BPG 层析柱标准装柱流程规范
bpg层析柱 装柱

bpg层析柱装柱摘要:I.简介- 介绍BPG 层析柱II.装柱过程- 准备工作- 层析柱的准备- 装柱器的准备- 装柱步骤- 加样- 加固定相- 加流动相- 排除气泡- 密封装柱器III.注意事项- 避免气泡的产生- 保持操作环境的清洁- 选择合适的固定相和流动相IV.总结- 装柱的重要性- 装柱后的处理正文:BPG 层析柱是一种在生物分离技术中广泛应用的工具,它通过利用样品中各组分在固定相和流动相之间的分配系数的不同,达到分离的目的。
在使用BPG 层析柱进行分离前,我们需要进行装柱操作。
首先,我们需要进行准备工作。
层析柱的准备主要是清洗柱子,以去除可能影响分离效果的杂质。
装柱器的准备则包括检查装柱器是否完好,并按照说明书进行必要的清洗和消毒。
装柱过程分为以下几个步骤:首先,将样品加入装柱器中。
然后,加入固定相。
这一步需要注意,固定相的加入量应适宜,过多或过少都可能影响分离效果。
接着,加入流动相。
在加流动相的过程中,应缓慢、均匀地加入,以避免气泡的产生。
之后,需要排除气泡,以保证样品在柱子中的分离效果。
最后,密封装柱器,开始进行层析。
在装柱过程中,有几点需要特别注意。
首先,应尽量避免气泡的产生,因为气泡会影响样品的分离效果。
其次,应保持操作环境的清洁,避免杂质污染样品。
最后,选择合适的固定相和流动相,是保证分离效果的关键。
总的来说,装柱是BPG 层析柱实验的重要步骤,正确的装柱操作可以保证实验的顺利进行,得到理想的分离效果。
BPG 140-950装柱过程

BPG 140/950装柱过程1.计算每厘米柱床高度填料的数量;2.选择合适的配件和末端筛网,有10、12、23和54 μm几种孔径。
选择不合适的滤网可能导致较高反压或填料泄露;3.选择最佳装柱流速3.1第一步:a.用20%乙醇浸润滤网排除空气;b.向柱中加入10-15 cm装柱缓冲液(关闭出口阀门),缓冲液的选择参考填料说明书;c.底部滤网上侧放置一软管,与蠕动泵的抽吸端连接;d.运行蠕动泵,彻底排除滤网底部包裹的气泡。
3.2第二步a.连续抽吸缓冲液,直至液面位于底部以上2-3 cm;b.使用水平仪检查层析柱是否水平放置,若不平,调整轮子高度。
3.3第三步a.制备75%的填料溶液,可使用玻璃棒搅拌,不可使用磁力搅拌器;3.4第四步a.小心将填料匀浆导入柱内,以防混入气泡;3.5第五步a.插入顶端连接器;b.拧紧四个螺帽;c.使用高度调节柄使连接器底部位于溶液液面下1-5 mm处;注意:该步动作尽可能快,以免填料完全沉降。
3.6第六步a.旋转密封调节旋钮密封O-形圈;b.下移连接器以排除内部空气,直至缓冲液形成一个凹面,并且再无气泡出现。
3.7第七步a.运行蠕动泵,先使用低流速,排除进液管内空气;b.在泵和层析柱之间安装一个压力表,将进液管安装于层析柱顶端,此时蠕动泵一直打开;c.打开底部出口阀门;d.建立压力/流速曲线。
先使用较低流速,然后缓慢提高流速直至流速达到平台,期间记录流速变化。
对于某些硬度较大的凝胶填料,不会出现流速平台,这时使用的流速对应的压力不能超过层析柱允许的最大压力;e.绘制压力/流速曲线,最佳装柱流速为最大流速的70%-100%。
4. 当柱床稳定后,在柱床顶端作一标记,关闭蠕动泵和出口阀门,逆时针旋转调节旋钮松开O-形圈;5. 顺时针转动高度调节柄快速向下移动连接器,柱床和O-形圈之间的缓冲液通过柱壁溢出。
执行该步操作时,柱床将会上升。
当连接器下降至柱床以上0.5-1 cm时停止下降;6. 密封O-形圈,打开底部出水口,运行蠕动泵,调节至最佳装柱流速,柱床将继续被压缩至标记处。
BPG层析柱规范标准装柱经过流程规范标准

操 作 标 准目的:为了使BPG300层析柱装柱过程可重复,并能够得到较好的柱效,故建立此操作规范。
范围:配合ÄKTA process 系统进行有效的蛋白质纯化操作。
责任人:层析工序操作人员 标准操作程序: 1 基本术语概念填料因子(Packing Factor, PF ):指在在装柱过程中,用低流速(如60cm/h )对填料进行沉降压缩得到的调料高度和最后装柱完成时填料高度GEHC 生产的各种常见填料的PF 参见《GEHC AxiChrom 300-1000 columns UserManual 28-9562-89 Edition AA 》;线性流速(linear flow rate ):单位时间内液体流经的直线距离,常用cm/h 表示;体积流速(volume flow rate ):单位时间内液体流经的空间容积,常用ml/min表示;2 准备工作2.1 检查层析柱的完整性,所带配件,是否水平(用水平仪矫正),是否清洁(如有污染应进行清洗)。
2.2 确定所用填料及其特性、浓度等以DEAE Sepharose Fast Flow填料为例,其填料因子(PF)为1.15,新填料(slurry)浓度为75%(保存于20%乙醇中),耐压3bar。
2.3 确定放大后的工艺参数以XX生化制药股份有限公司的放大工艺为例,中试工艺参数:柱高h=10cm;体积流速v1=3ml/min;柱内径d=1.6cm.即,线性流速v2=v1/s柱=3/(3.14×0.82) cm/min=1.5 cm/min;样品与填料接触时间t=h/v2=10/1.5min=6.67min;在工艺的线性放大中h、v2和t均不变,则可保证样品出峰的位置(洗脱时间)和形状不变。
使用BPG300层析柱进行放大的工艺参数:装柱体积V柱= S柱h=3.14×1.52×1L=7L;装柱需要slurry体积V slurry=V柱×PF/C slurry以DEAE Sepharose Fast Flow为填料,则,V slurry=7×1.15/0.75L=10.73L;装入柱中的slurry高度L slurry=V slurry/S柱=10.73/(3.14×1.52)dm=1.52dm=15.2cm.3管路安装3.1 层析柱管道和配件安装3.1.1卸下柱子顶部和底部的盲堵垫圈,旋松密封调节器,用纯水或20%乙醇充分浸润柱内壁和柱头O型圈;3.1.2 用扳手对称卸下支持杆连接到法兰的螺丝,并通过旋转高度调节手柄将柱头旋至最高处,在柱头顶部依次安装压力表和四路二通阀,在柱底安装四路二通阀;3.1.3在顶部四路二通阀上横向连接一根细管,另一端连至ÄKTA process 上端连接口COLUMN TOP ,同时从柱底四路二通阀横向接出一根细管至ÄKTA process 的下端连接口COLUMN BOTTOM。
层析柱 操作规程

层析柱操作规程层析柱操作规程一、引言层析柱是一种广泛应用于分析化学领域的分离技术,可以用于纯化混合物、分离样品中的化合物等。
为确保层析柱操作的准确性和安全性,制定本操作规程。
二、设备准备1. 确认所需使用的层析柱类型和规格。
2. 检查层析柱的外观是否完好,检查是否有裂纹或破损。
3. 选择合适的填料,并用洗净的溶剂将其均匀填充到层析柱中。
三、试样处理1. 准备待测样品,并将其溶解于适当的溶剂中。
2. 调整样品的pH值,以便于目标化合物的分离。
3. 使用过滤器过滤样品,以去除杂质。
四、操作步骤1. 将样品注入层析柱。
注意控制进样量,以避免柱内过载。
2. 使用一定流速的溶剂将样品通过层析柱。
可以使用手动或自动进样系统实现。
3. 观察溶剂前端和尾端的流动情况,确保它们在操作过程中维持稳定。
4. 根据需要,在柱体顶端加入适当的洗脱剂,以推动样品的分离。
5. 监测柱体顶端的洗脱溶液,以确定目标化合物的出现时间。
6. 收集洗脱溶液,直到目标化合物完全洗脱出来。
五、注意事项1. 在操作过程中,避免柱体受到剧烈震动或颠倒,以免损坏填料和柱体。
2. 在柱体运行时避免样品的进样保持过久,以防止填料变形或堵塞。
3. 柱体结束后,及时清洗柱体和填料,以便下一次使用。
4. 注意操作时的个人防护,避免接触或吸入有害溶液。
六、故障处理1. 如果柱体流速变慢或停止,请检查是否柱内有堵塞现象。
2. 如果柱体出现漏液或损坏,请及时更换或修复。
七、实验数据记录1. 记录样品的进样量和溶剂流速。
2. 监测洗脱溶液的UV/Vis或其他检测方法,记录目标化合物的出现时间和峰面积。
八、实验结束1. 按照操作规程清洗柱体和填料。
2. 关闭层析柱,保持其干燥和安全。
九、附录1. 填料的种类和性质。
2. 样品的名称和来源。
以上为层析柱操作规程,希望能对层析柱操作提供相应的参考和指导。
在操作过程中请务必严格按照规程操作,以确保实验的准确性和安全性。
层析柱干法装柱步骤

层析柱干法装柱步骤层析柱干法装柱,这事儿就像搭积木,得有个章法。
咱先得把层析柱给准备好。
这层析柱就好比是一个特殊的小房子,要装东西进去的。
得保证这个小房子干净又干燥,要是里面脏兮兮或者湿漉漉的,那后面装进去的东西可就“住”得不舒服了。
就像你自己的家,如果到处是灰尘和水,你能乐意吗?再来说说填料。
填料是这个柱子里的关键角色,就像是小房子里的家具。
把填料从容器里取出来的时候,动作要轻,可不能像个莽撞的大汉似的。
为啥呢?因为填料如果被弄得乱七八糟,它在柱子里就没法好好排列了。
这就好比你整理衣柜,要是把衣服都胡乱扔进去,找衣服的时候可就麻烦了。
现在开始往柱子里装填料。
把柱子一端封闭好,就像给小房子关上门,只留一个入口。
然后慢慢地把填料倒进去,这个过程要均匀,就像往杯子里倒水,要是一股脑儿全倒进去,水就会溅得到处都是。
填料倒的时候,得时不时晃一晃柱子,让填料在里面铺得更均匀。
这就像你铺床的时候,要把被子铺平展,要是有褶皱,睡起来就不得劲儿。
可不能心急,要是填料倒得太快或者不均匀,那柱子里就会有缝隙或者空洞,这可不行,就像房子的墙有了漏洞,那还怎么住人呢?填料倒得差不多的时候,要轻轻敲打柱子的管壁。
这就像是在给填料做按摩,让它们在柱子里更紧实。
不过敲打的力度得掌握好,不能太用力,不然就把填料给敲坏了。
这就好比你敲鸡蛋,太用力鸡蛋就破了,填料要是破了,那整个柱子的功能可就受影响了。
等填料装得差不多了,再把柱子顶端多余的填料弄平。
这就像是给房子的屋顶做最后的修整,要弄得平平整整的。
要是不平,那后面使用的时候就会有问题。
装完柱之后,可别忘了检查一下。
看看柱子里的填料是不是均匀,有没有什么地方看起来不太对劲。
这就像是做完一件手工品,得检查检查有没有瑕疵。
要是发现有问题,就得重新调整,总不能让一个有毛病的柱子就这么开始工作吧,那肯定会出乱子的。
干这个层析柱干法装柱啊,就得像照顾自己的小宝贝一样细心。
每个步骤都不能马虎,每个细节都很重要。
柱层析操作的基本流程

1.样品选择与预处理。
根据分离目的选择合适的样品,并进行必要
的预处理。
2.装柱。
选择合适的层析柱,如干法或湿法装柱。
在装柱前,柱子
应预先用适当的溶剂或缓冲液处理,以除去可能吸附的杂质,并确保内部没有气泡。
装柱时,应确保柱子均匀且无分层现象。
3.平衡。
用平衡液(通常是缓冲液)填充柱子,以确保柱子内部充
分平衡。
平衡液的体积一般为柱床体积的3到5倍,以保持平衡后柱床体积的稳定及基质充分平衡。
4.加样。
缓慢小心地将样品溶液加到固定相表面,尽量避免冲击基
质,以保持基质表面平坦。
加样量应尽量少,以减少对基质的干扰。
5.洗脱。
使用适当的洗脱液进行洗脱,以将样品组分从固定相上洗
脱下来。
洗脱液的流速和体积应根据分离目的和样品性质进行调整。
6.收集与鉴定。
收集不同馏分的样品,并进行进一步的分析和鉴定。
层析柱装柱流程范文

层析柱装柱流程范文层析柱(CLC)是一种分离和纯化化学物质的常用技术。
它在许多领域,包括制药、生物化学、环境科学和食品科学中广泛应用。
层析柱装柱流程是在层析柱中装填填料的过程,决定着柱的分离性能和吸附能力。
下面是一种常见的层析柱装柱流程:1.准备填料首先需要选择适当的填料。
填料的选择取决于分离目标和样品特性。
常见的填料包括硅胶、脱色树脂、离子交换树脂和凝胶颗粒等。
填料应具有一定的吸附能力,能够与目标物发生相互作用。
2.准备柱子将柱子清洗干净,并根据填料的尺寸调整柱子的高度。
柱子可以是玻璃柱、不锈钢柱或塑料柱,具体选择取决于实验要求。
3.浸泡填料将填料放入容器中,加入合适的溶剂。
浸泡填料有助于去除可能存在的杂质,提高填料表面的活性。
可以根据填料类型和实验要求调整浸泡时间,一般需要几小时到几天。
4.烘干填料将浸泡过的填料放入烘箱中或暴露在室温下进行干燥。
烘干填料有助于去除残留的溶剂,使填料能够更好地保持其结构和吸附性能。
5.装填填料将干燥的填料均匀地倒入柱子中。
填料的层高度应根据实验要求调整,一般为柱子高度的1/3到2/3、填料应当尽量均匀地分布在柱子中,以确保有效的分离效果。
6.压实填料使用压实设备或手动敲击柱子,将填料压缩和固定在柱子中。
压实的目的是增加填料的堆积密度,减少填料颗粒之间的间隙,提高分离效果。
压实的程度应根据填料类型和实验要求进行调整。
7.洗涤柱子将柱子与适当的溶剂进行冲洗,以去除可能存在的杂质和残留的溶剂。
洗涤的选择取决于填料和实验要求。
洗涤过程可以重复几次,直到柱子完全清洁。
8.储存柱子装填完成后,柱子可以进行包装或储存。
柱子应存放在阴凉干燥的地方,以保持填料的性能和活性。
层析柱 操作规程

层析柱操作规程
《层析柱操作规程》
层析柱是一种分离和纯化化合物的工具,它在实验室和工业生产中都得到广泛应用。
为了正确、高效地运用层析柱进行实验操作,必须严格按照规程进行操作。
1. 准备工作
在开始操作层析柱之前,首先需要检查仪器设备和试剂是否准备就绪。
确保层析柱、柱子和柱底都是干净的,没有杂质和残留物。
同时,检查溶剂和流动相的浓度和pH值是否符合实验要求。
2. 样品预处理
样品在进入层析柱之前,需要进行适当的预处理。
通常包括溶解、过滤或稀释等步骤,以确保样品的纯度和浓度符合层析柱的使用要求。
3. 层析条件选择
根据样品的特性和分离要求,选择合适的层析柱和流动相。
流动相的选择包括了溶剂的种类、比例和流速等参数,需要根据实验要求进行合理选择。
4. 样品加载
将经过预处理的样品通过适当的方法加载到层析柱中。
可以采用重力流动、压力注入或者其他方法,确保样品均匀地进入层析柱。
5. 层析过程监控
在样品加载后,需要监控层析过程并进行记录。
包括流出液的收集、色谱图谱的观察等,以便及时发现异常情况并进行调整。
6. 收集和分析分离物
根据层析过程中的监控数据,及时收集目标物质,并进行分析和检测。
可以通过色谱、质谱等技术进行分析,得到分离物的纯度和产率数据。
7. 层析柱的清洗和保养
在操作完毕后,及时清洗和保养层析柱。
包括流动相的冲洗、柱子和柱底的清洗以及存放,以保证下次使用时的质量。
在实验操作层析柱时,严格按照规程进行操作,能够确保实验的准确性和重复性,同时也保证了仪器设备的长久使用。
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操作标准
目得:为了使BPG300层析柱装柱过程可重复,并能够得到较好得柱效,故建立此操作规范。
范围:配合ÄKTA process系统进行有效得蛋白质纯化操作。
责任人:层析工序操作人员
标准操作程序:
1基本术语概念
填料因子(PackingFactor, PF):指在在装柱过程中,用低流速(如60c
m/h)对填料进行沉降压缩得到得调料高度与最后装柱完成时填料高度(柱高)得
比值,
GEHC生产得各种常见填料得PF参见《GEHC AxiChrom300-1000columns UserManual 28-9562—89 Edition AA》;
线性流速(linear flow rate):单位时间内液体流经得直线距离,常用cm/h
表示;
体积流速(volume flowrate):单位时间内液体流经得空间容积,常用ml/mi
n表示;
换算:
2准备工作
2.1检查层析柱得完整性,所带配件,就是否水平(用水平仪矫正),就是否清洁(如有污染应进行清洗)、
2、2确定所用填料及其特性、浓度等
以DEAE SepharoseFast Flow填料为例,其填料因子(PF)为1.15,新填
料(slurry)浓度为75%(保存于20%乙醇中),耐压3bar。
2。
3 确定放大后得工艺参数
以XX生化制药股份有限公司得放大工艺为例,
中试工艺参数:
柱高h=10cm;体积流速v1=3ml/min;柱内径d=1、6cm、
即,线性流速v 2=v1/s 柱=3/(3、14×0。
82) cm/mi n=1.5 cm /min;
样品与填料接触时间t =h /v2=10/1、5min =6。
67mi n;
在工艺得线性放大中h 、v2与t 均不变,则可保证样品出峰得位置(洗脱时间)与形状不变、
使用BP G300层析柱进行放大得工艺参数:
装柱体积V 柱= S 柱h=3。
14×1、52×1L=7L;
装柱需要sl ur ry体积V slurry =V柱×PF/C sl ur ry
以DE AE Sepharo se Fast F low 为填料,
则,V slur ry=7×1。
15/0、75L=10。
73L;
装入柱中得slur ry 高度Lsl ur ry=V slurry /S 柱=10、73/(3。
14×1。
52)dm=1.52
dm=15。
2cm 。
3管路安装
3、1 层析柱管道与配件安装
3。
1、1卸下柱子顶部与底部得盲堵垫圈,旋松密封调节器,用纯水或20%乙醇充分浸润柱内壁与柱头O 型圈;
3.1。
2 用扳手对称卸下支持杆连接到法兰得螺丝,并通过旋转高度调节手柄将柱头旋至最高处,在柱头顶部依次安装压力表与四路二通阀,在柱底安装四路二通阀;
3。
1、3在顶部四路二通阀上横向连接一根细管,另一端连至ÄKTA pro ce ss 上端连接口C OLUMN TOP,同时从柱底四路二通阀横向接出一根细管至ÄKTA pr oce ss 得下端连接口CO LU MN BOTT OM 、
图1、BP G300层析柱安装示意图
3。
2层析柱下端筛网排气泡
3.2.1连接两根足够长得细管到ÄK TA pr ocess 进样泵得A1与B1进口,两管另一端均放入纯水中;
3。
2、2从A1泵入纯水:打开UNI CORN 软件,在sys tem co ntrol 窗口点击man ual →va lves →InletA,选择inletA1,ins ert;I nletB,选择clos ed,i n
sert;Column,选择upflow,insert;Pump→Flow,设定流速60L/h,点击ex ecute运行程序充水至BPG柱中2-3cm左右,pause,清除下端筛网中得空气,用注射器吸出筛网中残留得气泡。
4装填料
4、1准备填料
所用填料为DEAE Sepharose Fast Flow ,装置得就是保存于20%乙醇中得新slurry;
4、2卸下柱头,用搅拌棍引流加入混匀得slurry至15、2cm处,再加入纯水至40cm左右,充分搅拌混匀,同时避免挤压筛网与柱壁,静置使填料界面至少低于38cm;
4、3在system control窗口点击manual→valves→InletA,选择inletA1,i nsert;InletB,选择closed,insert;Column,选择downflow,insert;Pump→Flow,设定流速60L/h,点击execute运行程序将柱头上端筛网充满水以除去气泡,再装上柱头,用密封调节器固定柱头,拧紧螺丝;
4、4在system control窗口点击manual→Pump→Flow,设定流速为42L/h(60cm/h),进行填料得沉降,待填料高度降至14cm左右,将密封调节器旋至全松,将柱头快速调至距离填料3—4cm处,将密封调节器旋至半松,将柱头快速调至滤网距离填料1-2cm,旋紧密封调节器,再设定高流速(如150L/h),继续压缩填料,最后再调节柱头至10cm、整个过程一直有流速,泵速不能停。
5 柱效测定
图2、柱效测定示意图
5.1平衡
将A1接口细管放入0。
4M NaCl溶液中,将柱顶端四路二通阀调至管路与大气相连状态,在system control窗口点击manual→valves→InletA,选择inletA1,insert;InletB,选择closed,insert;Column,选择downflow,ins ert;Pump→Flow,再设定高流速(如150L/h),点击execute运行,排气泡,再将阀调至管路与柱头相连状态,平衡3—5个柱体积至电导曲线稳定,点击END;
5。
2上样
5、2、1将B1接口细管放入2M NaCl溶液,柱顶端四路二通阀调至管路与大气相连状态,在system control窗口点击manual→valves→InletA,选择Closed,insert;InletB,选择InletB1,insert;Column,选择downflow,insert;Pump→Flow,设定高流速(150L/h)点击execute运行,排气泡,pause;
5、2。
2在system control窗口点击manual→Other→End_Timer,选择Acc、 Volumn, Timeout 设上样量为70mL(1%柱体积);Pump→Flow,设定上样流速60L/h,点击execute得同时将柱顶端四路二通阀调至管路与柱头相连,完成上样;
5。
3 洗脱
5.3。
1将柱顶端四路二通阀调至管路与大气相连状态,在systemcontrol窗口点击manual→valves→InletA,选择inletA1,insert;InletB,选择closed,insert;Column,选择downflow,insert;Pump→Flow,设定高流速(150L/h)点击execute运行,排气泡,同时将管路充满0。
4M NaCl溶液,调流速至21L/h(30cm/h);
5.3、2 待流速稳定后,在system control窗口点击manual→valves→Injection Mark,insert,点击execute得同时将柱顶端四路二通阀调至管路与柱头相连,开始洗脱,在一个柱体积左右,电导检测下将产生目得峰。
5.4测柱效
在Evaluation窗口中,选择实验保存得结果,在结果图中点击鼠标右键,选择Properties,点击Clear,并选中Cond_102,点击OK。
回到Evaluation窗口,选择积分按钮,在弹出窗口中,选择Cond_102,peak window中调整积分得范围,并在Reject Peaks中,填Peak must be one of1largest;确定后,在积分结果窗口,点击右键,选择Properties,在peaktable选项中,勾选Plate Height(HETP)与Asymmetry。
确定后即可计算得到计算理论塔板高度HE TP与对称因子As。
1 When calculating the amountof media to be packed usethe p ressionFactor 1。
1 instead of the Packing Factor above whichis used duringpacking。