临床免疫学补体检测及应用
免疫学临床应用
（二） 抗原或抗体的检测方法
凝集反应 沉淀反应 补体参与的抗原抗体反应 免疫标记技术
（一）凝集反应（agglutination）
颗粒性抗原（红细胞、细菌、 乳胶颗粒等）与 抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。
1 、直接凝集(direct agglutination) 玻片凝集、试管凝集
2、间接凝集（indirect agglutination） 可溶性抗原包被在乳胶颗粒或红细胞表面，与相应 抗 体混合出现的凝集现象。
3、细胞因子检测
可用于鉴定分离的淋巴细胞亚群，监测某些疾病状态的细胞免疫功 能。IL-2、IL-2R、rIFN 、TNF等检测。
①免疫学方法：ELISA、RIA等。
②细胞生物学方法 ③分子生物学方法，如聚合酶链反应（PCR）法等
4、体内免疫细胞功能测定：皮肤试验
（1）迟发型超敏反应：旧结核菌素试验（ OT试验 ） 皮试（+）——有一定的细胞免疫能力 皮试（—）——细胞免疫功能缺损
免疫重建(immunoreconstitution)
将免疫功能正常个体的造血干细胞或淋巴细胞移植 给患有免疫功能缺陷的个体，使后者的免疫功能全部 或部分得到恢复。
一、免疫增强疗法和免疫抑制疗法
二、特异性免疫治疗和非特异性免疫治疗
三、主动免疫治疗（active immunotherapy） 和被动免疫治疗（passive immunotherapy）
（三）计划免疫
二、新型疫苗的发展 三、疫苗的应用
1、抗感染 2、抗肿瘤 3、计划生育 4、防止免疫病理损伤
复习题
一、名词解释 凝集反应、沉淀反应、ELISA、人工主动免疫、 人工被动免疫、类毒素、LAK细胞、TIL细胞
二、问答题 1、简述抗原抗体反应的特点。 2、何谓免疫标记技术？简述三大免疫标记技术 的原理和应用。 3、试比较人工主动免疫与人工被动免疫。
补体结合实验报告
补体结合实验报告一、实验目的本实验旨在通过观察和分析补体结合反应，加深对免疫学中补体系统的理解，并探讨其在疾病诊断和治疗中的应用。
二、实验原理补体系统是机体免疫系统的重要组成部分，能够通过一系列酶促反应参与免疫应答。
补体结合反应是补体系统的关键步骤之一，常用于免疫学研究和临床诊断。
补体结合反应的基本原理是抗原与特异性抗体结合后，激活补体系统中的特定组分，进而引发一系列补体级联反应。
这些反应最终导致补体蛋白在抗原表面形成复合物，从而实现对抗原的免疫识别和清除。
三、实验步骤1.实验前准备：–准备足够的抗原溶液、抗体溶液和补体活性试剂。
–准备适当浓度的阳性和阴性对照样品。
–准备酶标板，将待测样品加入孔中。
2.补体结合反应：–将抗原溶液加入酶标板中相应孔中。
–加入抗体溶液，使其与抗原充分结合。
–加入补体活性试剂，观察反应发生。
3.反应结束后，使用染色剂标记的二抗进行检测。
4.使用酶底物，在适当的时间内测定吸光度变化。
5.分析实验结果，得出结论。
四、实验结果与分析根据实验步骤，我们进行了补体结合实验，并观察到吸光度的变化。
我们比较了阳性对照样品和阴性对照样品的吸光度，发现阳性对照样品的吸光度明显高于阴性对照样品。
这表明阳性对照样品中发生了补体结合反应，而阴性对照样品中未发生补体结合反应。
通过实验结果分析，我们可以得出以下结论： 1. 补体结合反应可以用于检测抗原和抗体的结合情况，从而判断感染状态或诊断某些疾病。
2. 补体结合实验的结果可通过测定吸光度等方法定量分析。
3. 补体结合实验在临床诊断中有广泛的应用，如自身免疫性疾病、感染性疾病等的检测和诊断。
五、实验优化和改进本实验可以进一步优化和改进，以提高实验结果的准确性和稳定性。
以下是一些建议： 1. 优化实验条件，如抗原和抗体的浓度、温度和时间等。
2. 引入质控样品，以确保实验结果的可靠性。
3. 应用更敏感和准确的检测方法，如荧光标记等。
4. 通过扩大样本数量和种类，增加实验的统计学意义。
血清总补体活性(CH50)测定 临床免疫学
实验六、血清总补体活性(CH50)测定【实验目的】1、掌握总补体活性(CH50)测定的原理2、熟悉实验步骤，影响因素，结果判断标准，结果计算方法。
【实验原理】绵羊红细胞（Ag)与溶血素(Ab)，在新鲜血清补体的作用下，绵羊红细胞可被溶解，出现溶血现象。
溶血程度与血清中补体量正相关，呈S形曲线。
在50%溶血附近，稍微改变补体量，溶血程度变化明显（溶血程度与补体量之间呈明显线性关系），因此以50％溶血率来判定终点较100％更为敏感，所以该试验称为50％溶血试验-CH50（Complement Hemolysis 50%)【实验材料】巴比妥缓冲液、SRBC（Alsever氏液保存）用时加4份DW（pH7.4），溶血素，NS，待测血清（用时1:20稀释），空针，针头，试管，刻度吸管，离心机，721分光光度计（配0.5cm比色皿），37℃水浴箱【实验步骤】1. 制备1:20待测血清：抽静脉血凝固→500-1000rpm离心→分出血清，BB液作1：20稀释2．制备2％SRBC：SRBC用NS洗涤3次→按压积用B.B液配成2%悬液：2ml压积+98mlB.B液，并进行验证（调T为38%~42%）3. 制备50%溶血标准管：2％SRBC 2ml+ DW 8ml配成全溶管，然后取全溶管上清2.5ml + B.B液2.5ml⒋CH50测定：按下表加各试剂→摇匀→37℃水浴30min→离心→测A542nm →计算出每ml血清中补体活性（u)血清总补体溶血活性的测定（2.5ml体系）【实验结果】取各管离心后与50%溶血标准管做初步目视比较，观察溶血程度。
选择与标准管在分光光度计上A542nm光密度值最接近一管的稀释血清量，按下列公式计算CH50活性。
血清总补体活性＝(1/血清量)×血清稀释倍数=66.6u/ml【实验讨论】1．操作注意事项：①待检血清标本应无溶血、无乳糜、无污染。
②缓冲液、致敏SRBC均应新鲜配制，缓冲液若被细菌污染，会导致自发溶血。
临床免疫学与检验-补体系统
应用
补体结合试验广泛应用于病毒学、细菌学、寄生虫学等领域的诊断和研究，如检测病毒抗体、鉴定细菌种类、诊 断寄生虫病等。
样本采集
应使用无菌技术采集静脉血，避免溶血和污染。
样本保存
应尽快分离血清或血浆，并储存在适当的温度下，以避免 补体活化或降解。
样本处理
应避免反复冻融和长时间储存，以确保补体活性不受影响。
试剂选择和质量控制标准
试剂选择
应选择经过验证的、高质量的试 剂，以确保实验的准确性和可重 复性。
质量控制标准
应建立严格的质量控制标准，包 括试剂的批间差异、灵敏度、特 异性等指标。
新型补体抑制剂在临床试验中应用
自身免疫性疾病
新型补体抑制剂在系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎等自身免疫 性疾病的临床试验中展现出良好疗效。
移植排斥反应
在器官移植领域，新型补体抑制剂可有效减少移植排斥反应，提高 移植成功率。
感染性疾病
针对细菌感染、病毒感染等感染性疾病，新型补体抑制剂可辅助治 疗，减轻炎症反应。
补体组成
补体系统由30余种可溶性蛋白、膜结合性蛋白和补体受体组成，故称为补体系 统。
补体系统生物学功能
溶菌、溶细胞作用
补体系统激活后，最终在靶细胞 表面形成MAC，从而使细胞内外
渗透压失衡，导致细胞溶破。
调理作用
补体激活过程中产生的C3b、 C4b等片段可结合在细菌或其他 颗粒性物质表面，通过与吞噬细 胞表面的补体受体结合，增强吞
补体结合试验原理
补体结合试验原理补体结合试验是一种常用的实验方法，用于检测抗原与抗体之间的相互作用。
它基于补体系统的活化和补体蛋白与抗原-抗体复合物的结合反应。
本文将介绍补体结合试验的原理及其在科学研究和临床诊断中的应用。
一、补体系统的概述补体系统是机体免疫系统的重要组成部分，由多种血清蛋白组成。
补体系统能够通过一系列酶促反应产生溶菌酶、炎症介质等，参与机体的免疫防御和炎症反应。
补体系统的活化途径主要有经典途径、替代途径和凝集素途径。
在这些途径中，C3和C4是常用的检测指标，其水平变化反映了补体系统的活性。
二、补体结合试验的原理补体结合试验是一种体外实验，用于检测抗原与抗体结合的程度。
其基本原理是：当抗原与抗体结合后，会形成抗原-抗体复合物。
在补体结合试验中，将待测抗原与已知抗体混合，然后加入补体蛋白。
如果抗原与抗体结合，复合物将激活补体系统，导致C3和C4的降解和活化。
通过检测C3和C4的变化，可以确定抗原与抗体是否结合。
三、补体结合试验的应用1. 免疫学研究：补体结合试验可以用于研究抗原与抗体之间的相互作用，探索免疫应答的机制。
例如，可以利用该方法鉴定特定抗原的抗体水平，评估免疫反应的强度和效果。
2. 诊断传染病：补体结合试验在传染病的诊断中具有重要意义。
例如，肝炎、风疹、风湿热等疾病的诊断可以通过检测相应病原体的抗体水平来完成。
3. 自身免疫性疾病：补体结合试验还可以用于自身免疫性疾病的诊断。
例如，系统性红斑狼疮的诊断可以通过检测抗核抗体的结合情况来确定。
4. 药物研发：补体结合试验在药物研发中也有广泛应用。
例如，可以用该方法评估新药对特定抗原的结合能力，筛选具有抗体结合活性的药物候选物。
四、补体结合试验的优缺点补体结合试验具有一定的优点和缺点。
其优点包括：实验简单、操作方便、结果可靠。
同时，补体结合试验也存在一些缺点，如需要大量的血清样本、结果受其他因素影响较大等。
补体结合试验是一种常用的实验方法，通过检测补体系统的活化来评估抗原与抗体结合的程度。
补体的名词解释临床免疫学
补体的名词解释临床免疫学补体，是一种复杂的蛋白质系统，存在于人体的血液和组织间隙中，是免疫系统中的一个重要组成部分。
通过一系列的酶活性反应，补体能够介导炎症反应、杀伤微生物和免疫复合物，以及调节免疫细胞的功能。
在临床免疫学领域，研究补体的功能和调控对于深入理解免疫系统的活动和疾病发展具有重要意义。
补体系统起始于三条激活途径，分别是经典途径、替代途径和乙酰胆碱酯酶途径。
经典途径主要通过抗原-抗体免疫复合物的形成来激活，替代途径则与微生物、病毒等非自身物质的直接接触有关，而乙酰胆碱酯酶途径则是一种非免疫的激活方式。
这三条途径在不同的生理和病理条件下相互协同，共同促进补体系统的激活。
当补体被激活后，它能够产生一系列的生物活性产物，如溶菌素、趋化因子和炎症介质等。
溶菌素是一种能够直接杀伤细菌的蛋白质，通过破坏细菌细胞膜结构，导致其溶解和死亡。
趋化因子能够吸引和激活免疫细胞，如中性粒细胞和单核细胞，使其迁移至病变部位，参与炎症反应和局部免疫效应。
炎症介质在炎症反应中起到重要作用，如组胺和前列腺素等，能够扩张血管、促进血管渗透性增加、引起局部血流和组织血流动力学的改变等。
补体系统在免疫应答过程中发挥着重要的作用，与免疫系统的其他组成部分相互协同，共同参与对抗感染和维持正常生理状态。
然而，补体系统的异常调控和功能紊乱也会引发多种疾病，如自身免疫疾病、炎症性疾病和免疫复合物相关疾病等。
因此，临床免疫学中对补体的研究至关重要。
自身免疫疾病是一类由于机体免疫系统对自身组织产生攻击的疾病，其中一些疾病与补体系统的异常激活和炎症反应有关。
例如，系统性红斑狼疮（SLE）是一种典型的自身免疫疾病，其中免疫复合物的沉积和补体系统的激活导致多器官损伤和炎症反应。
在临床上，检测补体成分的水平可以作为判断疾病活动程度和预测疾病进展的指标之一。
除了自身免疫疾病，补体系统在炎症反应和感染过程中也发挥着重要作用。
细菌感染时，补体系统能够识别并杀伤细菌，发挥免疫清除的作用。
医学免疫学：第5 第6 第19 章 补体、补体检测及细胞因子 (2)
C4bp的抑制作用（C4 Binding Protein)
结合C4b，抑制C4b与C2的结合，防止C3转化酶的组装。 促进I因子对C4b的蛋白水解
四. 补体的生物学作用
在细胞表面激活并形成 MAC，介导溶细胞效应； 激活过程中产生的水解片段，介导各种生物学效应
1. 溶菌、溶解病毒和细胞的细胞毒作用
CH50(U/ml)=1/血清用量*稀释倍数
取10只试管，分别编号，按照下表加入各试剂
试管号 BBS 1：20稀释血清 2％SRBC 2U溶血素
补体溶血活性
1 1.40
0.10
0.5
0.5
200
2 1.35
0.15
0.5
0.5
133
置
3 1.30
0.20
0.5
0.5
100
37℃
4 1.25
0.25
2. 调理作用 C3b、C4b
3. 免疫粘附 C3b
4. 炎症介质作用 过敏毒素 C3a、C5a 趋化因子 C5a
第十九章 补体检测及应用
补体总活性测定
• 补体最主要的活性是溶细胞作用 • 特异性抗体+红细胞→激活补体→溶血 • 在适当的、稳定的反应体系中，溶血反应
对补体的剂量依赖呈一特殊的S形曲线
阳性
阴性
阴性
阳性
二、方法评价
➢优 点
灵敏度高、所测定的抗体水平可达0.05μg/ml ， 出现交叉反应的机率较小， 可检测的抗原或抗体范围广泛， 无需特殊设备、结果容易观察、试验条件要求不高
➢现 状
影响的因素多、各种制剂需要繁琐的稀释和滴定等， 现代化、自动化抗原抗体检测方法的不断涌现，补体结合试验逐 渐被遗弃 补体结合试验作为一种经典的免疫方法类型，其设计和原理仍对 新型免疫方法的建立有着启迪和指导作用
补体结合实验的原理及应用
补体结合实验的原理及应用补体结合实验是一种重要的免疫学实验方法，用于检测和分析体内是否存在补体结合抗原或抗体。
该实验基于补体系统的特性，通过补体的激活和结合来检测特定的抗原抗体反应，从而可以诊断疾病、研究免疫反应机制和评价疫苗效果等。
补体系统是人体免疫系统的一个重要部分，通过一系列的酶解反应参与机体的免疫防御和炎症反应。
补体分子主要由补体蛋白C1至C9及其他一些辅助蛋白组成，其中关键的酶解反应包括：免疫复合物形成、补体激活、补体蛋白C3和C5的裂解和形成膜攻击复合物等。
补体结合实验的基本原理是，通过将需要检测的抗原和抗体与补体体系相结合，利用补体活性变化的特性来检测抗原抗体结合情况。
主要可以分为免疫沉淀法和溶血试验两种方法。
免疫沉淀法是在试验体系中加入补体体系和待检测的抗原抗体反应物质，通过观察补体的激活和沉淀来检测抗原抗体结合情况。
一般使用的试剂有天门冬氨酸-苏氨酸盐缓冲液（VERONALTAMATE）和尿话藤素盐酸盐（PORCIMAERIN HYDROCHLORIDE）。
实验中，当抗原和抗体结合后形成免疫复合物时，会激活补体系统并发生酶解反应，导致沉淀形成。
通过观察沉淀的形成程度，可以判断抗原和抗体的结合情况。
溶血试验是通过测量红细胞发生溶血的程度来评估抗原抗体结合情况。
在试验中，待检测的抗原与抗体发生结合，形成免疫复合物后，加入补体体系和靶标红细胞，补体激活后会引发红细胞溶解现象。
通过测量补体激活所导致的红细胞溶解程度，可以评估抗原抗体结合的阳性与否。
补体结合实验在临床医学和科研方面有广泛的应用。
在疾病诊断方面，补体结合实验常用于检测体内的抗体水平，如乙型肝炎、风湿热、系统性红斑狼疮等疾病的诊断与鉴定。
同时，补体结合实验还可用于评估药物或疫苗的免疫效果，通过观察抗原抗体反应产生的补体结合情况，来判断药物或疫苗的治疗效果。
此外，补体结合实验还被广泛应用于免疫学研究领域，用于研究免疫反应机制、筛查特异性抗原和抗体等。
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第十九章补体检测及应用本章考点1.概述2.补体的活化途径3.有关补体测定的试验4.补体测定的应用补体是存在于人和脊椎动物正常新鲜血清及组织液中的一组具有酶样活性的球蛋白。
补体系统是补体加上其调节因子和相关膜蛋白共同组成一个反应系统，称为补体系统。
补体系统参与机体的抗感染及免疫调节，也可介导病理性反应，是体内重要的免疫系统和放大系统。
第一节补体系统的组成和性质一、命名根据l968年WH0命名委员会对补体系统进行了统一命名。
参与补体激活经典途径的固有成分按其被发现的先后顺序分别称Cl、C2、……C9。
Cl由Clq、Clr、Cls 三种亚单位组成；补体系统旁路激活途径及调节因子中另一些组分以英文大写字母表示，如B因子、D因子、P因子、H 因子等；补体调节成分多以其功能进行命名，如C1抑制物、C4结合蛋白、衰变加速因子等；补体活化后的裂解片段以该成分的符号后面加小写英文字母表示，如C3a、C3b等；具有酶活性的成分或复合物在其符号上划一横线表示，如、，灭活的补体片段在其符号前面加英文字母i表示，如iC3b等；对补体受体以其结合对象命名，如CLrR、C5Ar、对C3片段受体则用CRl、CR2……CR4表示。
二、分类构成补体系统包括30余种活性成分，按其性质和功能可以分为三大类：1.在体液中参与补体活化级联反应的各种固有成分；2.以可溶性形式或膜结合形式存在的各种补体调节蛋白；3.结合补体片段或调节补体生物效应的各种受体。
三、理化性质补体的大多数组分都是糖蛋白，且多属于β球蛋白，约占血清球蛋白总量的l0%；Clq，C8等为γ球蛋白；Cls，C9为α球蛋白。
正常血清中各组分的含量相差较大，C3含量最多，C2最低。
各种属动物间血中补体含量也不相同，豚鼠血清中含有丰富的补体，故实验室多采用豚鼠血作为补体来源。
补体性质不稳定，易受各种理化因素影响，如加热、机械振荡、酸碱、酒精等均可使其失活；在0℃～10℃下活性只保持3～4天，冷冻干燥可较长时间保持其活性；加热56℃30min可使血清中绝大部分补体组分丧失活性，称为灭活或灭能。
第二节补体系统的活化与调控一、补体系统的活化补体系统的各组分在体液中通常以非活性状态、类似酶原的形式存在，当受到一定因素激活，才表现出生物活性。
补体的激活途径主要有两种，即经典途径和替代途径，此外尚有MBL（甘露糖结合凝集素）途径。
经典途径和替代途径两种途径的启动过程不一致，但经典途径的激活可以导致替代途径的活化，反之则不行。
补体的其他激活途径即甘露聚糖结合凝集素（MBL）途径，简称MBL途径。
此途径开始于急性期蛋白与病原体的结合，而不是抗原复合物形成。
1.经典途径：经典途径是以结合抗原后的IgG或IgM类抗体为主要激活剂，补体C1～C9共11种成分全部参与的激活途径。
除了抗原抗体复合物外，还有许多因子可激活此途径，如非特异性凝集的Ig、细菌脂多糖、一些RNA肿瘤病毒、双链DNA、胰蛋白酶、纤溶酶、尿酸盐结晶、C-反应蛋白等。
经典活化途径可人为地分成识别、活化和膜攻击3个阶段。
2.替代途径：替代途径又称旁路途径。
它与经典途径的不同之处主要是越过C1、C4和C2，直接激活补体C3，然后完成C5～C9的激活过程；参与此途径的血清成分尚有B、D、P、H、I等因子。
替代途径的激活物主要是细胞壁成分，如内毒素、某些蛋白水解酶、IgG4、IgA聚合物等。
替代途径是通过研究C4缺陷而仍保持补体系统活化的患者而发现的。
二、补体活化的调控补体系统被激活后，进行系统有序的级联反应，从而发挥广泛的生物学效应，参与机体的防御功能。
如果补体系统活化失控，可形成过多的膜攻击复合物而产生自身损伤，或过多的炎症介质造成病理效应。
正常机体的补体活化处于严密的调控之下，从而维持机体的自身稳定。
1.补体的自身调控：补体激活过程中生成的某些中间产物非常不稳定，成为补体级联反应的重要自限因素。
此外只有细胞表面形成的抗原抗体复合物才能触发经典途径，而旁路途径的C3转化酶则仅在特定的物质表面才具有稳定性，故正常机体内一般不会发生过强的自发性补体激活反应，补体系统自身调控的作用在于维持机体自身的稳定性；2.调节因子的作用：体内存在多种可溶性膜结合的补体调节因子，它们以特定方式与不同的补体成分相互作用，使补体的激活与抑制处于精细的平衡状态，调节蛋白的缺失有时是造成某些疾病发生的原因。
目前发现的补体调节蛋白有十余种，按其作用特点可分为三类：l）防止或限制补体在液相中自发激活的抑制剂；2）抑制或增强补体对底物正常作用的调节剂；3）保护机体组织、细胞免遭补体破坏作用的抑制剂。
第三节补体系统的生物活性补体是机体重要的免疫效应系统之一。
补体系统活化可以溶解细胞，在活化过程中产生的中间复合物及某些片段也具有多种多样的生物活性，所以补体系统对机体的作用是多方面的，既可参与机体的防御效应和自身稳定，亦可引起免疫损伤。
1.溶细胞作用：不论何种途径活化，补体系统都能对其粘附的细胞产生溶解作用。
补体的溶细胞反应不仅可以抗菌，也可抵抗其他微生物及寄生虫的感染。
另一方面，补体也常常引起病理性反应，如异型输血时的溶血反应、自身免疫病时细胞损伤等；2.免疫复合物的清除：补体在活化过程中生成的中间产物，对抗原抗体复合物有很强的亲和力，可共价结合到免疫复合物上，然后通过补体的其他效应对免疫复合物产生抑制或清除作用。
常通过以下几种方式对免疫复合物的清除：1）吞噬调理作用；2）免疫粘附作用；3）免疫复合物抑制作用；3.炎症介质作用：补体是机体重要的炎症介质之一，可通过过敏毒素作用、趋化作用、激肽样作用等多种途径引起炎症；4.中和与溶解病毒作用：其机理可能是阻止病毒对易感细胞的吸附和穿入，并可能干扰病毒在细胞中的增殖。
第四节补体的合成与代谢1.补体编码基因：补体成分十分复杂，各编码基因分散在不同的染色体上，补体成分的许多蛋白质分子具有同分异构现象，显示其遗传多态性。
几乎所有补体蛋白均为单位点常染色体等显性遗传。
编码人C4、C2、B因子的基因在第6对染色体短臂上，与MHC的基因相邻，命名为Ⅲ类组织相容性基因；与C3、C4反应的许多调节蛋白的基因被组合在一起，在第一对染色体上形成一个超基因家族，此家族编码的蛋白有：H 因子、C4bp、DRF、CRI、CR2等。
2.补体合成的器官及细胞：尽管一些器官和组织产生不同补体成分，但产生补体的主要器官是肝脏，主要细胞是巨噬细胞。
3.补体的代谢平衡：补体成分在血液中可被蛋白酶直接降解，病理情况下补体的代谢速率反映了补体的激活程度，补体活化后的酶解片段迅速失活，并很快从循环中消除，沉着于细胞表面及组织中被消耗或分解。
如C3在C3转化酶作用下，生成C3a和C3b，C3降解为iC3b，再降解为C3c、C3dg。
最后降解为C3d 和C3g。
第五节补体总活性测定（一）实验原理补体最主要的活性是溶细胞作用。
特异性抗体与红细胞结合后可激活补体，导致红细胞表面形成跨膜小孔，使胞外水分渗入，引起红细胞肿胀而发生溶血。
补体溶血程度与补体的活性相关，但非直线关系。
在一个适当的、稳定的反应系统中，溶血反应对补体的剂量依赖呈一特殊的S形曲线。
如以溶血百分率为纵坐标，相应血清量为横坐标，可见在轻微溶血和接近完全溶血处，对补体量的变化不敏感。
S形曲线在30%～70%之间最陡，几乎呈直线，补体量的少许变动，也会造成溶血程度的较大改变，即曲线此阶段对补体量的变化非常敏感。
因此，实验常以50%溶血作为终点指标，它比l00%溶血更为敏感，这一方法称为补体50%溶血实验即CH50。
（二）检测试剂绵羊红细胞；溶血素；稀释缓冲液。
（三）方法评价CH50试验是测定经典途径总补体溶血活性，所反映的是补体9种成分的综合水平。
方法简便、快速，但敏感性较低。
补体的溶血活性除与试验中反应体积成反比外，还与反应所用缓冲液的pH、离子强度、钙镁浓度、绵羊红细胞数量和反应温度有一定关系。
缓冲液pH和离子强度增高，补体活性下降，虽可稳定溶血系统，但过量则反而抑制溶血反应，故实验时对反应的各个环节应严加控制，统一步骤。
（四）临床意义CH50法检测是补体经典途径的溶血活性，所反映的主要是补体9种成分的综合水平。
如果测定值过低或者完全无活性，首先考虑补体缺陷，可分别检测C4、C2、C3和C5等成分的含量；严重肝病时血浆蛋白合成能力受损。
营养不良时蛋白合成原料不足，也可以不同程度地引起血清补体水平下降。
在患系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎和强直性脊柱炎等自身免疫病时，血清补体水平随病情发生变化。
疾病活动期补体活化过度，血清补体水平下降；病情稳定后补体水平又反应性增高。
因此补体检测常可作为自身免疫病诊断或是否有疾病活动的参考指标。
细菌感染特别是革兰阴性细菌感染时，常因补体旁路途径的活化过度引起血清补体水平降低。
心肌梗死、甲状腺炎、大叶性肺炎、糖尿病、妊娠等情况下血清补体水平常升高。
第六节补体结合试验补体结合试验是用免疫溶血机制做指示系统，来检测另一反应系统抗原或抗体的试验。
早在1906年Wasseramann就将其应用于梅毒的诊断，即著名的华氏反应。
1.补体结合试验原理、类型：补体结合试验中有5种成分参与反应，分属3个系统：1）反应系统；2）补体系统；3）指示系统。
其中反应系统（抗原与抗体）与指示系统（绵羊红细胞与溶血素）争夺补体系统。
如先加入反应系统和补体，给其以优先结合补体的机会，如果反应系统中存在待测的抗体（或抗原），则抗原、抗体发生反应后可结合补体，再加入指示系统（SRBL与相应溶血素），由于反应中无游离的补体而不出现溶血，为补体结合试验阳性。
如待测系统中不存在待检的抗体或（抗原），则在液体中仍有游离的补体存在，当加入指示剂时会出现溶血，为补体结合试验阴性。
因此补体结合试验可用已知抗原来检测相应抗体，或用已知抗体来检测相应抗原。
2.补体结合试验的临床应用：补体结合试验可应用在以下几个方面：1）传染病诊断，病原性抗原及相应抗体的检测；2）其他抗原的检测，如肿瘤相关抗原、血液中的蛋白质鉴定，HLA分型等；3）自身抗体的检测等。
补体结合试验的优点为灵敏度高、特异性强、应用面广、易于普及。
缺点为试验参与反应的成分多，影响因素复杂，操作步骤繁琐并且要求十分严格，容易出现错误。
第七节单个补体成分测定在30多种补体成分中，主要检测C3、C4、Clq、B因子和Cl酯镁抑制物。
测定方法分为免疫溶血法及免疫化学法。
1.免疫溶血法溶血法主要根据抗原与其特异性抗体（IgG、IgM型）结合后可激活补体的经典途径，导致细胞溶解。
该方法中抗原为SRBC，抗体为兔或马抗SRBC的抗体，即溶血素。
将两者组合作为指示系统参与反应。
试验中有两组补体参与，一组是作为实验反应系统的补体，此类试剂可选用先天缺乏某单一补体成分的动物或人血清，如某些人可天然缺乏C2、豚鼠缺C5、家兔缺C6；也可利用化学试剂人为灭活正常血清中某种成分制备缺乏该成分的补体试剂，加入致敏SRBC（检测经典途径补体成分用）或总红细胞RRBC（检测替代途径补体成分用）指示系统后，此时由于补体级联反应体系中缺乏某种补体成分，不能使补体连续激活，不发生溶血。