生物素测试剂盒操作流程
EMSA探针生物素标记试剂盒
E. 用紫外交联仪(UV-light cross-linker)选择254nm紫外波长，120mJ/cm2，交联30-45秒。如果没有紫外交联仪可以使用
普通的手提式紫外灯(例如碧云天的手提紫外检测仪(EUV002))，距离膜5-10厘米左右照射1-5分钟。也可以使用超净
工作台内的紫外灯，距离膜5-10厘米左右照射1-10分钟。最佳的交联时间可以使用标准品自行摸索。
1ml 200µl
GS008-7 GS008-8
—
TE 退火缓冲液(10X)
说明书
15ml 150µl 1份
保存条件：
-20℃保存。
注意事项： ¾ 需自备用于检测探针标记效率的带正电荷尼龙膜或硝酸纤维素膜(NC膜)，以及用于生物素检测的相关试剂。带正电荷尼
龙膜(FFN12/FFN16) 和硝酸纤维素膜(FFN06/FFN09)可以向碧云天订购。相应的用于生物素检测的化学发光法EMSA试 剂盒(GS009)也可以向碧云天订购。 ¾ 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
会出现标记效率大于100%的情况。
6. 生物素标记EMSA探针的制备：
A. 对于步骤3B标记好的单链DNA探针，把正义链和反义链等体积混合(不可根据标记效率调整摩尔比例)。对于最初使
用变性的双链EMSA探针进行探针标记的情况，直接进入下一步。
B. 加入退火缓冲液(10X)，使退火缓冲液的最终浓度为1X，混匀。例如待退火探针的体积为100微升，则加入11微升退
使用说明：
1. 准备工作： A. 取出TdT Buffer (5X)、Biotin-11-dUTP和Ultrapure water溶解，并置于冰浴上备用。 B. 取出待标记的单链EMSA探针，用水稀释至1µM，并置于冰浴上备用。如果待标记的EMSA探针为双链，95℃加热2 分钟，然后立即放置到冰水浴中，使双链的EMSA探针转变为单链的探针，然后同样用水稀释至总的单链DNA浓度为 1µM，即每条单链的浓度为0.5µM，相当于最初双链的EMSA探针浓度为0.5µM。
饲料添加剂生物素的检验操作规程
饲料添加剂2％d-生物素的检验操作规程
[质量标准依据]：GB/T23180－2008
分子式：C10H16N2O3S
分子量：244.31
1技术要求
1.1.1外观：白色至类白色流动性粉末。
1.1.2粒度：通过孔径为150μm（100目）的分析筛，筛上物≤10.0％。
1.1.3含量：≥
2.0％。
1.1.4干燥失重：≤1
2.0％。
2试验方法
2.1生物素含量测定
2.1.1应用试剂
2.1.1.1流动相：0.05%三氟醋酸（用5mol/L的NaOH调节到pH ＝2.5）＋乙腈＝75＋25。
2.1.1.2对照品溶液：精确称取10mg（准确至0.01mg）生物素对照品，置于50ml容量瓶中，用流动相溶解并定容。
每毫升含有生物素0.2mg。
2.1.1.3样品溶液：精确称取100mg（准确至0.1mg）样品，置于50ml容量瓶中，加约40ml流动相溶液，在超声波水浴中处理10min，用流动相定容。
取上层清液通过0.45μm的滤膜，作为样品溶液。
2.1.2应用仪器。
生物素标记试剂盒使用说明书
生物素标记试剂盒使用说明书货号: EBLK0002产品介绍：Elabscience生物素标记试剂盒提供了生物素标记所需全部试剂，用于含有氨基（NH2-）抗体的标记。
生物素已经活化，可直接使用，每个试剂盒足以完成3次标记，每次可标记0.2-2mg。
试剂盒中包括6个用于抗体标记脱盐的Filtration tube，不用透析，操作简便，熟练操作90min可完成整个标记过程。
产品特点：试剂全面:本试剂盒提供了生物素标记所需全部试剂。
快速:整个过程仅需90min。
方便:通过Filtration tube即可脱盐，无需透析或者凝胶过滤。
使用灵活:既可用于微量标记又可大量标记，每次可标记0.2-2mg。
理想的标记效果:已经优化确定了最适的标记比例，降低标记不足或由于过度标记而失活的可能性。
产品组成：标记过程需要仪器：1. 10ul，50ul，200ul，1000ul可调高精度移液器2. 恒温箱（37℃）3. 离心机（离心力可达到12,000×g）储存条件：本试剂盒未开封前在2-8℃可稳定保存一年生物素标记反应原理：NH2-Reactive Biotin专一地与伯胺反应（N-末端及赖氨酸残基侧链）形成稳定的酰胺键生物素标记NH2-Reactive Biotin使用量的计算：每个反应中生物素试剂的使用量取决于待标记蛋白质的量和浓度。
通过优化，我们确定了标记2mg/ml的抗体（IgG ，150KD），使用生物素和抗体的分子比为20:1能达到较理想的标记效果。
1、标记2mg/ml的抗体，使用生物素和抗体的分子比为20:1时，应加入生物素量的计算方法：ml蛋白×2mg蛋白ml蛋白×1mmolIgG150,000mgIgG×20mmol生物素mmol蛋白= mmol生物素2、对于10mmol的生物素溶液，应加入反应中该生物素体积的计算方法：mmol生物素×1,000,000μLL ×L10mmol= ul生物素计算示例：对于0.5ml 2mg/ml的IgG（分子量为150,000）溶液，需加入10mM的生物素溶液13.3ul。
食物中生物素(维生素H)的测定方法
食物中生物素（维生素H）的测定方法微生物测定法1.原理生物素对于Lactobacillus plantarum（ATCC 8014）的正常生长是一种必需的营养素，在一定生长条件下，Lactobacillus plantarum的生长与繁殖速度与溶液中生物素的含量成一定的线性关系，通过利用浊度法或光密度法测定细菌生长和繁殖的强度可间接地测定出食物样品中的生物素含量。
最低检出限为0.003ng。
2.适用范围本方法参考"Official Methods of Analysis of the Association of official Analytical Chemists"、"Methods of Vitamin Analysis"以及"Methods of the Microbiological Analysis of Selected Nutrients"。
本方法适用于测定各类食物及饲料中的生物素含量。
3.试剂本试验所用水均为蒸馏水，所用试剂均需分析纯试剂。
3.1 甲苯。
3.2 1 mol/L硫酸溶液：在600ml水中加入55.6ml浓硫酸，稀释至1000ml。
3.3 3 mol/L硫酸溶液：在600ml水中加入166.7ml浓硫酸，稀释至1000ml。
3.4 10mol/L氢氧化钠溶液：溶200g氢氧化钠于水中，定容至500ml。
3.5 1：1（1+1）乙醇溶液：500ml无水乙醇与500ml水充分混匀。
3.6 酸解酪蛋白：称取50g不含维生素的酪蛋白于500ml烧杯中，加200ml 3 mol/L盐酸，121℃高压水解6小时。
将水解物转移至蒸发皿内，在沸水浴上蒸发至膏状。
加200ml水使之溶解后再蒸发至膏状，如此反复3次，以去除盐酸。
以溴酚蓝作外指示剂，用10mol/L氢氧化钠调节pH至3.5。
加20g活性炭，振摇，过滤，如果滤液不呈淡黄色或无色，可用活性炭重复处理。
简述使用elisa试剂盒的操作流程
简述使用elisa试剂盒的操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor.I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!ELISA试剂盒操作流程简述ELISA，全称为酶联免疫吸附测定，是一种广泛用于定量检测样本中特定蛋白质或抗原的生物分析技术。
化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒 D3308 说明书
化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒产品编号 产品名称包装 D3308化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒1000cm 2产品简介：化学发光法生物素检测试剂盒(Chemiluminescent Biotin-labeled Nucleic Acid Detection Kit)是一种通过Streptavidin-HRP 及后续的BeyoECL Moon 试剂来实现化学发光检测Biotin 标记核酸的检测试剂盒。
适用于Southern blot 、Northern blot 、ribonuclease protection assay (RPA)或EMSA 等实验中，采用生物素标记的DNA 或RNA 探针时的检测。
本试剂盒不适用于生物素标记蛋白的检测。
本试剂盒同时还提供了封闭液、洗涤液等检测时所需的配套试剂。
本试剂盒采用了高质量的Streptavidin-HRP Conjugate ，HRP 和Streptavidin 共价交联的比例大于3，这样比采用Streptavidin 和Biotin-HRP conjugate 两种试剂进行检测要更方便，并且灵敏度更高。
采用了非特异性结合比avidin 更低的strepatavidin ，使检测结果背景更低灵敏度更高。
本试剂盒没有提供生物素探针标记相关的试剂，生物素标记的DNA 探针或EMSA 探针的制备可以相应地使用碧云天生产的生物素3'末端DNA 标记试剂盒(D3106)或EMSA 探针生物素标记试剂盒(GS008)。
本试剂盒可以用于检测至少10块10×10cm 有生物素标记EMSA 探针的膜，即共1000cm 2。
包装清单：产品编号 产品名称包装 D3308-1 BeyoECL Moon A 液 55ml D3308-2 BeyoECL Moon B 液 55ml D3308-3 Streptavidin-HRP Conjugate100µl D3308-4 封闭液 380ml D3308-5 洗涤液(5X)250ml D3308-6检测平衡液 250ml —说明书1份保存条件：D3308-3 Streptavidin-HRP Conjugate 在-20ºC 保存，其余可4ºC 保存。
生物素标记
生物素标记生物素标记1,向皿中加入2ml 1mg/ml的生物素试剂。
2,4℃，温和shaking30min，孵育后有一些细胞会悬浮起来，转移这些细胞至离心管中，离心收集细胞，并按下面方法洗涤细胞。
3，用2ml含0.1mM Ca+，1mM mg2+，100Mm Glycine的PBS清洗细胞2次，这时也会有一些细胞悬浮起来，转移它们到一个离心管，离心收集细胞。
4，加2ml含0.1mM Ca+，1mM mg2+的PBS到皿中。
5，4℃，45min停止未反应的生物素试剂的反应。
（使生物素试剂失活），并收集浮起来的细胞，离心收集细胞。
6，收集细胞：将皿中的细胞和浮起来的细胞转移进入一个1.5ml 的离心管。
7，向1.5ml的离心管中加入1ml RIPA/lysis buffer。
（含蛋白酶抑制剂1table /50ml）8，4℃涡旋1h。
9,20000g,10min,4℃,以沉淀核酸与其他残渣。
10，把上清转入新的EP管，（这是总蛋白，T，一般情况下浓度应该在1-5mg/ml，可以用B radford method来测定浓度，并调整全部样品至同一浓度）11，向300ul pre-cleared sample中加入300ul含50% slurry-Avidin beads的PBS,P I孵育。
（PI，蛋白酶抑制剂，的工作浓度0.1-1mM，17-174ug/ml）12，室温涡旋1h。
（使生物素和亲和素充分结合）13，离心除去beads，将上清转移至一新离心管中。
（这是位结合的蛋白质，浓度相对于总蛋白被稀释了1.5倍。
）14，向beads中加入150ul 2×Laemmli buffer来将beads上的蛋白质洗掉。
（洗下来的蛋白浓度是总蛋白浓度的2倍）。
ELISA试剂盒的操作规范
ELISA试剂盒的操作规范
今天大家就一起来看看我公司ELISA试剂盒操作规范细节。
1.严格按照说明书进行操作。
操作前将试剂在室温下平衡30～60min。
2.加样后及时放入孵箱。
标本较多时，要分批操作。
按说明严格控制操作时间，防止孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗。
3.合理安排检测量，以免反应板过多导致洗板等待时间长。
4.加样时保持显色剂不外流；加终止液时应避免产生气泡。
5.应桌面清洁，整个操作过程中酶标板不被污染。
在加样的步骤中，您要注意加样器枪头的洁净与否和吸量的准确性，直接影响检测结果。
由于枪头构造特殊，导致清洗困难，加大了交叉污染的机会。
建议用一次性吸嘴。
加样器也要经常清洗，定期校准。
加样时应将所加物加在酶标板板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出。
化学发光法EMSA试剂盒 说明书
装置，电转时可以设置为380mA(约100V)转膜30-60分钟。如果胶较厚，则需适当延长转膜时间。转膜时需保持转膜 液的温度较低，通常可以把电转槽置于4℃冷库或置于冰浴或冰水浴中进行电转，这样可以确保低温。具体的电转膜 方法请参考电转膜装置的使用说明。 G. 转膜完毕后，小心取出尼龙膜，样品面向上，放置在一干燥的滤纸上，轻轻吸掉下表面明显的液体。立即进入下一 步的交联步骤，不可使膜干掉。 7. 交联： A. 用紫外交联仪(UV-light cross-linker)选择254nm紫外波长，120mJ/cm2，交联45-60秒。如果没有紫外交联仪可以使用普 通的手提式紫外灯(例如碧云天的手提紫外检测仪(EUV002))，距离膜5-10厘米左右照射3-10分钟。也可以使用超净工 作台内的紫外灯，距离膜5-10厘米左右照射3-15分钟。最佳的交联时间可以使用标准品自行摸索。 B. 交联完毕后，可以直接进入下一步检测；也可以用保鲜膜包裹后在室温干燥处存放3-5天，然后再进入下一步检测。 如果检测结果发现交联效果不佳，甚至连free probe的条带都非常微弱，可以考虑在膜干燥后参考步骤A的条件再交联 一次，以进一步改善交联效果。 8. 化学发光法检测生物素标记的探针： A. 37-50℃水浴溶解封闭液和洗涤液。 注意：封闭液和洗涤液必须完全溶解后方可使用，封闭液和洗涤液可以在室温至50℃之间使用，但必须确保这两种 溶液中均无沉淀产生，在冬天需特别注意。 B. 取一合适的容器加入15ml封闭液，再放入交联过的含有样品的尼龙膜。在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动15分钟。 C. 取7.5µl Streptavidin-HRP Conjugate加入到15ml封闭液中(1:2000稀释)，混匀备用。 D. 去除用于尼龙膜封闭的封闭液，加入上一步中配制的15ml含有Streptavidin-HRP Conjugate的封闭液。在侧摆摇床或水 平摇床上缓慢摇动15分钟。 E. 取25ml洗涤液(5X)，加入100ml重蒸水或MilliQ级纯水，混匀配制成125ml洗涤液。 F. 将尼龙膜转移至另一装有15-20ml洗涤液的容器内，漂洗1分钟。 G. 去除洗涤液，加入15-20ml洗涤液，在侧摆摇床或水平摇床缓慢上洗涤5分钟。 H. 重复步骤G 三次(共洗涤四次)，每次洗涤时间都约为5分钟。 I. 将尼龙膜转移至另一装有20-25ml检测平衡液的容器内，在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动5分钟。 J. 取5ml BeyoECL Plus Reagent A和5ml BeyoECL Plus Reagent B混匀，配制成BeyoECL Plus Reagent工作液。注意： BeyoECL Plus Reagent工作液必须现配现用。说明：从本步骤起操作方法和注意事项同Western实验的荧光检测。 K. 取出尼龙膜，用吸水纸吸去过多液体。立即将膜的样品面向上，放置到处于水平桌面上的洁净容器内或保鲜膜上。 L. 在尼龙膜的表面小心加上步骤J配制好的共10ml BeyoECL Plus Reagent工作液，使工作液完全覆盖尼龙膜。室温放置 2-3分钟。 M. 取出尼龙膜，用吸水纸吸去过多液体。将尼龙膜放在两片保鲜膜或其它适当的透光薄膜中间，并固定于压片暗盒(也 称片夹)内。 N. 用X光片压片1-5分钟。可以先压片1分钟，立即显影定影，然后根据结果再调整压片时间；也可以直接分别压片30 秒、1、3、5分钟或更长时间，然后一起显影定影观察结果。
生物测量仪器操作流程
生物测量仪器操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!1. 显微镜：准备工作：将显微镜放置在平稳的台面上，插上电源，打开光源。
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维生素B7（生物素）检测试剂盒实验操作流程
一、实验前准备工作
1、灭菌（在做实验前，至少提前两个小时以上灭菌）
如果有一次性无菌注射器则不需要灭菌注射器
没有枪头盒时用其他器皿装枪头一起灭菌（如烧杯，灭菌时放入枪头后用报纸把烧杯口封起来），同时带两把小镊子，做实验时取枪头用。
2、配制溶液
（1）准备10mlHCL溶液：1.0mol/l
（2）配制氢氧化钠溶液：1mol/l
a）称取0.4 g 氢氧化钠
b）用10 ml双蒸水或去离子水充分溶解
注：用带橡胶塞的玻璃瓶储存。
3、实验过程中需要的其他设备及器材：
无菌工作台
酶标仪(540nm或630nm)
37℃黑暗条件下的培养箱
95℃水浴锅（实验前需要提前加热到95℃）
振荡器
pH测量仪或pH试纸
双蒸水
0.2um无菌滤膜
酒精棉
二、样品处理
1、称取1g奶粉样品至一个50ml无菌试管中，加入40ml无菌水摇匀，用HCL或NaOH调整pH值到8.0 ＋/- 0.2，充分混匀；
2、在95℃水浴中提取30分钟，期间所有样品试管需每隔5分钟振荡一次，并一直保持试管塞紧闭
3、迅速冷却至室温（即把样品试管放进水里，保证试管塞紧闭）
从下面这一步开始需要在无菌工作台进行
4、分别取1ml样品用0.2um无菌滤膜过滤至1.5～2.0ml无菌试管中
5、根据样品中生物素含量用试剂盒中提供的无菌水进一步稀释样品，稀释后的样品即可用于检测。
样品稀释倍数计算如下：
例如：固体样品标注浓度为80ug/100g
用该浓度除以标准2
计算： 80 μg ÷ 0.24 μg ＝333
→ 结果为稀释倍数大约为300
→ 1 ：300 稀释
稀释步骤：
a) 1 ：9（100ul样品提取溶液＋ 900ul试剂盒中的无菌水），
b) 1 ：9（100ul a液＋ 900ul试剂盒中的无菌水），
c) 1 ：2（200ul b液＋ 400ul试剂盒中的无菌水）
注：每一步稀释都需要充分混匀后再做下一步稀释，提取稀释液需立即使用。
三、检测过程
1、配制标准品
装有无菌水的瓶子：推开蓝色帽，沿着玻璃边缘垂直向上拉开，丢弃。
标准品必须在试验之前新鲜制备。
－打开生物素标准品瓶，取出盖子。
丢掉盖子和红色塞子
－加入x ml无菌水，至标准品瓶中。
充分溶解标准品，即配成标准品浓缩液。
注：x详见质控报告和标准品包装标签，每一批次所加体积会略有不同，无菌水必须是取自试剂盒中提供的。
－取6个无菌管（1.5～2.0ml）并按照下列表格准备标准品溶液。
注：配制每一个标准品，都是取标准浓缩液进行稀释。
2、制备生物素培养基
注：培养基必须在试验之前新鲜制备。
—打开瓶盖用镊子从干燥剂中取出培养基，丢掉干燥剂。
－加入10ml无菌水（必须取自试剂盒中）至生物素培养基中。
－盖好培养基瓶，充分摇匀。
－在95℃水浴中加热至少5分钟，期间振荡至少2次，保证瓶子封闭。
－迅速冷却至室温（低于30℃）。
－使用0.2μm无菌滤纸过滤培养基至15ml无菌离心管中。
3、检测过程
－取出当次实验需要数量的微孔板条，并固定在板上，未使用的微孔板条立即放回原来的箔袋中，并与干燥剂一起重新封好，储存在2-8℃条件下。
－用移液枪取150μl生物素培养基至微孔中
－用移液枪取150μl标准品或样品至指定的微孔中
－用粘合箔盖住微孔条或微孔：用手或压舌板将粘合箔平压，使其充分封闭微孔板条。
注意：保证粘合箔和微孔的封闭性，特别注意微孔的边缘部分。
－在37℃黑暗条件下（可用孵育器）孵育44～48小时。
注：37℃孵育不能超过48小时。
以两次平行、两个样品为例，取两条微孔板条，每孔加样如下:
4、读取数据
－再次向下挤压粘合箔，将微孔板向上放置在桌面上，在桌面上来回振荡，使微生物溶解在培养基中
－从对角开始小心揭去粘合箔，从左边开始进行；
－微孔液体表面有泡沫时可以用移液枪头去除
－用酶标仪630nm（或540nm）条件下读取浑浊度
四、结果计算
推荐在计算结果时使用专业计算软件。
并使用4参数计算公式进行结果计算。
判断检测结果有效：
－OD空白值 < OD标准1
－OD标准5 > 0.6 OD
从标准曲线上读取的浓度×稀释倍数
样品中生物素含量＝────────────────────
（μg/100ml）样品总量 g（ml）
（μg/100g）
注：稀释倍数为样品处理过程中所计算的整数倍，不包括提取过程中的40倍，这个倍数已经在曲线中考虑进去。
例如：
样品重量： 1 g
样品提取稀释倍数： 1：40（不需要被考虑进去）
其它稀释倍数： 1：300（必须考虑）
从标准曲线中读取浓度值： 0.24 μg /100 g（ml）
0.24 ×300 / 1 = 128 μg / 100 g（ml）
五、实验注意事项
1、试剂盒应存放在2－8℃条件下。
2、微孔板操作时使用的必须是无菌样品提取液或稀释液，并且样品稀释时需要使用盒中提供的无菌水。
3、样品提取和稀释必须在无菌条件下进行。
4、检测培养基有可能刺激眼睛、皮肤和黏膜。
5、完成试验后须根据规章处理检测仪器（如使用高压灭菌锅）。