食管内脏高敏感性动物模型的建立和评价
生物制药技术中的动物模型建立与应用
生物制药技术中的动物模型建立与应用动物模型在生物制药技术中的建立与应用生物制药技术作为当代医药领域的重要分支之一，已经成为新药研发的主要手段之一。
在药物研究和开发过程中，动物模型的建立和应用起着至关重要的作用。
本文将从动物模型的建立和应用两方面进行阐述，以探讨其在生物制药技术中的重要性。
一、动物模型的建立动物模型是指人类疾病在动物体内模拟出现的实验模型。
通过建立合适的动物模型，科研人员能够更加全面地了解药物在活体内的作用机制和效果，为药物的临床应用提供可靠的依据。
1.选择适当的动物种类在建立动物模型时，首先需要选择合适的动物种类。
常见的实验动物包括小鼠、大鼠、猪、犬等。
选择合适的动物种类需要考虑其生理解剖结构、遗传特性、疾病敏感性以及代谢能力等因素，以确保其与人体的相似度高，研究结果的可靠性强。
2.复制人类疾病模型动物模型的建立需要模拟出人类疾病的发生和发展过程。
通过遗传学、生理学、药理学等方法，使动物表现出与人类疾病相似的病理生理过程。
例如，利用基因编辑技术，将人类特定疾病相关基因插入小鼠基因组中，使其表达人类特定疾病的特征，如阿尔茨海默症、帕金森病等。
3.建立评价指标体系为了评估药物的疗效和安全性，需要建立相应的评价指标体系。
包括生理指标（如体重、体温、血压等）、病理指标（如病灶大小、形态学变化等）和生物化学指标（如酶活性、代谢产物等），通过这些指标可以客观地判断药物的影响以及治疗效果。
二、动物模型的应用1.药物疗效评价动物模型的建立为药物疗效评价提供了强有力的工具。
利用动物模型可以模拟人类疾病，测试药物对疾病的治疗效果。
通过观察动物的生理指标、临床症状和病理变化，评估药物的疗效和剂量反应关系，为临床前药物筛选提供重要依据。
2.药物毒性评价药物的毒性评价是新药研发过程中必不可少的环节。
动物模型能够帮助评估药物对机体的毒性作用，如药物对肝肾功能的影响、心脏和中枢神经系统的损伤等。
通过动物模型的毒性评价，可以及早发现及预测潜在的给药风险，保证药物的安全性。
食管鳞癌动物模型研究进展
国际外科学杂志 202丨年4 月第 48 卷第 4 期丨n丨ernational Journal of Surgery，April 2021，Vol. 48，No. 4279 •食管鳞癌动物模型研究进展张鑫平宋帅常栋首都医科大学附属北京友谊医院胸外科100050通信作者：常栋，E m a i l:changdongj@163. c o m【摘要】食管癌是常见的消化道恶性肿瘤之一，其确切的病因及发病机制尚未完全明确食管癌动物模型的建立，为食管癌的基础和临床前研究提供支持，对于进一步研究明确发病机制及和探索研发新的治疗药物具有重要意义。
目前研究常用的食管鱗癌动物模型主要有化学诱导模型、异位移植模型和原位移植模型，随着人源性肿瘤动物研究的不断进展，移植瘤模型也得到越来越广泛地应用：无论哪种模型都各有其优缺点及适用性，应根据实验目的合理选择。
本文综合近年来有关食管鳞癌动物模型的研究进展，探讨目前科研及临床前常用模型，为食管癌临床治疗提供理论参考。
【关键词】食管肿瘤；模型，动物；诱发性；移植性；食管癌细胞系基金项目：吴阶平医学基金会-临床科研专项资助(320. 6750. 18475)DOI：10. 3760/cma. j. cnl 15396-20210204-00045Research progress of animal models of esophageal squamous cell carcinomaZhang Xinping, Song Shuai, Chang DongDepartment of Thoracic Surgery, Beijing FrienAship Hospital, Capital Medical University, Beijing 100050, ChinaGorresponding author:Chang Dong, Email：******************【Abstract】Esophageal cancer is one of the common malignancies of tlie digestive tract，and its exact etiologyand pathogenesis have not been completely clear. The establishment of animal model of esophageal cancer providessupport for the basic and preclinical research of esophageal cancer, which is of great significance for further study toclarify the pathogenesis and explore the development of new therapeutic drugs. At present, the animal modelscommonly used in the study of esophageal squamous cell carcinoma mainly include chemical induction model,heterotopic transplantation model and orthotopic transplantation model. With the continuous progress of animalresearch on human origin tumor, the human transplanted tumor model has been more and more widely used. Nomatter which model has its own advantages and disadvantages and applicability, should be selected according to thepurpose of the experiment. In this paper, the research progress on animal models of esophageal squamous cellcarcinoma in recent years is reviewed, and the models commonly used in scientific research and preclinicaltreatment are discussed, which may provide a theoretical basis for the clinical treatment.【Key words 】Esophageal neoplasms ；Models, animal ；Induction ；Transplantation ；Esophagealcancer cell lineFund program：Wu Jieping Medical Foundation-Clinical Research Special Fund (320.6750. 18475)DOI：10. 3760/cma. j. cnl 15396-20210204-00045食管癌是常见的消化道恶性肿瘤之一，预后较 差，发病率居全球恶性肿瘤第8位，病死率居第6位[,]。
8-食品安全风险分析与评估-农产品中重金属风险评估
农产品中重金属风险评估杨文建lingwentt@南京财经大学食品学院农产品质量安全问题已经成为人们关注的焦点之一。
由于化肥、农药、饲料添加剂等农用化学品的大量施用，采矿、冶炼、化工、电子等工业“三废”的排放，导致大量生态环境破坏，并由此产生了一系列农产品质量与安全问题。
一些初级农产品中发现有重金属残留，如鱼、软体动物、动物内脏、大米、小麦、蔬菜、肉都有不同水平的镉含量；铅主要污染植物性农产品；鱼类和海产品中有机锡和甲基汞含量较高。
农产品的污染不仅影响农产品的出口贸易，还直接影响人们的身体健康。
人体长期暴露于重金属污染物（如铅、镉、汞、砷等）会引起神经系统、肝脏、肾脏等损害。
农产品中重金属危害的风险评估是判定农产品中重金属累积是否会对人体产生危害的首要方法。
因此，随着人们对农产品中重金属含量的关注越来越多，重金属风险评估也被越来越多地应用于污染控制与风险管理。
WHO/FAO 食品添加剂联合专家委员会（JECFA）自1970 年起就开始对重金属进行风险评估，一些发达国家也相继建立自己的专门机构来负责农产品中重金属风险评估，欧盟EFSA 还在欧盟范围内，就风险性较高的重金属进行了风险评估，并依据风险评估结果提出相关农产品中重金属（如铜、汞）的限量。
目前，这方面的工作在我国还非常欠缺。
本文通过总结JECFA、欧盟和英国等进行的食品中重金属风险评估研究方面的方法与经验，旨在推动我国农产品中重金属风险评估工作的进一步开展。
1 农产品中风险性重金属的来源及健康危害镉：采矿业、冶金、市政污水污泥和堆肥农用、磷肥施用、燃料燃烧和废弃物焚烧导致土壤镉含量上升。
长期低水平镉膳食暴露会造成肾皮层中镉累积，随后产生肾毒性。
汞：自从工业时代开始后，汞释放入环境的量不断增加，例如在美国以煤为燃料的火力发电站每年大约释放45 t 的汞。
无机汞和金属汞在水中厌氧微生物的甲基化作用下易转化为甲基汞，且甲基汞极易被水生生物吸收，如鱼体内汞近50%~80%是甲基汞。
消化系统疾病动物模型
消化系统疾病动物模型（一）胃肠疾病动物模型1、急性胃炎动物模型（1）酸制剂诱发急性胃炎模型：Wistar大鼠，雄性，300g，大鼠禁食24h，在清醒状态下，用下述试剂或物质灌胃：①水杨酸制剂（如20mmol／L阿司匹林或水杨酸溶液）按100mg／kg体重灌胃；②2ml10mmol／L的醋酸或2ml不同浓度的盐酸（1、10、100mmol／L）；③2ml同种动物胆汁或2mmol／L的牛磺胆酸；④2ml15％的乙醇。
4h 后处死动物，剖检可见胃内发生急性弥漫性炎症改变。
胃粘膜表面有浅表糜烂、出血，粘膜层内见中性粒细胞浸润。
（2）胆汁反流性胃炎模型：碱性肠液倒流入胃，刺激胃粘膜可引起炎症，即胆汁反流性胃炎。
常见于原发性或继发性幽门功能紊乱或胃切除手术后。
本法取上部小肠的碱性肠液注入已结扎幽门的同种大鼠胃内，使之对胃粘膜产生持续刺激，形成胃炎。
动物选取雄性Wistar大鼠，体重180～220g,制备上部小肠液，向胃内注入小肠液，2 ml/只（正常对照组注入2 ml生理盐水）。
缝合腹壁，腹腔注射阿托品5 mg/kg体重，以抑制胃液分泌，利于胃粘膜损伤模型的形成。
处死大鼠，开腹，结扎贲门，取出胃，沿胃大弯剪开。
用滤纸吸干表面水分，立即称量胃重，以胃湿重/体重之比（胃系数）表示胃水肿程度。
肉眼观察并计数整个胃粘膜出血点数，作为损伤指数。
模型组动物胃系数和损伤指数明显增加，肉眼观察模型组胃粘膜充血、水肿，皱襞减少，颜色暗红，并有大量散在出血点。
2、慢性胃炎动物模型（1）大鼠慢性萎缩性胃炎模型酗酒、用药不当、饮食习惯不良、幽门螺杆菌感染、自身免疫等是此病的主要病因。
组织病理学是评价造模成功的最主要指标，主要观察和测量胃粘膜厚度、粘膜肌层厚度、腺体数量、壁细胞数量、固有层炎细胞浸润程度和肠化生发生率等。
综合法一：胆汁（去氧胆酸钠）+热水+主动免疫综合法二：去氧胆酸钠+热糊+主动免疫综合法三：去氧胆酸钠+酒精+氨水+吲哚美锌3、动物胃粘膜肠上皮化生模型（1）X线胃局部照射诱发胃粘膜肠化生模型：选用5～8周龄的Wistar 或JCL/SD大鼠。
高血压病实验动物模型的应用概况与评价
高血压病是世界公认的心血管疾病的主要危险因 素遥据统计袁2010 年全球有 31.1%的成年人渊约 13.9 亿冤 患有高血压病[1]遥 根据美国国家健康与营养调查研究 显示袁2015要2016 年成年人高血压病患病率为 29.0%[2]遥 2012要2015 年中国大陆约 45 万名年龄逸18 岁居民 为样本的全国代表性大型调查显示袁23.2%的中国人 患有高血压病[3]遥 本文总结了近年国内外高血压病动 物模型的造模方法及应用情况袁为高血压病的发病机 制以及治疗方面的基础研究提供参考遥 1 基因相关的高血压病动物模型 1.1 遗传性高血压病模型 1.1.1 自发性高血压大鼠渊spontaneously hyper鄄 tensive rat袁SHR冤模型
此类模型是长期喂养特定饲料袁常用的饮食诱 导有高糖尧高脂以及高盐袁亦有复合饮酒诱导高血压 病[30-32]袁此种动物模型的建立对于现临床常见饮食不 健康的年轻人有很大意义袁对于青年高血压病患者的 发病机制尧治疗及预后有着不可或缺的作用遥 但建模 时间较长袁血压升高不甚理想袁停止特殊饮食后袁血压 不能维持遥 2.1.3 慢性间歇低氧诱发大鼠高血压病模型
[中图分类号] R544.1
[文献标识码] A
[文章编号] 1673-7210渊2021冤06渊b冤-0036-04
人源性食管癌移植瘤模型的建立、评价及其应用的初步研究
红 细胞裂 解液 （ Ｓ ｉ ｇ ｍａ ） ； ９ ６ 孔 超低吸 附 Ｕ型细胞 培养
板（ Ｃ ｏ ｍｉ ｎ ｇ ） ； ＤＭＳ Ｏ（ Ｓ ｉ ｇ ｍａ ） ； 抗人 Ｃ Ｄ ２ ９单克隆抗 体
９ ０
实验动物与比较医学 Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ Ａｎ பைடு நூலகம் ｍａ ｌ ａ ｎ ｄ Ｃ ｏ ｍ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ
Ａｐ ｒ ． ２ ０ １ ３ ． ３ ３ （ ２ ）
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ ４ — ５ ８ １ ７ ． ２ ０ １ ３ ． ０ ２ ． ０ ０ ３
［ 作者简介】 欧 阳可栋（ １ ９ ７ ７ － ） ， 男， 博士， 研究方 向： 肿瘤药理学 。Ｅ — ｍ ａ ｉ ｌ ： ｋ ｄ ｏ ｕ ｙ ａ ｎ ｇ ＠ ｃ ｈ ｅ ｍ ｐ ａ ｒ ｔ ｎ ｅ ｒ ． ｃ ｎ 刘继斌（ １ ９ ７ ４ ． ） ， 共 同第一作者， 男， 博士， 副主任技师， 研究方 向： 肿瘤 的临床检验诊断研究。
Ｅ — ｍａ ｉ ｌ ： ｔ ｉ ａ ｎ ｓ ２ ０ ０ ８ ＠１ ６ ３ ． ｔ ｏ ｍ
【 通讯作者】 秦宵然（ １ ９ ７ ４ 一 ） ， 男， 博士， 研 究方 向： 肿瘤学 。 Ｅ ． ｍａ ｉ ｌ ： ｘ ｉ ａ ｏ ｒ ａ ｎ ＿ ｑ ｉ ｎ ＠ｙ ａ ｈ ｏ ｏ ． ｃ ｏ ｎ ｒ 张一 ｔ ￣ ， （ １ ９ ５ ６ 一 ） ， 男， 博士， 主任 医师， 研究方 向： 肿瘤学 。 Ｅ － ｍａ ｉｌ ： ｚ ｙ ｘ ３ ５ ３ ５ ８ ４ ９ ＠ｙ ａ ｈ ｏ ｏ ． ｃ ｏ ｍ． ｃ ｎ
人 源性食 管癌 移 植瘤模 型 的建 立 、
消化系统疾病实验设计方法
消化系统疾病实验设计方法在医学领域中，消化系统疾病的研究和探索一直是一个重要的课题。
为了更好地了解和治疗这些疾病，科学家们经常设计各种实验来模拟和研究消化系统的功能和疾病机制。
本文将介绍一些常用的消化系统疾病实验设计方法，以期提供一些有价值的参考。
一、动物模型实验设计在研究消化系统疾病时，常常需要使用动物模型来模拟人体情况。
以下是几种常见的动物模型实验设计方法：1. 胃溃疡实验设计：可以使用小鼠或大鼠作为实验动物，通过给予其辛辣食物、非甾体抗炎药物或给予胃粘膜损伤剂等方法，诱发胃溃疡发生。
实验过程中需要监测动物的食物摄入量、胃酸分泌和胃黏膜损伤程度等指标。
2. 肝炎模型实验设计：常用小鼠或大鼠模型，通过注射病毒、化学物质或高脂饮食等方法，诱发肝炎发生。
实验过程中需要监测动物的肝功能指标、炎症反应水平和组织损伤程度等。
3. 肠炎模型实验设计：可以使用小鼠或大鼠进行实验，通过给予动物温度、化学物质或诱导免疫反应等方法，模拟肠炎的发生。
实验过程中需要检测动物的肠道菌群、免疫反应水平和肠道屏障功能等指标。
二、细胞培养实验设计细胞培养实验是研究消化系统疾病的重要手段之一。
以下是几种常见的细胞培养实验设计方法：1. 胃酸分泌实验设计：可使用胃黏膜细胞株如RGM-1，通过给予不同刺激物如组胺、胆碱等来模拟胃酸分泌过程。
实验过程中需要检测细胞分泌的胃酸量和相关信号通路的激活程度等。
2. 肠道细胞炎症实验设计：可以使用肠道上皮细胞株如Caco-2，通过给予细胞不同的炎症刺激如TNF-α、细菌脂多糖等，模拟肠道炎症反应。
实验过程中需要检测细胞炎症因子的分泌水平和细胞屏障功能等。
3. 肝细胞损伤实验设计：常用肝细胞株如HepG2进行实验，通过给予细胞不同的损伤因子如酒精、药物等，模拟肝细胞的损伤过程。
实验过程中需要检测细胞的损伤程度、氧化应激水平和修复能力等。
三、分子生物学实验设计分子生物学实验可以揭示消化系统疾病的分子机制和相关信号通路。
肠易激综合征大鼠内脏敏感性异常与结肠及中枢神经系统5HT和cfos
关系 [ 5, 6] , 但 IBS患者 CN S中 5 HT 是否异常及其与内 脏敏感性改变的关系, 目前尚不清楚。本研究通过观 察 C IBS大鼠直肠球囊扩张后 ENS和 CNS中 5 H T 及 c fos异常表达, 探讨 5 HT 在脑 肠轴中对内脏敏感性 调节可能机制。
1 材料与方法 1. 1 材料 4周龄的雄性 W istar大鼠 20 只, 体质量 120~ 150 g, 军事医学科学院实验动物中心提 供。兔
肠易激综合征 ( irritab le bow e l syndrom e, IBS) 是指 腹痛或腹部不适同时伴有排便异常为特征的一种功能
性肠病, 目前 IBS的病因和发病机制尚不清楚, 其中内 脏敏感性异常机制和脑 肠轴异常机制是目前研究热 点 [ 1 4] 。 5 H T 是 肠 神 经 系 统 ( enteric nerves system, ENS) 和中枢神经系统 ( centra l nerves system, CNS) 中 一种重要的神经递质, 对内脏感觉的传递和调节方面 起重要作用; 一些研究显示 IBS与 5 HT 异常有一定的
丛的数目及 OD 值均明显高于 B组 (P < 0. 05); A 组下丘脑及前扣带回 5 HT、c fos阳性 神经组织面积及 OD 值也明显高于 B组。结
论 C IBS大鼠模型存在对直肠球囊扩张的 内脏敏 感性异 常, 肠 神经系 统及中 枢神经系 统 5 HT、c fo s的 异常表 达可 能参与 C IBS
10)。所有大鼠给予直肠 内球 囊 扩 张, 检 测球 囊 扩张 引 起 腹部 收 缩反 射 的 最小 容 量阈 值 及 1. 0 mL 扩 张 容量 时 腹部 收 缩 反射
( AW R )的 次数。结 肠、回盲部肌间神经丛及下丘脑、前扣带回 5 HT 和 c fos表达应用免 疫组织化学 染色及计 算机图像分 析系统半
gvhd 动物模型评分标准
gvhd 动物模型评分标准
GVHD动物模型评分标准主要根据以下方面进行评估：
1.临床表现：评估动物是否出现GVHD的典型症状，如皮肤病变、肝脾肿
大、体重减轻、食欲减退等。
2.免疫细胞反应：检测免疫细胞的数量和功能，以评估GVHD对免疫系统的
影响。
包括T细胞、B细胞、NK细胞等免疫细胞的活性、数量及功能。
3.组织病理学检查：通过活检样本进行组织病理学检查，观察GVHD对组织
器官的损伤情况，如皮肤、肝脏、脾脏、肠道等。
4.生存率与生存时间：评估模型动物的生存情况，包括生存率和生存时间
等指标。
5.其他指标：如血清生化指标、细胞因子水平等，可进一步评估GVHD的严
重程度和病理过程。
根据以上方面的评估结果，对GVHD动物模型进行评分，以量化评估模型的病情严重程度和相关研究结果的可靠性。
需要注意的是，不同的研究机构和实验条件可能存在一定的差异，因此在具体评估过程中还需结合实际研究背景和实验设计进行综合分析。
肠易激综合征内脏高敏感性动物模型的研究
（ ０ｇｕ ｆｌ ｔ ｏ ｉ ｌ ｆ ｈｎ ｈｉ ｎ ｅ ｉ Ｍ Ｓ ａｇ ａ ２０ ３ ， ｈ ａ Ｌ ｎｈ ａ ｉ ｅ Ｈ ｓ ｔ ａｇａ Ｕ ｉ ｒ ｔ ｏ Ｔ ，ｈ ｎｈｉ ０ ０ ２ Ｃ ｉ ） Ａ ｉ ｄ ｐ ａｏＳ ａ ｖ ｓｙ ｆ Ｃ ｎ
维普资讯
第２ ４卷
第１ 期
中 医
药
学
刊
Ｖｏ ． ４ Ｎｏ １ Ｊ２ ．
２００６年 １月
ＣＨＩ ＳＥ ＡＲＣＨＩ Ｓ ＯＦ ＴＲＡＤＩ Ｏ ＣＩ
Ｊｎ．２０ ０６ ａ
组肠功能障碍性综合征。其发病机理不很明确， 认为可能 失去 父 母 或 受 虐 待 等 可 致 成 年 后 患 ＩＳ的 危 险 性 增 Ｂ 道菌群失调和精神行为等的异常有关…。目前认为Ｉ 内 ２
脏敏感性增 高是 ＩＳ最重要 的病理 生理特 征之一 ， 胃肠 Ｂ 是 运动紊乱 、 腹痛及症 状多样 化的原 因。 目前对肠 易激综 合 征的实验研究 ， 常用 的模型 有 ： 慢性 束缚 、 直肠 扩张 、 游泳 、 光电刺激 、 拥挤 、 噪音 、 服泻药 等。近年来 内脏高 敏感性 灌 动物造模受到学术界的关注。 １ 内脏高敏 感性动物造模情况 内脏高敏感性指的是内脏组织对 刺激的感 受性增强 的
关键词 ： 易激综合征 ； 肠 高敏 感性 ； 动物模型
中图分类号 ：５ ４ ４ １ ７ ． １
文献标识码 ： Ａ
文章编号：０ ９— ２６ ２０ ） １ ０ ９— ２ １０ ５ ７ （０ ６ ０ —０ ６ ０
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【摘要】目的建立食管内脏高敏感性动物模型。
方法采用腹腔注射鸡卵清蛋白（ova）基础致敏联合食管酸灌注的方法处理sd大鼠，并采用免疫组织化学方法和显微图像分析技术评价内脏高敏感性-食管化学刺激大鼠模型的可靠性。
结果 ova基础致敏联合食管酸灌注组大鼠被激活了一个复杂而广泛的大脑网络，其在额顶皮质、岛叶、扣带皮质、中央杏仁核、k lliker-fuse核、疑核、臂旁核、下丘脑室旁核、丘脑室旁核、三叉旁核、孤束核、最后区、延髓网状核等fos样免疫活性（fli）神经元的数目均显著高于其余各组（p＜0.05）。
模型组大鼠在中央杏仁核、臂旁核、室旁核、三叉旁核、孤束核的fli阳性产物的平均光密度 (od) 值亦较其余各组明显增高（p＜0.05）。
结论预先腹腔注射鸡卵清蛋白基础致敏联合食管酸灌注可成功建立食管内脏高敏感性动物模型。
【关键词】内脏高敏感性；c-fos；免疫组织化学；食管酸灌注；卵清蛋白
［基金项目］国家自然科学基金资助项目（30700362）
establish and evaluation of the rat model of esophageal visceral hypersensitivity 慢性食管内脏高敏感性可能是某一亚类的非糜烂性反流病(nerd)发生的最重要病理生理特征，是这类患者症状产生的基础和症状多样化的原因［1-2］。
目前，尚不清楚中枢神经系统(cns)中哪些核团及环路参与了食管内脏高敏感性的应答和调节，亦不明了在内脏高敏感状态下哪些结构对食管化学刺激反应敏锐，且在人体开展cns内形态学-功能的定位研究非常困难。
因此，采用有效的动物模型来研究内脏敏感性改变的中枢敏化机制有着十分重要的意义。
1 材料与方法
1.1 实验动物及分组成年健康sd大鼠29只，雌雄不限，体质量225～285 g，由本校实验动物中心提供。
将sd大鼠随机分为４组，a组：空白对照组6只；ｂ组：食管酸灌注组8只；ｃ组：ova致敏组7只；ｄ组：ova及食管酸灌注组8只。
1.2 方法
1.2.1 食管酸灌注的方法在实验的第14天，对c组、d组动物进行食管酸灌注。
麻醉动物平卧位固定，头部抬高20°～30°，切开腹壁和胃壁，将一引流管放置在贲门处以收集从食管滴注的液体。
把一单腔灌流管经口放置于食管内，导管开口位于食管和胃交界处上2～3 cm，固定导管，另一端与持续灌注泵相连。
使用0.1 mol/l盐酸滴注，滴注液温度保持37 ℃，速度10 ml/h，共50 min。
1.2.2 脑组织切片的制备食管酸灌注后30 min深度麻醉动物后立即开胸，经左心室至升主动脉插管并加压灌注200 ml生理盐水冲洗全身血液，随后用预冷的4 ℃含4%多聚甲醛的0.1 mol/l 磷酸盐缓冲液(pb，ph7.4)500 ml加压灌注固定1 h。
然后取脊髓和全脑组织置于相同固定液中，在4 ℃条件下固定18～20 h，再移至含20％蔗糖的0.1 mol/l pb溶液中浸泡过夜至下沉（4 ℃）。
用恒冷箱冰冻切片机-20 ℃行连续冠状切片，片厚40 μm，隔5取2，切片贴于经apes处理的载玻片上备用。
1.2.3 fos表达的免疫组织化学染色用含0.01 mol/l正常小牛血清、0.5% triton x 的pbs液室温下孵育2 h；滴加兔多克隆抗c-fos抗体稀释液（1∶2 000，oncogen公司），4 ℃孵育48 ｈ；滴加二抗，superpicture即用型二步法检测试剂盒（由上海蓝创生物公司提供）在37 ℃孵育10～15 min；dab/h2o2法呈色；最后进行常规脱水、透明、中性树胶封片、光镜观察。
1.2.4 fos阳性细胞计数方法用日本olympus bx-50光学显微镜观察，然后用江苏捷达科技提供的显微图像分析系统处理并计算出各脑区及神经核团内fos蛋白阳性细胞数量的总和。
1.2.5 数据处理应用 spss11.0统计软件，采用方差分析比较各组间数值差异显著性，p＜0.05有显著性差异。
2 结果各组cns内fli神经元计数，从表1可看出：①b组大鼠的中央杏仁核、kf 核群、下丘脑室旁核、下丘脑视上核、丘脑室旁核、臂旁核、疑核、三叉旁核、孤束核中央亚核和最后区等核团阳性细胞数量与对照组相比较有统计学意义（见表1，p＜0.05），而额顶叶皮质则仅有少数fli颗粒。
②c组在额叶皮质ⅰ、ⅱ区、扣带回皮质ⅰ、ⅱ区，及中央杏仁核、下丘脑室旁核、中脑导水管周围灰质、中尾段延髓的孤束核内侧亚核背侧和最后区内有中等密度的fos阳性神经元表达，且与空白对照组相比有统计学意义。
③d组大鼠额顶叶皮质(图1)、岛叶、扣带回、中央杏仁核、kf核群、疑核、臂旁核、下丘脑室旁核、丘脑室旁核、三叉旁核、孤束核、最后区、延髓网状核等核团(图2)fli神经元的数目较单纯的食管酸灌注组和ova致敏组显著增加（p＜0.05）。