普萘洛尔对血管瘤内皮细胞的抑制作用

普萘洛尔对血管瘤内皮细胞的抑制作用

[摘要]目的：探讨不同浓度普萘洛尔在不同时间段内对血管瘤内皮细胞的抑制作用。方法：收集手术切除的新鲜婴幼儿血管瘤标本，采用组织块法培养内皮细胞，免疫荧光法对培养的细胞进行鉴定；通过绘制生长曲线和流式细胞仪检测普萘洛尔(propranolol) 对

血管瘤内皮细胞增殖影响。结果：伴随普诺洛尔浓度增大(0μg/ml，20μg/ml，40μg/ml，60μg/ml，80μg/ml，100μg/ml，120μg/ml)及作用时间的增加（24h,48h,72h）对血管瘤内皮细胞的抑制作用明显增强；流式细胞仪测定不同浓度普萘洛尔作用不同时段后血管瘤内皮细胞凋亡明显。结论：普萘洛尔能抑制血管瘤内皮细胞的增殖并促进其凋亡，抑制血管瘤的生长。

[关键词]普萘洛尔；血管瘤内皮细胞；凋亡

effects of propranolol on proliferation of hemangioma endothelial cells from infantile

yang yong-qin,sun mo-yi,li jian-hu,liang liang,shen

zhi-yuan

(department of oral and maxillofacial surgery,school of stomatology,the fourth militiary medical university,xi＇an 710032,shanxi,china)

abstract: objective to investigate the effects of propranolol on proliferation of hemangioma endothelial cells from infantile. methods in this study,we treated the

vascular endothelial cells of hemangioma in 96-well plates with different dose(0μg/ml to 120μg/ml)of propranolol.the survival and proliferatoin of the vascular endothelial cells of hemangioma were evaluated by the

3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetra-zoloum(mtt) assay and crystal violet assay. the effects of propranolol on the vascular endothelial cells of hemangioma were observed by cell growth curves and flow cytometry. results with the augmentation of the concentration of propranolol (0μg/ml,20μg/ml, 40μg/ml, 60μg/ml, 80μg/ml, 100μg/ml, 120μ

g/ml)and the lengthening of action time

（24h,48h,72h）,proliferation of hemangioma endothelial cells are inhibiting apparently.annexinv-pi assay were aslo performed.propranolol could inhibit the growth of vascular endothelial cells of hemangioma and advancing apoptosis. conclusion propranolol is able to inhibit the proliferation of the hemangioma endothelial cells , and to advance apoptosis of vascular endothelial cells,resulting in inhibition of hemangioma.

key words:propranolol; hemangioma endothelial cells；apoptosis

针对血管瘤，目前临床常用的药物主要有糖皮质激素、干扰素α、

环磷酰胺、长春新碱等，然而，这些药物均有其不同程度的不良反应，因此在临床使用中受到不同程度的限制。自2008年，法国bordeaux儿童医院léauté-labrèze等医生在美国《新英格兰医学杂志》报道了他们应用普萘洛尔（propranolol）治疗婴儿血管瘤的重大发现。报道用β受体阻断剂-普萘洛尔（propranolol）成功治疗小儿血管瘤患者后，因普萘洛尔耐受性良好，相比类固醇有较少的副作用，或将成为药物治疗血管瘤的新选择。本实验采用组织块法培养出血管瘤内皮细胞，并将不同浓度普萘洛尔添加到传代后的血管瘤内皮细胞培养基中进行培养。探讨普萘洛尔是否对血管瘤内皮细胞有抑制作用，进而证明其对血管瘤是否有治疗作用。

1 材料和方法

1.1 标本来源：第四军医大学口腔医院手术切除的血管瘤标本。

1.2 主要试剂和仪器：dmem/f-12培养基培养基（hyclone）、胰蛋白酶（amresco）、青霉素+链霉素、胎牛血清(胎牛血清)，d’hanks （武汉谷歌生物），鼠抗人ⅷ因子、mtt （北京索莱宝）、dmso（北京索莱宝）、annexin v-fitc细胞凋亡检测试剂盒（凯基生物），96孔培养板（corning）、co2恒温培养箱（sanyo）、fac-scalibur型流式细胞仪(becton dickinson公司)、计算机数据处理软件(bd公司cellquest软件)。

1.3 血管瘤内皮细胞分离和培养：①标本， 4℃无菌d～hank液试管中保存；②用d-hank液及pbs液冲洗标本至肉眼观察冲洗液颜色清亮，无浑浊及脱落组织；③去除多余的皮肤及脂肪，选择瘤