周德杰论文
“完善自我”高中生议论文初写训练讲义
阅读下面的文字，根据要求写一篇不少于800字的议论文。
（70分）枭逢鸠。
鸠曰：“子将安之？”枭曰：“我将东徙。
”鸠曰：“何故？”枭曰：“乡人皆恶我鸣，以故东徙。
”鸠曰：“子能更鸣可矣，不能更鸣，东徙犹恶子之声。
”【译文】猫头鹰遇见了斑鸠，斑鸠问它：“你要到哪儿去呀？”猫头鹰说：“我准备搬到东边去。
”斑鸠问：“为什么呢？” 猫头鹰说：“村里人都讨厌我的叫声，因此我想搬到东边去。
”斑鸠说：“你改变叫声，就可以了。
要是不能改变叫声，即使搬到东边去，东边村里人照样讨厌你。
”【审题立意】（结果）枭搬到东边村里人照样讨厌（原因）没有从根本上解决问题。
立意:与其改变环境，不如改变自己治标不如治本认识到自己的不足，还要找到完善自我的恰当的方法赢得社会认同，在于完善自己。
【分论点的设计】【开篇示例的论据】论据1：托尔斯泰说“世界上有两种人：一种是观望者，一种是行动者。
大多数人都想改变这个世界，但没有想改变自己。
”论据2：穆罕默德曾当着他的信徒说，他有能力移山，只要叫三声“山过来”，山就会过来，然而穆罕默德叫了三声“山过来”，山仍然“不动如山”。
于是穆罕默德对信徒说：“既然山不过来，那么我们就靠过去吧！”分论点1：善于发现自己的不足，不怨天尤人，仔细分析问题存在的缘故，并试着用正确的方法解决这些问题，不断完善自我。
示例1：英国的作家和诗人莎士比亚，是大家再熟悉不过的人，但又有几个人真正知道莎翁成名前的学习环境呢？莎士比亚原来只不过是替人看管马匹的，剧院中的打杂工而已，但他不因身处逆境而怨天尤人，而是一有空闲便从剧院的门缝和小孔里偷看戏台上的演出，他凭着这种执着的“偷学”精神，终于使自己闻名于世。
示例2：司马迁，西汉著名大史学家。
意外横祸，使他身受“腐刑”，但他并没有被逆境击倒。
出狱后，以惊人的毅力，忍受残体的折磨，终于完成了名垂千古的我国第一部纪传体通史《史记》，被鲁迅称之为“史家之绝唱，无韵之离骚”，后世称之“中国历史之父”。
双孢蘑菇源抗氧化肽的Plastein反应修饰研究
双孢蘑菇源抗氧化肽的Plastein反应修饰研究【摘要】本文以对DPPH自由基的清除能力为指标，对双孢蘑菇源抗氧化肽进行Plastein反应修饰研究。
通过单因素试验研究了蛋白酶种类、氨基酸种类、pH值、温度对双孢蘑菇源抗氧化肽Plastein反应修饰的影响，在此基础上采用正交试验优化了双孢蘑菇源抗氧化肽的Plastein反应修饰工艺。
结果表明，双孢蘑菇源抗氧化肽的最佳Plastein反应修饰条件为：以菠萝蛋白酶、天冬氨酸对双孢蘑菇源抗氧化肽进行Plastein反应修饰，pH2.0，温度50℃。
该条件下制备的Plastein反应产物的抗氧化活性大约是修饰前的4倍，提示Plastein 反应是提高抗氧化肽抗氧化活性的有效方法。
【关键词】双孢蘑菇；抗氧化肽；Plastein反应；DPPH自由基Studies on Modification of Antioxidant Peptide from Agaricus Bisporus by Plastein ReactionZHANG Qiang WANG Song－hua JIANG Sheng－juan MENG Fan－rong（Life Science College, Anhui Science and Technology University, Bengbu Anhui, 233100）【Abstract】Antioxidant peptide from agaricus bisporus was modified by plastein reaction using scavenging ability on DPPH free radical as an inspected indicator. The effect of four main factors including enzyme , amino acid, temperature and pH on plastein reaction were studied by using single factor analysis method. On this basis,the optimal technology for plastein reaction modification of antioxidant peptide from agaricus bisporus was obtained by orthogonal experiment. Experimental results showed that the best technology for plastein reaction modification of antioxidant peptide from agaricus bisporus were as following: Enzyme of bromelain, substrate of aspartic acid, pH value of 2.0, temperature of 50℃. the antioxidant activity of modified antioxidant peptide by plastein reaction on this condition was about 4 times of original antioxidant peptide.This suggests that the plastein reaction might be served as a effective approach to improve antioxidant activity of antioxidant peptide.【Key words】Agaricus bisporus; Antioxidant peptide; Plastein reaction; DPPH free radical抗氧化肽是生物活性肽的一种，不仅具有多肽产品的营养作用，而且具备抗氧化和清除自由基的功能，增强人体抗衰老、抗疾病的能力，在预防和治疗自由基诱发的疾病和抗衰老方面有着广泛的应用前景[1]。
中医治疗高血压病合并高尿酸血症的临床观察
以血濡之，且气香可理气，为血中之气药；肝郁则木不疏脾土，脾失健运，茯苓甘补淡渗，性平作用缓和，具健脾利湿的作用；肝郁则气血运行不畅，气滞血瘀，经脉不通，益母草可活血通经；佐以仙灵脾、枸杞子滋补肝肾。
全方共奏疏肝清解、活血、补肾之功。
本研究结果提示，中药治疗多囊卵巢综合征近期疗效与西药相当，远期疗效优于西药，且更持久稳定、不良反应小。
参考文献1谭文.甾体避孕药的临床研究现状.国外医学·计划生育分册，1999，18（4）：193.2曹泽毅.中华妇产科学.第2版.北京：人民卫生出版社，2005.2470，2472.3国家中医药管理局.中医病证诊断疗效标准.南京大学出版社，1994.59-62.4郑筱萸.中药新药临床研究指导原则（试行）.北京：中国医药科技出版社，2002.240-241.5乐杰.妇产科学.第5版.北京：人民卫生出版社，2001.376-379.6苏延华.多囊卵巢综合征的治疗.生殖医学杂志，2000，9（5）：304-309.7郁琦.女性青少年的多囊卵巢综合征.生殖医学杂志，1999，8（2）：126-127.（收稿日期：2006-03-20）·论著·中医治疗高血压病合并高尿酸血症的临床观察张其慧作者单位：100035，北京中医药大学附属护国寺中医医院内科【摘要】目的观察中医治疗高血压病合并高尿酸血症的临床疗效。
方法将67例患者按就诊顺序随机分为治疗组35例，对照组32例。
两组均常规服用降压药物，治疗组在此基础上加服中药汤剂治疗，疗程均为28d 。
结果治疗组SBP 、DBP 、SU A 治疗前后的变化有非常显著性差异，!<0.01，BU N 及Scr 治疗前后变化亦具有显著性差异，!<0.05。
治疗前后DBP 及SU A 降低差值，治疗组优于对照组，!<0.05。
治疗组各项症状治疗总有效率高于对照组。
结论中医治疗高血压病合并高尿酸血症确有疗效，可降低血压和血尿酸，很好地改善患者的临床症状，提高患者的生存质量。
橘子皮皂化交联改性及其对重金属离子的吸附
橘 子 皮 皂 化 交 联 改 性 及 其 对 重 金 属 离 子 的 吸 附
橘子 皮皂化 交联 改性 及其对重 金属 离子 的吸附 ＊
冯宁川
（ １ ． 宁夏 医科 大学 基 础 医 学 院 ， 宁夏
郭学 益。 吕大雷
长沙 ４ １ ０ ０ ８ ３ ）
银川 ７ ５ ０ ０ ０ ４ ； ２ ． 中南 大 学 冶 金 科 ０Ｐ ） 为原料 ， 经乙醇、 Ｎａ ＯＨ和Ｃ ａ Ｃ １ ２ 处理 ， 得到皂化交联改性 橘子皮 （ Ｓ Ｃ ＯＰ ） 生 物吸附剂 ， 将其用于
对重金属离子 Ｃ ｕ 、 Ｐ ｂ 、 Ｃｄ 、 Ｚ ｎ 和 Ｎｉ 的吸附 ， 并 研 究 了溶 液 ｐ Ｈ、 吸附时间和重金属 离子初始浓度 对 Ｓ Ｃ Ｏ Ｐ 吸 附 性 能 的影
响 。结 果 表 明 ， 重金属离子在改性橘子皮上的吸附速率快 ， 符 合 准二 级 动力 学 方 程 ； 改 性 橘 子 皮 对 Ｃｕ ｚ ＋、 Ｐ ｂ 、 Ｚ ｎ ｚ ＋和 Ｎｉ ｚ 的 吸 附 等温线符合 Ｌ ａ ｎ ｇ ｍｕ ｉ ｒ 方程 ， 对Ｃ ｄ 抖 的吸 附等温 线符 合 Ｆ ｒ ｅ ｕ ｎ ｄ ｌ ｉ ｃ ｈ方 程 ， 根据 Ｌ ａ ｎ ｇ ｍｕ ｉ ｒ方 程 计 算 对 Ｃ ｕ 、 ｐ ｂ ｚ ＋、 Ｃ ｄ 、 Ｚ ｎ 件 和 Ｎｉ ０ 的饱 和 吸 附 量 分别 为 ７ ２ ． ７ ３ 、 ２ ０ ９ ． ８ ０ 、 ８ ５ ． ８ ４ 、 ５ ６ ． １ ８ 、 ３ ３ ． ８ ０ ｍｇ ／ ｇ ， 均 高 于 改 性 前 。改 性 后 的橘 子 皮 生 物 吸 附 剂 可 以 再 生 重 复 使
４ １ ０ ０ ８ ３ ） Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｏｒ ａ ｎ ｇ ｅ ｐ ｅ ｅ １ ｗａ ｓ ｃ ｈ ｅ ｍｉ ｃ ａ ｌ ｌ ｙ ｍｏ ｄ ｉ ｆ ｉ ｅ ｄ ｂ ｙ ｅ ｔ ｈ ａ ｎ ｏ １ ，ｓ ｏ ｄ ｉ ｕ ｍ ｈ ｙ ｄ ｒ ｏ ｘ ｉ ｄ ｅ ａ ｎ ｄ ｃ ａ ｌ ｃ ｉ ｕ ｍ ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｉ ｄ ｅ ． Ｔｈ ｅ ｏ ｂ － ｔ ａ ｉ ｎ ｅ ｄ ｓ ａ ｐ ｏ ｎ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｃ ｒ ｏ ｓ ｓ － ｌ ｉ ｎ ｋ ｉ ｎ ｇ ｏ ｒ ａ ｎ ｇ ｅ ｐ ｅ ｅ ｌ （ Ｓ ＣＯＰ ）ｗａ ｓ ｕ ｓ ｅ ｄ ａ ｓ ｂ ｉ ｏ ｓ ｏ ｒ ｂ ｅ ｎ ｔ ｆ ｏ ｒ ａ ｄ ｓ ｏ ｒ ｂ ｉ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ ｈ ｅ ａ ｖ ｙ ｍｅ ｔ ａ ｌ ｉ ｏ ｎ ｓ （ Ｃｕ ＋，Ｐ ｂ ０ ＋，Ｃ ｄ ＋，Ｚ ｎ ＋ａ ｎ ｄ Ｎｉ ＋） ｉ ｎ ａ ｑ ｕ ｅ ｏ ｕ ｓ ｓ ｏ ｌ ｕ ｔ ｉ ｏ ｎ ． Ｔｈ ｅ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ｓ ｏ ｌ ｕ ｔ ｉ ｏ ｎ ｐ Ｈ ，ｉ ｎ ｉ ｔ ｉ ａ ｌ ｉ ｏ ｎ ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｃ ｏ ｎ ｔ ａ ｃ ｔ ｉ ｎ ｇ ｔ ｉ ｍｅ ｏ ｎ ａ ｄ ｓ ｏ ｒ ｐ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ａ ｐ ａ ｃ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ Ｓ ＣＯＰ ｗａ ｓ ｉ ｎ ｖ ｅ ｓ ｔ ｉ ｇ ａ ｔ ｅ ｄ ．Ｒｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｓ ｈ ｏ ｗｅ ｄ ｔ ｈ ａ ｔ ｔ ｈ ｅ ａ ｄ ｓ ｏ ｒ ｐ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｈ ｅ ａ ｖ ｙ ｍｅ ｔ ａ ｌ ｉ ｏ ｎ ｓ ｏ ｎ Ｓ Ｃ ＯＰ ｗａ ｓ ｒ ａ ｐ ｉ ｄ ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｄ ｙ ｎ ａ ｍｉ ｃ ａ ｄ ｓ ｏ ｒ ｐ ｔ ｉ ｏ ｎ ｄ ａ ｔ ａ ｃ ｏ ｕ ｌ ｄ ｂ ｅ ｗｅ ｌ ｌ ｄ ｅ ｓ ｃ ｒ ｉ ｂ ｅ ｄ ｂ ｙ ｐ ｓ ｅ ｕ ｄ ｏ — ｓ ｅ ｃ ｏ ｎ ｄ ｏ ｒ ｄ ｅ ｒ ｋ ｉ ｎ ｅ ｔ ｉ ｃ ｓ ． Ｌａ ｎ ｇ ｍｕ ｉ ｒ ｉ ｓ ｏ ｔ ｈ ｅ ｒ ｍｓ ｍｏ ｄ ｅ ｌ ｆ ｉ ｔ ｔ ｅ ｄ ｔ ｈ ｅ Ｃｕ 。 ，Ｐ ｂ 。 ，Ｚ ｎ ａ ｎ ｄ Ｎｉ 。 ａ ｄ ｓ ｏ ｒ ｐ ｔ ｉ ｏ ｎ ｄ ａ ｔ ａ ｂ ｅ ｔ ｔ ｅ ｒ ｔ ｈ ａ ｎ Ｆｒ ｅ ｕ ｎ ｄ ｌ ｉ ｃ ｈ ｉ ｓ ｏ ｔ ｈ ｅ ｒ ｍｓ
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从 试 验 用 钢 板 上 切 取 试 样 ， 尺 寸 为 ２５ｒａｍ ×２５ｒ ａｍ ×８０ｒ ａｍ。 用 １２ｋＷ 箱 式 电 阻 炉 进 行 固 溶 和 时 效 处 理 ， 先 经
裂殖酵母方法作为一种新应用于皮质酮甲基氧化酶缺乏引发突变的研究
裂殖酵母方法作为一种新应用于皮质酮甲基氧化酶缺乏引发突变的研究摘要:醛固酮合酶,cyp11 B2,催化11-去氧皮质醛固酮的转化。
这个过程需要三个步骤：首先，在11β位点的羟基化，形成皮质酮，接下来，在位置18羟基化产生18-羟基皮(质甾)酮，最后，在18位点的氧化形成醛固酮。
醛固酮缺乏症作为一种危害生命的电解质紊乱疾病，经常发现在婴幼期表达，原因是CYP11 B2基因的突变。
因此，在突变和酶活性的深入研究将会为CYP11 B2缺失引起的醛固酮缺少症的诊断和处理提供信息。
在这里，我们报道一个快速又廉价的，关于全细胞CYP11 B2突变的酶学性质的技术的发展。
新系统的原理是在裂殖酵母里cyp11 B2突变体的内源性表达，其次是类固醇的生物转化试验的突变体酶的表征。
新的系统验证和CYP11 B2 10个已知的突变已被研究，他们中的两个首次涉及到对CYP11 B2三步反应的影响。
裂殖酵母系统的结果与细胞培养表现的结果十分吻合，表现出了新系统可以作为一种非放射性的方法应用于CYP11 B2突变的酶学性质的研究。
引言:细胞色素P450在人体肾上腺内合成胆固醇激素扮演着很大的角色，比如说皮质醇和醛固酮的生产。
醛固酮，人体内最重要的盐，涉及到人体内的盐和水平衡的调节，从而能够调节人的血压。
在人体中，醛固酮的合成通过细胞色素P450的一些酶介导合成的，而在这些色素酶中醛固酮合成酶催化终端的三个步骤，首先11-去氧皮质酮（DOC）的11-β位点的羟基化，生成皮质酮（B）；然后在18位点的羟基化产生18-羟基皮质酮（18OHB），最后，在18位点氧化形成醛固酮（图表1）。
醛固酮的生物合成不足是由CYP11 B2基因缺陷引起的，它被称为皮质甲基氧化酶（CMO）缺陷（图表1）。
在CMO 1缺陷中，这种突变将会导致CYP11 B2基因的完全失活，或则导致其活性的显著降低。
相比于CMO1突变，CMO 2突变的临床图片揭示CMO 2突变仅仅只会导致在终端18-氧化步骤进行封锁。
铜(Ⅱ)诱导双氢青蒿素过氧键断裂的电催化作用
ｔ ｍ ｏ ｆｅ ｔ ｕ ｒｅ ｆ ｃ ．Ｔ ｈ ｌ ａ ａ ｅｏ ｈ ｅ ｏ ｙ ｂ ｎ ａ ｆｅ ｔｉｓｐｈ ｒ ａ ｏｏ ｉａ ｃ ｉ ｉｙ．Ａｎ ｅｅ ｔｏ ｈｅ ｉａ ｅ ｈ ｄ ｅｃｅ ｖ ｇ ｆｔ ｅ ｐ ｒ ｘ ｏ ｄ ｃ ｎ ａ ｆ ｃ ｔ ａ ｍ ｃ ｌｇ ｃ ｌａ ｔｖｔ ｌｃ ｒ ｃ ｍ ｃ ｌｍ ｔ ｏ ｗ ａ ｓ ｄ ｔ ｎ ｅ ｔ ｔ ｈ ｒ ａ ｇ ｆｔ ｅｐｅ ｏ ｏ ｎ ｄ ｈ ｄｒ ａ ｔｍ ｉｉ ｎ ｉ ｄ ｅ ｌｃ ｒ ｃ ｔ ｌ ｓｓｏ ｓｕ ｅ Ｏ ｉ ｖ ｓ ｉ ｅｔ ｅ ｂ ｅ ｋａ ｅ ｏ ｈ ｒ ｘｙ ｂ ｎｄ ｉ ｉ ｙ ｏ ｒｅ ｓｎｉ ｎ ｕｃ ｄ ｂｙ ｅｅ ｔ ｏ ａ ａｙ ｉ ｆＥＤ— ｇａ
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效 果 ， 催 化 Ｄ Ａ 过 氧键 断键 ， 而影 响 ＤＨ 的药 理 活 性 ． 能 Ｈ 从 Ａ
关 键 词 ： 氢 青 蒿 素 ； 二 胺 四 乙酸 二 钠 ；铜 ；过 氧 键 ； 裂 ；电催 化 还 原 双 乙 断
中 图分 类 号 ：０６ ３ ｉ９ ４ ４ ／ｖ １ ， 文献 标 识 码 ：Ａ
植物和真菌双重荧光染色方法研究
第34卷第2期Vol .34No .2周口师范学院学报Journal of Zhoukou Normal University 2017年3月Mar . 2017植物和真菌双重荧光染色方法研究张杰1，刘军2(1.周口师范学院生命科学与农学学院，河南周口 466001;2.邓州市成人教育教学研究室，河南邓州474100)摘要：双重荧光染色便于观察细胞的显微结构，它具有精确、稳定、可靠的优势.通过改进透化细胞壁和增 加抗荧光淬灭剂的方法研究了植物细胞和真菌孢子的双重荧光染色的方法.实验结果表明：改进双重荧光染 色步骤后能够使植物细胞和真菌孢子在荧光显微镜下显示出清晰的双重荧光.关键词：双重荧光染色；植物；真菌中图分类号：S 865.1文献标志码：A 文章编号：1671 - 9476(2017)02 - 0114 - 03D 0I：10.13450/j .cnki .jzknu .2017.02.028随着生物技术工作的不断拓展和深入，双重荧 光染色法越来越受到生物学研究者的重视.双重 荧光染色方法有助于生物学工作者简便、准确地了 解研究对象[1].由于两种染料有不同的荧光光谱，可以在荧光显微镜下显示不同的颜色，因此能够更 加准确、可靠地显示出研究对象静态或动态的变 化[].双重荧光染色法已广泛用于观察细胞发育、细胞凋亡、蛋白互作[].由于在实际应用中存在一 些问题而受到一定限制，例如染色后内细胞团成云 雾状，导致无法准确分辨结构；染色后细胞内的亚 显微结构界限模糊，不能清晰地区分；式验步骤繁 琐，所需时间较长等[].用双重荧光染色的方法观 察植物细胞和真菌细胞内结构的研究尚未见报道，鉴于此，该试验在前人试验的基础上，简化双重荧 光染色的步骤，确定了适合植物和真菌的最佳染料 浓度与处理时间，同时增加了抗荧光淬灭的双重荧 光染色方法，由此尝试建立了一种针对植物和真菌 的双重荧光染色方法.1材料与方法材料：洋葱表皮细胞和绿僵菌孢子.试剂：罗丹名标记a c t in 抗体染色剂，核染色剂D A P I P B S缓冲液 p H 68改进方法：P B S 清洗细胞2次—0.5%曲拉通收稿日期：2016 10 20;修回日期：2016 11 16基金项目：河南省教育厅自然科学资助项目（N o .2011B 180061)作者简介：张杰（1975—），男，河南太康人，讲师，在读博士，主要研究方向：分子生物学与生物工程•室温透化细胞10 m in —5即/;〇^的F I T C —鬼笔 环肽37 oC 染色60 m in —P B S 清洗细胞2次—D A P I 染色10 m in —P B S 清洗细胞2次—滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上—盖玻片封片—指 甲油封边—荧光显微镜观察.2结果与分析2.1洋葱表皮细胞染色结果WFRPD A P IA B C A明场显微照片；B 绿光激发a c tin 染色照片；C D A P I 染色紫外激发照片；D合并显微照片图1处理前洋葱表皮细胞双重荧光染色效果图由图1可知，用未改进的方法处理洋葱细胞 后，在荧光显微镜下拍摄不到罗丹明标记的红色a c tin (图1B )，而只拍摄D A P I 标记的蓝色细胞核的荧光信号（图1C )细胞壁也呈现了蓝色荧光，表 明其专一性不强，进行整合后不能清晰显示细胞核 与a c t in 结构关系图（图1D ).overlayD第34卷第2期张杰，等:植物和真菌双重荧光染色方法研究115A明场显微照片；B绿光激发actin染色照片；C D A P I染色紫外激发照片；D合并显微照图2处理后洋葱表皮细胞双重荧光染色效果图处理方法改进后，在荧光显微镜下拍摄得到两种信号（图2)红色的罗丹明标记的a c t in(图2 B)蓝色为D A P I标记的细胞核（图2C)然后进行整合，可以得到如图2D所示的细胞核与a c t in结 构关系.由图2可知经过上述方法处理后，洋葱表皮细胞的细胞壁和细胞核部位能够被罗丹明标记的a c t in抗体染上清晰的红色荧光；细胞核能够被D A P I染上清晰的蓝色；经过整合后，可以看到act in不仅作用于细胞核，而且在细胞壁部位也含有大量的a c tin.该结果表明经过上述方法处理后能够使两种染色剂稳定地结合到目标部位.2.2真菌孢子染色结果由图3可知，用未改进的方法处理绿僵菌孢子后，在荧光显微镜下拍摄不到罗丹明标记的红色a c tin(图3B)而只拍摄到D A P I标记的蓝色细胞核的荧光信号（图3C)进行整合后不能清晰显示细胞核与a c t in结构关系图（图3D)WF RP DAPI overlayA明场显微照片；B绿光激发actin染色照片；C D A P I染色紫外激发照片；D合并显微照图3处理前绿僵菌孢子双重荧光染色效果图_______WF _______RP______________DAPI____________OverlayA B C DA明场显微照片；B绿光激发actin染色照片；C D A P I染色紫外激发照片；D合并显微照图4处理后绿僵菌孢子双重荧光染色效果图处理方法改进后，由图4可知在荧光显微镜下拍摄得到两种荧光信号，红色的罗丹明标记的act i n(图 4B)蓝色为D A P I 标记的细胞核（图 4C)然后进行整合，可以得到如图4D所示的细胞核与a c t in结构关系.由图4可知经过上述方法处理后，真菌孢子细胞质能够被罗丹明标记的a c t in抗体染上清晰的红色荧光；细胞核能够被D A P I染上清晰的蓝色；经过整合后，可以看到a c t in与细胞核部位重合，但是不能清晰地标记细胞壁部位.该结果表明经过上述方法处理后能够使两种染色剂稳定地结合到真菌孢子的目标部位，但是不能清晰地标记真菌细胞壁.3讨论双重荧光染色技术是细胞组织学研究最基本的技术，借助于染料与细胞特定的生化成分，使细 胞内的不同组织呈现出不同的荧光颜色，以便观察.通过双重荧光染色分析能够准确可靠地定位细胞核和a c t i n的位置.罗丹明标记a c t in抗体染色时首先要通过0.5%曲拉通室温透化细胞，否则 该染料不能透过细胞膜导致染色失败.曲拉通透化后能够使罗丹明标记的a c t in抗体结合到a c tin 上，a c t in能够在荧光显微镜下显示出清晰的红色荧光，并且不影响下一步的复染结果（图1和图2)该方法比通过水解细胞壁的方法缩短了染色时间[2，].与吖啶橙染色细胞核相比[]，D A P I复染细 胞核结果是结构更加清晰，易于观察.D A P I染料与D N A的结合是非嵌入式的，主要结合在D N A 的A T碱基区，用紫外光激发时发射出明亮的蓝色荧光.D A P I染色并不影响植物细胞和真菌孢子细胞中a c t i n的装配（图1和图2)在染色后封片时加上抗荧光淬灭剂能够长时间地保持荧光而不淬灭.这样更便于在显微镜下寻找理想的视野.该实验所用染色方法在植物细胞和真菌孢子中染色都能得到良好的效果，但是对真菌孢子染色时由于真菌孢子太小而不能清晰地区分出真菌孢子的细胞壁.故在该荧光染色方法的基础之上，可 以进一步地用细胞壁特异结合的荧光染料进行第三次染色进而观察细胞壁的显微结果.荧光染色方法虽然具有精确、稳定、可靠等优点，但是实验周期比较长、实验试剂比较昂贵，而且对于实验人员的技术要求较高[7].通过改进操作方法和实验流程能够保持荧光染色方法的精确、稳定、可靠等优势，同时降低了对于实验人员的技术要求，进而能够使荧光染色方法在生物学研究领域普及推广.参考文献：[]刘甜甜，周倩，吴秋云，等.马铃薯晚疫病菌侵染的 Solophenyl F la v in e荧光染色方法研究[].植物科学学 报，2016(02)： 316-324.[2]乔飞，曹晶潇，江雪飞，等.香蕉叶片微管免疫荧光染色方法的建立与应用[].热带作物学报，2012(08):116周口师范学院学报2017年3月1409- 1411.[]王萍，栾非时，陈克农，等.4种染色方法对甜瓜白粉 病菌染色效果的观察比较[].菌物学报，2008(05): 673-678.[4] 孙尉峻，于学颖，胡庭溪，等.一种同时进行牛嚢胚差异染色和凋亡染色的方法[].畜牧兽医学报，2015,16 (11) ： 1967- 1973.[5] M illancs Ana M a ria，Fontaniclla Blanca，Lcgaz MariaE strella，ct al.Glycoproteins from sugarcane plantsregulate cell polarity of Ustilago scitaminca tcliosporcs [].Journal of Plant Physiology，2005，162(3) : 253 —265.[6] 张雪英，尹增芳.毛竹组织荧光染色显微观察方法的研究[].竹子研究汇刊，2008, 27 (4): 26-29.[7] 蔡欣.标记减数分裂遗传重组的免疫荧光染色方法[J].中国生物化学与分子生物学报，200, 26 (11): 1068 -1071.(上接第109页）E f f e c t s o f s e e d s o a k i n g m e d i c a m e n t o n g e r m i n a t i o n c h a r a c t e r i s t i c s o f r a p e s e e dW A N G J u n s h e n g，Z H A O J i n h u i，Z H A N G J iu h o n g(C o lle g e o f L ife S cience an d A g r o n o m y，Z h o u k o u N o r m a l U n iv e r s it y，Z h o u k o u 466001 ,C h in a)Abstract：Taking rape seeds as experimental materials and using petri dish culture method to study the effects of three kinds of medicaments such as sodium chloride，potassium n itra te，ammonium nitrate on seed germination and seedling growth of rape seed.T'hc results showed that the potassium nitrate and ammonium nitrate solution w ith suitable concentration could promote seed germination and grow th of roots and shoots?as well as enhance germination rate and germination index and vigor index and germination potential，especially0.2 %ammonium nitrate and 0.8% potassium nitrate solution had obvious prom oting effect o n seed germ ination，while sodium chloride solution could inhibit seed germination and hinder growth of roots a nd shoots，especially the concentration of sodium chloride solution was 0.4%，the inhibition and obstruction effect was the most obvious.A l above showed that three kinds of seed soaking reagent had germ ination.Key words r a p e; seed soaking; medicament; germination characteristics。
黄芩茎叶总黄酮对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用及其机制
（ １ ．扬州大学临床医学院 ，江苏 扬 州 ， ２ ２ ５ ０ ０ １ ； ２ ．扬州市 中医院 ， 江苏 扬州 ， ２ ２ ５ ０ ０ ２ ）
摘 要： 目的 探讨黄芩茎叶总黄酮（ Ｓ Ｓ Ｔ Ｆ ） 对过氧化氢（ Ｈ ２ Ｏ ２ ） 所致人脐静脉 内皮细胞（ Ｈ Ｕ Ｖ Ｅ Ｃ ） 氧化损伤的保护作用及 其 可能机 制。方法 在 由 Ｈ ０ 制备血 管内皮细胞氧化损伤模型 的基 础上 ， 采用 ＭＴ Ｔ法测定各 组细胞活力 ； 生化 比色 法测定 各组 细胞 培养上清液 中乳酸脱氢酶 （ Ｌ Ｄ Ｈ） 的活性 ， 丙二醛（ Ｍ Ｄ Ａ ） 的含量及超氧化 物歧化酶 （ Ｓ Ｏ Ｄ ） 的活性 ； 流式 细胞 术检测各
组 细胞 的凋亡率 以及 ｗ ｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ—ｂ ｌ ｏ ｔ 法 测定各组细胞凋亡抑制蛋 白 Ｂ ｃ ｌ 一２的表达情况 。结果 Ｈ２ Ｏ ２处理 ＨＵ Ｖ Ｅ Ｃ后其存活率
较正常 Ｈ Ｕ Ｖ Ｅ Ｃ下降 ， 细胞培养上清液中 Ｌ Ｄ Ｈ活性和 Ｍ Ｄ Ａ含量 明显增加 ， Ｓ Ｏ Ｄ活性较 正常 Ｈ Ｕ Ｖ Ｅ Ｃ降低 ； Ｈ Ｕ Ｖ Ｅ Ｃ凋亡率 明显 升高（ Ｐ＜０ ． ０ ５或 Ｐ＜ ０ ． ０ １ ） ；而 Ｓ Ｓ Ｔ Ｆ （ １ ０ ０～ ４ ０ ０ ｍ ｇ ／ Ｌ ） 各剂量都 能提高 Ｈ２ Ｏ ２损伤 的 Ｈ Ｕ Ｖ Ｃ Ｅ的细胞 活力 ， 明显 降低 Ｌ Ｄ Ｈ 活 性， 显 著减少 Ｍ Ｄ Ａ的含量， 提高Ｓ Ｏ Ｄ的活性 ， 明显降低 Ｈ Ｕ Ｖ Ｅ Ｃ凋亡率 ， 明显提高 Ｂ ｃ ｌ 一 ２蛋白表达水平 （ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ 或 尸＜ ０ ． ０ １ ） 。 结论 Ｓ Ｓ Ｔ Ｆ能减轻 Ｈ２ Ｏ ２对 ＨＵ Ｖ Ｅ Ｃ的氧化损 伤作用 ， 降低 Ｈ２ Ｏ ２ 所致 ＨＵ Ｖ Ｅ Ｃ的凋亡率 ， 其机制可能 与上调凋亡抑制蛋 白 Ｂ ｃ ｌ
《2024年同型半胱氨酸对人内皮细胞的损伤机制及丹皮酚保护作用的实验研究》范文
《同型半胱氨酸对人内皮细胞的损伤机制及丹皮酚保护作用的实验研究》篇一一、引言同型半胱氨酸（Hcy）是一种在人体内常见的非必需氨基酸，其在生物体中的浓度与心血管疾病等慢性疾病的发病风险密切相关。
近期研究表明，高浓度的Hcy能对人体内皮细胞造成损害，并进一步影响血管功能。
本文旨在研究同型半胱氨酸对人内皮细胞的损伤机制，并探讨丹皮酚在其中的保护作用。
二、方法1. 实验材料本实验主要采用人内皮细胞株（HUVEC）和同型半胱氨酸，同时，实验还涉及到丹皮酚这一化合物。
2. 实验方法本实验采用细胞培养技术，首先将人内皮细胞培养在体外环境中，然后分别在正常Hcy浓度和高Hcy浓度下培养细胞，观察细胞的生长状态和形态变化。
同时，在加入丹皮酚的情况下，观察其对Hcy引起的细胞损伤的保护作用。
三、同型半胱氨酸对人内皮细胞的损伤机制1. 细胞形态变化在高Hcy浓度下，人内皮细胞出现明显的形态变化，细胞结构紊乱，部分细胞出现凋亡或坏死现象。
2. 细胞凋亡与坏死Hcy的增加会引发氧化应激反应，导致细胞内活性氧（ROS）的大量生成，破坏细胞的氧化还原平衡。
这会引起细胞的凋亡和坏死，并可能对血管健康产生严重影响。
3. 细胞膜完整性破坏高浓度的Hcy能通过影响膜上特定分子的表达或修饰而改变膜的通透性，导致细胞膜的完整性受损。
这可能导致细胞内外物质的交换失衡，影响细胞的正常功能。
四、丹皮酚的保护作用1. 抑制氧化应激反应丹皮酚具有抗氧化作用，能够抑制Hcy引起的氧化应激反应，减少活性氧的生成，从而保护细胞免受损伤。
2. 保护细胞膜完整性丹皮酚可以与Hcy竞争性地结合膜上特定分子，减少Hcy对膜的损伤。
此外，丹皮酚还能通过调节膜上相关分子的表达或修饰来增强膜的稳定性。
3. 促进细胞修复与再生丹皮酚能促进细胞的修复与再生过程，帮助受损的内皮细胞恢复正常的结构和功能。
这有助于维护血管的健康和稳定性。
五、结论本研究表明，高浓度的同型半胱氨酸会对人内皮细胞造成损伤，导致细胞形态变化、凋亡和坏死以及细胞膜完整性的破坏。
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茯苓四物汤对小鼠高尿酸血证的影响摘要：目的探索茯苓四物汤对小鼠高尿酸血症的影响及作用机制。
方法以次黄嘌呤和烟酸制备高尿酸血症小鼠模型，采用茯苓四物汤（高、中、低剂量）进行治疗，以血府逐瘀汤作为对照，并对血尿酸（UA）、肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）指标检测。
结果①模型对照组小鼠血尿酸明显高于正常对照组组(p＜0.01)，茯苓四物汤高、中、低剂量组小鼠血尿酸水平明显低于模型对照组(p＜0.01)，其中尤以茯苓四物汤中剂量组下降最为明显，血府逐瘀汤组小鼠血尿酸明显低于模型组(p＜0.05)。
②模型对照组小鼠肌酐、尿素氮较空白组明显增高(p＜0.01)，茯苓四物汤高、中、低剂量组、血府逐瘀汤组肌酐、尿素氮水平均低于模型组，其中茯苓四物汤中剂量组肌酐下降最为明显(p＜0.01)结论茯苓四物汤具有显著降低次黄嘌呤和烟酸致高尿酸血症小鼠的血尿酸的作用，可减少痛风的发生发展。
其机制可能与增强肾的排泄功能有关。
关键词：高尿酸血症；四物汤；血尿酸；肌酐；尿素氮
高尿酸血症是一种由于嘌呤代谢紊乱产生过多尿酸和（或）肾尿酸排泄不足[1]，并在体内蓄积所致的一组代谢性疾病。
高尿酸血症是痛风的前提与生化基础，因此预防和治疗高尿酸血症对痛风患者可起到积极的作用。
高尿酸血症在中医中属于痹症范畴，茯苓四物汤是中医治疗痹症的经验方剂，本实验选用茯苓四物汤进行实验，用于治疗次黄嘌呤和烟酸致高尿酸血症小鼠的血尿酸水平，观察茯苓四物汤对小鼠高尿酸血症的治疗作用并探讨其作用机制。
材料和方法
1.药品与试剂
烟酸，批号070925，武汉恒星医药原料有限公司生产；次黄嘌呤，批号080312，北京恒业中远化工有限公司生产。
尿酸、尿素氮、肌酐测试盒，由南京建成生物工程研究所生产，批号080715。
所有中药均购自吉林市仁和堂药店。
2.实验动物
ICR小鼠60只，雌雄各半，体重（22±5）g，由吉林大学基础医学院动物实验中心提供。
在恒温（22℃）、相对湿度65％～70％、光照周期12h：12h环境中适应性饲养3天后进入实验。
3.仪器
TD5A型低速离心机，由湖南凯达科学仪器有限公司生产；电热恒温水浴锅，由北京医疗设备厂生产；XD811自动生化分析仪，由上海迅达医疗仪器公司生产；微量移液器，由北京经科宏达生物技术有限公司生产。
4.方法
4.1 中药制剂的制备
四物汤加减方（当归20g、熟地15g、川芎15g、白芍15g、茯苓20g、薏苡仁30g、苍术20g、木瓜15g）、血府逐瘀汤(生地黄9g、桃仁12g、红花9g、赤芍药6g、柴胡3g、川芎5g、枳壳6g、牛膝9g、甘草3g)等药物按重量加8倍量水浸泡40min，武火加热至沸腾后，文火煎煮40min，倒出煎液。
再加热入5倍量水，沸腾后文火再煎30min，合并两次煎液，分别水浴浓缩至所需浓度, 4℃冰箱储存备用[2]。
4.2 构建模型药物的制备
将次黄嘌呤、烟酸分别溶于蒸馏水中，配制成次黄嘌呤624g/kg，药物浓度为20.8mg/ml；烟酸102g/kg，药物浓度为10.2mg/ml的混悬液[3]。
4.3 动物分组及给药
动物适应性饲养3d后，随机分为6组，即正常对照组、模型对照组、血府逐瘀汤组、茯苓四物汤高剂量组、茯苓四物汤中剂量组、茯苓四物汤低剂量组，每组
10只小鼠。
正常对照组实验过程中以蒸馏水灌胃，其余各组给与次黄嘌呤和烟酸灌胃，同时分别给与各治疗药物：血府逐瘀汤组含生药量为8.86g/kg，药物浓度0.26g/ml；茯苓四物汤高、中、低剂量组含生药量分别为42.86、21.43、10.71g/kg，药物浓度分别为0.27、0.54、1.07g/ml灌胃，连续5天。
所有动物给药体积均为0.4ml/10g。
4.4 实验指标检测
末次给药后1h，动物称重后腹腔注射3%水合氯醛麻醉，腹主动脉取血，检测血清尿酸、肌酐、尿素氮指标的含量。
5.统计学处理
实验数据用SPSS13.0统计软件分析，所有计量资料用均数±标准差表示。
结果：
模型对照组小鼠尿酸水平与空白组尿酸水平比较有显著性差异(p＜0.01)，模型对照组尿酸及尿素氮显著高于空白对照组(p＜0.01)，模型对照组肌酐高于正常对照组(p＜0.05)。
血府逐瘀汤组尿酸、肌酐及尿素氮水平明显低于模型对照组(p ＜0.01)。
茯苓四物汤各组尿酸、肌酐及尿素氮水平均低于模型对照组，其中尿酸和肌酐明显低于模型对照组(p＜0.01)；茯苓四物汤高剂量组尿素氮明显低于模型组(p＜0.05)；茯苓四物汤中、低剂量组低于模型组，但无统计学意义(p >0.05)。
结果见表1
表1各组药物对尿酸、肌酐、尿素氮的影响（n=10）
与空白组比：* p＜0.05 ，** p＜0.01；与模型组比较：p＜0.05 ，p＜0.01 3.各治疗组药物对肾功能的影响
模型对照组肌酐较正常对照组增高(p＜0.05)，模型组尿素氮较空白组明显增高(p＜0.01),各药物组肌酐及尿素氮水平均低于模型对照组，其中茯苓四物汤中剂量组肌酐水平下降最为明显(p＜0.01)；茯苓四物汤高剂量组尿素氮下降最明显(p＜0.05)。
结果见表1。
讨论
近年来原发性高尿酸血症和痛风患病率有逐年升高趋势[4],由于高尿酸血症与痛风、心脑血管疾病、高血压病、高脂血症、糖尿病、高胰岛素血症等很多疾病有密切的相关性[5-8]，所以对高尿酸血症的研究有十分重要的临床意义，加强对高尿酸血症治疗药物的研究日趋重要。
构建与临床相近的高尿酸血症动物模型是研究防治高尿酸血症药物药效的
基础。
本实验采用次黄嘌呤和烟酸灌胃构建高尿酸血症小鼠模型[3]，由于次黄嘌呤在小鼠体内水解产生含氮的有机碱和磷酸，干扰机体正常的嘌呤代谢，致使小鼠体内嘌呤代谢紊乱，从而加速尿酸形成，而烟酸减少了小鼠尿酸排泄，从而使尿酸在小鼠体内大量积聚，以此方法制备小鼠高尿酸血症的模型。
实验结果显示，此方法制备的小鼠血尿酸水平明显高于正常对照组(p＜0.01)，说明构建小鼠高尿酸血症模型是成功的。
血清肌酐和尿素氮含量的高低是衡量肾功能的重要指标，本实验研究结果显示，各组药物均可使小鼠血Cr和BUN下降，一方面说明茯苓四物汤及血府逐瘀汤是通过提高小鼠的肾功能，增加尿酸排泄来降低小鼠体内尿酸水平，另一方面也说明了茯苓四物汤和血府逐瘀汤在降低模型动物血清UA水平的同时，对小鼠肾功能有明显影响：对机体有一定的影响或有一定损害，其药物有一定的毒性。
研究结果显示四物汤中剂量组血清尿酸水平明显低于血府逐瘀汤组，说明四物汤加减方中剂量组疗效最好，且其疗效明显高于临床常用药血府逐瘀汤，证实其进一步的研究具有重大的临床意义。
参考文献
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