猪急性心肌梗死模型的建立(一)
心肌梗死动物模型具体方法及步骤
心肌梗死动物模型具体方法及步骤原型物种人来源结扎冠状动脉左前降支（LAD）导致心梗模式动物品系SPF级SD大鼠，健康，3-4W，雌雄各半，体重为180g-200g。
实验分组实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组。
实验周期72h建模方法心肌梗死是指心肌的缺血性坏死，是一种急性及严重的心脏状态。
心脏作为血液循环动力中心这一功能的实现，需要冠状动脉不断提供的血流供应，当冠状动脉发生病变而狭窄或堵塞，使得冠状动脉的血流急剧减少或中断，便会使相应的心肌出现严重而持久地急性缺血，心肌无法得到足够氧气，最终导致心肌不可逆的缺血性坏死，心脏的收缩和舒张功能降低，机体供血不足，严重者最终导致机体死亡。
1. 大鼠用3%戊巴比妥钠（30mg/kg），腹腔注射麻醉，用小动物剃毛器剃除大鼠胸部及腋下毛发（充分暴露手术区），用碘酒和75％乙醇术区消毒。
2.气管插管：麻醉后，夹趾检测无反应即可进行MI手术。
打开外置光源、显微镜开关，打开呼吸机，设置好各参数（呼吸比2：1，潮气量6-8 mL，频率70 次/min），将气管插管沿声门插入气管，取下大鼠接上呼吸机，观察大鼠呼吸状况，胸廓起伏与呼吸机频率一致表示插管成功，即可进行MI手术。
3. 大鼠采用右侧卧位，用眼科剪在左前肢腋下，用显微剪于三、四肋间打开胸腔充分暴露心脏，显微直镊轻轻夹起少量心包并于左心耳下撕开少许心包，充分暴露左冠状动脉前降支（LAD）或所在区域。
4. 结扎冠状动脉：于显微镜下找到LAD走向或可能所在位置,持针器持取5-0带针缝合线，于左心耳根部下方肺动脉圆锥旁以5-0 无创缝合线穿过左冠状动脉前降支( LAD)，以完全阻断LAD血流。
5.关胸：结扎完成后，5-0缝线完全缝合胸腔开口（保证无缝隙、无错位）关闭胸腔，由内向外逐层缝合各层肌肉和皮肤。
6.术后管理：术后密切关注大鼠状态，有无呼吸异常等。
待大鼠自然苏醒后将大鼠从呼吸机上取下并取下气管插管，正常饲养。
解剖M型超声心动图评价介入栓塞法猪急性心肌梗死模型左心结构与局部功能
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急性心肌损伤后心肌修复的初步观察
急性心肌损伤后心肌修复的初步观察廖占玲;王炳银;刘峰【摘要】目的评估大鼠急性心肌梗死后,梗死边缘区和右心室非梗死区心肌细胞增殖情况,探讨其在修复损伤心肌中的可能作用.方法 2012年1月起选取苏州大学动物实验中心SD大鼠14只,采用随机数字表法分为两组:实验组采用开胸结扎冠状动脉前降支制作急性心肌梗死模型,对照组开胸置缝线而不结扎.于术后第10日处死大鼠,采集梗死边缘区及非梗死区心肌组织.处死大鼠前12h和24h分别腹腔注射50 mg/kg 5-溴-2-脱氧尿苷(Brdu).苏木精-伊红(HE)染色后观察心肌组织形态学和病理学变化,免疫组织化学法检测Brdu阳性心肌细胞.结果大鼠急性心肌梗死后左心室梗死边缘区及右心室非梗死区均可见Brdu阳性心肌细胞,即存在心肌细胞增殖/再生.实验组梗死边缘区Brdu阳性心肌细胞比例为对照组的5.7倍[(1.26±0.15)％vs (0.22±0.06)％](P＜0.01);右心室非梗死区Brdu阳性细胞为对照组的4.2倍[(0.75±0.12)％vs (0.18±0.07)％](P＜0.01);实验组梗死边缘区Brdu阳性细胞与右心室非梗死区比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论大鼠急性心肌梗死后心肌细胞可增殖再生,梗死边缘区及右心室非梗死区均可见心肌细胞增殖,且均显著高于对照组.【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2014(020)008【总页数】3页(P1487-1489)【关键词】急性心肌梗死;大鼠;心肌细胞再生;增殖【作者】廖占玲;王炳银;刘峰【作者单位】上海交通大学医学院苏州九龙医院心脏中心,江苏苏州 215021;上海交通大学医学院苏州九龙医院心脏中心,江苏苏州 215021;上海交通大学医学院苏州九龙医院心脏中心,江苏苏州 215021【正文语种】中文【中图分类】R541.4传统的观念一直认为心脏是一个终末分化器官，心肌细胞不能再生，肥大是其唯一的表现形式。
小型猪急性心肌梗死后心力衰竭模型的构建
声检查 ， 制模 第 ｌ 复 查 有 创 血 流动 力 学 检 查 ， 行 心 脏 病 理 检 查 ， 定 和 评 价 模 型 的 成 功 率 、 定 性 和 可 重 复 ４天 并 认 稳
性 。结 果 制 模 １ ４ｄ后 共 有 １ ５头 小 型猪 成 活 ， 电图 、 肌 坏 死 标 记物 、 理 检 查 均 符 合 Ａ 病 理 生 理 过 程 。其 心 心 病 ＭＩ
低 （ ００ ） Ｐ＜ ． １ 。病 理 检 查 显示 心肌 梗 死 面 积 占左 心 室 面 积 的 ２ ． ％ ～ ４ ９ 。 结 论 ５４ ３．％ 球 囊 闭 塞 结 合 微 血 栓 微 球
混 悬 液 灌 注 构 建小 型猪 急 性 心 肌梗 死 后 心 力 衰 竭模 型 具 有 闭 胸 、 成 功 率 、 定 和 重 复 性 好 等 优 点 ， 药 物 、 状 高 稳 较 冠
Ｆ ＡＮ ｅ．ｅ‘ ＬＩ Ｘｉ ｏ ｋ ｎ Ｗ ｉｚ Ｕ ａ ． ｕ ， Ｆ ＡＮ ｎ． Ｘｉ ｎａ
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中国小型猪心导管介入冠状动脉栓塞心肌梗死模型制作及方法
中国小型猪心导管介入冠状动脉栓塞心肌梗死模型制作及方法(1)复制方法体重18～22kg雄性中国小型猪。
按30mg/kg的剂量戊丨巴丨比丨妥丨钠静脉注射麻醉，动物固定后分离股静脉建立静脉通路以补液及给药，接心电监护。
无菌作颈部切口，分离颈总动脉，动脉穿刺插入鞘管，给肝素200U/kg抗凝，通过静脉通道给利多卡因(5mg/kg)以预防室颤。
采用左前斜位(45°)，在X线机透视下经鞘管将右冠指引导管插入至主动脉升段，通过泛影葡胺造影定位使导管开口与冠状动脉开口同轴，将导丝小心插入冠状动脉左前降支，再通过球囊导管送入栓子至左前降支中下1/3处。
造影确认阻断血流后，依次退出导丝、球囊及导管、鞘管，缝合颈部切口，术后观察14d后处死动物，取心脏并做相关检查。
观测指标的选择可选用功能性指标(如心电图、超声心动图、无创性心功能测定、放射性核素tuo心肌血流测定等)，生化指标(各种心肌酶、心肌代谢及其他生化指标)，形态学指标(心肌梗死范围、心肌病理切片观测心肌损伤修复情况、心肌细胞及心肌小血管新生情况等)。
多指标观测可从多方面反映心肌梗死发生、发展、转归以及各种治疗措施的近期及远期疗效。
(2)模型特点本模型制作方法不需开胸等复杂手术，也不需结扎冠状动脉，可避免手术创伤对动物造成重大的伤害及机体内环境的重大改变，保持胸腔内环境稳定；同时可进行活体(在体)、长期、多指标的连续、动态观测。
因该模型稳定，可进行准确的定位、定量研究，结果可靠，重复性好，所以既可用于急性试验，观察药物的即刻作用；又可进行慢性试验，术后观察数日、数周或更久的动态变化过程以及药物的长期疗效。
特别是观察心肌修复过程，心肌细胞及心肌小血管再生等作用，说明各种治疗措施或药物的远期疗效。
但本试验技术难度大，技巧性强，操作复杂，需依赖X线机、介入设备，并需多学科合作配合，才能取得成功。
(3)比较医学中国小型猪心脏及冠状动脉系统的解剖生理特点与人相似，优于犬及其他动物，其模型更符合临床特点。
氟伐他汀对心肌梗死大鼠心肌组织et-1及etar的影响
冰霜保存。 ２．心脏标本采集： １、在结扎冠脉（Ｃ２、Ｆ２组）或置入缝线（Ｎ组）后４小时完整剪下心
脏。２、将大鼠心脏于ＯｏＣ ＰＰＳ液中清洗，剪除心房和右心室，用滤纸吸去水 分。３、大鼠左心室称重，用剪刀剪碎，加入９倍的００Ｃ生理盐水。４、匀浆： 在ＯｏＣ下，以２００００ｒｐｍ匀浆３０ｓ，停顿１５ｓ，连续３次。５、匀浆液以３０００ｒｐｍ， 离心５分钟。吸取上清液，置一７００ｃ冰霜保存。 五．心肌梗死面积的测定（针对Ｆ。、Ｃ。组）
表４氟伐他汀对大鼠心肌ＥＴ一１的影响
图２各组大鼠心肌ＥＴ—ｌ比较
Ｎ组
Ｃ２组
Ｆ２组
与Ｎ组相比｛｛Ｐ＜０．０１：与Ｃ２组相比＃ｇＰ＜Ｏ．０１
三前言
自日本学者Ｙａｎａｇｅｓａｗａ“３于１９８８年从猪主动脉内皮细胞培养液中分离纯 化内皮素（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ，ＥＴ）以来，ＥＴ的生物化学效应已得到广泛的研究。ＥＴ 主要由内皮细胞以旁分泌和自分泌的方式分泌。’…，现已证实，血管平滑肌细 胞“１，心肌细胞啼，“，和支气管上皮细胞口１均可分泌。成熟的ＥＴ为２１个氨基酸 组成的多肽，是在内皮素转化酶（ＥＣＥ）的作用下，由大内皮素（ｂｉｇ ＥＴ）剪切 而成。他有３种不同的异构体ＥＴ。曙１，通过与受体ＥＴＡ，ＥＴＢ结合产生生物学效 应。其中ＥＴ一１除存在于其他组织外，是唯一存在于血管内皮的内皮素。９１。目 前，国内外许多研究证实，ＥＴ一１对心血管疾病的发生发展起着重要作剪亍了雹Ｔ—ｌ 在心血管方面主要表现在强烈的缩血管效应“…，正性肌力作用““，促血管平 滑肌细胞（ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ，ＶＳＭＣ）”“、心肌细胞增殖““和胶 原合成…１等。从已有的研究可知：心肌梗死后循环血浆及心肌局部组织均有 ＥＴ一１含量升高和ｍＲＮＡ的表达增多。但升高和增多随病情的进展具有明显的部 位差异性。例如Ｔｏｎｎｅｓｓｅｎ等“础发现；经冠状动脉结扎致心肌梗死模型的大 鼠，心肌梗塞区ＥＴ一１ ｍＲＮＡ的表达明显升高，是非梗死区表达量的３倍。而６ 周后血浆中ＥＴ－Ｉ的含量才明显升高。Ｔｏｎｎｅｓｓｅｎ等“６１的另一研究发现，结扎 猪的左前降支（ＬＡＤ）造成心肌缺血后，心肌内的ＥＴ－Ｉ含量及其ｍＲＮＡ表达明显 升高，免疫组化检测及原位杂交也显示心肌细胞内ＥＴ一１含量明显增多，作者 进而推断出心肌局部升高的ＥＴ一１主要来源于心肌细胞的分泌，并认为ＥＴ—ｌ 对局部心肌的作用并非完全缩血管效应，可能存在其他细胞毒效应。上述研 究表明，具有强烈缩血管效应的ＥＴ－Ｉ主要通过旁分泌和自分泌对局部组织产 生生物学效应。如今通过抑制ＥＴ一１的表达和活性以改善或逆转心肌缺血及重 构已成为研究的热点之一。Ｗａｔａｎａｂｅ等“７１在大鼠冠状动脉结扎前５分钟或再 灌注前５分钟静脉注射ＥＴ一１／ＥＴ一２的单克隆抗体后发现左室梗死面积比对照 组减轻３８％或３１％。国内林丽等“”的研究证实，预先静脉注射ＥＴ—ｌ的ｍＲＮＡ反 义寡核苷酸（ＡＳ—ＯＤＮ）后可预防大鼠急性缺血性室性心律失常；Ｆｒａｃｃａｒｏｌｌｏ 等“踟使用ＥＴＲ。拮抗剂可抑制心梗后的胶原积聚。Ｏｉｅ等。伽使用ＥＴＲ拮抗剂和血
hHGF基因修饰的hUC-MSCs移植在急性心肌梗死模型心肌损伤修复中的作用
（ 天津医科 大学， 天津 ３ ０ ０ ０ ７ ０ ）
摘要 ： 目的
观察人肝细胞生长 因子 （ ｈ Ｈ Ｇ Ｆ ） 基 因修饰的人脐带间充质干细胞 （ ｈ Ｕ Ｃ ． Ｍ Ｓ Ｃ ｓ ） 移植在急性心肌梗死
模 型心肌损伤修复中的作 用。方法 用携 带 ｈ Ｈ Ｇ Ｆ基 因的腺 病毒基 因表达载体 以 １ ５ ０感染 强度 （ ＭＯ Ｉ ） 转染 ｈ Ｕ Ｃ — Ｍ Ｓ Ｃ ｓ ， 获得 ｈ Ｈ Ｇ Ｆ基因修饰 的 ｈ Ｕ Ｃ — ＭＳ Ｃ ｓ 。３ ０只广西巴马小型猪制作 急性心肌梗死模型 。造模成功后的 ２ ４只猪随机 分为 Ａ、 Ｂ 、 ｃ、 Ｄ组各 ６只。Ｃ组采用微量注射器将 ｈ Ｕ Ｃ － ＭＳ Ｃ ｓ 悬液经心外膜呈矩阵分布多点注入梗 死组 织 ， Ｄ组 以同 样方法注入 ｈ ＨＧ Ｆ基 因修饰的 ｈ Ｕ Ｃ － ＭＳ Ｃ ｓ 悬液 ， Ｂ组注入等量 Ｐ Ｂ Ｓ ， Ａ组只造模 。术后 ６ 周， 经核素心肌灌注显像法检 测 心肌灌注与心脏功能变化 ； Ｍａ ｓ ｓ ｏ ｎ三色法检测存活心肌 ， 免疫组化法检测新生血管光密度 。结果 Ａ、 Ｂ、 ｃ、 Ｄ组灌 注质量缺损百分率差值 （ Ａ ＭＤ Ｐ ） 分别为 ４ ． ３ ３ ％ ±１ ． ８ ６ ％、 ３ ． ６ ７ ％ ±１ ． ２ １ ％、 一 ０ ． ８ ３ ％ ±１ ． １ ７ ％、 一 ０ ． １ ７ ％ ±１ ． ３ ３ ％， 左 室射血分数差值 （ Ａ Ｌ Ｖ Ｅ Ｆ ） 分别为 一 ９ ． １ ７ ％± ２ ． ４ ８ ％、 一 ９ ． ３ ３ ％± ２ ． ７ ３ ％、 １ ． ０ ０ ％ ±３ ． ２ ２ ％、 ０ ． ５ ０ ％ ±２ ． ２ ６ ％， Ｃ 、 Ｄ组与 Ａ、 Ｂ组 的 Ａ ＭＤ Ｐ 、 Ａ Ｌ Ｖ Ｅ Ｆ比较 ， Ｐ均 ＜ ０ ． ０ ０ １ 。Ａ、 Ｂ 、 Ｃ 、 Ｄ组 在梗死交界 区域存 活的心肌 累计 光密度 （ Ｉ Ｏ Ｄ） 值分 别为
五指山小型猪在心血管系统疾病建模中的应用
五指山小型猪在心血管系统疾病建模中的应用田玉龙;钟红珊【摘要】五指山小型猪是中国特有的、具有自主知识产权的高度近交猪种,具有遗传性稳定、体型小、体重轻、抗逆性强等特点,因组织器官结构及生理生化指标与人类相似,已越来越广泛地应用于医学研究领域.在我国,五指山小型猪被用来构建高脂血症模型、动脉粥样硬化模型、急慢性心肌缺血致急性心肌梗死模型和心力衰竭模型、心脏骤停模型、心肺复苏后心肌代谢评估等心血管疾病模型.五指山小型猪在心血管系统解剖及生物学行为与人高度相似,将会在未来心血管疾病研究中发挥日益重要的作用.【期刊名称】《介入放射学杂志》【年(卷),期】2016(025)004【总页数】4页(P363-366)【关键词】五指山小型猪;心血管系统疾病;动物模型;医学研究【作者】田玉龙;钟红珊【作者单位】110001沈阳中国医科大学附属第一医院介入放射科、辽宁省影像诊断与介入治疗重点实验室;110001沈阳中国医科大学附属第一医院介入放射科、辽宁省影像诊断与介入治疗重点实验室【正文语种】中文【中图分类】R528.1DOI：1O.3969/j.issn.1OO8-794X.2O16.04.O22单位：110001沈阳中国医科大学附属第一医院介入放射科、辽宁省影像诊断与介入治疗重点实验室【Abstract】W uzhishan miniature pig breed isunique to China，which ishighly inbred pig breed with independentintellectualpropertyrights.The pigshave somecertain characteristics，such asgenetic stability，smallsize，lightweightand strong resistance，etc.As its structures oftissues and organs as wellas its physiologicaland biochemicalindex are quite similarto those ofhuman beings，ithasbeen more and more widely used in the field ofmedicalresearch.In China，W uzhishan miniature pigshave already been used in establishing various models of cardiovascular system diseases，including hyperlipidemia model，model of atherosclerosis，acute and chronic ischemia-induced myocardialinfarction model，heartfailure model，heart arrestmodel，modelused forevaluation ofmyocardialmetabolism aftercardiopulmonary resuscitation，etc.In aspectofthe cardiovascularsystem anatomy and biologicalbehavior，W uzhishan miniature pigs are highly similar to human beings，therefore，the utilization of W uzhishan miniature pigs willplay an increasingly importantrolein thestudyofcardiovasculardiseasein thefuture.（J Intervent Radiol，2O16，25：363-366）【Key words】W uzhishan miniature pig；disease ofcardiovascular system；animal model；medical research猪在解剖学及生理学方面与人有较大的相似性，其在医学研究中的重要性日渐显著。
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猪急性心肌梗死模型的建立(一)
作者：蒋益波，冯毅，丁建东，王宇
摘要]目的：探讨应用经皮腔内冠状动脉成形术(PTCA)球囊堵闭猪冠状动脉建立急性心肌梗死动物模型的实验方法。
方法：选用苏中幼猪12只,麻醉后经股动脉置入PTCA球囊至冠状动脉左回旋支分支,堵闭血流90min，行心电图、血流动力学、心脏二维超声、TTC染色及光镜、电镜检查以判断急性心肌梗死模型是否成功建立。
结果：12只猪均完成冠状动脉左回旋支分支的封堵,部分实验动物显示心电图呈典型急性心肌梗死动态图形变化,球囊堵塞1h后超声检查出现心室局部运动异常;堵塞90min再灌注30min后处死猪，取出心肌作TTC染色及光镜、电镜检测，证明成功建立猪急性心肌梗死模型。
结论：应用PTCA球囊封堵冠状动脉可成功建立猪急性心肌梗死模型,方法简便易行，具有创伤小、死亡率低等优点。
关键词]心肌梗死；猪；动物模型
目前,国外多采用猪做心血管疾病研究的模型。
猪的心脏在解剖结构、心脏血管分布、心脏与体重比等方面和人的心脏很相似,特别是其冠状动脉系统侧支交叉分布较少以及不易建立新的侧支循环1]的特性是大鼠、兔及犬的心脏所不可比拟的。
作者在参照文献的基础上,摸索出一套简便易行的方法,成功地建立了猪心肌梗死（心梗）模型。
1资料与方法
1.1动物健康小型猪，由东南大学医学院动物中心提供，均为雄性，体重25~30kg，共12只。
1.2TTC染色剂氯化三苯基四氮唑（2，3，5Triphenyltetrazoliumchloride，TTC，Sigma公司）2g加入生理盐水200ml配制成1%的TTC。
1．3方法
1．3．1实验动物的麻醉基础麻醉：术前禁食8h，安定1mg・kg-1、氯胺酮10mg・kg-1、阿托品1mg肌肉注射。
维持麻醉：戊巴比妥钠0.1mg・kg-1・min-1耳静脉维持。
气管插管：插管型号7.0，长度28cm，插入长度26cm。
呼吸机：容量控制在12ml・kg-1，12次・min-1。
给氧浓度60%。
1．3.2心梗模型的建立动物取仰卧位，右侧腹股沟部、前胸部及四肢备皮，常规消毒后铺巾，切开皮肤、皮下组织及肌肉，分离暴露出右股动脉。
动脉穿刺后经J型0.035in（1in=0.0254m）导丝送入6F（1F=0.33mm）动脉鞘管，肝素100U・kg－1，隔1h静脉注射肝素1000U。
用0.035in导丝引导将6FJudkins造影导管送至主动脉根部，注射欧乃派克行左、右冠状动脉造影，明确分析冠状动脉分布，选择左回旋支分支为堵塞目标血管，选用指引导管6FJL （JudkinsLeft）置入左冠状动脉，将0.014in经皮腔内冠状动脉成形术（percutaneousfransluminalcoronaryangioplasty,PTCA)导丝放至左回旋支分支，造影确认后用压力泵以3~6atm（1atm=101．325kPa）扩张球囊，行缺血预适应三四次，每次球囊充盈20s，间隔3~5min，无明显异常反应后扩张球囊90min。
造影证实血流阻塞，90min后将球囊撤出，再灌注30min。
在心梗模型建立过程中，接心电监护仪，监测心电图、血流动力学的动态变化，并监测超声心动图的变化。
1．3.3心脏标本的染色及光镜检查（1）TTC染色：静脉注射10%KCl20ml将猪处死，迅速开胸取出心脏，用生理盐水将残余血液冲洗干净，垂直于心脏长轴，自心尖向心底将心脏切成4mm厚的短轴面切片，然后置于1%TTC磷酸盐缓冲液中，放入37℃恒温水浴箱20min之后在10%福尔马林中固定。
正常心肌染色呈砖红色，坏死心肌呈灰白色。
数码相机拍照。
（2）HE染色：快速、准确切取心梗区和缺血区、正常区组织（不超过1cm大小），置入10%福尔马林固定液中，固定后行组织修整、洗涤、酒精逐级脱水，二甲苯置换出组织块中的酒精，石蜡包埋，切片机切成4μm的薄片，HE染色，封片，光镜观察。
1.3.4标本的电镜检查快速、准确切取心梗区和正常心肌组织约1mm3大小，立即置于4%戊二醛固定液中固定2h，磷酸盐缓冲液漂洗3次，酒精逐级脱水，环氧丙烷浸透20min，由
包埋剂包埋样品并聚合（60℃），半簿（500nm）切片定位，超簿（50nm）切片，醋酸铀和枸橼酸铅双重电子染色，电镜观察。
1．4统计学处理应用SPSS10.0软件进行统计学处理，计量资料均以x-±s表示，采用t检验进行显著性检验，P0.05为差异有统计学意义。