质粒构建
构建质粒原则
质粒构建原则
质粒构建是一个多步骤的过程，涉及选择适当的质粒骨架、插入基因、筛选和表征重组质粒。
遵循以下原则可提高构建质粒的效率和成功率：
选择适当的质粒骨架：
•根据克隆目的选择具有适当复制起源、选择标记和克隆位点的质粒骨架。
•考虑目的基因的大小和表达需要。
•选择具有低复制数和稳定复制特性的大肠杆菌质粒骨架，以减少重组事件。
插入基因：
•使用适当的限制性内切酶和连接酶将目的基因插入克隆位点。
•确保限制性内切酶位点与插入片段兼容，并且不会破坏质粒骨架中重要的功能。
•使用连接缓冲液进行连接，并确保连接酶和片段浓度合适。
筛选重组质粒：
•使用抗生素或其他选择标记对重组质粒进行筛选。
•将转化的细菌接种到含有选择标记的培养基中，并选择在该培养基上生长的菌落。
表征重组质粒：
•对筛选出的菌落进行质粒提取，并使用限制性内切酶消化或测序来验证插入物的正确性。
•测序还可以检测插入位点附近是否有突变或其他错误。
其他注意事项：
•使用高质量的试剂和酶。
•保持无菌条件，以防止污染。
•优化反应条件，包括温度、时间和酶浓度。
•仔细遵循实验方案并记录所有步骤。
•考虑使用克隆试剂盒，这些试剂盒提供预先优化和标准化的反应条件。
•获得有经验的研究人员或专家的帮助。
酵母菌表面展示操作步骤之质粒构建和转化
酵母菌表面展示操作步骤之质粒构建和转化质粒构建和转化是进行酵母菌表面展示的重要步骤之一。
在这一过程中，我们需要合成包含目标基因序列的质粒，并将其转化到酵母菌细胞中。
下面是酵母菌表面展示操作步骤之质粒构建和转化的详细描述。
1. 质粒构建质粒是一种带有自主复制序列的DNA分子。
在酵母菌表面展示中，我们需要构建一种质粒，其中包含用于表达和展示目标蛋白的基因序列。
a. 选择适合的质粒载体：选择合适的质粒载体，例如pYD1或pPICZα，这些载体在酵母菌表面展示中被广泛使用。
b. 插入目标基因：根据目标基因的序列设计引物，通过PCR扩增目标基因，并在引物的末端添加限制酶切序列，以便后续的质粒构建。
c. 酶切和连接：将PCR扩增产物与质粒载体进行酶切，并使用连接酶将两者连接起来。
此步骤需要选择合适的限制酶，并优化酶切和连接的条件。
d. 转化大肠杆菌：将连接好的质粒转化到大肠杆菌中，并通过培养和筛选获得含有目标质粒的克隆。
2. 酵母菌质粒转化在完成质粒构建之后，我们需要将质粒转化到酵母菌细胞中。
转化是指将质粒导入到细胞内，并使其在细胞内复制和表达。
a. 制备质粒：从大肠杆菌培养物中提取包含目标质粒的质粒DNA。
使用质粒提取试剂盒按照厂家说明书进行质粒提取。
b. 酵母菌预处理：用含有酵母菌培养基预处理酵母菌细胞。
这一步骤可以增加酵母菌细胞对质粒的转化效率。
c. 质粒转化：将预处理后的酵母菌细胞与质粒DNA一起孵育。
孵育温度和时间依据具体的实验要求进行设置。
质粒转化的方法包括热激冷冻法、锂乙酸法等，选择合适的方法进行转化。
d. 筛选阳性克隆：将经过转化的酵母菌细胞转移到含有适当选择压力的培养基中，并在培养基上筛选出带有目标质粒的阳性克隆。
这些步骤是进行酵母菌表面展示的质粒构建和转化的基本操作流程。
在每个步骤中，实验者需要采取严谨的操作、选择合适的试剂和工具，并根据实验要求进行优化。
通过这一步骤，可以成功构建和导入目标质粒，为后续的酵母菌表面展示实验奠定基础。
质粒构建 (2)
质粒构建1. 引言质粒是一种重要的实验工具，广泛应用于基因工程、遗传学和生物学研究中。
质粒构建是指将感兴趣的DNA片段插入到质粒中的过程，用于进一步研究DNA序列的功能和相互作用。
本文将介绍质粒构建的基本原理和步骤。
2. 质粒构建的基本原理质粒构建需要以下几个基本要素：•质粒：质粒是一种环状的DNA分子，可存在于细菌、酵母等生物体内。
•DNA片段：DNA片段是质粒构建中要插入质粒的感兴趣DNA序列，可以通过PCR扩增、基因合成等方法得到。
•限制酶：限制酶是一种特殊的酶，能够识别和切割DNA的特定序列。
•连接酶：连接酶是一种酶，能够将DNA片段与质粒连接起来。
基于以上要素，质粒构建的基本原理如下：1.将质粒和目标DNA片段分别进行限制性内切酶切割。
限制酶切割会产生粘性末端或平滑末端的DNA片段。
2.使用连接酶将目标DNA片段与质粒连接起来。
连接酶能够将两条DNA片段的末端连接起来，形成一个完整的质粒。
3.利用转化或转染等方法将质粒导入到宿主细胞中。
质粒在宿主细胞中进行复制和表达。
3. 质粒构建的步骤质粒构建的具体步骤如下：3.1 质粒提取从质粒宿主细胞中提取质粒是质粒构建的第一步。
常用的质粒提取方法包括碱裂解法、盐溶解法、商业提取试剂盒等。
质粒提取的目的是获取纯度较高的质粒样本，便于后续实验操作。
3.2 目标DNA片段的获取目标DNA片段可以通过PCR扩增、基因合成等方法得到。
PCR扩增需要设计引物，引物的序列与目标DNA片段的两端相互衔接。
基因合成则需要将目标DNA序列依照设定的序列进行化学合成。
3.3 DNA片段与质粒的连接将目标DNA片段与质粒进行连接，需要使用连接酶。
连接酶则需要根据DNA片段和质粒的不同情况选择合适的连接酶和反应条件。
连接酶反应通常包括连接酶、DNA片段和质粒的混合体系，以及一定的温度和时间。
3.4 转化或转染将连接好的质粒导入到宿主细胞中，以使质粒在宿主细胞中进行复制和表达。
质粒构建课件
Digestion & ligation
PCR product or vector Enzyme 1 Enzyme 2 10XBuffer 100XBSA(?) ddH2O
37°C 2~3 h
PCR product Vector T4 DNA ligase 10Xligase buffer ddH2O
pCS2(GFP)
……
/vectordb/
Gene cloning
Target gene: hBex2 Vector selection Primer design Amplification, digestion & ligation Transformation & Identification
AAT TCG AAG
CGG TG
EcoR I/BamHI digestion
BamH I GAT CCA CCG
GFP
G AAT TCG AAG
insert
CTT CG A ATT C
GCG GAT CCA CCG
CGG TGG ATC CGC
GFP
Gene cloning
Target gene: hBex2 Vector selection Primer design Amplification, digestion & ligation Transformation & Identification
质粒构建
孟庆明 2019-04-09
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主要内容
质粒的概念及特点 质粒构建的基本步骤和原理
一、质粒的概念
载体（vector;carrier;vehicle） 可以插入核酸片段、能携带外源核酸进入宿主细胞，并在其中进行 独立和稳定的自我复制的核酸分子。基因工程中广泛应用的载体多 来自人工改造的细菌质粒、噬菌体或病毒核酸等。多数载体是DNA 分子，但某些RNA分子也能用做载体。
质粒的构建原理
质粒的构建原理质粒是一种环状的DNA分子，常用于基因工程和基因转移研究中，具有无菌发酵的能力。
质粒构建是将外源基因插入质粒中，形成重组质粒，然后通过转化等方法将重组质粒导入目标细胞中，实现外源基因的表达。
质粒构建主要包括质粒选择、外源基因克隆、质粒复制源的选择和质粒验证等步骤。
首先，质粒选择是质粒构建的第一步。
常用的质粒有pUC、pBR322、pET等。
质粒的选择主要考虑质粒的大小、拷贝数和复制源。
较小的质粒易于操作，而高拷贝质粒有更高的表达效率；复制源是质粒复制和稳定维持的关键元件，常用的复制源有p15A、pMB1和ColE1等。
其次，外源基因克隆是质粒构建的核心步骤。
一般来说，先从源细胞中提取目标基因的DNA序列，然后使用PCR扩增或酶切方法将目标基因插入质粒的多克隆位点（多克隆位点是质粒上的一段特定区域，用于插入外源基因）。
在PCR扩增中，引物可以根据目标基因序列设计，将目标基因扩增出来；在酶切中，则需要使用一对限制酶切酶切剪目标基因和质粒，生成具有互补末端的片段，然后通过连接将目标基因与质粒连接起来，形成重组质粒。
质粒复制源的选择是质粒构建的重要一环。
质粒复制源是指负责质粒复制的DNA序列，可以使质粒在宿主细胞中进行自主复制。
不同的宿主细胞可能对不同的质粒复制源有不同的适应性。
此外，质粒复制源还涉及到质粒的拷贝数和稳定性。
通常来说，高拷贝质粒（如pUC）能够在细胞中形成较高的拷贝数，适合对外源基因进行高效表达；而低拷贝质粒（如p15A）则适合用于负载大片段DNA。
最后，质粒构建的最后一步是质粒验证。
质粒验证是为了确认重组质粒是否成功构建。
一种常见的验证方法是限制性酶切分析，通过对重组质粒进行限制酶切检测，可以观察到目标基因的大小变化，从而判断是否成功插入外源基因；另一种验证方法是测序分析，通过将重组质粒进行测序，可以得到目标基因的序列信息，验证插入的正确性。
总而言之，质粒构建的原理是将外源基因插入质粒中，通过质粒选择、外源基因克隆、质粒复制源的选择和质粒验证等步骤，构建出重组质粒。
质粒的构建
① 复制起点 ori pMB1系列（来源于ColE1）的 高拷贝型复制起点
② Ampr基因 pSF2124质粒的Ampr基因
③ Tetr基因 pSC101的Tetr 基因。
第6页，共29页。
（2）长度 4363bp
（3）选择标记
氨苄青霉素和四环素抗性。
（4）克隆位点
24个克隆位点。
其中9个会导致Tetr基因失活（如 BamH I、Hind Ⅲ、Sal I）； 3个会导致Ampr基因失活（Sca I、 PvuI、Pst I）。
从pBR322上切去HaeII片断，既除去 了mob识别位点，又增加质粒的拷贝数。
第12页，共29页。
② 改造EcoR I 位点 pBR325： 使EcoRI 也成为插入失活型位点。 在pBR322位点上接入一段来自噬菌体 PICm的HaeII酶切片断（带有氯霉素抗性 基因cmlr）。 cmlr上也带一个EcoRI位点。
§ 视已知蛋白的cDNA序列为诱饵(bait)，将其与DNA结合域融合， 构建成诱饵质粒。
§ 将待筛选蛋母细胞中。
§ 酵母细胞中，已分离的DNA结合域和转录激活域不会相互作用， 但诱饵蛋白若能与待筛选的未知蛋白特异性地相互作用，则可激 活报告基因的转录；反之，则不能。利用4种报告基因的表达， 便可捕捉到新的蛋白质。
第20页，共29页。
③ lacZ的肽互补
1）-肽（ lacZ’ ）：
-半乳糖苷酶N端的一段氨基酸片断（11-41 氨基酸）。
4聚体
N端的11-41aa N端的11-41aa N端的11-41aa N端的11-41aa
C端大部分 C端大部分 C端大部分 C端大部分
lacZ只有在29页。
载体lacZ’与互补
酵母菌表面展示操作步骤之质粒构建
酵母菌表面展示操作步骤之质粒构建质粒构建是酵母菌表面展示技术的关键步骤之一。
通过质粒构建，可以将目标蛋白基因与表面展示载体进行连接，实现对目标蛋白在酵母菌表面的展示。
以下是酵母菌表面展示操作步骤之质粒构建的具体内容。
第一步：目标蛋白基因与表面展示载体设计根据目标蛋白的特性和所需实验目的，选择合适的表面展示载体。
常用的载体有pCTCON2、pYD1、pYD2等。
此外，还需要根据质粒构建所需的连接酶切位点，设计引物对目标蛋白基因进行扩增。
第二步：目标蛋白基因扩增利用PCR方法，使用设计好的引物对目标蛋白基因进行扩增。
扩增条件可以根据目标片段的长度和GC含量进行优化。
扩增后，通过琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增产物的大小，并使用纯化试剂盒纯化产物。
第三步：表面展示载体线性化将表面展示载体进行限制性酶切，选择合适的限制性酶对载体进行切割。
切割产生的末端可以根据所需进行处理。
线性化的表面展示载体可以提高质粒的转化效率和稳定性。
第四步：目标蛋白基因与表面展示载体连接将线性化的表面展示载体与目标蛋白基因进行连接。
连接可以通过多种方法进行，如PCR法、接头连接法等。
连接方法的选择应根据实验需求进行。
第五步：连接产物转入宿主酵母菌将连接好的质粒转化到酵母菌宿主细胞中。
转化可以选择化学法或电转法进行。
转化后，将细胞均匀涂布在含有适当选择性的培养基上，利用培养基中的选择性条件筛选转化成功的菌落。
第六步：筛选和鉴定质粒对于转化成功的菌落，进行筛选和鉴定。
首先通过酵母菌表面展示的方法对菌落进行初步筛选。
初步筛选后的菌落进行PCR扩增，使用测序方法对扩增产物的序列进行验证。
第七步：质粒抽提和进一步分析对于验证成功的酵母菌菌株，进行质粒抽提。
常用的质粒抽提方法有碱裂解法、按序列分析法等。
抽提得到的质粒可以进行进一步分析，如限制性酶切、测序等。
以上就是酵母菌表面展示操作步骤之质粒构建的内容。
通过以上步骤，我们可以构建目标蛋白的表面展示载体，并将其成功转化到酵母菌中，为后续的酵母菌表面展示实验打下基础。
质粒构建全过程范文
质粒构建全过程范文质粒构建是分子生物学实验中的一项重要技术，用于将目标基因插入到质粒中，进而导入到宿主细胞中。
下面将详细介绍质粒构建的全过程。
第一步：设计引物在质粒构建之前，需要设计引物，包括引物序列的选择和设计。
引物是用于在PCR反应中扩增目标基因的特定序列。
引物的选择应考虑到目标基因的特点，如长度、GC含量、互补性及其它特异性需求。
第二步：PCR扩增目标基因通过PCR反应扩增目标基因，此过程中，使用上一步设计的引物。
PCR反应的条件和周期取决于目标基因的特点，如长度和GC含量。
扩增后的DNA片段可以通过琼脂糖凝胶电泳检测。
第三步：准备载体质粒选择一个合适的载体质粒，根据实验需求选择质粒的构型、大小及适用宿主细胞。
将质粒提取并进行消毒处理，以去除可能的污染物。
第四步：限制性内切酶切质粒与目标基因通过在特定位点使用限制性内切酶切割载体质粒和PCR扩增得到的目标基因，以生成互补的黏性末端。
第五步：连接目标基因与载体质粒将切割后的载体质粒与目标基因进行连接。
此时，两者的黏性末端会互相连接，形成短暂的连接体。
可以使用连接酶、盐溶液等辅助物质来增强连接效果。
连接后的质粒可以通过琼脂糖凝胶电泳检测。
第六步：转化宿主细胞将连接后的质粒转化到宿主细胞中，以使宿主细胞具有新质粒。
转化的方法有多种，包括化学法、电渗透法、热冲击法等。
选择合适的转化方法要考虑到宿主细胞的特点。
第七步：宿主细胞筛选与鉴定转化完成后，宿主细胞需要进行筛选与鉴定。
一般来说，可以利用抗生素抗性基因选择含有质粒的细胞。
通过培养在含有抗生素的培养基上，只有含有质粒的细胞能够生长。
第八步：验证目标基因的插入通过PCR扩增或测序等方法验证目标基因是否成功插入到质粒中，并且在宿主细胞中表达。
可以使用特异性引物扩增目标基因，然后进行琼脂糖凝胶电泳检测。
测序可以进一步验证目标基因的正确性。
第九步：扩增检测阳性菌落通过原核培养使阳性菌落扩增，以获得足够大量的质粒实验使用。
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前期准备工作
1、抗生素配制：将抗生素配制成50mg/ml，过滤除菌，分装成500ul/管，-20℃保
存。
2、LB固体培养基：胰蛋白胨lOg、酵母提取物5g、NaCll0g加入800ml灭菌水，
充分溶解，加NaOH调节pH值至7．0，加灭菌水定容至1L，加入15g琼脂，高压灭菌，按照30～35ml培养基／90mm培养皿铺制平板，40C保存。
3、LB培养基：胰蛋白胨lOg、酵母提取物5g、NaCl10g加入800ml灭菌水，充分
溶解，加NaOH调节pH值至7．0，加灭菌水定容至lL，高压灭菌后，40C保存。
4、LB／Amp培养基：胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCll0g,加入800ml灭菌水，
充分溶解，加NaOH调节pH值至7．0，加灭菌水定容至1L，高压灭菌后，冷却至室温，加入1mlAmpicillin(100mg／m1)匀，40C保存。
5、LB／Kan固体培养基：胰蛋白胨lOg、酵母提取物5g、NaCl l0g加入800ml灭
菌水，充分溶解，加NaOH调节pH值至7．0，加灭菌水定容至1L，加入159琼脂，高压灭菌，冷却至60度，加入lml 卡那霉素(100mg／m1)混匀，按照30～35ml培养基／90mm培养皿铺制平板，40C保存。
6、l％琼脂糖凝胶：琼脂糖O．6g，1×TBE 60ml，煮沸，冷却至60℃后灌胶。
7、无菌水：去离子水高温高压灭菌，分装成1ml/管，-20℃保存。
8、感受态细菌：取大肠杆菌DH5α单菌落到5ml的LB中培养过夜，37℃以1:100
转接，250rpm培养至OD0.3~0.4，取1ml预冷菌液到灭菌EP管中，4℃1500rpm 离心5分钟，吸干上清再加入50ul预冷新鲜LB轻轻悬浮菌体，加入50ul 2xTSS 快速轻轻混匀，至冰上30分钟，或者直接冻存于-80℃
9、50 x TAE 电泳缓冲液制备：称量Tris 242g，Na2EDTA.2H2O 37.2g于1L烧杯
中；向烧杯中加入约800ml去离子水，充分搅拌均匀；加入57.1ml的冰乙酸，充分溶解;用NaOH调pH至8.3，加去离子水定容至1L后，室温保存。
使用时稀释50倍即1×TAE Buffer
整体流程
1、质粒提取过程
1-1在室温下吸取4ml含有质粒大肠杆菌菌液，离心转速为10000g，1min，弃去上清液（用滤纸充分吸干）
1-2加入250ul的Solution/RNAse A摇晃使之悬浮（震荡器震荡混匀）
1-3加入250ul的Solution II轻轻混匀，从加液开始约3.5min后加入SolutionIII
1-4加入350ul的SolutionIII快速混匀，会出现白色沉淀
1-5在室温下离心转速为130000g，10min
1-6将离心后的上清液转至DNA结合柱（不要将沉淀倒入），室温下离心转速为10000g，1min
1-7弃去滤液，加入500ul的HB Buffer，室温下离心转速为10000g，1min
1-8弃去滤液加入700ul的DNA wash Buffer，室温下离心转速为10000g，1min，重复一次
1-9弃去滤液，空柱，室温下离心转速为13000g，2min
1-10将DNA结合柱置于1.5ml灭菌微量离心管上，加入50ul预热的灭菌去离子水放置2min，室温下离心转速为13000g，1min
1-11将提取的质粒电泳鉴定并置于40C冰箱保存
注：1-3中的时间尽量保证精确在三分钟到三分半之间，时间过短，无法破坏细
菌的细胞壁及细胞膜质粒无法提取出来;时间过久，破坏过于严重会使细菌的基
因组序列也被提取出来。
预热的水和两分钟的静置可以使DNA更好的溶解，有利于提高产率
电泳使用100v电压一般情况下30分钟足够分离DNA了下同
2、目的基因扩增体系
5×PrimeSTAR Buffer （Mg2+ plus） 10ul
dNTP Mixture 4ul
引物 R 1ul
引物 F 1ul
目的基因 1ul
PrimeSTAR HS 0.5ul
灭菌蒸馏水 32.5ul
反应过程
98℃ 5min（1cycle）
98℃ 15s
60℃ 15s 30-35cycle
72℃ 2min
72℃ 10min（1cycle）
4℃∞ （1cycle）
延伸步骤的时间随着目的基因序列的变长而适当的延长（）
3、DNA纯化
3-1将bFGF PCR产物加入5倍体积的Buffer cp，震摇完全混合
3-2离心后将样本加入DNA结合柱，室温下离心转速为10000g，1min
3-3弃去滤液，加入700ul的DNA wash Buffer，室温下离心转速为10000g，1min
3-4弃去滤液，重复步骤3-3
3-5弃去滤液，将空柱室温下离心转速为13000g，2min
3-6将DNA结合柱置于1.5ml灭菌微量离心管上，加入30ul的无菌水，静置2min，
室温下离心转速为13000g，2min
3-6将得到的纯化DNA电泳鉴定并40C保存
4、目的基因与质粒的酶切
根据目的基因与质粒的不同采用不同的酶进行酶切我们一般采用的是以下几种
酶
ECOR I Hind III 双酶切反应体系
ECOR I 1ul
Hind III 1ul
目的基因或质粒 20ul
10×Buffer 4ul
ddH2O 14ul 总体积 40ul
NotI酶切
Not I 1ul
BSA 2ul
10 x buffer（H) 2ul
0.1%Triton X-100 2ul
目的基因或质粒 13ul
总体积 20ul
酶切一般使用的是37℃过夜以保证酶切产物的纯度。
5、酶切产物纯化连接
纯化步骤同3
连接体系
T4 DNA Ligase Buffer 2.5ul
DNA 0.3pmol
质粒 0.03pmol
T4 DNA Ligase 1ul
总体积 25ul
16℃连接过夜
注：连接之前根据酶切产物电泳大概确定质粒和目的基因的含量（ug/ul）,根据公式进行计算换算成pmol，比例一般使用3-10之间
公式如下：
Pmol*bp数*660/1000000=ug
6、连接产物转化
5-1取出-800C保存的感受态在冰上进行解冻
5-2加2ul的DNA（pCMV-MCS与bFGF），轻弹混匀
5-3放于冰上30min
5-4 420C水浴热激90s
5-5取出置冰上2min
5-6加入800ul预热的培养基（370C)
5-7 370C摇床1h
5-8取100ul培养液放入不同含有氨苄抗生素的培养平板中
5-9转化液保存在40C中
5-10转化的平板倒置于370C培养箱过夜培养
7、单菌落挑选
观察过夜培养的平板，可见平板上有细菌的单菌落，挑选其中的较小的单菌落进行摇菌，一般采用试管加入5ml的液体培养基并加入适量的抗生素（50ug/ml）
注：连接的质粒进入细菌后抗性表达一般不如原质粒迅速故挑选单菌落时选用较小的单菌落
8、提取质粒步骤同1
9、酶切鉴定体系如4（酶切鉴定不用纯化酶切产物）
10、测序
特例：
1、如果两种基因的多酶切位点不适合进行双酶切或者单酶切，则可以使用重叠
PCR的方法将两种基因连接到一起，具体如下:
5×PrimeSTAR Buffer （Mg2+ plus） 20ul
dNTP Mixture 8ul
前端基因 F 2ul
后端基因 R 2ul
前端基因 3.4ul
后端基因 8ul
PrimeSTAR HS 1ul
灭菌蒸馏水 63.6ul 总体积 100ul
反应过程
95℃ 2min 95℃ 3min
98℃ 15s 98℃ 15s
50℃ 15s 5cycle ℃ 15s 30cycle
72℃ 2min 72℃ 2.5min
72℃ 20min
40C ∞
2、如果酶切质粒或基因产生的基因片段的大小相差不大，一般相差几百个bp可
以使用切胶回收的办法来分离我们想要的基因，一般采用2%的琼脂糖凝胶进行分
离时间要久一点，大概一个小时左右，以利于分离分子量比较接近的DNA
具体如下：
1.1g/ml加入Binding Buffer（xp2），550C~600C溶解，7min，混匀2~3min
2.样本转移至DNA结合柱，离心，10000g，1min
3.弃去滤液加入300ulBinding Buffer（xp2），离心，10000g，12min
4.弃去滤液加入700ul SPW wash Buffer至结合柱，离心，10000g，12min
5.重复第四步
6.弃去滤液，离心，13000g，2min，甩干
7.加入30~50uldH2O，室温下，静置2min，离心，13000g，1min
注意事项：切胶回收的时候注意紫外灯不能过久照射琼脂糖凝胶，以免DNA被破
坏或发生改变，照射后标定好目的条带的位置将紫外灯关闭移出曝光仪，切胶称
重。
为了提高产率水要事先预热。