三种骨修复材料植入兔股骨内组织病理学探究
自固化磷酸钙人工骨松质骨颗粒作骨髓间充质干细胞载体修复家兔股骨头缺血性坏死的实验探究
Ｂ
ｔａｋｅ
ｔｈｅ
ｕｔｏａｌｌｅｒｇｉｃ
ｃａｎｃｅｌｌａｔｅｄ ｂｏｎｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ
ｍａｔｅｒｉａｌ．Ｔｈｅ
８ ｗｅｅｋｓ ａｆｔｅｒ ａｎｄ
ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ ｗｅｒｅ
ｏｐｅｒａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ
２，４，６ ｗｅｒｅ
ＢＭＳＣｓ
ｉｓｏｌａｔｅｄ，ｃｕｌｔｕｒｅｄ
ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｅｄ ｂｙ ｃｕｌｔｉｖａｔｉｎｇ ｗｈｏｌｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｗｈｉｃｈ ｗａｓ
摘 要
目的：骨髓间充质干细胞体外分离、培养和扩增技 术在实验阶段已经成熟并且在临床部分已经开始应用， 但是尚未能找到其合适的载体，不便于临床的实际应用。 为提高骨髓间充质干细胞在临床应用的疗效，实验拟比 自固化磷酸钙人工骨松质骨颗粒和自体松质骨作为载体 对实验性家兔股骨头缺血性坏死的修复作用。 方法：１．实验前准备及实验动物的分组：实验动物 提前一周饲养以适应环境及观察确定无疾病。术前一天 禁食水。２４只成年新西兰大耳白兔，随机分为Ａ、Ｂ两 组，每组１２只，Ａ组为白固化磷酸钙人工骨（Ｃａｌｃｉｕｍ
ａｖａｓｃｕｌａｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｆｅｍｏｒａｌ ｈｅａｄ ｗｈｉｃｈ ｔｈｅ ＣＣＰＣ ａｎｄ ａｕｔｏａｌｌｅｒｇｉｃ ｃａｎｃｅｌｌａｔｅｄ ｂｏｎｅ
ａｓ
ｓｕｐｐｏｒｔ ｍａｔｅｒｉａｌ． ａｎｄ
Ｍｅｔｈｏｄｓ：１．Ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｇｒｏｕｐ
ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｉｍａｌｓ：Ｂｒｅｅｄ ａｌｌ ａｎｉｍａｌｓ ｏｆ ｐｒｅｐａｒｅ ｆｏｒ
中文摘要
的高密度区，骨小梁结构完整。４周标本，钻孔区高密 度部分密度略减，钻孔区以外密度有所增加，骨小梁结 构完整。６周标本，内植ＣＣＰＣ部分密度仍略高，出现 骨小梁，钻孔区界限模糊，钻孔缺损区以外密度有所增 加，骨小梁紊乱，８周标本，内植ＣＣＰＣ部分密度基本 正常，出现骨小梁，钻孔区界限进一步模糊。钻孔缺损 区以外密度有所增加，骨小梁紊乱，出现软骨下囊性变。 Ｂ组２周标本钻孔区密度减低，钻孔区以外密度有所增 加，骨小梁结构完整。４周标本，钻孔区密度增高但仍 低于正常，钻孔区以外密度有所增加，骨小梁结构完整。 ６周标本，钻孔区可见稀疏骨小梁，钻孔区以外密度增 加，骨小梁紊乱，出现软骨下囊性变。８周标本，钻孔 区密度基本正常，出现骨小梁，钻孔区界限模糊。钻孔 区以外密度有所增加，骨小梁紊乱，出现软骨下囊性变。 从总体上看，Ａ组缺损区因植入完整的ＣＣＰＣ，故密度 逐渐降低最后出现正常骨小梁结构。Ｂ组缺损区植入明 胶海绵混合白体松质骨颗粒，密度由开始降低后升高， 最后出现正常骨小梁结构。２．股骨头的组织检查：Ａ组 术后２周时，钻孔缺损区内有大量的成骨细胞，缺损区 边缘有较多的类骨质和新生骨小梁。４周时缺损区内有 大量骨小梁形成及类骨质填充。６周时缺损区内可见比 较成熟的骨小梁，并出现骨髓组织。在８周时缺损区内 骨小梁趋于成熟，并有大量骨髓组织形成。Ｂ组实验动 物的股骨头标本术后２周时，钻孔边缘形成较多新生骨 组织，新生骨内侧有一个成骨细胞聚集层，而钻孔区中 心充满了炎症细胞。４周时，钻空区新生骨小梁增多，
慢病毒介导hBMP-2转染BMSCs复合脱钙松质骨修复兔股骨缺损的实验研究
•212«中国骨与关节损伤杂志2021年2月第36卷第2期Chin J Bone Joint Injury,Feb.2021,Vol.36.NO.2•临床论著•慢病毒介导hBMP-2转染BMSCs复合脱钙松质骨修复兔股骨缺损的实验研究陈佳滨打陈志达打肖莉莉食宋超-蔡役艺■,李强，，陶旋'1.解放军联勤保障部队第909医院（厦门大学附属东南医院）全军骨科中心，福建漳州363000；2.解放军联勤保障部队第909医院超声诊断科；3.桂林医学院创伤急救中心摘要：目的研究慢病毒介导人骨形态发生蛋白（Human bone morphogenetic protein,hBMP-2）转染骨髓间充质干细胞（Bone mesenchymal stem cells,BMSCs）植入脱钙松质骨后对兔股骨大段缺损的修复作用。
方法体外对兔BMSCs分离、培养、传代及表型鉴定后，采用慢病毒介导hBMP-2转染兔BMSCs,然后采用Western Blot法检测hBMP-2基因的表达情况。
兔股骨大段缺损模型制造成功后随机分为4组（n=6）,A组左侧股骨大段缺损区单纯行钢板螺钉内固定；B、C、D组左侧股骨大段缺损区行钢板螺钉内固定后分别植入脱钙松质骨.BMSCs复合脱钙松质骨、慢病毒介导hBMP-2转染BMSCs复合脱钙松质骨。
结果慢病毒介导hBMP2转染后的BMSCs细胞内hBMP-2基因能持续高效表达目的蛋白。
术后12周X线片显示，A、B、C组骨缺损修复未完成，D组左股骨缺损区骨痂开始塑形，骨缺损消失，髓腔再通，骨缺损修复完成：内固定取出后进行三维CT检查，A、B、C组左侧股骨缺损处再次发生骨折.D组并未再次发生骨折「结论慢病毒介导hBMP2转染后的兔BMSCs细胞内hBMP2目的基因能高效持续表达目的蛋白，能诱导兔BMSCs分化成骨从而促进兔股骨缺损的修复。
关键词：骨形态发生蛋白-2；慢病毒；骨髓间充质干细胞；兔股骨缺损；脱钙松质骨中图分类号:R-33文献标识码：B文章编号:1672-9935（2021）02-0212-03骨移植是目前治疗骨缺损的主要方法，包括自体骨移植和同种异体骨移植，自体骨移植来源有限且容易出现供区岀血、感染，同种异体骨来源较广但存在免疫排斥或感染等风险"7。
髓芯减压联合胶原基骨修复材料、VEGF对股骨头坏死家兔骨密度及生物力学的影响
局解手术学杂志http ://2023,32（7）J REG ANAT OPER SURG 髓芯减压联合胶原基骨修复材料、VEGF 对股骨头坏死家兔骨密度及生物力学的影响吕亚军,李宜炯,赵振拴,张宇宸,王伟 （河北医科大学第一医院骨二科，河北 石家庄 050031）［摘要］ 目的 探讨髓芯减压联合胶原基骨修复材料、血管内皮生长因子（VEGF ）对股骨头坏死（ONFH ）家兔模型的股骨头骨密度及生物力学的影响。
方法 30只家兔股骨头内注射无水乙醇建立ONFH 模型，随机分为健康对照组（A 组）、模型组（B 组）、髓芯减压联合自体松质骨组（C 组）、髓芯减压联合胶原基骨修复材料组（D 组）及髓芯减压联合胶原基骨修复材料和VEGF 组（E 组），每组6只。
治疗8周后，分别检测各组家兔股骨头的骨密度和生物力学参数（最大应力、弹性模量、刚度、最大载荷和能量吸收），HE 染色观察股骨头形态。
qRT -PCR 检测各组家兔的股骨头组织中骨保护素（OPG ）、血管内皮生长因子164（VEGF164）、血管内皮生长因子受体2（VEGFR2）、核因子κB 受体活化因子配体（RANKL ）和核因子κB 受体活化因子（RANK ）的mRNA 水平。
结果 B 组的骨密度较A 组显著降低（P <0.05），E 组的骨密度显著高于B 组、C 组和D 组（P <0.05）。
与A 组相比，B 组的空骨陷窝比率显著增高（P <0.05）；与B 组相比，C 组、D 组和E 组的空骨陷窝比率均降低，以E 组最低（P <0.05）。
与A 组相比，B 组的股骨头生物力学参数显著降低（P <0.05）；与B 组相比，C 组、D 组和E 组的股骨头生物力学参数均升高，以E 组最高（P <0.05）。
与B 组、C 组和D 组相比，E 组股骨头组织中OPG 、VEGF164和VEGFR2的mRNA 水平均升高（P <0.05），RANKL 和RANK 的mRNA 水平均降低（P <0.05）。
利用PLA、PGA、PLGA三种支架再生兔关节软骨
·论著·利用P L A、P G A、P L G A三种支架再生兔关节软骨陈哲峰范卫民刘峰【摘要】目的观察兔关节软骨细胞在聚乳酸(P L A),聚羟基乙酸(P G A),以及两者的共聚物P L-G A三种三维支架上的贴附和生长情况,利用组织工程技术培养工程化关节软骨。
方法多聚赖氨酸包埋P L A,P G A,P L G A三维细胞支架。
分离培养兔关节软骨细胞,体外扩增后种植到三种支架中。
在体外培养软骨细胞一支架复合物,4周终止培养,进行H E、M a s s o n组织学染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色。
结果(1)体外培养发现,软骨细胞在P L G A支架材料内贴附生长良好,长期培养仍保持软骨细胞特性,其贴附生长能力,分泌Ⅱ型胶原能力较P G A,P L A支架组强。
(2)支架经过多聚赖氨酸包埋后,软骨细胞的贴附生长及分泌Ⅱ型胶原能力均较对照组好。
结论多聚赖氨酸处理的P L G A三维支架适合软骨细胞贴附生长和分泌Ⅱ型胶原,可作为软骨组织工程的细胞载体。
【关键词】软骨细胞;细胞支架;多聚赖氨酸E x p e r i m e n t a l s t u d y o n r e g e n e r a t i o n o f a r t i c u l a r c a r t i l a g e o n P L A,P G A,P L G A s c a f f o l d b y t i s s u e e n g i n e e r i n g8/5).’2K2+,,A<);2%M%+,L I UA2+,N B2E-@3M2+3*K J@3’*E27%=Q,A%@Q3<K K%1%-327/*Q E%3-1,)-+G%+,C27%=-1U+%O2@Q%3D,)-+G%+,210029,8/I)<【A b s t r a c t】O b j e c t i v e T o s t u d y t h e a b i l i t y o f p o l y l a c t i c a c i d(P L A),p o l y g l y c o l i c a c i d(P G A),P L G A i ns u p p o r t i n g t h e g r o w t ho f r a b b i t c h o n d r o c y t e s,a n d t o r e c o n s t r u c t a r t i c u l a r c a r t i l a g eb y t i s s u e e n g i n e e r i n g.M e t h o d s C o a t e dP L A,P G A,P L G Aw i t h p o l y-l-l y s i n e,f r e e c h o n d r o c y t e s i s o l a t e d f r o m r a b b i t a r t i c u l a r c a r-t i l a g ew e r e s e e d e do n t o t h r e ek i n d s o f s c a f f o l d s a f t e r e x p a n s i o nb y i nv i t r o c u l t u r e.T h e c o m p l e xo f c e l l-s c a f f o l dw a s t h e n c u l t u r e d i n v i v o.A f t e r4w e e k s o f c u l t u r e,t h e c o m p l e xw a s a s s e s s e d b y h i s t o l o g i c a l s t a i-n i n g o fH-E a n dM a s s o n.I m m u n o h i s t o c h e m i c a l a n a l y s i sw a s p e r f o r m e d t o e v a l u a t e c o l l a g e n t y p eⅡs y n t h e-s i s.R e s u l t s(1)A r t i c u l a r c h o n d r o c y t e s w e r e w e l l d i s t r i b u t e d a n d a d h e r e d t o P G A,P L G A s c a f f o l d s a n dm a i n-t a i n e d t h e i r c h a r a c t e r i s t i c s o f a r t i c u l a r c a r t i l a g e t h r o u g h o u t t h e c u l t u r e p e r i o d.(2)C h o n d r o c y t e sw e r ew e l ld i s t r i b u te d a n d a d h e r e d t o s c af f o l d s a f t e r c o a t e dw i t h p o l y-l-l y s i n e,a n d s e c r e t e dm o r e t y p eⅡc o l l ag e n i n c o n-t r a s t t o n o n-c o a t e d s c a f f o l d s.C o n c l u s i o n P L G A s c a f f o l d c o a t e dw i t h p o l y-l-l y s i n e c a n s u p p o r t t h e c h o n d r o-c y t e p r o l i f e r a t i o nw i t hm a i n t e n a n c e o f t h e i r p h e n o t y p e,a nd c a n be s u i t a b l e c a r r i e r sf o r t i s s u e e ng i n e e r i n g o fa r t i c u l a r c a r t i l a g e.【K e y w o r d s】C h o n d r o c y t e;S c a f f o l d;P o l y-l-l y s i n e[(%-+,Q9C27(,<9,9Q32005,31(8):599S601N]由于软骨自身修复能力有限,创伤等病因导致关节软骨缺损后,常继发成为骨关节炎。
骨髓间充质干细胞与壳聚糖复合修复关节软骨损伤
骨髓间充质干细胞与壳聚糖复合修复关节软骨损伤陈路;夏先学;蒋科【摘要】背景：创伤等导致的关节软骨缺损是国内外骨科界面临的难题，组织工程学技术为软骨缺损的修复提供了新方法。
目的：探讨壳聚糖-骨髓间充质干细胞复合材料修复兔膝关节软骨缺损的可行性。
方法：将培养的兔骨髓间充质干细胞种植到壳聚糖支架上体外构建壳聚糖-骨髓间充质干细胞复合材料，移植到兔关节软骨缺损处为实验组，不予以特殊处理为对照组。
术后6，12周，大体观察以及甲苯胺蓝染色评定两组软骨组织修复情况。
结果与结论：术后6周，对照组仅有纤维组织增生，实验组关节软骨缺损处有软骨样组织生成。
术后12周，对照组软骨缺损边缘可观察到少量类透明软骨组织，实验组缺损区完全覆盖有光滑、透明软骨组织。
术后12周，对照组甲苯胺蓝染色较淡，有少量软骨组织生成，实验组甲苯胺蓝染色较明显，缺损完全被透明软骨组织所覆盖，软骨细胞较多。
结果表明兔骨髓间充质干细胞-壳聚糖支架复合材料能更好的引导软骨组织的生成，促进软骨缺损修复。
%BACKGROUND:Trauma easily leads to the emergence of articular cartilage defects, which is a difficult problem in the orthopedics field. Tissue engineering technology provides a new method for cartilage repair. OBJECTIVE:To explore the feasibility of combining chitosan and bone marrow mesenchymal stem cels to repair injured articular cartilage in rabbits. METHODS: Cultured rabbit bone marrow mesenchymal stem cels were seeded onto chitosan scaffold, and then the composite material was implanted into the defect as experimental group. Rabbits with no treatment served as control group. Gross observation and toluidine blue staining were carried out at 6 and 12 weeks after operation. RESULTS ANDCONCLUSION:At 6 weeks after operation, the control group had only fibrous tissue hyperplasia, and in the experimental group, cartilage-like tissues were generated at the defect site. At 12 weeks after operation, a smal amount of hyaline cartilage-like tissues were observed in the control group, and the defects in the experimental group were covered with smooth and hyaline cartilage tissues. After 12 weeks, the toluidine blue staining was light in the control group with a smal amount of cartilage tissues; in the experimental group, the toluidine blue staining was remarkable, and the defects were completely covered with hyaline cartilage tissues, and cartilage cels were increased in number. The findings indicate that chitosan-bone marrow mesenchymal stem cels composite material is better to induce cartilage tissue formation and promote cartilage defect repair.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2015(000)045【总页数】5页(P7254-7258)【关键词】干细胞;骨髓干细胞;软骨缺损;关节软骨;软骨修复;组织工程学;壳聚糖;细胞支架;骨髓间充质干细胞;动物模型【作者】陈路;夏先学;蒋科【作者单位】川北医学院附属医院骨科，四川省南充市 637000;川北医学院附属医院骨科，四川省南充市 637000;川北医学院附属医院骨科，四川省南充市637000【正文语种】中文【中图分类】R394.2文章亮点：1关节软骨缺损是一种常见的病变类型，临床治疗可选择不同的方法，但大多无法获得理想的效果。
纳米晶胶原基骨和骨髓间充质干细胞复合修复兔股骨头坏死缺损的研究
纳米晶胶原基骨和骨髓间充质干细胞复合修复兔股骨头坏死缺损的研究孙伟1 李子荣1 史振才1 张念非1 李艳2 崔福斋2 【摘 要】 目的 探讨采用纳米晶胶原基骨(nano-hydro xy apatite collagen,nHA C)和骨髓间充质干细胞(marr ow mesenchym al stem cells,M SCs)复合材料修复兔股骨头坏死骨缺损的可行性。
方法 2004年6月～10月,取45只成年新西兰大白兔制成双侧股骨头内骨缺损模型,随机分为3组进行修复,A组:骨缺损不填充任何材料;B组:骨缺损填充单纯nHAC;C组:骨缺损填充nHA C与M SCs的复合材料。
术后3组分别于4、8和12周对股骨头行影像学和组织学观察。
结果 影像学和组织学显示C组复合材料有良好的诱导成骨能力,术后4周即有明显的成骨反应和新骨形成,12周基本修复股骨头的骨缺损区;B组材料修复能力较C组差,但B组和C组均优于A组。
B组和C组对nHA C无明显异物反应。
结论 nHAC有较强的传导成骨作用,是修复兔股骨头骨缺损的良好移植材料;复合M SCs后能促进骨缺损的修复,对股骨头坏死的治疗有较大价值。
【关键词】 股骨头 坏死 纳米晶胶原基骨 骨髓间充质干细胞 复合材料 修复中图分类号:R681.8 R318 文献标识码:AEFFECT OF NANO-HYDROXYAPATITE C OLLAGEN BONE AND MARROW MESENCHYMAL STEM CELL ON TREATMENT OF RABBIT OSTEONECTOSIS OF THE FEMORAL HEAD DEFECT/SU N W ei,L I Zir ong,S H I Zhencai,et al.Center f or Osteonecr osis and J oint P r eser ving&Reconstruction,China-J ap an Fr iend ship H osp ital, Beij ing,100029,P.R.ChinaCorr esp onding author:L I Zir ong,E-mail:L ZR96@【Abstract】 Obj ective T o eva luate the effect o f nano-hydro x yapatit e colla gen(nHA C)bone and m arr ow mesenchy mal stem cells(M SCs)o n t he t reatment o f r abbit osteo necr osis o f t he femo ra l head(ON F H)defect.Methods Fr om June to O ctober2004,animal mo dels of O NF H defect w er e est ablished in45N ew Z ealand ra bbit s.T hey wer e divided into3g ro ups r ando mly:In g ro up A,as the contr ol g ro up,defect w as not filled w ith any implant s;In g ro up B w ith nHA C;I n g ro up C with nHA C+M SC.I maging and hist olog ical o bser va tio n w er e m ade4,8,12w eeks after oper atio n.Results g ro up C had a better o steog enesis ability t han g ro up B and gr o up A.gr oup B had a better osteo genesis a bility than g r oup A.O bv io us new bones and o steog enesis w ere observ ed in gr o up C4w eeks after oper atio n.T he defect areas in g ro up C w ere almo st r epair ed12w eeks after oper atio n.Conclusion nHA C has a better effect of osteo co nductio n and it is a superior mater ial fo r repair ing bo ne defect of ON FH and o f g reat value in tr eating ON F H when compounded w ith M SCs.【Key words】 F emo ral head Osteo necr osis N ano-hy dr ox y apat ite collagen M ar ro w mesenchymal stem cells Compound mat erial R epairFoundation items:Capital M edicine Development Research Fund(2002-1007);K ey Clinical R esear ch F und of M inist ry of Chinese Public Health(2004-2006) 股骨头坏死(o steonecrosis of the fem oral head, ONFH)为进展性和致残性疾病,常累及中青年,且多为双侧发病,保存自身股骨头的治疗是临床的一大难题。
牛松质骨复合骨髓基质干细胞植入治疗兔股骨头坏死的实验研究,
［ 键 词 ］ 股 骨 头 坏 死 ； 髓 基 质 干 细胞 ； 胞 培 养 关 骨 细 中 图 分 类 号 ： ２ ． Ｒ３ ２ ７ 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ：６ ２３ ５ （ ０ ７０ —Ｏ 一３ １７ —４ ７ ２ ０ ） ２１ １Ｏ
Ｅｘ ｒｍ ｅ ａ ｓ ｕ ｙ ｎ ｒ ａｔ ｅ ｆ ｍ ｏ ａ ｈｅ ｄ ｎｅ ｒ ｓｓ ｉ ｐｅ ｉ ｎｔ ｌ ｔ ｄ ｏ ｔ ｅ ｍ ｎｔ ｏｆ ｅ ｒ ｌ ａ ｃ ｏ ｉ ｎ ｒ ｂ ｔ ａ ｂｉ ｗｉｈ ｒ ｎ ｐ ａ ａ ｉ ｎ ｆ ｂｏ ｔ ｔ ａ ｓ ｌ ｎｔ ｔｏ ｏ ｎｅ
ｍ ａ ｒ ｗ ｓ ｒ ｍ ａ ｃ ｌｓ ｉ ｃ ｌ ｔ ｄ ｉ ｓ ｎｇ ｂ ｎｅ ＦＵ Ｓｏ ｒｏ ｔｏ ｌ ｅ ｌ ｎｏ ｕ ａ ｅ ｎ ｐｏ ｙ ｏ ｎｇ， ＺＨ Ａ Ｎ Ｇ Ｙ ｕ ｎｈ ． Ｄｅ ａ ｔ ｅ ｏｆ ａ ｅ ｐ ｒ ｍ ｎｔ
Ｏｒ ｈ ｐ ｅ ｉｓ ｈ ｆｌ ｔ ｄ Ｈｏ ｐ ｔ ｌ ｆ ｉ ｚ ｏ ｅ ｉａ ｌ ｇ ，Ｊ ｎ ｈ ｕ １ １ ０ ，Ｃｈ ｎ ｔ ｏ ａ ｄ ｃ ，ｔ ｅ Ａｆｉ ａ ｅ ｓ ｉａ ｎ ｈ ｕ Ｍ ｄ ｃ ｌ ｉ ｏ Ｊ Ｃｏ ｌ ｅ ｉ ｚ ｏ ２ ０ １ ｅ ｉａ
随机 分 为 ４组 ： 组 为 单 纯 造 模 组 、 组 为 髓 芯 减 压 组 、 Ａ Ｂ Ｃ组 为 自体 骨髓 基 质 干 细 胞 移 植 组 组 为 异 体 骨 髓 基 质 干 细胞 Ｄ 移 植 组 。 组 于 术后 １ ２ ４ ６ ８周 ， Ｃ、 组 分 剐 于 术后 ２ ４ ６ ８周 处 死 动 物 ， 察 所 获 股 骨 头 标 本 组 织切 片 光镜 检 查 和 Ａ 、 、 、、 Ｂ、 Ｄ 、 、、 观 组 织 图像 分 析 。结 果 ： 组 随 时 间增 长逐 渐 出现 骨 小 粱 紊 乱 ， 骨 囊性 变 。Ｃ、 组 ８周 时 钻 孔 中心 出现 骨 小 梁 结 构 ， Ｂ Ａ 软 Ｄ 而 组 只在 钻 孔 边缘 出现 密 度 增 高 ， 孔 中 心 无 变 化 。 论 ： 髓 基 质 干 细 胞 移 植 能 够 治 疗 股 骨 头 坏 死 ， 异 体 骨髓 基 质 干 细 钻 结 骨 且 胞 和 自体 骨 髓 基 质 干 细 胞 移 植 治 疗 兔 股 骨 头坏 死 的 疗 效 差 异 无 统 计 学 意 义 。 同时 ， 松 质 骨 可 以作 为 一 种 较好 的 栽 体 应 ２ ０７ 鲞箜 期
利用PLA、PGA、PLGA三种支架再生兔关节软骨
利用PLA、PGA、PLGA三种支架再生兔关节软骨陈哲峰;范卫民;刘峰【期刊名称】《江苏医药》【年(卷),期】2005(31)8【摘要】目的观察兔关节软骨细胞在聚乳酸(PLA),聚羟基乙酸(PGA),以及两者的共聚物PLGA三种三维支架上的贴附和生长情况,利用组织工程技术培养工程化关节软骨.方法多聚赖氨酸包埋PLA,PGA,PLGA三维细胞支架.分离培养兔关节软骨细胞,体外扩增后种植到三种支架中.在体外培养软骨细胞一支架复合物,4周终止培养,进行HE、Masson组织学染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色.结果 (1)体外培养发现,软骨细胞在PLGA支架材料内贴附生长良好,长期培养仍保持软骨细胞特性,其贴附生长能力,分泌Ⅱ型胶原能力较PGA,PLA支架组强.(2)支架经过多聚赖氨酸包埋后,软骨细胞的贴附生长及分泌Ⅱ型胶原能力均较对照组好.结论多聚赖氨酸处理的PLGA三维支架适合软骨细胞贴附生长和分泌Ⅱ型胶原,可作为软骨组织工程的细胞载体.【总页数】3页(P599-601)【作者】陈哲峰;范卫民;刘峰【作者单位】210029,南京医科大学第一附属医院骨科;210029,南京医科大学第一附属医院骨科;210029,南京医科大学第一附属医院骨科【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.骨髓基质干细胞复合PLGA支架修复兔关节软骨缺损 [J], 刘方红;张秋芳2.PLGA-Ⅱ型胶原复合rhBMP-2/bFGF修复兔膝关节软骨的缺损 [J], 束志勇;查振刚;汪炬;黄春华;刘宁;吴昊;王双利3.PLGA复合Ⅱ型胶原和生长因子诱导组织工程软骨修复兔关节软骨缺损 [J], 熊高鑫;李劼若;查振刚;谭文成;吴昊;林宏生;夏吉生;黄馨霈;屠美;张嘉晴4.载淫羊藿素多孔PLGA/TCP联合微骨折术修复兔膝关节软骨缺损的初步观察 [J], 李伟;王战伟;伍晓;于斐;张文涛;江长青5.利用PLGA细胞支架再生人关节软骨的实验研究 [J], 王卫国;娄思权;郑多;夏家辉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
兔骨移植材料组织学特征及体内埋植3个月病理学观察
并形成新骨。较好的临床应用价值。 ４．讨论 本文通过酸碱法去除骨组织中细胞成分，制备脱细胞骨基质速度较快，细胞成分去除较
完全。用ＮａＯＨ可溶解骨组织及细胞膜表面的酸性蛋白，并皂化脂肪成分；Ｈ２Ｓ０４可去除骨 组织及细胞膜表面的碱性蛋白，并在骨皮质表面脱去少量的钙所形成的凹陷，利于细胞爬行：‘ 使用无水碳酸钠可以中和残留的酸，防止进一步脱钙，也可进一步破坏残留细胞。通过加热， 可以加剧反应，缩短制备时间，但主要在于使蛋白、胶原进一步变性和脱落。通使其免疫原性降至最低。结果表明移植体内 的骨移植材料与体内骨组织结合紧密，镜下未见作为支架的移植材料。说明制作的骨移植材 料移植后生物相容性和生物可降解性较好。近年来有关脱细胞骨基质的文献报道较多，有学 者认为脱细胞骨基质只脱去细胞，保留促进成骨细胞生长的有机物质更利于成骨。针对这个 观点，我们将进一步通过动物实验，观察骨移植材料与脱细胞骨基质的生长特点及两者的优 劣比较，探讨骨移植材料的应用价值。
携带ＩＬ．１２的慢病毒载体有效促进ＤＣ细胞成熟
杜珍武，邸君，王茜，张玉成，吴玫，张桂珍 吉林大学中日联谊医院中心研究室，吉林长春，１３００３ｌ
目的：探讨携带ＩＬ．１２的慢病毒载体感染树突细胞对树突细胞成熟的影响 方法：应用基因重组技术构建携带人ＩＬ．１２的慢病毒载体，应用２９３ＦＴ细胞进行慢病毒 颗粒包装。应用用细胞因子ＩＬ－４与ＧＭ．ＣｓＦ体外诱导外周血单核细胞为树突细胞。包装的 病毒颗粒在诱导第４、６天进行树突细胞的感染，感染的树突细胞取培养的第７天、第１０ 天、第１４天的培养上清，应用ＥＵＳＡ方法测定ＩＬ．１２含量，应用流式细胞术测定树突细胞 表面ＣＤ８３分子表达，应用ＭＴＴ法测定树突致敏的淋巴细胞增殖。 结果：通过倒置显微镜观察，诱导因子作用的单核细胞形态逐渐由梭型变为圆形，由贴 壁细胞变为悬浮细胞，说明树突细胞诱导成功。病毒感染的树突细的ＩＬ．１２含量随时间逐渐 增多，而未被病毒感染的树突细胞的ＩＬ．１２含量明显低于病毒感染组，同时随时间变化无明 显变化。病毒感染的树突细胞不仅ＣＤ８３表达的细胞数量明显高于未被病毒感染组，而且致 敏的淋巴细胞增殖能力也高于未被病毒感染组。 结论：本研究包装的携带ＩＬ。１２基因的慢病毒载体可以有效感染树突细胞，并能够够促 进树突细胞本身的成熟。 关键词：慢病毒载体，ＩＬ．１２，树突细胞，ＣＤ８３
ACM复合rBMSC修复兔股骨内髁关节软骨缺损的价值
ＡＣＭ 复合 ｒＢＭＳＣ修 复 兔 股 骨 内髁关 节 软骨 缺 损 的价值
刘 拴 张 明 勇 胡 冰 （武 汉科 技大 学 附属 天佑 医院 骨科 ，湖北 武 汉 ４３００６４）
［摘 要 ］ 目的 探讨脱细胞软 骨支 架材料 （ＡＣＭ）复合兔 骨髓 间充 质 干细胞 （ｒＢＭＳＣ）修 复兔股 骨 内髁关 节软 骨缺损 的价 值 。方 法 选 取 ４８只健康新西 兰白兔（３月龄 ），随机分 为 ３组 ，ＡＣＭ—ＢＭＳＣ组 ，ＡＣＭ 组 ，空 白对照组。各个组再分 为 ６ ｗ和 １２ ｗ ２ 个 时间段。６ Ｗ、１２ Ｗ时观察修复组织 ，进行 Ｗａｋｉｔａｎｉ组织学评 分。结果 各 个关 节腔没有 看到感 染积 液 ，没 有发 生关节 腔粘 连情 况 。手术后 ６ Ｗ，ＡＣＭ—ＢＭＳＣ组修 复组织多数和周 围组织接合较好 ，ＡＣＭ组 修复组织厚度 约 ２／３，没有看到潮线 ，空 白对照组缺 损 区 没有 明显 的类软骨组织修 复。手术 后 １２ Ｗ，ＡＣＭ．ＢＭＳＣ组修 复组织 多数是 透明软 骨样 组织 ，ＡＣＭ 组修 复组织 表面欠 光滑 ，空 白对 照组能 够看到少量 肉芽组织修 复。在 同一时 间段 内 ，不 同组 间细胞形态 、基质染色 、表面平整 、软骨厚度 、接合 、总分 比较 ，ＡＣＭ—ＢＭ· ｓｃ组 和空 白对照组 、ＡＣＭ组 和空 白对照组 ，差异显著 （Ｐ＜０．０５）；ＡＣＭ－ＢＭＳＣ组和 ＡＣＭ组无 显著差异 （Ｐ＞０．０５）。结论 经传 代后 复合脱 细胞 关节软骨支架 材料可 以较好地修复兔关 节软骨缺损 ，修复组织 中细胞形状 、分布和排列与正 常软骨 组织接 近 ，是关 节软 骨 缺 损 修 复 的 可 选 方 法 。
［关键词 ］ 脱细胞软骨支架 材料 ；骨髓 间充质干细胞 ；兔股骨 内髁关 节 ；软骨 缺损 ［中图分类号］ １１６８４．７ ［文献标识码］ Ａ ［文章 编号］ １００５－９２０２（２０１８）１３－３２１６－０４；ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｍ １００５－９２０２．２０１８．１３．０５８
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三种骨修复材料植入兔股骨内的组织病理学研究北京生物医学工程 1999年第4期第18卷论著作者：田文华陈丹丹奚廷斐赵谌牛景路丁宁单位：田文华陈丹丹奚廷斐中国药品生物制品检定所(北京100050)；赵谌牛景路丁宁北京首都医科大学附属口腔医院(北京100050)关键词：羟基磷灰石(HA)；氧化锆生物陶瓷(Zr)；生物活性玻璃陶瓷(BG)；植入；成熟骨组织摘要将三种骨修复生物材料分别植入兔股骨内，在植入后7天，14天，30天，60天，90 天，180天，360天进行了组织病理学研究。
三种骨修复生物材料植入早期组织学观察基本相同，植入360天组织学观察有所不同，羟基磷灰石(HA)已有部分吸收，骨组织及骨髓已长入生物材料内部；氧化锆生物陶瓷(Zr)可见材料周围形成大量成熟骨组织，表面光滑，生物材料表面未见明显吸收现象；生物活性玻璃陶瓷(BG)可见生物材料周围已形成大量成熟骨组织，表面不显光滑，且与生物材料紧密相接。
A Study of Histopathology Induced by Three Kindsof Bone-repairableBiomaterials Implanted into the Rabbit ThighTian Wenhua, Chen Dandan, Xi Tingfei(National Institu for Control of Pharmaceutical and Biological Products,Beijing 100050)Zhao Chen, Niu Jinglu, Ding Ning(Beijing Capital Medical University,Beijing 100050)AbstractThree kinds of bone-repairable biomaterials were implanted into thigh of rabbit respectively.Then histopathology was studied after 7 days,14 days,30 days,90 days,180 days and 360 days.At early stages, the histopathology induced by the bone-repairable biomaterials was about the same,but difference was observed after 360 days.It was found that the hydroxyapatite had been partly absorbed,osseous tissue and marrow had grown into the materials.There were planty oif mature osseous tissue with smooth surface and unclear absorption formed around the zirconium oxidebioceramics whirlbone,while around the bioactiveglass caramics tightly contacted mature osseous tissous without smooth surface was found.Key words:Hydroxyapatite; Zirconium oxide Bioceramics whirlbone; bioactiveglass ceramics; Implantation; Mature osseous tissue0 前言人体的硬组织(如骨、齿及关节等)因各种原因造成的损坏、缺陷、变形等大范围病变，完全依靠采用自体骨进行修复是不可能的。
一则数量有限，二则增加了感染机会，更增加了患者的痛苦。
而异体骨(人骨、动物骨等)的移植，又存在着免疫反应等问题。
因此，为广大患者提供急需的、性能良好的人工骨材料具有重要的现实意义。
羟基磷灰石是天然骨与牙齿的主要成分，国内外均致力于羟基磷灰石的研究、开发与应用并取得了令人欣慰的成果。
羟基磷灰石材料具有优良的生物相容性，主要用于骨修复和植入物的表面涂层，但是羟基磷灰石的强度较低，无法满足人工关节、人工骨和人工牙的负重要求。
目前常用接近惰性的氧化铝和氧化锆陶瓷，以及生物活性陶瓷。
这类陶瓷强度硬、耐磨、耐压、耐腐蚀且稳定性好，其缺点是与骨组织不能形成真正的骨性连接［1～4］。
为进一步深入细致地了解骨修复材料长期植入生物体内的组织学变化，我们对国产羟基磷灰石(HA)、氧化锆生物陶瓷(Zr)和生物活性玻璃陶瓷(BG)植入兔股骨内的组织学反应进行了长期深入的研究，为临床提供该材料应用的可靠性。
1 材料和方法1.1 材料(1)羟基磷灰石(HA)，规格φ2mm×6mm，北京深港科技开发部提供。
(2)氧化锆生物陶瓷(Zr)，规格φ2mm×6mm，北京赛奇特种陶瓷功能制品工程研究中心提供。
(3)生物活性玻璃陶瓷(BG)，规格φ2mm×6mm，海南天元医用生物材料厂提供。
1.2 动物分组第一组：羟基磷灰石(HA)在同一只兔子，两后腿各植入3个样品(每个时间组2只)。
第二组：在同一只兔子右腿植入氧化锆生物陶瓷(Zr)3个样品，左腿植入生物活性玻璃陶瓷(BG)3个样品(每个时间组4只)。
1.3 方法选用2.5kg左右的新西兰健康家兔，用3%戊巴妥液麻醉，按外科手术要求，常规备皮，消毒术野，暴露兔股骨外侧骨皮质，用牙科电钻钻通，形成所需洞形。
按动物分组要求分别将试样紧密嵌入，骨蜡封闭，分层缝合切口，青霉素肌注(80万u)。
手术后第 7，14，30，60，90，180，360天分别无痛处死动物，切取试样周围0.5～1.0cm的骨组织，置于10%甲醛溶液中固定，作石蜡包埋，切片，HE染色，病理切片观察［5］。
2 结果2.1 肉眼观察三种骨修复生物材料骨内植入切口一期愈合，未见分泌物和淤血。
股骨外侧未见异常，植入试样与骨紧密嵌合，周围组织生长良好，存活30天以上动物，可见植入试样表面均有不同程度的新生骨覆盖。
2.2 组织学观察三种骨修复生物材料植入兔股骨内早期(7天)可见淋巴细胞，少量中性粒细胞和纤维母细胞(3～2级)，病理切片见图1；14天已形成部分纤维被膜，炎症细胞明显减少(1级)，病理切片见图2；30天后形成新骨层包绕试样，病理切片见图3，4；90～180天可见包绕骨层明显加厚，骨板改建，趋于成熟，与试样直接相接，病理切片见图5，6。
图1图2图3图4图5图6三种骨修复生物材料植入兔股骨内360天，组织学观察明显不同。
羟基磷灰石(HA)已有部分吸收，骨组织及骨髓已长入生物材料内部；氧化锆生物陶瓷(Zr)可见生物材料周围形成大量成熟骨组织，表面光滑，生物材料表面未见明显吸收现象；生物活性玻璃陶瓷(BG) 可见生物材料周围已形成大量成熟骨组织，表面不光滑，且与生物材料紧密相接。
病理切片见图7。
图7图1～图7为骨内组织植入试验病理切片3 讨论三种骨修复生物材料植入早期可见淋巴细胞，少量中性粒细胞。
14天炎症细胞明显减少，且形成部分纤维被膜。
羟基磷灰石(HA)和氧化锆生物陶瓷(Zr)有少量新骨形成。
30天后已形成新骨层包绕试样，90～180天包绕骨层明显加厚，骨板改建趋于成熟，与试样直接相接。
三种骨修复生物材料植入360天，组织观察明显不同，与生物修复材料结构有关。
因羟基磷灰石(HA)是多孔的生物材料，所以有部分骨组织及骨髓已长入生物材料内部；生物活性玻璃陶瓷(BG)生物材料周围已形成大量成熟骨组织，表面不光滑，可能部分材料降解，且与材料紧密相接。
HA和BG两种材料生物相容性良好。
氧化锆生物陶瓷(Zr)材料周围形成大量成熟骨组织，表面光滑，生物材料表面未见明显吸收现象。
本研究结果证明三种骨修复材料有诱导骨生长的能力、促进骨质新生及钙化的可能，能与骨组织形成骨性结合，稳定性好。
作者简介：田文华(1940－)，男，副主任药师。
参考文献1 Mukhetjee DP.Polymers:Biomaterials and medical application.John Willey & Sons,1989,3202 Arm DM,Tencer AF.Effect of controlled release of platelet-derived growth factor from a porous hydroxyapatite implant on boneingrouth.Biomaterials,1996,17:703-7093 Takuma M,Takamori Y,et al.Experimental study on the relationship between the initiation period of occlusal function and the tissue response around aluminium oxide implant.J Osaka Univ Dent Sch,1987,27:101-1094 Mashimoto M,Akagawa Y,et al.Single-crystal sapphire endosseous dental implant loaded with functioned stress-clinical and histological evaluation of peri-implant tissue.J Oral Rehabil, 1988,15:65-765 卫生部.卫药发［1997］第81号文：生物材料和医疗器材生物学评价技术要求.1997。