课题5DNA的粗提取与鉴定-温州第二高级中学
DNA的粗提取与鉴定

DNA 的粗提取与鉴定
一、实验原理:
1、析出DNA 的原理:DNA 在NaCL 溶液中的溶解度是随着NaCL 浓度的变化而变化的,当NaCL 的物质的量浓度为0.14mol/L 时,DNA 的溶解度最低,高于或低于这一浓度溶解度都会增高。
如图:
2、提纯DNA 的原理:
DNA 不溶于冷酒精,而细胞中某些物质可溶于冷酒精。
3、鉴定原理:DNA 遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色。
二、方法步骤:
材料准备:常用鸡血细胞液
柠檬酸钠(抗凝剂)+鸡血−−−→静置或离心
血浆(弃去)+鸡血细胞液。
如图:
说明:①柠檬酸钠防止血液凝固。
②弃去上清液,是因为DNA 存在于血细胞中,血浆很少(没有)。
③用鸟类血细胞是因为鸟类成熟红细胞含DNA ,而哺乳动物成熟红细胞不含DNA ,所以不能用。
④本实验还可以用菜花或动物肝脏等作实验材料。
第一次在2中,使DNA与蛋白质分离
①两次加入高浓度NaCL
第二次在5中,DNA再溶解
第一次在1中,使细胞吸水涨破
②两次加入蒸馏水
第二次在3中,降低DNA的溶解度
第一次在1中,取滤液(含核物质)
③三次过滤第二次在4中,取黏稠物质
第三次在6中,取滤液
说明:在第一、三次取滤液时,纱布1—2层,第二次取黏稠物时纱布应多层。
④5次搅拌均要求超一个方向,轻缓,防止DNA断裂。
(二
璃制品表面带电荷,DNA中的磷酸基带相反的电荷,会被吸附于玻璃表面,减少DNA。
DNA粗提取与鉴定实验总结

DNA粗提取与鉴定实验总结袁开米222010317011032DNA粗提取与鉴定是高中生物选修一专题五——DNA与蛋白质技术中课题1中的内容,该实验内容在中学生物教学中具有重要意义。
虽然学生在必修课中学习了与DNA相关的知识,对DNA的结构与功能有了一定的了解,但就像“雾里看花,水中望月”,总隔着一层,因此,本实验对学生来说有着很大的价值,给他们一次直接从生物体内直接提取DNA的机会,对DNA有了一定的现实及情感体验!为了很好的锻炼与提升自己的实验教学技能,我们组的成员都十分重视本次实验教学。
在接到实验任务后,组长进行了合理而严密的分工,充分发动小组成员为本次实验教学做准备。
每个小组成员都进行资料查询与整理,制定出自己的实验设计方案,然后进行小组讨论敲定本次实验教学的最终教学方案及教学设计等。
令人欣慰的是在制定教学方案的过程中我还是发现了自己在很多地方的不足,比如,对DNA的相关知识仍然掌握得不到位,经过本次实验教学后对DNA的基础知识有了一个全方位的归纳与整理,同时也激发了我对DNA前沿知识的学习望,其次,之前我一直认为DNA的粗提取与鉴定这个实验太过简单,其实当自己亲自进行实验教学时发现并不是这么回事!因此,小事情中看大人物的自我体验又让我体验了一遍,也许这点体验在以后的生活中还会多次出现,但我相信,有了这一次小小的体验后,我的做事态度从此之后又是另一种状态,即便仅仅只有一小点变化!实验方案与教学设计敲定后,我们就开始准备预实验!若要说本次实验教学让人感触最深的我认为还是预实验。
说实话,或许是我对该实验比较感兴趣的缘故,我在预实验中充分体验到了实验的乐趣。
刚开始做预实验时,我做的实验材料是香蕉,他们其他人做的预实验材料为菜花,虽然我做了七八次以香蕉为实验材料的DNA粗提取与鉴定实验都没有观察到明显的实验现象,但无论从实验教训、实验态度,还是从经验积累方面来说,我对自己的表现还是感觉欣慰。
我用香蕉为实验材料的实验经验与教训为后面以菜花为材料的预实验积累了经验与教训,使我们在后续实验中进展得相对较顺利!在预实验中,虽然预实验失败后会感觉到有点郁闷,但我喜欢这种感觉,希望以后能够从事这一方面的事业!经过小组成员的不懈能力,我们的预实验顺利结束!一切实验教学准备好后,我们小组进入了实验教学阶段,实验教学阶段开展得很顺利,实验讲解很到位,教学氛围很好,实验过程中同学合作融洽,只是实验现象没有达到预期目标,DNA的鉴定没有观察到明显的现象。
DNA的粗提取与鉴定教案

完成DNA的粗提取与鉴定
视频:DNA的粗提取与鉴定
小结
小结
板书设计
DNA的粗提取与鉴定
1.破碎细胞,释放DNA
2.去除滤液中的杂质
(1)溶解细胞核内的DNA
(2)DNA的析出
3.DNA的初步纯化
背景介绍;DNA的溶解性
图片:DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线
问题:
在什么浓度下,DNA的溶解度最小?DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的?
在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时,DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低;在0.14 mol/L时,DNA溶解度最小;当NaCl溶液浓度继续增加时,DNA的溶解度又逐渐增大。
第一步:
在浓度较高的NaCl溶液溶液中核蛋白容易解聚,游离出的DNA溶解在溶液中。
方法:在溶液中加入两倍体积的浓度为2mol/L的NaCl溶液,用玻璃棒沿一个方向搅拌1min,使DNA充分溶解。
板书:(1)溶解细胞核内的DNA
第二步:
加蒸馏水降低NaCl溶液浓度,使DNA析出。
方法:缓慢贴壁加入蒸馏水,并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌,以利于DNA分子的附着和缠绕。同时应注意控制加水量,使NaCl溶液的终浓度为0.14mol/L,直到溶液中丝状物不再增加时为止。
4.DNA的鉴定
教学反思
那么教材中选择鸡血细胞液作为实验材料,而相对于其他材料鸡血细胞液,有什么优点呢?
1.鸡是真核生物,真核生物的DNA都在染色体上。
2.鸟类的血细胞核大,DNA多(从核DNA数目来看,猪38条,鸡78条,哺乳动物血0条,猕猴桃58条,洋葱16条,豌豆14条,菠菜12条,大肠杆菌1条)
《专题5 课题1 DNA的粗提取与鉴定》教学设计教学反思

《DNA的粗提取与鉴定》教学设计方案(第一课时)一、教学目标:1. 了解DNA粗提取的主要步骤,理解DNA在不同溶剂、温度、盐浓度下的溶解度差别。
2. 掌握DNA鉴定方法,了解DNA的结构和功能。
3. 培养实验操作技能,提高观察、分析和解决问题的能力。
二、教学重难点:1. 教学重点:掌握DNA粗提取的基本步骤,理解不同条件对DNA溶解度的影响。
2. 教学难点:实验操作过程中细节的把握,以及观察和分析实验结果。
三、教学准备:1. 准备所需的实验器械和试剂,确保实验条件适宜。
2. 准备教材、PPT和相关视频资料,用于教室讲解和演示。
3. 提前安置学生预习相关内容,熟悉实验步骤和注意事项。
4. 准备好问题和讨论话题,以便教室互动和总结。
四、教学过程:1. 导入新课教师展示一些与DNA相关的图片或视频,如DNA指纹、亲子鉴定、基因诊断等,引导学生思考DNA在生物体中的重要作用。
然后引出本节课的主题——DNA的粗提取与鉴定。
2. 实验原理讲解教师详细讲解实验的原理,包括DNA在不同浓度盐溶液中的溶解度差别、DNA在不同溶剂中的溶解度差别以及离心原理等。
3. 小组讨论与合作学生分组,根据教师提供的材料(鸡血、细胞膜成分、酒精、9%氯化钠溶液等)进行讨论和合作,尝试提取DNA。
每组推选一名代表汇报本组的实验结果和遇到的困难。
4. 教师指导教师根据学生实验情况进行指导,对实验过程中出现的问题进行解答,并对实验操作细节进行强调。
5. 实验总结与评判学生完成实验后,教师引导学生对实验结果进行分析和总结,并针对学生的表现进行评判。
教师可以提出一些问题,如“你们是如何判断DNA是否提取成功的?”“在实验过程中遇到了哪些困难?是如何解决的?”等,引导学生思考和讨论。
6. 拓展延伸教师引导学生思考在实际生活中的应用,如生物技术在医学、法医学、农业等方面的应用,鼓励学生利用课余时间进行探索和钻研。
7. 作业安置教师安置一些与本节课内容相关的作业,如查阅相关资料、撰写小论文等,以稳固学生对本节课知识的掌握和应用能力。
高中生物学新课程选择性必修3实验教学设计5:DNA的粗提取与鉴定

环节二问题驱动,明确原理
教师引导学生通过阅读教材,分析本实验涉及的DNA物理性质和化学性质,以表格形式进行归纳总结。
1.DNA存在于真核细胞的什么部位?(主要细胞核)
2.如何使DNA从细胞内到达细胞外?(破坏生物膜)
3.如何将DNA与不溶性杂质分离?(过滤)
4.如何将DNA与可溶性蛋白等杂质分离?(利用溶解性)
实施实验活动,提升探究能力。
环节五分享与交流(调查结束以后)
组织、评价
由课题组织在班内分享研究过程及成果,并针对班级学生及学科老师的提问进行解释与说明。
培养学生的合作交流意识与能力。
作业布置
以上活动全部结束以后,由课题组长负责撰写研究报告。
教学反思
以课题组为单位开展实验活动,交流研究成果的学习形式,既解决了学校实验条件有限的客观困难,也充分发挥了部分学科积极分子的学习积极性,提升了他们的专业特长。小组中各成员具有明确的分工,有利于小组成员在实验过程中地贡献一份力量,增强参与实验的积极性。
3.通过自主改进并优化实验材料、试剂、操作方法,借助实验评价量化表记录并评价实验过程和分析实验结果,培养实验方案设计及对结果展开讨论的科学探究能力。
教学重点
DNA的提取原理和方法
教学难点
DNA的鉴定方法
教学方法
讨论法,实验法,讲授法
实验原理
1.DNA提取原理:利用葱白、洋葱和猕猴桃等材料提取DNA,依据了到哪不溶于酒精,而其他有机物易溶于酒精,且不同浓度氯化钠溶液中DNA的溶解度不同等原理。
5.鉴定DNA的原理。
意在培养学生自主归纳总结的能力,问题设计符合学生的已有认知水平且层层递进,并有助于引导学生层层剖析,逐步理解提取类和鉴定类实验的一般流程。
高三生物二轮复习专题五DNA的粗提取与鉴定

③测定并计算
取DNA稀释液100µL至比色杯中,测定260nm处 的光吸收值
DNA含量(g/mL)=50×(260nm的读数)×稀释倍数
课堂小结
多 聚
PCR原理
DNA的复制需要酶、原料、能量、引物 DNA的变性和复性受温度影响
可以通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质。 第二次过滤,除
去蛋白质沉淀
在滤液中加入NaCl,使NaCl溶液浓度为2mol/L,过滤除去不溶
的杂质,再加入蒸馏水,调节NaCl溶液浓度为0.14mol/L,析
出DNA,过滤除去溶液中的杂质,再用2mol/L的NaCl溶液溶
解DNA。 第三次过滤,除去蛋白质滤液
二、 PCR实验操作
(一)设备及用具
1、PCR仪 实质上是能够自动调控温度的仪器
2、微量离心管 一种薄壁塑料管,总容积为0.5mL
3、微量移液器 用于定量转移PCR配方中的液体,其 上的一次性吸液枪头用一次更换一次 4、离心机 一种通过高速转动产生离心现象, 能将固体与液体分开的设备。
(二)操作步骤:
DNA不溶于酒精,但细胞质中某些蛋白质溶于酒精。
专题5课题2
《多聚酶链式反应扩增DNA片断》
基础知识
1.元素组成: C、H、O、N、P
2.基本单位: 脱氧核苷酸
脱氧核 苷酸
磷酸 脱氧核苷
脱氧核糖
含氮 嘌呤 碱基
嘧啶
腺嘌呤(A) 鸟嘌呤(G) 胞嘧啶(C)
胸腺嘧啶(T)
3.脱氧核苷酸链的形成
脱氧核苷酸链结构简图
3、原理:当不同的蛋白质通过凝胶时,相 对(相对分子质量较小)的蛋白质容易进入 凝胶内部的通道,路程( 较长 ),移动速 度( 较慢),而(相对分子质量较大)的蛋 白质无法进入凝胶内部的通道,只能在 (凝胶外部)移动,路程(较短),移动速 度(较快),相对分子质量不同的蛋白质因 此得以分离。
DNA的粗提取与鉴定

DNA的粗提取与鉴定(一)实验原理鸟类血液中红细胞有细胞核,细胞核内DNA与蛋白质结合成染色质。
利用DNA在0.14mol/L的氯化钠溶液中溶解度最低,而蛋白质此时的溶解度高的特点,可以使DNA与蛋白质分离,形成沉淀析出,通过过滤,得到粗提取的滤出物DNA。
再利用DNA不溶于酒精,但细胞中的其他物质可溶于酒精的特点,进一步提取出含杂质较少的DNA。
利用DNA遇二苯胺(沸水浴)成蓝色的特性,可以鉴定提取的DNA。
(二)实验材料(以鸡血为例)鸡血细胞液:先配备10%的柠檬酸钠溶液,按180mL新鲜鸡血混合100mL10%柠檬酸钠溶液的比例,立即将血液与柠檬酸钠充分混合,同时用玻璃棒搅拌以免凝血。
然后,用离心机以2000转/min的速度离心4min后,用吸管除去离心管上清液,就可获得所需的鸡血细胞悬液。
每组大约需要5—10mL鸡血细胞悬液。
如果无离心机,可将与柠檬酸钠充分混合的血液置于冰箱内,静置一天,使血细胞自行沉淀后,也可获得所需的鸡血细胞悬液。
(三)试剂与仪器1、2mol/L的NaCl溶液称取117g的NaCl,加蒸馏水至1000mL,使之完全溶解,即可获得2mol/L 的NaCl,须按此配方配备大量的2mol/L 的NaCl。
2、二苯胺试剂A液——1.5g二苯胺溶于100mL冰醋酸中,再加1.5mL浓硫酸,用棕色瓶保存。
B液——体积分数为0.2%的乙醛溶液。
实验前,将0.1mL的B液加入到10mL的A液中,现配现用。
3、0.015mol/L的NaCl溶液称取0.88g氯化钠加蒸馏水至1000mL,使之完全溶解。
4、塑料杯和试管DNA易吸附在玻璃器皿上,用塑料杯和试管可减少提取过程中DNA的损失。
(四)实验方法与步骤1、提取细胞核物质取5—10mL鸡血细胞悬液入烧杯中,加蒸馏水20mL,同时,用玻璃棒沿一个方向快速充分搅拌,使血细胞过度吸水破裂,细胞核内物质释放出来,然后用纱布过滤取其滤液。
2、溶解核内的DNA在滤液中加入2mol/L的NaCl40mL,并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min,核中DNA游离并充分溶解,染色质中的DNA和蛋白质分离。
课题6 DNA的粗提取与鉴定(学案)

省海中高二生物(选修)教学学案课题5DNA的粗提取与鉴定一、达标(一)知识目标知识与技能: 1、通过尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取,了解DNA的物理化学性质。
2、理解DNA粗提取与鉴定的原理过程与方法:掌握DNA如提取计数,能利用DNA的性质进行实验设计和操作情感态度与价值观:通过对DNA的粗提取的实验过程的设计及操作,锻炼科学的思维方法,培养实事求是的科学态度。
(二)重点和难点重点: DNA的粗提取和鉴定方法难点: DNA的粗提取和鉴定方法二、基础知识1.提取DNA的方法提取生物大分子的基本思路是。
对于DNA的粗提取而言,就是要利用、等在物理和化学性质方面的差异,提取DNA,去除其他成分。
1)DNA的溶解性DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的中溶解度不同,利用这一特点,选择适当的盐浓度就能使充分溶解,而使杂质沉淀,或者相反,以达到分离目的。
图5—1是DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线,请根据曲线图,思考:①在什么浓度下,DNA的溶解度最小?DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的?②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出?此外,DNA不溶于溶液,但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。
利用这一原理,可以将DNA与蛋白质进一步的分离。
2)DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解,但是对没有影响。
大多数蛋白质不能忍受60—80o C的高温,而DNA在以上才会变性。
洗涤剂能够瓦解,但对DNA没有影响。
3)DNA的鉴定在条件下,DNA遇会被染成色,因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
2.实验设计1)实验材料的选取凡是含有的生物材料都可以考虑,但是使用的生物组织,成功的可能性更大。
在下面的生物材料中选取适合的实验材料:鱼卵、猪肝、菜花(花椰菜)、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基的大肠杆菌思考:哺乳动物的红细胞的特点?2)破碎细胞,获取含DNA的滤液动物细胞的破碎比较容易,以鸡血细胞为例,在鸡血细胞液中加入一定量的,同时用搅拌,过滤后收集滤液即可。
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【课题】:课题5 DNA的粗提取与鉴定【主备人】:苗贤举【备课时间】: 3月10日【审核人】:宋利刚【复习目标】本课题通过尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取,了解DNA的物理化学性质,理解DNA粗提取以及DNA鉴定的原理。
【复习重点与难点】复习重点:DNA的粗提取和鉴定方法。
复习难点:DNA的粗提取和鉴定方法。
【知识回顾】一、实验原理1、提取DNA的方法提取生物大分子的基本思路是。
对于DNA的粗提取而言,就是要利用、等在物理和化学性质方面的差异,提取DNA,去除其他成分。
1)DNA的溶解性思考题1:DNA在氯化钠溶液中的溶解度有什么特点?对此有什么应用?思考题2:利用什么原理来将DNA与蛋白质分离开?2)DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解,但是对没有影响。
大多数蛋白质不能忍受60—80o C的高温,而DNA在以上才会变性。
洗涤剂能够瓦解,但对DNA没有影响。
3)DNA的鉴定思考题3:依据什么原理来鉴定DNA?在条件下,DNA遇会被染成色,因此二苯胺可以作为鉴定DNA 的试剂。
二、实验设计1、实验材料的选取凡是含有的生物材料都可以考虑,但是使用的生物组织,成功的可能性更大。
在下面的生物材料中选取适合的实验材料:鱼卵、猪肝、菜花(花椰菜)、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基的大肠杆菌2、破碎细胞,获取含DNA的滤液1)制备和提取细胞核物质:动物细胞的破碎比较容易,以鸡血细胞为例。
在鸡血细胞液中加入一定量的,同时用搅拌,得到鸡血细胞液。
过滤后收集研磨液;如果实验材料是植物细胞,需要先用溶解细胞膜。
例如,提取洋葱的DNA时,在切碎的洋葱中加入一定的和,进行充分的搅拌和研磨。
过滤后收集研磨液。
思考:①为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂?②加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么?③如果研磨不充分,会对实验结果产生怎样的影响?④此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分?2)溶解细胞核的DNA:向收集的滤液中加入的溶液,搅拌使DNA呈溶解状态。
3、去除滤液中的杂质方案一的原理是DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同;方案二的原理是蛋白酶分解蛋白质,不分解DNA;方案三的原理是蛋白质和DNA的变性温度不同。
思考:①为什么反复地溶解与析出DNA,能够去除杂质?②方案二与方案三的原理有什么不同?4、DNA的析出与鉴定将处理后的溶液过滤,加入与滤液体积、冷却的,静置,溶液中会出现,这就是粗提取的DNA。
用玻璃棒搅拌,卷起丝状物,并用滤纸吸取上面的水分。
取两支20ml的试管,各加入物质的量浓度为的NaCl溶液5ml,将丝状物放入其中一支试管中,用玻璃棒搅拌,使丝状物溶解。
然后,向两支试管中各加入4ml的。
混合均匀后,将试管置于中加热5min,待试管冷却后,比较两支试管溶液颜色的变化,看看溶解有DNA的溶液是否变。
三、实验案例:以鸡血细胞DNA的提取和鉴定为例:1.制备鸡血细胞液:在鸡血中加入质量浓度为0.1g/mL的柠檬酸钠溶液,离心处理;2.提取鸡血细胞的细胞核物质:向鸡血细胞液中加入蒸馏水,搅拌、过滤;思考1:加入蒸馏水的目的是什么?为什么能达到此目的?3.溶解细胞核内的DNA:加入2mol/L的氯化钠溶液,搅拌,使DNA呈溶解状态;4.析出含DNA的黏稠物:加入蒸馏水,用玻璃棒搅拌;思考题2:此时加入蒸馏水的目的是什么?5.滤取含DNA的黏稠物:过滤;思考题3:这次过滤与上次过滤的目的一样吗?为什么?6.将DNA的黏稠物再溶解:加入2mol/L的氯化钠溶液,搅拌,使DNA呈溶解状态;7.过滤含有DNA的氯化钠溶液:过滤;思考题4:这一步骤的目的是什么?思考题5:为什么反复地溶解与析出DNA,能够去除杂质?8.提取含杂质较少的DNA:加入冷却的95%的酒精,搅拌;思考题6:这一步骤的目的是什么?思考题7:为什么加入的酒精需要冷却的?9.DNA的鉴定:取两支试管,各加入0.015mol/L的氯化钠溶液5mL,一支加入提取的DNA,两支各加入4mL的二苯胺试剂。
混合均匀后置于沸水中加热。
四、操作提示1、以血液为实验材料时,每100ml血液中需要加入3g ,防止。
2、加入洗涤剂后,动作要、,否则容易产生大量的泡沫,不利于后续步骤地操作。
加入酒精和用玻璃棒搅拌时,动作要,以免,导致DNA分子不能形成絮状沉淀。
3、二苯胺试剂要,否则会影响鉴定的效果。
4.DNA的溶解度与NaCl溶液浓度的关系:当NaCl溶液浓度低于0.14mol/L时,随浓度的升高,DNA的溶解度降低;当NaCl溶液浓度高于0.14mol/L时,随浓度升高,DNA的溶解度升高。
5.盛放鸡血细胞液的容器,最好是塑料容器。
鸡血细胞破碎以后释放出的DNA,容易被玻璃容器吸附,由于细胞内DNA的含量本来就比较少,再被玻璃容器吸附去一部分,提取到的DNA就会更少。
因此,实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管,这样可以减少提取过程的DNA的损失。
[典例解析]本实验中有三次过滤:⑴过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液⑵过滤含粘稠物的0.14mol/LNaCl溶液⑶过滤溶解有DNA的2mol/LNaCl溶液以上三次过滤分别为了获得()A含核物质的滤液、纱布上的粘稠物、含DNA的滤液B含核物质的滤液、滤液中DNA粘稠物、含DNA的滤液C含核物质的滤液、滤液中DNA粘稠物、纱布上的DNAD含较纯的DNA滤液、纱布上的粘稠物、含DNA的滤液答案:A解析:用蒸馏水稀释鸡血细胞液,使血细胞的细胞膜、核膜破裂,释放出核物质,此时过滤只能得到含DNA和其他物质如蛋白质的滤液,这种滤液必须经过实验中其他步骤得相继处理,方能得到较纯的DNA。
DNA在0.13mol/LNaCl溶液中溶解度最低,成丝状粘稠物,可经过滤留在纱布上。
【习题巩固】一、选择题(10个)1.在研究DNA的基因样本前,采集来的血样需要蛋白水解酶处理,然后用有机溶剂除去蛋白质。
用蛋白水解酶处理血样的目的是()A.除去血浆中的蛋白质B.除去染色体上的蛋白质C.除去血细胞表面的蛋白质D.除去血细胞中的所有的蛋白质,使DNA释放,便于进一步提纯2.与析出DNA粘稠物有关的叙述,不正确的是()A.操作时缓缓滴加蒸馏水,降低DNA的溶解度B.在操作A时,用玻璃棒轻缓搅拌,以保证DNA分子完整C.加蒸馏水可同时降低DNA和蛋白质的溶解度,两者均可析出D.当丝状粘稠物不再增加时,此时NaCl的浓度相当于0.14mol/L3.洗涤剂能够瓦解(),但对DNA没有影响。
A.细胞壁B.细胞膜C.细胞核D.细胞质4.在沸水浴的条件下,DNA遇()会被染成蓝色。
A.斐林试剂B.苏丹Ⅲ染液C.双缩脲试剂D.二苯胺5.在DNA提取过程中,最好使用塑料试管和烧杯,目的是()A.不易破碎B.减少提取过程中DNA的损失C.增加DNA的含量D.容易洗刷6.下列操作中,对DNA的提取量影响最小的是()A.使鸡血细胞在蒸馏水中充分破裂,放出DNA等核物质B.搅拌时,要使用玻璃棒沿一个方向轻缓搅拌C.在“析出DNA粘稠物”时,要缓缓加蒸馏水,直至溶液中粘稠物不再增加D.在用酒精沉淀DNA时,要使用冷酒精,甚至再将混合液放入冰箱中冷却E在DNA的溶解和再溶解时,要充分搅拌7.DNA的粗提取中,将与滤液体积相等的、冷却的(),静置2—3min,溶液中会出现白色丝状物。
A.0.9%的NaClB.0.14mol/L的NaCl溶液C.质量分数15%的HClD.体积分数为95%的酒精溶液8.以血液为实验材料时,需要向血液中加入(),防止血液凝固。
A.醋酸钠B.龙胆紫C.柠檬酸钠D.醋酸洋红9.在向溶解DNA的NaCl溶液中,不断加入蒸馏水的目的是()A.加快溶解DNA的速度B.加快溶解杂质的速度C.减少DNA的溶解度,加快DNA析出D.减小杂质的溶解度,加快杂质的析出10.去除滤液中的杂质时,直接在滤液中加入嫩肉粉,利用嫩肉粉中的()分解蛋白质。
A.胃蛋白酶B.胰蛋白酶C.木瓜蛋白酶D.肠肽酶二、非选择题(3个)1.提取鸡血中DNA时,要除去血液中的上清液,这是因为什么?2.填写本实验完成下列实验操作时所用试剂。
⑴提取鸡血细胞中核物质⑵溶解核内DNA:⑶析出2mol/LNaCl溶液中的DNA⑷DNA粘稠物的再溶解⑸提取杂质较少的DNA白色乳状丝状物⑹DNA的鉴定3.关于DNA粗提取的实验材料的选择,也经过了多次实验效果的比较,最终选择鸡血做实验材料的原因是什么?请回答下列问题:⑴鸡血细胞中红细胞,家鸡属于鸟类,新陈代谢旺盛,因而血液中细胞树木较多,可以提供丰富的。
⑵实验前由老师制备血细胞液供同学们做实验材料,而不用鸡全血,主要原因是。
⑶生活在牧区的人们,采集牛、羊和马血比较方便,若他们按实验要求完成实验步骤后,结果是,这是因为这些动物和人一样,成熟的红细胞中,但若改用动物肝脏做实验材料,实验能顺利进行。
这是因为。
⑷若选用动物肝脏做实验材料,在提取之前,最好增加程序,使组织细胞更易分离。
【疑难点拨】1.为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂?答:蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体,水分可以大量进入血细胞内,使血细胞胀裂,再加上搅拌的机械作用,就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂),从而释放出DNA。
2.加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么?答:洗涤剂是一些离子去污剂,能溶解细胞膜,有利于DNA的释放;食盐的主要成分是NaCl,有利于DNA的溶解。
3.如果研磨不充分,会对实验结果产生怎样的影响?答:研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全,提取的DNA量变少,影响实验结果,导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。
4.此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分?答:可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质。
5.为什么反复地溶解与析出DNA,能够去除杂质?答:用高盐浓度的溶液溶解DNA,能除去在高盐中不能溶解的杂质;用低盐浓度使DNA析出,能除去溶解在低盐溶液中的杂质。
因此,通过反复溶解与析出DNA,就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。
6.方案二与方案三的原理有什么不同?答:方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白,从而使提取的DNA与蛋白质分开;方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同,从而使蛋白质变性,与DNA分离。
7.DNA的溶解度与NaCl溶液浓度的关系:当NaCl溶液浓度低于0.14mol/L时,随浓度的升高,DNA的溶解度降低;当NaCl溶液浓度高于0.14mol/L 时,随浓度升高,DNA的溶解度升高。
8.制备鸡血细胞液时,要在新鲜的鸡血中加入柠檬酸钠的原因制备鸡血细胞液时,要在新鲜的鸡血中加入抗凝剂——柠檬酸钠,防止血液凝固。
其原理是柠檬酸钠能与血浆中Ca2+发生反应,生成柠檬酸钙络合物,血浆中游离的Ca2+大大减少,血液便不会凝固,因为鸡血红细胞,白细胞都有细胞核,DNA主要存在于细胞核中,所以在离心或静置沉淀后,要弃出上层清液——血浆。