层析柱装柱流程
硅胶层析柱的填装方法
硅胶层析柱的填装方法硅胶层析柱所用的硅胶是试剂级，100-200目，在实验前将10g左右的硅胶放在托盘中，130℃真空干燥箱内活化16h，活化后放在干燥器中冷却，待用。
将无水硫酸钠盛装在托盘中，在450℃马弗炉中活化2h，后取出放在干燥器中冷却，待用。
一、装柱过程：1、取40ml烧杯4个，100ml量筒2个（分别倒取二氯甲烷100ml，正己烷90ml），40cm玻璃棒1个，250ml烧杯1个（盛装废液用），铁架台1个，层析柱1个（长350mm，内径20mm），不锈钢铁勺1个，20ml注射器（带针头）2个（以上仪器均干净）。
2、拌硅胶。
将活化过的硅胶倒入40ml烧杯中，用另一个20ml烧杯盛取二氯甲烷并缓慢倒入硅胶中，同时用玻璃棒不断搅拌，赶走硅胶中的气泡。
3、倒硅胶。
用少量二氯甲烷淋洗层析柱，玻璃棒引流；之后将上述拌好的硅胶沿着玻璃棒倒入层析柱，倒完后缓慢抽出玻璃棒。
4、敲柱子。
用橡皮管敲击柱子，赶走层析柱硅胶中的气泡，然后打开活塞，流出洗脱液，让硅胶自然沉降；在此期间，用不锈钢小勺舀取一勺无水硫酸钠，倒入层析柱中；等到柱子快干是关闭活塞（二氯甲烷的液面在无水硫酸钠的表面以上）。
5、走柱子。
柱子装好后用20ml二氯甲烷冲洗层析柱2次，注意用玻璃棒引流，缓慢倒下二氯甲烷，并打开活塞，使洗脱液缓慢流下，确保液面保持在硫酸钠表面以上，不能流干；再用40ml正己烷冲洗层析柱，待液面在硫酸钠以上些许时关闭活塞。
6、层析柱至此装好，待用。
二、样品走柱子过程：1、将样品液转移到装好的层析柱中后，用1-2ml正己烷清洗鸡心瓶，并转移到层析柱内，流出液弃去。
2、用25ml正己烷洗脱层析柱，弃去流出液，关闭活塞。
3、将盛装废液的烧杯移去，将K-D浓缩瓶接在层析柱下，再用30ml二氯甲烷/正己烷淋洗液（体积比2:3）洗脱层析柱，以2-5ml/min流速接收流出液于K-D 浓缩瓶中。
仪器名称规格数量烧杯40ml 4个250ml 1个量筒100ml 2个玻璃棒40cm 1个铁架台1个层析柱350mm×20mm 1个不锈钢小勺1个注射器20ml 2个。
BPG 层析柱标准装柱流程规范
操作标准目得:为了使BＰG3００层析柱装柱过程可重复,并能够得到较好得柱效,故建立此操作规范。
范围:配合ÄKTA prｏcｅsｓ系统进行有效得蛋白质纯化操作。
责任人:层析工序操作人员标准操作程序:1基本术语概念填料因子(PackｉｎｇFａｃtor, PＦ):指在在装柱过程中,用低流速(如６0ｃm/h)对填料进行沉降压缩得到得调料高度与最后装柱完成时填料高度(柱高)得比值,GＥHC生产得各种常见填料得PF参见《GEＨC ＡxiＣhroｍ300－10０0columns UseｒＭanuａl 28-95６２—89 Ｅｄiｔiｏn AＡ》;线性流速(liｎeａr flow ratｅ):单位时间内液体流经得直线距离,常用cm／h表示;体积流速(volume floｗratｅ):单位时间内液体流经得空间容积,常用ml/mｉｎ表示;换算:２准备工作2.１检查层析柱得完整性,所带配件,就是否水平(用水平仪矫正),就是否清洁(如有污染应进行清洗)、2、２确定所用填料及其特性、浓度等以DＥAE ＳｅpｈaroｓｅFast Flｏw填料为例,其填料因子(PF)为1.１５,新填料(slｕｒｒy)浓度为75％(保存于2０%乙醇中),耐压3bａｒ。
2。
3 确定放大后得工艺参数以ＸX生化制药股份有限公司得放大工艺为例,中试工艺参数:柱高h＝10ｃm;体积流速v1=3mｌ/min;柱内径d=１、６cm、即,线性流速v ２=v1/s 柱=3/(3、14×0。
82) cm/mi ｎ=1.５ cm ／min;样品与填料接触时间t ＝h ／v2=１０/1、5min ＝6。
67mi ｎ;在工艺得线性放大中h 、ｖ2与t 均不变,则可保证样品出峰得位置(洗脱时间)与形状不变、使用ＢP Ｇ３００层析柱进行放大得工艺参数:装柱体积V 柱= S 柱h=3。
1４×1、52×１L=7Ｌ;装柱需要sl ｕr ｒｙ体积V ｓｌurry =Ｖ柱×PF/C sl ｕr ｒy以ＤE ＡE Sepharo ｓe Fast F ｌow 为填料,则,V slur ｒｙ＝7×1。
层析柱装柱流程
层析柱装柱流程层析柱（Column Chromatography）是一种常见的色谱技术，用于分离和纯化化合物混合物。
它利用样品成分在固定相和流动相之间的差异迁移速率来实现分离。
在这篇文章中，我们将介绍层析柱装柱的基本步骤和相关参考内容，帮助读者了解层析柱技术的应用与操作。
1. 准备工作在进行层析柱装柱前，我们需要准备以下材料和设备：- 色谱柱：选择合适的柱径和柱高，以容纳样品和分离剂。
不同的应用需要不同类型的色谱柱，如硅胶柱、石墨化炭柱、反相柱等。
- 流动相：确定合适的流动相溶剂体系，用于样品的迁移和分离。
通常选择非极性溶剂（如石油醚、丙酮、甲醇等）或极性溶剂（如乙酸乙酯、二甲醚等）。
- 固定相：将合适的固定相装填到色谱柱中，用于分离和吸附样品成分。
选择合适的固定相类型，如硅胶、氧化铝、石墨化炭等。
- 样品：准备需要分离和纯化的混合物样品。
- 旋转蒸发仪：用于去除样品中的溶剂。
2. 装填色谱柱- 将色谱柱固定在柱座上，并根据柱径和柱高的大小调整砂轮，使得柱床均匀。
- 用适当的溶剂湿润色谱柱，避免流动相在柱床中出现间隙和假相。
3. 样品预处理- 将样品溶解在适当的溶剂中，以便在层析柱中迁移。
- 如果样品中有大量杂质，可以使用旋转蒸发仪去除溶剂。
4. 层析柱操作- 使用毛细管或注射器将样品注入色谱柱顶部。
确保样品不超过柱床高度。
- 将流动相逐步加入色谱柱，使其通过柱床。
可以根据实验需要调整流速和溶剂比例。
- 样品成分会根据其在固定相和流动相之间的亲疏水性质而分离。
在柱床中具有更大亲和力的成分会被滞留，而亲和力较小的成分会更快地通过柱床。
- 根据成分的迁移速度和柱床的色谱裂分能力，监测和采集分离后的组分。
常见的监测方法包括紫外可见光谱、红外光谱、荧光检测等。
5. 分离和纯化产物- 根据监测结果，确定目标化合物的峰位置和纯度。
- 通过收集色谱峰和进一步的实验操作，如再层析、结晶、后处理等，将目标化合物从样品中分离和纯化。
纯化工艺层析柱(XK)装填标准操作规程
II编制I 批准1.目的1.1.规范层析柱装填的标准操作流程。
2.范围2. 1. 适用于XXXXXXXX有限公司的XK16、XK26、XK50层析柱。
3.职责3.1.分管主任、操作人员对本规程实施负责，QA质控员负责监督检查。
4.设备与耗材5.5. 1. 实验准备：5. 1. 1.估算装柱的柱体积，然后乘以压缩因子1. 1计算需要取的沉降后的填料体积，取出填料装入烧杯中，将填料中的乙醇溶液用纯化水||编制I 批准/注射用水等体积置换三次。
5.1.2.将XK16/XK26/XK50层析柱的各部件淸洗干净，组装好后连接到层析系统，将柱前报警压力设置为0.45MPa，使用0. 4MPa的恒压模式进行保压测试，30min内压降小于0.05MPa、未出现明显漏液方可投入使用。
5.1.3.配制好对应体积的氯化钠、乙醇溶液。
5. 2. 实验步骤：5. 2. 1.保压测试结束后，确认层析柱下柱头膜内无气泡，若有气泡则取岀柱头，取下柱头膜，使用upFlou-lml/min的方式慢慢将液体填满柱头，然后将柱头膜安上，并再次确认该柱头有无气泡。
5. 2. 2.将装柱器安装到层析柱上，调好层析柱水平，确保层析柱竖直。
5. 2. 3.计算层析柱和装柱器的总体积，按该体积向填料中加入纯化水/ 注射用水（可以稍少一点，用润洗装填料烧杯的纯化水/注射用水补上），使填料混旋液的体积等于层析柱和装柱器的总体积。
5. 2. 4.将填料混旋液充分混合均匀，并小心倒入到层析柱中，润洗烧杯一并倒入层析柱中（注意液体不能溢出）。
5. 2. 5.轻轻将装柱器的盖子旋上，为保证装柱器内的气泡残留尽可能少, 在旋紧盖子前可以DownFlou-lml/min的方式，使液体充分填满装柱器，然后暂停系统，旋紧盖子。
5. 2.6.以DownFlow的方式进行恒流操作，各填料恒流的线性速度见下表。
当填料高度在lOniin内不发生变化时，说明恒流结束，准备恒压操作。
层析柱设备的操作流程
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1. 制备层析柱。
根据样品量和层析介质的性质选择合适的层析柱尺寸。
(完整版)柱层析的操作步骤和注意事项
柱层析技术常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。
柱子可以分为：加压，常压，减压。
压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。
减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝聚），以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。
以前曾经大量的过减压柱，对它有比较深厚的感情，但是自从尝试了加压后，就几乎再也没动过减压的念头了。
加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。
压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。
非凡是在轻易分解的样品的分离中适用。
压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。
个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。
关于柱子的尺寸，应该是粗长的最好。
柱子长了，相应的塔板数就高。
柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。
试想假如柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。
而假如样品层只有0.5厘米，那么各组分就比较轻易得到完全分离了。
当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保的说，不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。
现在见到的柱子径高比一般在1：5～10，书中写硅胶量是样品量的30～40倍，具体的选择要具体分析。
假如所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分rf在0.2～0.4，杂质相差0.1以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如200毫克的样品，用2cm×20cm 的柱子）；假如相差不到0.1，就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如用3cm 的，也可以减小淋洗剂的极性等等。
柱层析的操作步骤和注意事项
精心整理柱层析技术常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。
柱子可以分为：加压，常压，减压。
压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。
头了。
有0.5相差0.1是因为分离的东西比较敏感，所以接收瓶一定要用可密封的，遵循schlenk操作。
至于是加压、常压、减压，随需而定。
因为是schlenk操作，所以点板是个问题，假如样品是显色的，恭喜了，不用点板，直接看柱子上的色带就行了。
假如样品无色，只好预备几十个schlenk瓶，一瓶一瓶的点，不过几次之后就知道样品在哪，也就可以省些了。
像我以前过一根无水无氧柱，需要六个schlenk，现在只一个就能把所要的全收集到。
无水无氧柱中用的比较多的是用氧化铝作固定相。
因为硅胶中有大量的羟基裸露在外，很轻易是样品分解，非凡是金属有机化合物和含磷化合物。
而氧化铝可以做成碱性、中性和酸性的，选择余地比较大，但是比硅胶要贵些。
听说有个方法，就是用石英做柱子，然后用HF254做固定相，这样在柱子外面用紫外灯一照就知道产品在哪里了，没有验证过。
哪位做过可以提出来大家参详参详。
--※关于湿法、干法上样。
湿法省事，一般用淋洗剂溶解样品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等，但溶剂越少越好，不然溶剂就成了淋洗剂了。
很多样品在上柱前是粘乎乎的，一般没关系。
可是有的上样后在硅胶上又会析出，这一般都是比较大量的样品才会出现，是因为硅胶对样品的吸附饱和，而样品本身又是比较好的固体才会发生，这就应该先重结晶，得到大部分的产品后再柱分，假如不能重结晶那就不管它了，直接过就是了，样品随着淋洗剂流动会溶解的。
有些样品溶解性差，能溶解的溶剂又不能上柱（比如DMF,DMSO等，会随着溶剂一起走，显色是一个很长的脱尾），这时就必须用干法上柱了。
装柱知识
通常将树脂装于圆筒形的树脂柱中，溶液连续地通过。
树脂柱内装载树脂的体积称为床容积(bed volume)，简写为BV。
工业用的树脂柱的床容积通常由1～10m3，也有较小或较大的。
这是树脂柱的基本单位，它工作时的各种物料量都以BV为单位。
例如溶液通过树脂柱的流量速度为2～4BV/h，即每小时通过溶液的体积为树脂床容积的2～4倍。
树脂的处理能力亦常以BV为单位计算。
流量bv ：单位时间某断面（横截面）的水（液体）流量。
流速bv/h：单位时间水（液体）中一个质点移动的距离。
装柱子过程：(1)将层析柱垂直固定在铁架台上，关闭活塞，在柱中加入约3cm高的蒸馏水。
(2)用烧杯将大孔树脂水浆液一次性均匀倒入层析柱中，倒入树脂的同时用玻棒搅拌大孔树脂浆液，并不断加入蒸馏水。
(3)把过量的水从柱底部放出，保持水面高于树脂层面3cm以上，直到树脂转移完毕。
(4)待所有树脂转移完毕后，继续往柱中加蒸馏水，持续30min3.2树脂预处理方法（1）乙醇浸泡：称取适量大孔吸附树脂，加入95%以上的乙醇浸泡24小时，乙醇液面应高于树脂上表面3-5厘米。
然后装入35×50mm 层析柱中。
（2）醇洗：用2BV（BV：指树脂床体积）乙醇以2BV/h的流速冲洗大孔树脂，洗至流出液加三倍量水不呈白色浑浊为止。
并以水以同样流速冲洗树脂，至流出液无醇味。
（3）酸洗：用2BV2%盐酸浸泡2～4小时，并以4～6BV/h流速淋洗树脂，然后用水以同样流速洗至流出液pH中性。
（4）碱洗：用2BV树脂床体积的2%NaOH水溶液淋洗树脂，流速与酸洗相同。
然后用水以同样流速洗至流出液pH中性。
（5）树脂连续使用不必再进行预处理，停用时间过长，应考虑重新预处理。
停用前要充分解吸，洗净，并以大于10%食盐溶液浸泡，以避免细菌在树脂中繁殖。
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层析柱装柱流程标准化管理部编码-[99968T-6889628-J68568-1689N]
层析柱装柱流程
装柱材料
层析柱：BXK层析柱装柱仪器：?KTA 装柱器
装柱溶液
20%乙醇
匀浆的准备
精确计算所需介质的量（这对固定柱高的层析柱尤其重要）。
1L填充柱所需的介质量大约是1.15L自然沉淀匀浆的量，于干净烧杯中，取 100%沉降胶（静止放置一天以上，倾去20%乙醇后的胶为100%沉降胶）与等体积20%乙醇混合备用。
安装层析柱
1.?检测层析柱的各个部件，确保干净、完整，拧上下端堵头，拧紧膨胀圈，然后
将层析柱垂直固定在铁架台上。
2.?将装柱器安装在层析柱上端。
3.?往层析柱中加入适量的20%乙醇，打开下端口，重力流，排除下筛网中滞留的气
泡，在液面低至1-2cm高度时关闭层析柱下端出口。
装柱
1.?用玻璃棒紧靠柱子内壁引流，将摇匀的介质加入到层析柱中，这可以减少气泡
的产生。
迅速用20%乙醇填满柱子和装柱器，装上装柱器盖子，连接到?KTA 上。
2.?打开层析柱下端，开始以30cm/h流速装柱，直至柱床界面平稳。
停止装柱。
3.?打开装柱器盖子，用虹吸法去除界面上端的液体，去掉装柱器，然后小心的用
20%乙醇封满柱子剩余部分。
4.?将上端转接头一端连上?KTA，打开机器，以装柱流速用装柱液排出转接头管路
中及筛板中残留的气泡，然后将转接头另一端装到层析柱上，使转接头下端刚好接触胶界面。
(装柱流速约为70-100%的最大流速）
5.?拧紧膨胀圈，继续用装柱流速压柱，至少保持3个柱体积，以界面不变为主，
在界面处做上记号。
6.?关闭泵，并关闭柱子下端出口，使层析柱上端和泵断开（转接器上接口是打开
的），略拧松膨胀圈，缓慢向下转动调节杆，到记号处停止，然后再拧紧膨胀圈，关闭上接口。
7. 检测柱效。