实验十二去壁低渗法制备植物染色体标本
植物细胞染色体标本的制作与观察-教案
植物细胞染色体标本的制作与观察-教案第一篇：植物细胞染色体标本的制作与观察-教案植物细胞染色体标本的制作与观察1.实验背景与原理染色体的研究在生物进化、发育、遗传和变异中都有十分重要的作用。
因此，染色体标本的制备技术是遗传学、细胞生物学、染色体工程、分类学等众多学科的基本实验技术。
物种细胞内染色体数目、形态、长度等信息的总和根据实验的观察和测量绘制成的模式图称为核型（karyotype）。
核型分析在物种亲缘鉴定，染色体变异分析，杂种分析，细胞分裂过程分析，孤雌生殖等研究中均有重要的作用。
染色体标本的常规制片方法有切片法、涂片法、压片法、滴片法（空气干燥法）等。
压片法操作简单，是常用的植物染色体标本制备的方法。
不过，该法在制备中要注意避免压片所造成的染色体的扭曲、变形和丢失的现象。
染色体制备的重要环节如下：（1）取材：应取分生旺盛的组织或细胞。
在植物中通常取根尖，在分裂高峰时取材，可得到大量分裂相细胞。
而在动物细胞中通常选取骨髓等分裂活跃的细胞，或是植物血球凝集素等刺激下的淋巴细胞，也可选取分裂旺盛的体外培养的癌细胞或转化细胞等。
（2）预处理：使用秋水仙胺等药品破坏纺锤体形成，不但可得到大量分裂相细胞，而且可使染色体缩短变粗，有利于观察。
（3）固定：渗透力强的固定液将细胞迅速杀死，蛋白质沉淀，并可尽量保持细胞原有状态。
（4）解离或低渗：植物细胞要除去细胞间的果胶层，并使细胞壁软化，从而使细胞得以膨胀，为染色体的分散提供了空间。
常用解离方法有酸解法和酶解法。
动物细胞无细胞壁，通常不需解离，而是用低渗液使细胞膨胀。
（5）染色体分散：通过压片、滴片等机械力量使染色体分散, 有利于观察。
2.实验目的（1）掌握常规压片技术制作植物染色体标本的一般方法。
（2）了解显微镜下常规显色的植物细胞染色体的形态特点,熟练掌握显微镜的使用。
（3）理解染色体与生命遗传的意义及染色体核型检查的应用。
3.实验材料与试剂（1）材料：市售大蒜、洋葱。
12染色体标本的制备
实验十二染色体标本的制备一、实验目的1.了解利用动物骨髓进行细胞染色体制片的一般方法，2.掌握细胞收集、低渗、滴片等技术手段。
3.观察和了解小鼠染色体的数目及形态特征。
二、实验原理染色体上的基因决定了一个物种生长发育的全部信息。
因此通过染色体分析，可以了解某一物种最基本的遗传指标。
进行染色体标本的制备一般取自细胞分裂旺盛的组织，如骨髓、淋巴细胞以及通过人工培养的悬浮液。
将秋水仙素注射到动物的腹腔内，经肠系膜吸收可转运到骨髓，使正在分裂的细胞不能形成纺锤体，染色体停在中期状态，经过处理和制片后就可以清楚地观察到染色体。
这种制片方法是属于侵害性的，因此这种方法适用于动物来源丰富、动物个体较小的材料。
对于大型动物可以采取骨髓穿刺术获得红骨髓，在临床上用于一些血液疾病的研究分析。
对于一些珍稀的鸟类可采用羽髓来制片，方法基本一样。
人类的染色体分析可采用外周血培养的方法来获得大量的细胞材料。
骨髓细胞具有丰富的细胞质和高度分裂能力，因此不必经体外培养，也不需要植物血球凝集素（PHA）的刺激，可直接观察到分裂细胞。
经秋水仙素处理后，分裂的骨髓细胞被阻断在有丝分裂中期，再经离心、低渗、固定、滴片等步骤，便可制作出理想的染色体标本，是研究动物细胞遗传学的好材料。
骨髓细胞染色体标本的制备，具有取材容易，方法简单易行等优点，设备也简单，在一般的实验室均可进行。
三、实验仪器、材料和试剂：1.仪器、用具天平，离心机，光学显微镜，恒温水浴锅，试管架，烧杯，离心管，刀片，镊子，解剖盘，解剖剪，镊子，注射器，纱布，冰冻载玻片，吸水纸，吸管，镜头纸。
2.材料体重20克左右的小鼠。
3.试剂(1)0.075mol/L KCl低渗液(2)Carnoy固定液（甲醇：醋酸＝3:1）(3)0.1%秋水仙素(4)Giemsa染色液【方法与步骤】1. 秋水仙素处理：在做实验前3~4小时，按每克体重2-4μg的量，向小鼠腹腔注射0.1％的秋水仙素。
植物染色体技术-去壁低渗法
五、酶解去壁：倒去固定液，蒸馏 水漂洗2-3遍，加入2.5%纤维素酶 与果胶酶的混合酶液1ml.
目的：分离细胞和软化去壁。
六、低渗处理：倾去酶液，加入 0.075M KCl溶液，在20~25℃条件 下低渗处理30min。 目的：使细胞吸收水分而膨胀， 染色体分散到细胞质中，在制片 时便于染色体分散开。
七、去沉淀：静止片刻，去掉大 块沉淀物，倒取上层悬液。
目的：自然沉降。
八、离心：上层清液以200g离心1020min。
九、标本制备：将分离所得的 悬液滴至载玻片上，在酒精灯 火焰上微微加热烤干，用卡宝 品红染色5~10min，在光镜下观 察小麦根尖细胞中期染色体的 形态结构。
这个方法与传统的压片法相比具有若 干优： 用这个方法获得的染色体形态比较完整, 接近正常状态。染色体各组成 部分— 长臂、短臂、着丝点、随体、染色单 体显示的都比较清楚,有利于染色体的测 量 和分析这个方法不但可使 中期染色 体散开,而且也 可使前中期,甚至前期的 染色体散开。
一、材料培养：取约30粒种
子,加水浸润后置于培养皿中 于25℃恒温培养发芽。
二、取材：待根长到1.0-2.0cm时， 在上午9：00剪取种子跟约0.51.0cm。
三、预处理：0.1%的秋水仙素处 理3-4小时，或冰水混合物浸泡24 小时。 目的：是染色体分裂滞留在中期。
四、固定：将经过预处理的根尖清 洗后用镊子将细胞夹碎，定液4-5ml 目的：使小麦根尖细胞固定在原来 的分裂状态，病史构成染色体的核 蛋白变性成沉淀，保持染色体的固 有形态。
植物染色体制片技术—— 去壁低渗法
近年来,有人试图将人类染色体标本 制备方法引用到植物材料上来，取得 一些进展。我们参照人类染色体标本 制备技术,开展了对植物细胞去壁、 低渗、火焰干燥方法的研究。
植物显微技术实验参考资料
实验一植物根尖染色体压片法一、实验目的1. 学习并掌握根尖处理、染色、压片及制片观察的方法；2. 观察有丝分裂各时期染色体的形态变化，了解有丝分裂全过程。
二、实验原理高等植物有丝分裂主要发生在根尖、茎尖生长点及幼叶等器官的分生组织（分生区），其中根尖是最常用的材料：1. 根尖取材容易，操作和鉴定也比其它组织方便；2. 采用实验室内种子萌发后所长出的幼嫩根尖，不受植物生长季节的限制，并且可以大量获得；3. 对于某些珍贵而稀少的实验材料，取用自然条件下生长植株的根尖，比取用茎尖、花器等对材料的伤害要小得多；4. 采用实验室内种子发根，切取根尖后的种苗通常还可以进行正常种植，利于后续研究进行。
三、实验材料•大蒜（Aillum sativum 2n=16）四、实验器具和药品1. 用具：染色板，载玻片，盖玻片，指管，温度计，试剂瓶，滴瓶，镊子，解剖针，毛边纸。
2. 药品：无水酒精，70%酒精，冰醋酸，对二氯苯或秋水仙素，醋酸钠，碱性品红，石炭酸，甲醛，山梨醇，纤维素酶，果胶酶，中性树胶或油派胶（Euparal），二甲苯。
五、实验说明1.根尖由于取材方便，是观察植物染色体最常用的材料，有些植物种子难以发芽，或仅有植株而无种子，也可以用茎尖作为材料。
2. 植物细胞分裂周期的长短不尽相同，通常在十到几十小时之间，温度明显地影响分裂周期，对于一个不太熟悉的实验材料，最好在特定温度下长根，掌握有丝分裂高峰期，以便得到更多的有丝分裂的细胞。
3. 有丝分裂期在整个细胞周期中所占的时间相对较短，有丝分裂制片的主要目的是进行染色体鉴定，希望观察到更多分裂相，尤其是分裂中期相，通常要对材料进行不同的预处理。
（预处理的目的是降低细胞质的粘度，使染色体缩短分散，防止纺锤体形成，让更多的细胞处于分裂中期，一般在分裂高峰前，把根尖放到药剂中处理3-4小时。
常用的药剂，如秋水仙素、对二氯苯、8-羟基喹啉等。
）4.植物细胞的细胞壁对细胞形态和结构起支撑和保护作用，分生组织的细胞壁将分生细胞结合成一个整体，因此在压片之前需要采用适当方法软化或部分分解细胞壁使细胞间易于分离，称为解离。
去壁低渗法制备植物染色体标本实验
去壁低渗法制备植物染色体标本实验方法步骤：1、材料培养：将高粱的种子充分浸种后，摆在铺有滤纸的培养皿内，在25℃温箱发芽培养2、预处理：待根长至0.5-1cm时,切取根尖立即放入盛有0.2%秋水仙素和0.002mol/L 8-羟基喹啉水溶液等量混合液的小瓶中预处理2-3小时3、前低渗：切取分裂旺盛的部分根尖（1mm），放入0.075mol/L氯化钾低渗液中，在25℃条件下处理30分钟。
以下可分两种方法进行处理4、（1）吸去前低渗液，立即加入甲醇：冰醋酸（3：1）固定液固定不少于1h。
（2）水洗：将固定好的材料用蒸馏水洗三次，除去材料中的固定液，在1mol/L 的HCl于60℃处理15分钟。
（3）酶解去壁：在小瓶内加入混合酶液（酶液量以浸过材料为合适），在25℃下酶解30-60分钟（4）后低渗：吸去酶液，慢慢加入(25±0.5) ℃的双蒸水,轻轻洗一次,然后在双蒸水中浸泡10分钟。
5、悬液法：（1）制备细胞悬液：倒去双蒸水，用镊子立即将材料夹碎形成细胞悬液（2）固定：向细胞中加入新配制的甲醇：冰醋酸（3：1）固定液1-2ml，使成细胞悬液时间在10分钟到数小时不等。
（3）去沉淀：静置片刻使大块组织沉淀，然后取上层细胞悬液于另一个小瓶中。
（4）去上清夜：将上层细胞悬液静置30分钟左右，即可见细胞沉淀，用吸管轻轻吸去上清夜，留约0.5ml左右细胞悬液置备标本(5)标本制备:在一张经过充分洗净脱脂,并预先在蒸馏水中冷冻的清洁载玻片上,用吸管滴2-3滴细胞悬液,立即将载玻片一端抬起,并轻轻吹气，使细胞迅速分散，然后在酒精灯火焰上微微加热烤干。
（6）染色：经干燥的玻片标本，用Giemsa染色液染色30分钟，然后用自来水细流冲洗，甩干水珠空气干燥6、在显微镜下寻找典型的中期染色体，注意观察中期染色体的长臂、短臂和着丝粒位置，并尽可能找到具随体染色体。
低渗液处理细胞染色体标本制作过程
低渗液处理细胞染色体标本制作过程下载温馨提示：该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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植物染色体标本制备的去壁、低渗法及其在细胞遗传学中的意义
植物染色体标本制备的去壁、低渗法及其在细胞遗传学中的意
义
植物染色体标本制备的去壁、低渗法是通过去除细胞壁，使得细胞内的染色体能够在液态介质（通常是醋酸或者醋酸-乙醇混合液）中自由展开，并与染色剂染色，从而得到适合观察和分析的染色体标本。
这种制备方法在植物细胞遗传学中得到广泛应用。
首先，通过去除细胞壁，可使得染色体得以展开成线性或环形的形式，方便进行观察和分析。
其次，在去壁液中低渗透压下染色质水肿膨胀，使染色体的结构更加明晰，染色效果更佳。
同时，去壁液中还含有某些成分，如乙酸和染色剂，可促进染色体的凝聚和染色，从而也有助于染色体的分析和研究。
植物染色体标本制备的去壁、低渗法在植物细胞遗传学中有着重要的应用价值，可用于染色体数目和形态的分析、基因定位和标记、染色体变异的检测和研究等。
特别是在遗传改良中，该方法也被广泛应用于植物杂交和基因转移等研究领域。
植物细胞染色体标本的制作与观察-教案
植物细胞染色体标本的制作与观察1. 实验背景与原理染色体的研究在生物进化、发育、遗传和变异中都有十分重要的作用。
因此，染色体标本的制备技术是遗传学、细胞生物学、染色体工程、分类学等众多学科的基本实验技术。
物种细胞内染色体数目、形态、长度等信息的总和根据实验的观察和测量绘制成的模式图称为核型（karyotype）。
核型分析在物种亲缘鉴定，染色体变异分析，杂种分析，细胞分裂过程分析，孤雌生殖等研究中均有重要的作用。
染色体标本的常规制片方法有切片法、涂片法、压片法、滴片法（空气干燥法）等。
压片法操作简单，是常用的植物染色体标本制备的方法。
不过，该法在制备中要注意避免压片所造成的染色体的扭曲、变形和丢失的现象。
染色体制备的重要环节如下：（1）取材：应取分生旺盛的组织或细胞。
在植物中通常取根尖，在分裂高峰时取材，可得到大量分裂相细胞。
而在动物细胞中通常选取骨髓等分裂活跃的细胞，或是植物血球凝集素等刺激下的淋巴细胞，也可选取分裂旺盛的体外培养的癌细胞或转化细胞等。
（2）预处理：使用秋水仙胺等药品破坏纺锤体形成，不但可得到大量分裂相细胞，而且可使染色体缩短变粗，有利于观察。
（3）固定：渗透力强的固定液将细胞迅速杀死，蛋白质沉淀，并可尽量保持细胞原有状态。
（4）解离或低渗：植物细胞要除去细胞间的果胶层，并使细胞壁软化，从而使细胞得以膨胀，为染色体的分散提供了空间。
常用解离方法有酸解法和酶解法。
动物细胞无细胞壁，通常不需解离，而是用低渗液使细胞膨胀。
（5）染色体分散：通过压片、滴片等机械力量使染色体分散, 有利于观察。
2. 实验目的（1）掌握常规压片技术制作植物染色体标本的一般方法。
（2）了解显微镜下常规显色的植物细胞染色体的形态特点,熟练掌握显微镜的使用。
（3）理解染色体与生命遗传的意义及染色体核型检查的应用。
3. 实验材料与试剂（1）材料：市售大蒜、洋葱。
（2）设备与用品：普通光学显微镜，水浴锅，盖玻片，载玻片，异物针，镊子，平皿，滤纸等。
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三、实验材料
• 水稻（Oryza sativa）、玉米(Zea mays)、蚕豆（Vicia faba）、豌豆(Pisum sativum)种子或洋葱(allium cepa)鳞茎。
四、实验器具与药品
• ⒈器具：恒温培养箱，显微镜，载玻片， 酒精灯。
• ⒉药品试剂：对二氯苯饱和溶液，甲醇， 冰醋酸，70%酒精，纤维素酶，果胶酶， Giemsa原液，1/15mol/L(pH6.8～7.2)， 0.075mol/L KCl。
玉米根尖 2n=2ห้องสมุดไป่ตู้=20
水稻根尖 2n=2x=24
五、作业
• 比较动植物低渗法制作染色体玻片的异 同。
五、实验步骤
结果观察
• 先在低倍物镜下进行观察，找到较好的 中期分裂相后，直接加显微镜油并转换 为油镜头进行观察（若使用香柏油，则 需加盖玻片，因为在香柏油中染色体会 褪色）。选择较好的分裂相用显微镜上 配备数码照相装置摄影，并将打印照片 附于实验报告中。
蚕豆根尖2n=2x=12
豌豆根尖 2n=2x=14