实验五 网织红细胞计数
一、网织红细胞(Ret)计数
优点：操作简单、快速，同时可获得多项血细胞参数。 缺点： ①不同的仪器使用的溶血素不同，形成不同的Hb 衍生物，某些溶血剂形成的衍生物稳定性差，故应严 格控制溶血剂的加入量及溶血时间。 ②有些溶血剂虽加入KCN,但衍生物并不是HiCN,而 是氰化血红蛋白仪器需经过校正后才能进行Hb测定。 ③ 低色素性贫血、某些肝病等，由于RBC具有抵 抗溶血剂的作用，导致RBC溶血不完全而影响Hb测定。
RET分型
较成熟RBC稍大，直径8.0～9.5µm。
0 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ
骨髓，
外周难见
(0.08%)
周围血少量
(0.15%)
外周最多
（60%以上）
பைடு நூலகம்
花冠型
有核
丝球型
充满，相互连接
网型、
松散，连成网
破网型
稀疏，丝点状
点粒型
散在，细颗粒 细丝状
ICSH 及NCCLS的定义：网织红细胞是已不含有细胞核的红细胞， 应分四型： Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ 。
染色后，使含有RNA的RBC被计数，自动计算出RET的%及绝对数。优点：
测量细胞多，避免主观因素、方法易于标准化。国外已广泛使用，国 内逐步推广使用。但成本高。
近年来，新型多参数血细胞分析仪具有Ret计数功能。
【质量控制】
1.抗凝血最好在4h内处理，保存在4º C，可延长至8h. 2.染色温度控制在37º C为宜，无论何种染液，室温（25º C） 以下染色时，RET检出率明显减低，故要求37º C恒温染 色。 3. 玻片法容易使血液中的水分蒸发，造成涂片困难，受染料沉 淀的干扰，故已少用。 4. 试管法为手工RET计数的首选方法，染液与血液的比例以 1:1为宜，严重贫血时可适当增加血液比例。 5. 推制血膜不宜太薄或太厚，否则会造成RET分布不均。 6. ICSH推荐使用Miller窥盘作Ret计数，其CV=10%±
网织红细胞计数简介
网织红细胞计数简介目录•1拼音•2英文参考•3网织红细胞计数的别名•4正常值•5化验结果意义•6网织红细胞计数校正•7化验取材•8化验方法•9化验类别•10参考资料1拼音wǎng zhī hóng xì bāo jì shù2英文参考retic. ct.reticulocyte count3网织红细胞计数的别名RC4正常值目测法：成人：0．5－1．5%，新生儿：2－6%。
5化验结果意义网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，在周围血液中的数值可反映骨髓红细胞的生成功能，因而对血液病的诊断和治疗反应的观察均有其重要意义。
网织红细胞增多，见于：（1）骨髓红细胞增生旺盛：急性溶血性贫血、出血性贫血。
（2）判断疗效：缺铁性贫血及巨幼细胞性贫血病人，在补充铁剂及维生素B12、叶酸之后，网织红细胞应迅速增多。
网织红细胞减少，见于：红细胞生成减低。
再生障碍性贫血病人，典型病例常低于0.5%。
6网织红细胞计数校正网织红细胞计数一般以占外周血红细胞（RBC）百分数表示，因此易受贫血程度的影响。
矫正方法有两种：网织红细胞百分数与红细胞绝对数乘积即绝对网织红细胞计数（正常范围:24 000 ~ 84 000/ 立方毫米）。
另一消除贫血程度影响的方法是，网织红细胞百分数与实际红细胞压积的积再除以正常红细胞压积（45）。
值得注意的是，上述矫正方法往往会使网织红细胞计数低于实际值，因此如果观察值已较低，则矫正值无意义。
矫正仅用于网织红细胞百分数增高时。
7化验取材血液8化验方法血常规检查9化验类别血常规检查临床血液学检查10参考资料《新编临床检验与检查手册》、《新编化验员工作手册》免责声明：本文内容来源于网络，不保证100%正确，涉及到药方及用法用量的问题，不保证正确，仅供参考。
由此造成的问题，本站概不负责。
临检--网织红细胞计数(Ret)
网织红细胞计数（Ret）【定义】网织红细胞是晚幼红细胞脱核后到完全成熟红细胞间的过渡细胞，属于尚未完全成熟的红细胞，其胞质中残存嗜碱性物质核糖核酸（RNA），经活体染色后，嗜碱性物质凝聚成蓝黑色颗粒，颗粒与颗粒连缀成线，线连接成网，故而得名。
【分型】根据网织红细胞发育阶段分为4型，分别是：Ⅰ型（丝球型）：红细胞充满网状物，见于骨髓。
Ⅱ型（网型）：红细胞网状物结构松散，见于骨髓。
Ⅲ型（破网型）：红细胞网状物结构稀少，呈不规则枝点状排列，见于外周血。
Ⅳ型（点粒型）：红细胞内为分散的细颗粒、短丝状网状物，见于外周血。
【检测原理】1.普通光学显微镜法2.网织细胞计数仪法和血液分析仪法【操作方法】1.显微镜试管法操作（1）加染液：于试管中加入10g/L煌焦油蓝生理盐水溶液2滴，再加新鲜血2滴，立即混匀，置37℃下15～20min。
（2）制片：取1小滴制成薄血涂片，自然干燥。
（3）观察：在低倍镜下选择红细胞分布均匀的部位进行观察。
（4）计数：在油镜下计数至少1000个红细胞中网织红细胞数。
（5）计算：网织红细胞分数=（计数的网织红细胞数）/1O00，网织红细胞绝对值（×109/L）=红细胞数×1012/L×网织红细胞分数。
2.显微镜法注意事项（1）网织红细胞必须活体染色，WH0推荐使用新亚甲蓝染液，其染色力强且稳定。
煌焦油蓝染液操作简单、费用低廉，但易产生沉淀、工作效率不高、精度差。
染液与血液比例以1:1为宜，严重贫血时，可适量增加血量。
（2）为提高网织红细胞计数精度和速度，ICSH推荐使用Miller窥盘，方法是将Miller 窥盘置于目镜内，选择红细胞散在且分布均匀的部位（3）用小方格（A）计数红细胞，大方格（B）计数网织红细胞，按下式计算：（4）注意鉴别网织红细胞与HbH包涵体。
Ret为蓝绿色网状或点粒状物质，分布不均，HbH包涵体为蓝绿色圆形小体，均匀散布于整个红细胞内。
网织红细胞计数
8
3．作为病情观察的指标
溶血性贫血及失血性贫血，治疗过程中 连续观察网织红细胞计数，可作为判断 病情变化的参考指标。 如治疗后网织红细胞逐渐降低，表示溶 血或出血已得到控制。 如网织红细胞持续不减低，甚至更增高， 表示病情未得以控制，甚至加重。
9
四、红细胞沉降率测定
红细胞沉降率（ESR），简称血沉率 指红细胞在一定条件下沉降的速率。 正常情况下，红细胞在血浆中具有相对 的悬浮稳定性，沉降极其缓慢。 在病理情况下，血沉率可明显增快。
28
临床意义
2．血细胞比容减低 见于各种贫血。 不同类型的贫血，红细胞体积大小不同， 故血细胞比容的减少与红细胞数量减少 并不—定成正比。 因此必须将红细胞数、血红蛋白量和血 细胞比容三者结合起来，计算红细胞各 项平均值才有参考意义。
29
(二)红细胞平均值的计算
1．平均红细胞容积(MCV) 指每个红细胞的平均体积，以飞升（ fl ）为单 位。
14
参考值
魏氏(Westergoen)法： 成年男性0~15mm/1小时末
成年女性0~20mm/1小时末
15
临床意义
(一)生理性变化 12岁以下的儿童血沉略快。 妇女月经期血沉略增快，可能与子宫内膜破损 及出血有关。 妊娠3个月以后至分娩后3周血沉快，与生理性 贫血及纤维蛋白原含量增加等有关。 老年人血浆纤维蛋白原含量增加血沉加快。 高原地区居民红细胞增多，血沉低于平原地区。
(三)网织红细胞计数
（2）评价疗效
网织红细胞反应： 网织红细胞反应：IDA或巨幼细胞贫血分别 或巨幼细胞贫血分别 给予铁剂、维生素B 或叶酸治疗2~3d后，网织 给予铁剂、维生素 12或叶酸治疗 后 红细胞计数值开始上升， 达到最高(10% 红细胞计数值开始上升，7~10d达到最高 达到最高 左右)；两周以后逐渐降至正常水平，红细胞、 左右 ；两周以后逐渐降至正常水平，红细胞、 血红蛋白开始升高。 血红蛋白开始升高。 骨髓移植、 治疗后： 骨髓移植、EPO治疗后：若骨髓开始恢复造 治疗后 血功能， 升高， 血功能，RMI升高，网织红细胞计数值上升。 升高 网织红细胞计数值上升。
六、参考值
成人： 成人：0.005-0.015（0.5%-1.5%） （ ） 新生儿： 新生儿：0.02-0.06（2%-6%） （ ） 儿童： 儿童：0.005-0.075（0.5%-7.5%） （ ） 成人绝对值（ 成人绝对值（24-84） ×109/L ）
七、临床意义
（1）评价骨髓增生能力，判断贫血类型 ）评价骨髓增生能力， 再障时 明显降低。绝对值低于 × 再障时，明显降低。绝对值低于5×109/L可 可 做为急性再障的辅助诊断指标。 做为急性再障的辅助诊断指标。 失血、多数溶血性贫血患者网织红细胞可明 失血、多数溶血性贫血患者网织红细胞可明 溶血性贫血 显高于正常。 显高于正常。 营养不良性贫血在治疗前网织红细胞可保持 营养不良性贫血在治疗前网织红细胞可保持 正常、轻度升高或降低。 正常、轻度升高或降低。
（3）放、化疗监测 机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制， 机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制， 早期HFR和MFR降低，然后才检测到网织 降低， 早期 和 降低 红细胞的降低。而停止放、化疗， 红细胞的降低。而停止放、化疗，骨髓功 能恢复后，又见上述指标依次上升。 能恢复后，又见上述指标依次上升。可指 导临床医师适时调整治疗方案， 导临床医师适时调整治疗方案，避免造成 严重的骨髓抑制。 严重的骨髓抑制。
网红计数
概念
• 网织红细胞是未完全成熟的红细胞。红细胞由骨 髓进入外周血，需24-48h合成最后20％的血红蛋 白，残余的嗜碱性物质才能完全消失，成为成熟 的红细胞。将其分为五型：花冠型、丝球型、网 型、破网型、点粒型。 •
静脉血采血方法： 静脉血采血方法：
• 抽取病人静脉血2ml，于EDTA二钾抗凝的 真空采血管中（1.5mgEDTA-K2／ML）24 小时室温保存。
细胞受色原理
显微镜计数法 • 网织红细胞较成熟的红细胞稍大，胞浆中 残存多少不等的嗜碱性物质，经煌焦油蓝 活体染色呈浅蓝或深蓝色的网状结构。
试剂
• • • • • 10gFra bibliotekL煌焦油蓝等渗盐水溶液： 煌焦油蓝1g、 枸櫞酸钠0.4g、 氯化钠0.85g、 蒸馏水加至100ml。
操作步骤
• ⑴于玻片的一端加10g/L煌焦油蓝等渗盐水 溶液一滴，任其自然干燥备用。 • ⑵取末梢血一滴于干燥染料上，用推片搅 动混匀后，将两玻片盖合，待3min以上时 间，才推制血片。 • ⑶油镜下，计数1000个红细胞中的网织细 胞数。
• 网织红细胞显著降低，表示骨髓增生低下， 见于再生障碍性贫血。
• 贫血治疗效果观察，如缺铁性贫血和营养 性巨幼红细胞性贫血， 经相应治疗后1-2日 开始增多，1周左右达到最高峰，因此观察 网织红细胞数量的反应，是贫血疗效的评 价指标。 • 骨髓受白血病、肿瘤等浸润时，血中网织 红细胞也可呈不规则的 病理性轻度增多， 此系病理刺激所至，它不反应造血旺盛。
正常参考值
• 成人：0.5-1.5％ • 24x 109/L-84 x109/L • 儿童：3-6％
临床意义
• 网织红细胞显著增加，表示骨髓红细胞生成旺盛， • 常见于溶 血性贫血（可高达70％）。 • 其次急性失血性贫血，急性失血后 5-10天达到 高峰，2周后恢复正常。 • 营养性巨幼红细胞性贫血和 缺铁性贫血可因缺 乏造血物质，仅轻度增加（也可正常或减少）。 • 网织红细胞数量持续上升，常提示慢性失血，如 消化道溃疡等。
网织红计数的方法与原理
6.临床意义
6.1．评价骨髓增生能力，判断贫血类型 6.2. 评价疗效 6.3. 放疗和化疗的监测
6．计算：网织红细胞百分数=大方格内的 网织红细胞数÷（小方格内的红细胞数 ×9 ）×100%
7.报告方式：百分数（%）或绝对值（个/L）
网织红细胞绝对值=红细胞浓度数（ 1012 /L） ×网织红细胞百分数
2.4仪器法 包括流式细胞仪法、网织红细胞计 数仪法和血液分析仪法
网织红细胞计数仪法：根据荧光强度对RNA进 行定量分析，精确计数网织红细胞占成熟红细 胞的百分数（Ret%），可将Ret分为 HFR,MFR,LFR三类,见下图：
嗜碱性物质少，呈 主要存在与外周血 分散的细颗粒，短 中 丝状
2 检测原理及方法
2.1检测原理
网织红细胞的核糖核酸以弥散胶体状态存在。常 规细胞染色法在涂片及染色过程中对细胞进行了 固定，使网织红细胞的核酸物质即使着色也难于 在普通显微镜下识别。Ret须经活体染色或荧光染 色后才可用显微镜识别或经仪器计算分离。 因此就有两大类计数方法：显微镜计数法和仪器 计数法。
ICSH根据网织红细胞的形态特征和成熟程度将 Ret分为4型：
分型
形态特征
正常存在部位
Ⅰ型（丝球型） Ⅱ型（网型） Ⅲ型（破网型） Ⅳ型（点粒型）
RBC几乎被网织物 仅在正常骨髓 充满
位于RBC中央、线 大量存在与骨髓， 团样，结构松散 外周血中很难见到
网状结构稀少，呈 少量存在与外周血 不规则点状排列 中
2.2显微镜计数法（玻片法、试管法和Miller窥盘计数 法） 。
.试管法
1.取小试管滴加2滴10g/L的煌焦油蓝生理盐水，混 匀；
网织红细胞计数
网织红细胞计数1．项目名称网织红细胞计数2．检验目的2．1观察贫血疗效2．2骨髓移植后监测骨髓造血恢复2．3其他疾病协诊等临床实验室3．检验原理：网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，其胞浆内尚存在有嗜碱性的RNA物质，甲蓝活体染色后，其胞浆内尚存在有嗜碱性的RNA物质，经煌焦油蓝或新亚呈浅蓝或深蓝色的网状结构。
4．性能参数4．1重复性4．2分析和计算参数：百分比（%）4．3样本量：染液量=1：14．4精密度5．原始样品系统：全血6．容器和添加剂类型容器采用真空负压专用抗凝管，添加剂类型为0.109M乙二胺四乙酸钾7．试及显微镜7．1 10G/L新亚甲蓝（或煌焦油蓝）生理盐水溶液：新亚甲蓝 1.0G枸橼酸钠0.4G氯化钠0.85G溶于双蒸馏水100ML中，混匀，过滤后备用。
7．2 显微镜7．2．1 商标8．校准程序:显微镜的验证，光路系统校正灯泡大约半年更换一次9．程序步骤：9．1标本采集与要求9．1．1标本采集：抽取静脉血1.8ml，加入到含有乙二胺四乙酸钾溶液的抗凝真空试管中，并轻轻颠倒10次使之充分混匀，不得有凝块、不得形成泡沫，总量不得超过2.0±0.2ml，并在试管上做好标识。
采血应避免溶血，采血后2小时内送到检验科，需要运输时应在低温条件下运输。
采集标本时宜“一针见血”,以防止组织损伤。
9．1．2不合格标本的处理对凝固、有凝块、采血量不符合要求、无条码或无标识等不合格的标本,距采集时间超过2小时并且没有按要求储存的标本,按程序文件《样品核收、登记和保存程序》处理9．1．3标本保存检测应在标本采集后2小时内完成,2～8℃保存不超过4小时,分析后的标本保存三天。
9．2检验前准备9．2．1把接收到的标本按顺序编写序号。
9．2．2准备清洁、干燥、无尘、无油脂的载玻片、盖玻片、毛细管，玻璃笔。
9．3病人标本的检验9．3．1取小试管1支加10G/L新亚甲蓝盐水溶液2滴。
9．3．2加入末梢血（或EDTA钾抗凝静脉血）2滴于上述试管中，混匀。
网织红细胞计数
22
手工法
魏氏法、温氏法、ζ血沉率及潘氏法, 检测原理相似。 差别在于抗凝剂、用血量、血沉管规 格、观察时间的不同，故各种方法的参 考值不同。 ICSH推荐魏氏法为血沉测定参考方法
23
魏氏法
将枸橼酸钠抗凝血吸入
10mm
特制血沉管内，垂直立 ESR：10mm/h 于室温中，1h末读取红
细胞层下沉的距离，用
Ⅳ点粒型
4
对网织红细胞的描述
是晚幼红细胞脱核后的未完全成熟的红细胞 体积比成熟红细胞体积稍大 胞浆内残存有正常核糖核酸(RNA) 具有合成血红蛋白的能力 核糖核酸越多，网织红细胞越幼稚 外周血中主要是Ⅳ型网织红细胞 网织红细胞经瑞氏染色为嗜多色性红细胞 存在于骨髓与外周血中
5
网织红细胞计数（Ret）
42
43
毫米（mm）数值报告。
24
魏氏血沉测定
25
自动血沉仪法
抗凝血液静置后，红细胞下降，红细胞 与血浆分离，其界面随时间而下移。血 沉仪用光电比浊法、红外线扫描法或摄 影法定时扫描红细胞与血浆界面位置， 得到血沉值并显示红细胞沉降高度H与 对应时间t相关的H-t曲线。
26
方法学评价
方法 优点
缺点
魏氏法 国内规范方法， 测定血沉某时刻最
贫血→RBC总面积减少，ESR↑ RBC增多，ESR ↓ RBC直径愈大，ESR ↑ 球形RBC增多，ESR↓
30
其他因素
血沉管位置 血沉管倾斜，血沉增快
温度 温度＞25℃，血沉增快，结 果应校正
31
质量保证（魏氏法）
抗凝剂用量准确：枸橼酸钠（109mmol/L） 与血液之比（1：4）。
网织红细胞数 100%
1000
SOP008网织红细胞百分数计数
网织红细胞计数一、检验目的：了解骨髓红细胞增殖增加或减低等情况二、原理网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，其胞浆内尚存在有嗜碱性的RNA物质，经煌焦油蓝或亚甲蓝活体染色后呈浅蓝色或深蓝色的网状结构一、标本要求取末梢外周血或抗凝静脉血二、试剂10g/L新亚甲蓝（或煌焦油蓝）生理盐水溶液：新亚甲蓝1g枸橼酸钠0.4g氯化钠0.85g溶于双蒸馏水100ml中，混匀，过滤后备用。
三、仪器设备普通光学显微镜和Miller窥盘四、操作步骤1.于小试管中滴加2滴网织红细胞染液。
2.加入末梢血2滴于上述试管中，混匀。
3.静置15--20分钟后，取用1滴制成薄片。
4.油镜下检查1000个红细胞中网织红细胞数，以百分率或绝对值报告。
七、质量控制：1、95%的可信限法：（1）Sp=√R（1—R）/NSp为标准差，R为网织红细胞百分数，N为所数红细胞数。
网织红细胞计数95%可信限范围为0.028—0.0522、两差比值法：r=IR1-R2I/√R1（1--R1）+R2（1—R2）/N。
R1、R2分别为两次计数结果N为所数红细胞数，r＜2时结果可靠。
八、计算方法：九、生物参考区间0.5%~1.5%十、操作性能十一、超出可报告范围的处理：十二、危急值：十三、干扰因素：1、工作人员的责任心。
2、推血片的质量。
3、染色时间。
十四、临床意义：1、网织红细胞增多：表示骨髓红细胞系统的增生旺盛。
多见于各种增生性贫血，如溶血性贫血，特别是急性溶血性贫血，急性大出血引起的失血性贫血。
当缺铁性贫血和巨幼细胞性贫血治疗有效时，可出现短时间的网织红细胞大量增加，以后即降至正常或稍高于正常。
2、网织红细胞减少：多见于骨髓增生低下，如再生障碍性贫血和某些溶血性贫血有再障危象时。
阵发性睡眠性血红蛋白尿症网织红细胞有所减少，但有些慢性再生障碍性贫血患者的网织红细胞并不明显减低。
3、可以作为贫血治疗疗效的判断监察指标，用于观察治疗效果和判断病情变化。
十五|参考文献：1、《全国临床检验操作规程》2、罗春丽主编《临床检验基础》3、刘成玉主编《临床检验基础实验指导》。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
3．因网织红细胞在体外仍继续成熟，其数量随 着保存时间的延长而递减，所以标本采集后应及 时处理；标本染色后也应及时测定，因染料吸附 可人为增高网织红细胞计数值。 4．选择红细胞分布均匀、网织红细胞着色好的部 位计数。由于网织红细胞体积较大，故应兼顾血 片边缘和尾部。
二、玻片法
【目的】 掌握网织红细胞玻片法的原理及 操作方法。 【原理】 网织红细胞胞质内残存少量核蛋 白体和核糖核酸(RNA)等嗜碱性物质，经煌 焦油蓝或新亚甲蓝等染液活体染色后呈蓝 色网织状或点粒状，可与完全成熟的红细 胞区别。
【注意事项】 1．染液质量直接影响网织红细胞计数的准确性。 煌焦油蓝染液长期普遍应用，但溶解度低，易形 成沉渣吸附于红细胞表面；新亚甲蓝对Ret染色力 强且稳定，是WHO推荐使用的染液。试剂应定期配 制，以免变质沉淀。瑞氏染液复染可使网织红细 胞数值偏低。 2．染色时间不能过短，室温低时，可放置37℃ 温箱或适当延长染色时间。染液与血液的比例以 1∶1为宜。
【操作】 1．加染液 2．加血液 3．制备涂片 4．观察 5．计数 6．计算 7．报告方式
【注意事项】 同试管法。
实验五 网织红细胞计数
一、试管法
【目的】 掌握网织红细胞试管法的原理及 操作方法。 【原理】 网织红细胞胞质内残存少量核蛋 白体和核糖核酸(RNA)等嗜碱性物质，经煌 焦油蓝或新亚甲蓝等染液活体染色后呈蓝 色网织状或点粒状，可与完全成熟的红细 胞区别。
【操作】 1．加染液 2．加血染色 3．制备涂片 4．源自察 5．计数 6．计算 7．报告方式