《生物制药》酶类药物2
生物制药技术试题库答案
一.名词解释1.生物药物是利用生物体.生物组织或其成分，综合应用生物学、生物化学、微生物学、免疫学、生物化工技术和药学的原理与方法进行加工、制造而成的一大类预防、诊断、治疗疾病的物质。
2.单克隆抗体：单个淋巴细胞针对某一抗原产生的单个抗体。
3.生物技术是运用现代生物科学、工程学和其他基础学科的知识，按照预先的设计，对生物进行控制和改造或模拟生物及其功能，用来发展商业性加工、产品生产和社会服务的新兴技术领域。
4.生化药物指从生物体中分离纯化所得的一类具有调节人体生理功能、达到预防和治疗疾病目的的物质。
5.生物制品是利用病原生物体及其代谢产物，依据免疫学原理制成的用于人类免疫性疾病的预防.诊断和治疗的一类制品。
6.贴壁培养：必须让细胞贴附于某种基质上生长繁殖的培养方法。
7.生化分离是指采用适宜的分离、提取、纯化技术，将目标成分从复杂的生物材料（细胞）中分离出来，并获得高纯度的产品的过程。
8.固定化酶：限制或固定于特定空间位置的酶，具体来说，是指经物理或化学方法处理，使酶变成不易随水流失即运动受到限制，而又能发挥催化作用的酶制剂。
9.灭菌：利用物理或化学的方法杀死或除去物料及设备中所有的微生物，包括营养细胞、细菌芽孢和孢子。
10.超临界流体萃取就是利用超临界流体的特性，通过改变临界压力或临界温度来提取和分种化合物。
11.盐析：在蛋白质溶液中加入中性盐随着盐浓度的升高，蛋白质溶解度逐渐降低，最后形成沉淀。
12.抗生素：生物在生命活动中产生，在低微浓度下选择性抑制他种生物机能的物质。
13.等电点沉淀：当溶液在某个pH值时，大分子因所带的正负电荷相等而呈电中性，溶解度最低，发生沉淀。
14.离心分离：利用惯性离心力实现不同颗粒分离的操作。
15.疫苗是典型的免疫类药物。
所谓疫苗，是指将病原微生物（如细菌、病毒等）及其代谢产物（如类毒素），经过人工减毒、灭活或利用基因工程等方法制成的用于预防传染病的主动免疫制剂。
107703-生物制药工艺学-第十三章(4) 酶类药物
（二）酶液的脱色
工业上常用活性炭脱色。
（三）盐析法
（四）有机溶剂法
有机溶剂沉淀蛋白的能力：丙酮＞异丙醇＞乙醇＞甲醇，工业上常 用的是乙醇。
（五）喷雾干燥直接制备粉末酶制剂
但常用是冷冻干燥法
四、酶的纯化
不同的酶，其纯化工艺可以差得很大。那么，评价一个纯化工艺的 好坏，主要看两个指标：酶的比活、总活力回收。要两者兼得是很难 的；目前有关酶的纯化工艺是经验多于理论。一些纯化方法的搭配和 连贯运用，是靠不断摸索的经验积累。下面讨论一些纯化过程中经常 遇到的技术难点。
气泡上升法和平板法（p372-373，自己看看）
（四）细胞色素C （五）糜蛋白酶 （六）溶菌酶 （七）超氧化物歧化酶 （以上四种酶的生产工艺和工艺过程自己看看）
本章思考练习 1、酶类药物的原料来源主要有哪些？ 2、发酵法微生物酶制剂生产过程中影响酶产生的因素有 哪些？ 3、酶制剂的工业提取方法有哪些？ 4、酶类药物有哪几类？ 5、胃蛋白酶的生产工艺如何？ 6、胰蛋白酶生产的工艺过程如何？ 7、从人尿液中如何分离提取尿激酶？
2、浓缩
酶的浓缩方法很多，常用的有冷冻干燥法、离子交换法、超滤法、凝 胶吸水法和聚乙二醇吸水法等。
（三）酶的结晶
1、酶的结晶方法
（1）盐析法
在适当的pH、温度等条件下，保持酶的稳定，慢慢改变盐浓度进行结 晶；结晶时常用的盐有硫铵、柠檬酸钠、乙酸铵、硫酸镁和甲酸钠等。
（2）有机溶剂法 结晶常用的有机溶剂有乙醇、丙醇、丁醇、乙腈、异丙醇、二噁烷，
（一）杂质的出去
除杂质常用的一些方法：
1、pH和加热沉淀法
2、蛋白质表面变性法
生化药品生产技术
（3）抑制水解酶的作用：抑制剂、热等。 （4）其它保护措施：冷、热、酸、碱
（三）影响提取的因素
１、温度
提取温度 ↑溶解度 ↑ 。
温度↑ 物料的粘度↓，有利于分
子扩散和机械搅拌。 对不耐热的生物活性物质的提取，
一般在0~10℃进行提取。
２、酸碱度
多数生化物质在中性条件下较稳定，pH 值一般应控制在4～9范围内， 避免目的物 的等电点 。
（一）生物药物原料的选择、预处理、 与保存方法
（二）生物药物的提取 （三）生物药物的分离纯化方法
天然生物材料制备生化药物的过程
基本原则 v有效成分含量高的新鲜材料 v来源丰富易得 v制造工艺简单易行 v成本低 v经济效果好
v机械法 v物理法 v生化和化学法
v酸、碱、盐水溶液提取法 v表面活性剂与反胶束提取法 v有机溶剂提取法 v双水相萃取法超临界萃取技术 v分子蒸馏法
石油醚
脱脂（脂类、色素、萜类等）
苯、乙醚、氯仿、 甾类、萜和挥发油、生物碱、
乙酸乙酯
各种苷元
正丁醇
苷
乙醇、甲醇
蛋白、多糖以外的各类成分
水
苷、生物碱盐、鞣质、氨基
酸、蛋白、糖
2、溶剂选择的原则
①目标成分易溶，杂质成分难溶； ②惰性，不与目标成分反应，即使发生反应也应该属于可逆性的； ③经济、安全、后续操作容易进行。
人工制备的生物原料：工程 菌、工程细胞及转基因 动植物等。
动物脏器： 胰脏、脑、 胃粘膜、肝脏、脾 脏、小肠、脑垂体、 心脏等。
人体组织：人血、尿 液、胆汁
天然生物材料来源
海洋生物：海藻、腔肠动 物；节肢动物、软体 动 物、棘皮动物、鱼 类、爬行动物、哺乳 动物。
生物制药工艺学试题及答案
重庆三峡学院2014至2015学年度第2期生物制药工艺学试题（A）试题使用对象：生命科学与工程学院2012级生物技术专业(本科)一、名词解释（本题共4小题，每小题3分，共12分）1.差异毒力2.干扰素3.GMP4.接种量二、单项选择题（本题共10小题，每小题2分，共20分）1、能用于防治血栓的酶类药物有（）A、SODB、胰岛素C、L-天冬酰胺酶D、尿激酶2、环孢菌素是微生物产生的（）A、免疫抑制剂B、酶类药物C、酶抑制剂D、大环内酯类抗生素3、如果想要从生物材料中提取辅酶Q10，应该选取下面哪一种动物脏器（）A、胰脏B、肝脏C、小肠D、心脏4、目前分离的1000多种抗生素，约2/3产自（）A、真菌B、放线菌C、细菌D、病毒5、由于目的蛋白质和杂蛋白分子量差别较大，拟根据分子量大小分离纯化并获得目的蛋白质，可采用（）A、SDS凝胶电泳B、盐析法C、凝胶过滤D、吸附层析6、能够用沙土管保存的菌种是（）A、大肠杆菌B、酵母菌C、青霉菌D、乳酸杆菌7、当向蛋白质纯溶液中加入中性盐时，蛋白质溶解度（）A．增大B.减小C.先增大，后减小D.先减小，后增大8、盐析常数Ks是生物大分子的特征常数，它与下列哪种因素关系密切。
（）A．盐浓度B.盐种类C.溶质浓度D介质pH9、下列属于无机吸附剂的是：（）A.白陶土B.活性炭C.淀粉D.纤维素10、活性炭在下列哪种溶剂中吸附能力最强？（）A.水B.甲醇C.乙醇D.三氯甲烷三、简答题（本题共6小题，每小题9分，共54分）1、简述生物药物的特点？2、简述抗生素生物合成基因的方法？3、医用抗生素应具备哪些要求？4、简述糖类药物的生理活性？5、多糖的提取方法？6、影响青霉素发酵产率的因素及发酵过程控制？四、填空题（本题共7空，每小题2分，共14分）重庆三峡学院2014 至2015 学年度第 2 期生物制药工艺学课程期末考查A 卷参考答案一、名词解释1.差异毒力：药物对病原菌和宿主组织的毒力差异。
《生物制药》课件
基因工程药物研发流程
从基因克隆、表达载体构建、细胞转 化到药物生产，每一步都需要精心设 计和严格控制。
案例二：细胞治疗技术的临床应用
细胞治疗技术概述
细胞治疗是指利用自体或异体细胞来治疗疾病的方法，具有个体 化、疗效好等优点。
细胞治疗技术分类
根据所用细胞的种类，可以分为干细胞治疗、免疫细胞治疗等。
细胞治疗技术临床应用实例
的合成。
微生物工程技术应用实例
03
如青霉素的生产，通过发酵工程中的微生物培养技术，实现了
大规模生产，为抗生素的广泛应用奠定了基础。
THANKS
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生物制药的物质基础
生物制药的物质基础是具有生物活性的蛋白质、多肽、核酸、糖类、脂 类等大分子物质。
03
生物制药的制备方法
生物制药的制备方法包括基因工程、细胞工程、酶工程和蛋白质工程等
生物技术手段。
生物制药的历史与发展
01 生物制药的起源
生物制药的起源可以追溯到20世纪初，当时人们 开始从天然生物体中提取具有药用价值的活性物 质。
02 生物制药的发展历程
随着生物技术的不断发展，生物制药经历了从天 然提取到基因工程、细胞工程等生物技术手段的 转变。
03 生物制药的未来展望
未来生物制药将更加注重个性化治疗和精准医疗 ，同时随着基因编辑技术的发展，基因疗法等新 型治疗手段将逐渐成为主流。
生物制药的分类与特点
按照来源分类
生物制药按照来源可以分为动物源生物药、植物源生物药和微生物 源生物药。
细胞治疗是指利用细胞来治疗疾病的 方法，未来细胞治疗将有更广泛的应 用前景。
05
案例分析
案例一：基因工程药物的研发与生产
基因工程药物概述
第二版生物制药技术习题答案完整版
第二版生物制药技术习题答案HUA system office room 【HUA16H-TTMS2A-HUAS8Q8-HUAH1688】第一章绪论1、生化药物：从生物体分离纯化所得的一类结构上十分接近人体内正常生理活性物质的，能调节人体生理功能以达到预防和治疗疾病目的的物质。
P12、按照药物的化学本质，把生物药物分为氨基酸类、蛋白质类、酶类、核酸类、多糖类、脂类、维生素及辅酶类。
P3-53、生物药物的原料来源分为动物、植物、微生物、海洋生物、人体五大类。
P54、肝素的化学成分属于一种多糖，其最常见的用途是抗血凝。
P45、SOD的中文全称是超氧化物歧化酶，能专一性清除氧自由基。
P46、辅酶在人体内的酶促反应中起重要的递H、递e等作用，有药用价值，人体生化反应中重要的辅酶：NAD、NADP、FMN和FAD 。
P47、前列腺素的成分是一大类含五元环的不饱和脂肪酸，重要的天然前列腺素有PGE1、PGE2、PGF2α等。
P58、请说明酶类药物主要有几类，并分别举例。
P4第二章生物药物的质量管理与控制1、中试：是把已取得的实验室研究成果进行放大的研究过程。
P282、热原：是指在药品中污染有能引起动物及人的体温升高的物质。
P423、生物检定法：利用药物对生物体的作用以测定其效价或生物活性的一种方法。
4、生物药物质量检验的程序包括取样、鉴别、检查、含量测定、写出检验报告。
5、药物的ADME表示药物在体内的整个过程，它们分别是吸收Absorption、分布Distribution、代谢Metabolism、排泄Excretion。
6、生物药物在表示含量的时候有百分含量和活性效价两种。
7、英美等国在药品的质量管理上采取典型的主副典机制，其中美国的药典和副药典分别简称为 USP 和 NF 。
8、在生物药物的质量管理规范中，GMP、GLP、GCP分别指良好药品生产规范、良好药品实验研究规范、良好药品临床试验规范。
9、为了对新兴的基因工程药物进行质量管理，中国在2000年编制并颁布了中国生物制品规程。
《生物制药工艺技术》 酶工程制药技术
酶工程研究
有机相中酶反应的研究
5
酶工程研究
在工业、农业、医药和 食品等方面发挥着极其
重要的作用。
酶的抑制剂、激活剂的开发及 应用研究
6
抗体酶、核酸 酶的研究
7
模拟酶、合成酶及酶分子的人工设计、 合成的研究
8
一、酶工程制备氨基酸类 药物
利用化学合成、生物合成或天 然存在的氨基酸前体为原料，同 时培养具有相 应酶的微生物、 植物或动物细胞，然后将酶或细 胞进行固定化处理，再将固定化 酶或细胞装填于适当反应器中制 成所谓 “生物反应堆”，加入 相应底物合成特定氨 基酸，反 应液经分离纯化即得相应氨基酸 成品。
③清洗和更换部分固定化酶比较麻烦。床内有 自压缩倾向，易堵塞，且床内的压力降相当大 ，底物必须在加压下才能加入。
①需保持一定的流速，运转成本高，难于放大。
②由于流化床的空隙体积大，酶的浓度不高。
③能处理粉末状底物。 ④即使应用细粒子的催化剂，压力降也不会很高。
③由于底物高速流动使酶冲出，降低了转化率。
固定化细胞的制备
无需进行酶的分离纯化
01
细胞保持酶的原始状态，
02
固定化过程中酶的回收
率高
抗污染能力强
06
固定化细胞 的特点
细胞内酶比固定化酶稳
03
定性更高
细胞本身含多酶体系， 05
可催化一系列反应
04
细胞内酶的辅因子可以
自动再生
固定化细胞的 制备技术
固定化细胞的制备
载体结合法
载体结合法是将细胞悬浮液直接与水不溶性的载体相结合 的 固定化方法。
ｐＨ的影响
溶液的ｐＨ对酶活性影响很大。 在一定的ｐＨ范围内酶表现催化 活性。在某一ｐＨ时酶的催化活 性最大，此ｐＨ称为酶作用的最 适ｐＨ。偏离酶的最适ｐＨ愈远， 酶的活性愈小，过酸或过碱则可 使酶完全失去活性。
生物学中的生物制药利用生物合成药物
生物学中的生物制药利用生物合成药物生物学中的生物制药利用生物合成药物是一种新兴的制药方法。
它利用生物体内的酶和代谢途径，通过基因工程技术来制造药物。
这种方法不仅可以大幅减少生产过程中的化学废物排放，还可以提高药物的纯度和效力。
在本文中，我们将介绍生物制药的基本概念、生物合成药物的制备过程以及其在医药领域的应用。
一、生物制药的基本概念生物制药是利用生物体（包括微生物和动植物）的生物技术制造药物的过程。
生物制药与传统制药相比，具有更高的产量、更好的纯度和更低的副作用。
同时，生物制药也是一种绿色和可持续发展的制药方法。
二、生物合成药物的制备过程生物合成药物是指利用生物体内合成途径来制备的药物。
以下是生物合成药物的制备过程：1. 选择目标分子：根据药物的应用需求，选择合适的目标分子。
这些分子可以是蛋白质、多肽、维生素等。
2. 基因克隆：通过基因工程技术，在宿主生物体中引入目标分子的基因。
3. 发酵培养：将含有目标基因的宿主生物体进行发酵培养，以获取高产量的目标分子。
4. 分离与纯化：对发酵产物进行分离和纯化，以去除杂质，得到纯度较高的目标分子。
5. 药物修饰：根据药物的特性和应用需求，对目标分子进行化学修饰，以增强药物的活性和稳定性。
6. 检测与质量控制：使用各种分析方法对制备的药物进行质量控制，确保其符合规定的标准。
三、生物合成药物在医药领域的应用生物合成药物在医药领域有广泛的应用，下面我们介绍几个常见的例子：1. 重组蛋白药物：通过基因工程技术生产的重组蛋白药物，如重组人胰岛素和重组人生长激素，已成为糖尿病和生长激素缺乏症等疾病的常用治疗药物。
2. 抗体药物：生物合成技术可以制备具有特定抗原结合能力的单克隆抗体，如抗癌药物帕妥珠单抗和丙种球蛋白。
3. 疫苗：利用生物合成技术，可以生产出各种疫苗，如乙肝疫苗和流感疫苗，用于预防疾病的发生和传播。
4. 酶替代疗法：某些疾病缺乏特定酶的活性，通过生物合成技术，可以制备出这些缺乏的酶，用于替代治疗，如克隆人凝血因子和高纯度尿激酶。
微生物酶在生物制药中的应用
微生物酶在生物制药中的应用酶是一种催化反应的蛋白质，能够在化学反应中加速反应速率，常被用作生物制药的重要工具之一。
微生物酶是指来自微生物体内的酶，这些微生物酶在生物制药领域拥有广泛的应用。
微生物酶在生物药物制备过程中的作用1.用于结构优化和改良微生物酶可以被用来改良已有的药物结构，或者设计新的药物结构，以便提高其生物活性、药效和药理特性。
微生物酶常被用来加速药物的产生、纯化和稳定化。
2.用于生产过程优化酶也可以被用来优化制药过程。
微生物酶能够催化药物组分的合成，使生产过程高效、准确和可持续。
它借助生长因子等辅助物用于昂贵的成分的生产——如维生素B12 ，潜在的抗癌药物和抗生素。
3.用于生产药物前体微生物酶还被广泛应用于生产药物的前体。
前体是指在体内或体外经代谢后才能形成活性药物的化学物质。
这些前体的合成通常很复杂，可以使用微生物酶来更快速、高产的合成药物。
4.用于病毒清除在生产过程中，可能会遇到从生长物中清除病毒的困难。
为了从药物中除去残留的病毒，通常会使用化学或物理灭活办法，微生物酶也被用于病毒清除，这可以减少可能由于呈现不完善病毒的药品导致的对人类健康的影响。
微生物酶的种类及其应用1. 蛋白酶蛋白酶可以切断蛋白质链，并将蛋白质分为不同的组分。
这些组分可以用于药物结构中的构筑和优化。
2. 核酸酶核酸酶可以将RNA或DNA剪切为不同的小片段，或者去除组合体中的其他成分。
这些小片段有助于最小化物质的体积，并进行更充分的分子相互作用以进一步提高药物活性。
3. 糖酶糖酶可将糖分解，从而使其容易分离和纯化。
这种应用对于药物组分的优化和结构的改良尤为有用。
结论微生物酶是生物制药行业的不可或缺的重要工具。
它们可以在药品生产中发挥多种作用，包括对结构进行优化、改良、生产过程的优化和病毒清除等。
随着我们对微生物酶的了解加深，它们将发挥越来越重要的作用，促进药品的质量和效率的提高，同时也有助于降低药品的成本。
生物制药
药物：预防、诊断、治疗疾病，改善生活质量和影响人体生物学进程的物质。
包括：化学药物、中药、生物药物生物药物：利用生物体、生物组织或其成分、综合应用多门学科的原理和方法进行加工、制造而成的一大类药物的总称。
包括：发酵工程制药、生化工程制药、基因工程制药、细胞工程制药、酶工程制药生物药物的分类：核酸类药物、基因重组多肽/蛋白、半合成生物药物、天然生化药物半合成生物药物：以天然生物药物为母体，经化学或生物方法进行结构修饰合成的药物；基因药物，即以DNA,RNA为基础，研究而成的基因治疗剂、基因疫苗，反义药物和核酶等生物药物的分类：天然生化药物、微生物药物、基因工程蛋白药物、核酸类药物、医学生物制品肝素是从猪粘膜中提取的一类多糖，肝素钙与小分子量肝素是肝素的系列药物，主要作为抗凝血药。
微生物药物：由微生物代谢所产生的药物以及借助微生物转化产生的用化学方法难以合成的药物或中间体。
主要包括抗生素类、氨基酸类、维生素类及酶等；抗生素：由生物（包括微生物、植物和动物）在其生命过程中所产生的一类在微量浓度下就能选择性抑制其它生物或细胞生长的生理活性物质。
核酸类药物：这类药物是以基因物质（DNA或RNA及其衍生物）作为治疗的物质基础，包括基因治疗用的重组目的DNA片段，反义RNA药物和核酶等。
生物制药发展历程：1 传统生物制药发展阶段；2 近代生物制药发展阶段；3 现代生物制药发展阶段生物制药工艺学是一门综合性应用技术科学，其研究内容包括生化制药工艺、微生物制药工艺、生物技术制药工艺、生物制品及相关的生物医药产品的生产工艺等。
生化制药：生化制药主要从动物、植物、微生物和海洋生物中提取、分离、纯化生物活性物质，加工制作成为生化药物。
生物技术制药：生物技术制药是利用现代生物技术（包括基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程和蛋白质工程等），生产多肽、蛋白质、酶和疫苗、抗体等。
生物制药的研究发展趋势：1.基因组学成果促进生物技术新药的研发2.蛋白质工程药物的开发3.新型疫苗的研制4.新的高效表达系统的研究与应用5.生物技术药物新剂型6.生物资源的综合利用与扩大开发7.抗生素和氨基酸的新型生产工艺8.中西结合创制新型生物药物第二章生物制药工艺技术基础生化制药技术工艺基础：1.生物原料与生物活性物质2.生物活性物质的提取3.生物活性物质的浓缩与干躁4 .生化物质的分离纯化方法从植物中提取的生物活性物质是生化制药重要来源。
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[中和,吸附] 氨水,人造沸石
pH7.5
[原料处理] 绞碎
[提取,压滤]
心肌碎肉
H2SO4
pH4
提取液
[盐析]
[洗脱]
吸附物
25%(NH4)2SO4
洗脱液
(NH4)2SO4 比重1.21~1.23
滤液
[浓缩]
CCL3COOH
[透析]
沉淀物
蒸馏水
粗品溶液
[吸附] Amberlite IRC-50
习 题 1.酶成为药物应具备的条件？
2.微生物发酵法生产酶类药物，优良菌种获取的途径有 哪些？
3.在酶类药物制备过程中，如何保护酶活性？
4．生物提取法制备酶类药物时，在原材料的选择方面， 要注意哪些方面？在原材料的预处理方面，有哪些方法？
5．微生物发酵法生产酶类药物时，如何进行发酵液的预 处理？对胞内酶，有哪些细胞破碎方法？ 6．试画出L-天门冬酰氨酶的生产工艺流程，并说明工艺 控制要点。
• 1、组成（结构）、性质
• 胃中惟一的一种蛋白水解酶。其最适pH值为1～2。
• 胃蛋白酶作用的主要部位是芳香族氨基酸或酸性氨 基酸的氨基所组成的肽键。 • 药用胃蛋白酶是胃液中多种蛋白水解酶的混合物， 含有胃蛋白酶，组织蛋白酶，胶原酶等，为粗制的 酶制剂。 • 性状：外观为淡黄色粉末
2、生产工艺 （1）工艺路线：
• 4）柱层析、洗脱、超滤浓缩：将上述澄清液超 滤浓缩后小心加到已用2.5mmol/L，pH7.6磷 酸缓冲液平衡好的DEAE－sephadex A50柱上 吸附，并用pH7.6的2.5～50mmol/L的磷酸盐 缓冲液进行梯度洗脱，收集具有SOD活性的洗 脱液。
• 5）冷冻干燥
（2）以牛肝为原料提取Mn-SOD的工艺
2.生产工艺
分离纯化SOD常根据原料，种类和性 质的差异而有所不同。
（1）以牛血红细胞提取Cu、Zn-SOD的工艺
【收集】
新鲜牛血 离心 溶血液
红细胞
【洗涤】 2％NaCl
干净红细胞 沉淀液
【溶血】
H2 O,30min
【去血红蛋白】
乙醇，氯仿，离心
上清
【分级沉淀】 丙酮
【溶解】
H2O，离心
上清液
【柱层析】 【超滤】 SOD粗提液 浓缩液 浓缩 DEAE-SephadexA50 60～70℃，10min，离心 【热变性】 【洗脱】 【超滤】
Zn，存在于
真核细胞
中
Mn-SOD: 原核细胞中，Mw40000,2个亚基，每个亚基1个Mn 真核细胞中，Mw80000，4个亚基，每个亚基1个Mn Fe-SOD: Mw38000，2个亚基，每个亚基含1个Fe，存在 于
原核细胞
中
• 金属辅基与酶活性关系 • Cu、Zn-SOD：Zn与分子结构有关，与 催化活性无关;Cu与活性有关，对酶活力 是必需的 • Mn-SOD：Mn对酶活力是必需的 • Fe-SOD：Fe对酶活力是必需的
五、细胞色素C （Cytochrome C）
• 细胞色素：来自三羧酸循环中产生的琥珀酸辅酶
A，其肽链仅有104个氨基酸，体内大量存在，
一般无需外源补充；且外源补充与体内含量相比
甚微。细胞色素C是生物氧化的一个非常重要的 电子传递体，在线粒体崤上与其它氧化酶排列成
呼吸链，参与细胞呼吸过程。
• 细胞色素C是中枢兴奋药，用于急救或辅助治疗 各种原因引起的组织缺氧，如一氧化碳中毒，安 眠药中毒、高山缺氧等，亦可用于脑缺氧、心肌 炎、心肌代偿不全、心绞痛、心肌梗塞、肝炎、 肾炎等。 • 细胞色素种类较多，可以用光谱学、血红素基团 的精确结构、抑制剂的敏感度以及还原电势的大 小来分辨。
第三节、重要的酶类药物
三、超氧化物歧化酶 （Superoxide dismutase, SOD）
• 超氧化物歧化酶是一种重要的氧自由基清除剂， 作为药用酶在美国、德国、澳大利亚等国已有 产品。由于SOD能专一性去除超氧阴离子自 由基，故引起国内外生化界和医药界的极大关 注。
• 目前临床上应用集中在自身免疫性疾病上如类 风湿关节炎，红斑性狼疮，皮肌炎等
三、尿激酶（Urokinase ）
• 尿激酶是一种碱性蛋白酶，由肾脏产生， 主要存 在于人和哺乳动物的尿中。人尿 平均含有5~6U/ml。
• 临床上，尿激酶已经广泛应用于治疗各 种新血栓形成或血栓梗塞疾病。
1.组成性质
（1）尿激酶有多种分子量形式，主要有31300、 54700两种。尿中的尿胃蛋白酶原在酸性条件下可 以激活生成尿胃蛋白酶，后者可以把分子量54700 的天然尿激酶降解为分子量为31300尿激酶。
（2）尿激酶是专一性很强的蛋白水解酶，血纤维蛋 白溶 酶原是它唯一的天然蛋白质底物，它作用于 精氨酸－缬氨酸键使得纤溶酶原转为纤溶酶。
（3）尿激酶的pI为pH8-9.
2.生产工艺
(1)工艺路线： 男性尿液 10℃pH8.5 沉淀 洗涤 硅藻土吸附 pH5~5.5 酸化尿 上清尿液 酸化 洗脱
硅藻土吸附物
吸附物
[洗脱] NaHPO4-NaCl
[透析]
[制剂]
洗脱液
蒸馏水
精品溶液 双甘肽,NaHSO4 成品
pH6.4
工艺过程：
①绞碎、提取、压滤
取新鲜或冷冻猪心，去血块、脂肪和肌健等，绞 肉机中绞碎。称取心肌碎肉，加1.5倍量蒸馏水搅拌均 匀，用硫酸调pH4左右，常温搅拌提取压滤，滤液用
氨水调节pH6.2，离心得提取液。心渣再加等量蒸馏水
硅藻土柱
洗脱液
去热原，去色素 pH8.0 透析液
流出液 产品
CM－C柱
洗脱液
（2）工艺过程：
①收尿 收集男性尿
②沉淀处理 尿液冷至10℃以下，用NaOH调pH至8.5, 静置1h，虹吸上清液。用盐酸调至pH5.0~5.5。
③硅藻土吸附 处理好的尿液加入1%尿量的硅藻土，于 5C下搅拌吸附1h。 ④洗脱 硅藻土吸附物洗涤装柱，先用0.02%氨水加 0.1mol/L氯化钠洗脱，当洗脱液油清变混时开始收集
吸附柱
pH7.6的2.5～50mmol/L PBS
洗脱浓缩液
【冻干】
冻干粉
（2）工艺过程：
1）收集、浮选
取新鲜牛血，离心除去血浆。
2）溶血、去血红蛋白：干净红细胞加水溶血 30min， 然后加入0.25倍体积的乙醇和0.15倍体积的氯仿， 搅拌15min，离心去血红蛋白，收集上清液。 3）沉淀、热变性：将上述清液加入1.2～1.5倍体 积的丙酮，产生大量絮状的沉淀，离心得沉淀物。 再将沉淀物加适量水，离心去不溶物，上清液于 60～70℃热处理10分钟，离心去沉淀得浅绿色得 澄清液。
④提取、沉淀、热处理 每千克菌体干粉加入 0.01 mol/LpH8的硼酸缓冲液10L37℃搅拌 1.5h，30℃8mol/L醋酸调节pH4.2～4.4， 压滤，滤液加入2倍体积的丙酮，放置3～4h 过滤，收集沉淀，自然风干，得干粗酶. 取粗制酶，加入0· 3％甘氨酸，调节 pH8.8搅拌1.5h离心，上清液60℃30min热 处理。上清液加 2倍体积的丙酮，析出沉淀， 离心，收集酶沉淀，0.01mol/L，pH8磷酸 缓冲液溶解，离心得上清酶溶液.
③盐析、浓缩、透析 洗脱液加入固体硫酸镀 达到 45％饱和度，使杂蛋白析出，过滤。 收集透明滤液，缓缓加入 20％三氯醋酸， 边加边搅拌使细胞色素 C沉淀析出，离心 收集沉淀。再将沉淀溶于蒸馏水，装入透 析袋中，透析至无硫酸根为止，过滤得细 胞色素C粗品溶液。
④吸附、洗脱、透析
粗品溶液通过处理好的 Amberite IRC－50
• L-天门冬酰胺酶为白色结晶粉末，微有 湿性，易溶于水，不溶于甲醇、乙醇、丙 酮、氯仿、乙醛、苯等有机溶剂。对热稳 定性好，在温度50℃下，15min后，活性 降低30%，60℃下，1小时内失活。
工艺路线：
大肠杆菌 [菌种培养] 肉汤培养基 37℃,48h 肉汤菌种 [种子培养] 玉米浆
37℃,4~8h
同上法重复提取1次，合并两次提取液。
• ②中和、吸附、洗脱 提取液加氨水中和至pH7.5，在冰箱中静 止沉淀杂蛋白，吸取上层清液，每升提取液加 入10g人造沸石，搅拌吸附40min，静置倾去 上层清液。收集吸附细胞色素 C的人造沸石， 用蒸馏水和氯化钠溶液反复洗涤，然后装柱， 用 25％硫酸氨溶液洗脱，得洗脱液。
种子菌种
玉米浆
37℃,6~8h
[压滤,风干] 丙酮 发酵液 干菌体 甘氨酸
60℃,30min
[提取]
硼酸缓冲液
pH8.3,4~8h
提取液
HAc
pH4.2~4.4
干粗酶
酶溶液
PEG
不同pH处理
无热原酶液
无菌分装
L-天冬酰胺酶冻干制剂
工艺过程：
①菌种培养 大肠杆菌37℃培养24h普通牛肉培 养基; ②种子培养 16％玉米浆，接种量 1～ 1.5％， 37℃，通气搅拌培养 4～8h; ③发酵罐培养 玉米浆培养基，接种量 8％， 37℃通气搅拌培养 6～ 8h，离心分离发酵液， 得菌体，加2倍量丙酮搅拌，压滤，滤饼过筛， 自然风干成菌体干粉.
【热变性】【离心】 【洗涤】 【匀浆】 【离心】 上清液 上清液 牛肝 65℃5min 生理盐水 pH7.8PBS （NH4）2SO4饱和度 45％、65％ 【分级盐析】【离心】 【溶解】 【透析】
沉淀
溶液
透析液
【柱层析】 DE-52
流出液
【超滤】 【冻干】
冻干粉
二、胃蛋白酶（Pepsin ）
• 胃蛋白酶：是一种消化性蛋白酶，由胃部中的胃粘膜主细胞 （gastricchiefcell）所分泌，功能是将食物中的蛋白质分 解为小的肽片段。 • 胃蛋白酶也是第一个从动物身上获得的酶。 • 自猪、牛、羊等胃粘膜提取的胃蛋白酶用作助消化药。常与 稀盐酸同时用于幼畜消化不良性腹泻和慢性萎缩性胃炎。 • 临床上主要用于因食蛋白过多，引起的消化不良及病后恢复 期消化机能减退等。