠均经
详细解剖学检查，取出器官、固定包埋后，以4 tun厚度连续切片，切片严格编号，奇数号行HE染色，光镜观察，以初步确定转移灶。
4. 免疫组织化学染色
选择肺脏、肝脏和脑作为主要研究器官，在HE染色确定转移灶位置的基础上，取相邻偶数号码的切片进行免疫组化检测，CEA鼠抗人单克隆抗体(ZM-0062)，LRP鼠抗人单克隆抗体(ZM．0335)工作液，即用型SP超敏感免疫组化染色试剂盒(sP-9000)、抗原修复液、DAB Kit显色试剂盒(zU一9032)均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。
五、统计学处理
细胞的生长活性和肿瘤体积x ±s表示，数值的比较采用方差分析。
HE检测结果和活体成像检测结果的比较用x2检验。
采用SPSSl3．0软件进行统计分析。
注意事项
原位种植法模拟肺癌发生的自然环境，是建立肺癌转移模型的最佳方法。
肿瘤学研究中应用最多的皮下种植法建立的模型只是局部包块而无远处器官的转移和播散，不出现肿瘤相关症状。
胸腔内原位种植法操作简便，重现临床NSCLC转移过程；GFP转入人肺腺癌
A549细胞对生长活性和致瘤性无影响，A549/GFP用于NSCLC转移模型结果可靠；借助于荧光显像设备，利用GFP的示踪功能可以非侵人性检测NSCLC转移。