薄层色谱的操作
薄层色谱的操作
6．检测6.1定性分析（同一性试验）在相同的状态下（相同类型的TLC/HPTLC板、相同的溶剂体系组成、相同的组份点样体积和其它TLC设备系统），样品成份的Rf值、颜色、与专用的或特殊基因衍生化试剂的反应和参考物或标准物在同一TLC/HPTLC板同时层析所得的结果相符时，未知物就可认为是存在而被鉴别出来。
分析的结果可以采用照片，照片复制品，影像记录（如：CAMAG薄层色谱数码成像系统）或TLC扫描仪方法记录下来。
当混合物物质被测试时，参考标准物中单个馏份的Rf值可能会与纯物质的Rf有所不同，但测试物理学馏份和标准化馏份的hRf值必须相符，其DhRf在±3之内。
为增加测试物与参照物同一性的可信度，采用TLC扫描仪实时记录其紫外光和可见光图谱并进行比较。
多波长测定将测试物和参照物的图谱情况和hRf值相关联供进一步鉴别。
6.2定量分析（仪器：存及打印。
同心部份的TLC/HPTLC增加。
，302，313，3 66，405，436图10：a)b)TLC/HPTLC7．标准条件7．1HPTLC板10x10和20x10cmHPTLC预涂板的标准条件总结如下以便于参考。
薄层商品化生产的HPTLC板规格10x10和20x10cm板；由样品数目决定点样用毛细管移液管或Nanomat进行斑状点样或用自动点样器作条状点样数量一般，斑状点样用20nl-1ml,窄条点样用2-20ml定位起点在距板下缘10mm处溶剂数量限定采用体积量或绝对量。
一般，对10x10cm双槽展开室的一个槽加5ml,对20x10cm双槽展开室的一个槽加10ml分离距离5cm展开室对10x10或20x10cm板用双槽展开室分离模式线性（上行式或水平的）饱和（A）无滤纸放入；溶剂和TLC/HPTLC板同时加入到展开室中。
（B）无滤纸放入；至少在层析展开开始前10分钟将溶剂倒入至展开室中。
（C）放入滤纸；至少在层析展开开始前30分钟将溶剂倒入至展开室中。
薄层色谱法操作流程
薄层色谱法操作流程
薄层色谱法是一种常见的化学分析方法，其操作流程如下：
1. 样品的制备与稀释：首先需要将待测物质制备成可供操作的样品，
并根据实验要求加入适量的溶剂稀释。
2. 色谱板的准备：根据需要选择相应的色谱板，并将其装入色谱槽中。
3. 样品的上样：使用毛细管或者微量注射器，在色谱板的起点处滴加
适量的样品。
4. 色谱板的开发：将色谱槽加入一定量的移动相，观察样品的运移情
况并记录。
5. 结果的观察与记录：当样品在色谱板上达到一定的移动距离时，将
其取出并进行观察和记录。
6. 结果的计算与分析：根据实验结果进行比对和计算，从而得出有关
样品的相关数据。
7. 结果的报告：将实验结果进行归纳和总结，并编写出符合学术要求
的分析报告。
总之，薄层色谱法是一种操作简单、分析快速的分离技术，在实际应
用中有着广泛的应用。
通过正确的操作流程和合理的结果分析，可以为研究人员提供大量有关样品的信息。
薄层色谱 操作技术
试验四薄层色谱计划课时：3课时一、试验目标：1、了解薄层色谱基础原理和应用。
2、掌握薄层色谱操作技术。
二、试验原理：1、原理薄层色谱(Thin Layer Chromatography)常见TLC表示，又称薄层层析，属于固－液吸附色谱。
样品在薄层板上吸附剂（固定相）和溶剂（移动相）之间进行分离。
因为多种化合物吸附能力各不相同，在展开剂上移时，它们进行不一样程度解吸，从而达成分离目标。
2、薄层色谱用途：1）化合物定性检验。
（经过和已知标准物对比方法进行未知物判定）在条件完全一致情况，纯碎化合物在薄层色谱中展现一定移动距离，称比移值（Rf值），所以利用薄层色谱法能够判定化合物纯度或确定两种性质相同化合物是否为同一物质。
但影响比移值原因很多，如薄层厚度，吸附剂颗粒大小，酸碱性，活性等级，外界温度和展开剂纯度、组成、挥发性等。
所以，要取得重现比移值就比较困难。
为此，在测定某一试样时，最好用已知样品进行对照。
距离溶剂前沿至原点中心的点中心的距离溶质最高浓度中心至原 f R2、快速分离少许物质。
（几到几十微克，甚至0.01µg ）3、跟踪反应进程。
在进行化学反应时，常利用薄层色谱观察原料斑点逐步消失，来判定反应是否完成。
4、化合物纯度检验（只出现一个斑点，且无拖尾现象，为纯物质。
）此法尤其适适用于挥发性较小或在较高温度易发生改变而不能用气相色谱分析物质。
三 、试验装置薄层板在不一样层析缸中展开方法四、试验操作步骤：1、吸附剂选择薄层色谱吸附剂最常见是氧化铝和硅胶。
1）、硅胶：“硅胶H”—不含粘合剂；“硅胶G”—含煅石膏粘合剂；其颗粒大小通常为260目以上。
颗粒太大，展开剂移动速度快，分离效果不好；反之，颗粒太小，溶剂移动太慢，斑点不集中，效果也不理想。
化合物吸附能力和它们极性成正比，含有较大极性化合物吸附较强，所以R f值较小。
酸和碱> 醇、胺、硫醇> 酯、醛、酮> 芳香族化合物> 卤代物、醚>烯> 饱和烃本试验选择吸附剂为薄层色谱用硅胶G。
制备薄层色谱爬大板纯化操作流程
制备薄层色谱爬大板纯化操作流程
1. 样品预处理，首先，将待分离的混合物进行必要的前处理，如溶解、过滤或稀释。
确保样品的纯度和浓度适合进行薄层色谱分离。
2. 准备薄层色谱板，选择合适的薄层色谱板，通常是涂有硅胶或者其他吸附剂的玻璃、铝或塑料片。
在使用前，需要将色谱板在烘箱中预热，以去除潮湿和杂质。
3. 样品施加，将经过预处理的样品以小滴的方式施加到薄层色谱板上，通常在距离底部1-2厘米的位置处施加。
施加时要避免样品斑点过大或过浓，以免影响分离效果。
4. 色谱板干燥，施加样品后，将色谱板放置在通风处或使用风扇进行干燥，直至样品斑点完全干燥。
5. 开展色谱，将干燥后的色谱板放入预先准备好的色谱槽中，加入适当的色谱溶剂，使溶剂能够在色谱板上上升。
注意要避免溶剂直接接触样品斑点，以免扩散。
6. 观察和记录，当溶剂前行到距离色谱板顶端1-2厘米处时，取出色谱板，标记溶剂前行的高度，并迅速在色谱板上标记出各斑点的位置。
7. 爬大板，根据需要进行爬大板操作，即将需要纯化的化合物所在的区域用吸管或刮取工具刮下，放入收集瓶中。
8. 纯化收集，收集下来的化合物可进行进一步的纯化和分析，如重结晶、进一步色谱分离等。
以上就是制备薄层色谱爬大板纯化的操作流程，每一步都需要严格控制条件和注意细节，以确保分离和纯化的有效性和准确性。
薄层色谱操作
薄层色谱操作
薄层色谱是一种在实验室中广泛应用的色谱技术。
它可以用于化合物的分离和纯化。
以下是薄层色谱的操作步骤和注意事项：
操作步骤：
1. 准备样品和薄层色谱板。
将样品溶解在合适的溶剂中, 然后在薄层色谱板上刷上一条样品线。
2. 将薄层色谱板放入色谱槽中, 槽中可以加入一定的溶剂, 使其与样品线平齐。
等到溶剂逐渐向上爬升并到达一定高度时, 停止操作。
3. 取出薄层色谱板, 然后标记各化合物的RF值。
4. 如果需要, 可以使用紫外光或其他检测方法进行分析验证。
注意事项：
1. 选用合适的薄层色谱板和溶剂。
不同的化合物需要使用不同的薄层色谱板和溶剂。
选择错误的材料可能会导致不准确的结果。
2. 操作时应避免色谱板上有空气泡。
空气泡可能会对结果产生误差。
3. 薄层色谱板应在封闭的环境下储存。
开盖情况下储存的薄层色谱板
可能会受到空气中湿度和灰尘的影响, 从而影响测试结果。
4. 建议使用培养皿盖板盖住色谱槽。
这可以减少溶剂挥发, 从而提高色谱板的稳定性。
总之, 在进行薄层色谱操作时, 应严格按照操作步骤并遵守注意事项。
这将有助于获得准确和可重复的结果。
薄层色谱法实验报告
薄层色谱法实验报告引言：薄层色谱法是一种常用的分离与鉴定化合物的方法，其原理是利用液相在固相表面的吸附作用，使化合物在定量的条件下沿着薄层固定车站进行迁移，进而对化合物进行分离和检测。
本报告将介绍我们在薄层色谱法实验中的操作步骤、结果与数据分析，并讨论其中的一些问题。
实验目的：本实验的目的是通过薄层色谱法对不同色素的分离与鉴定，熟悉薄层色谱法的操作步骤，并掌握合适的溶剂系统与柱上层析试剂的选择。
实验步骤：1. 准备薄层色谱板：将薄层硅胶G薄层板切割至适当大小并用醋酸乙酯素擦拭清洁表面。
2. 样品准备：将待分析的样品溶于适当的溶剂，制备不同浓度的样品溶液。
3. 样品施加：用微量注射器或吸管均匀施加不同浓度的样品溶液到薄层板的基线位置。
4. 条带迁移：将薄层板放入已配置好的层析槽中，待溶剂前进到合适位置后，取出薄层板，标记溶剂前行距离，并立即晾干。
5. 当场观察：用目视或紫外灯下观察薄层板上的条带情况，记录颜色与Rf值。
6. 条带擦拭与染色：将薄层板放入染色槽中或用活性炭擦去条带，染色后重新观察和记录。
实验结果：我们选择了三种不同的色素作为样品，分别为甲酸红、乙酸黄和丙酸蓝。
根据实验步骤，我们成功地制备了不同浓度的样品溶液，施加并迁移了薄层板。
在观察和记录过程中，我们发现不同色素的条带迁移距离与颜色明显不同。
数据分析：我们计算了每种色素的Rf值，即色素迁移距离与溶剂前进距离的比值。
通过计算，我们得出了甲酸红、乙酸黄和丙酸蓝的Rf值分别为0.3、0.5和0.7。
根据Rf值的大小，我们可以初步判断出这三种色素的亲疏水性质，其中甲酸红最亲水，丙酸蓝最疏水。
讨论与优化：在本次实验过程中，我们还存在一些实验操作上的问题，如样品施加均匀性和溶剂前进距离的控制等。
这些问题可能会影响实验结果的准确性与可重复性。
为了改进这些问题，我们可以尝试不同的样品施加方法，如使用微量注射器或自动色谱仪，以增加样品施加的均一性。
此外，我们还可以尝试不同的固定条件和溶剂体系，以提高实验的分离效果。
薄层色谱分析技术安全操作及保养规程
薄层色谱分析技术安全操作及保养规程薄层色谱分析技术是一种常用的分离和鉴定化合物的方法，具有分离效率高、操作简便、样品消耗小等优点。
但如果不正确操作，容易出现安全事故和实验错误，因此，正确的安全操作是非常重要的。
本文将介绍薄层色谱分析技术的安全操作及保养规程。
一、安全操作规程1.实验前安全检查在进行薄层色谱实验之前，必须进行安全检查，保证实验环境和仪器设备都处于正常、安全状态。
1.检查仪器设备：检查薄层色谱仪和有关设备是否处于正常启动状态和工作状态，检查喷雾瓶、玻璃器皿等实验用具是否完整，是否存在破损和漏液等情况。
2.检查实验室环境：检查实验室的配电、配气、干燥、通风等设施是否正常运行，检查实验用品周边区域是否干净、整洁。
同时，禁止在实验室吸烟、储存易燃和易爆品等危险品。
2.实验室操作规程在实验室进行薄层色谱实验时应严格按照以下规程进行：1.穿戴防护装备：戴上耳塞、手套、防护眼镜等个人防护用具。
2.打开通风设施：在实验过程中打开实验室的通风设施，以保证实验室空气流通。
3.喷嘴瓶使用规范：使用喷嘴瓶时，禁止从喷嘴前方激射喷液，以免产生飞溅。
同时，使用喷嘴瓶时，一定要避免混淆液体或加入不当的试剂。
4.实验室禁区规定：禁止在实验室吃剩余食物、饮用饮料，禁止化学品和实验废弃物随意丢弃，应该按照规定放入相应的储存容器。
5.实验过程记录：实验操作需要逐步记录，包括重要步骤和发现的问题等。
3.处理浓硝酸等危险化学品薄层色谱实验中需要使用一些化学品，如浓硝酸、无水乙醇等，这些化学品具有一定的危险性，必须严格按照相关规定进行处理：1.贮存：浓硝酸等危险化学品应该存放在贮存柜中，并标明危险种类和联系人。
2.使用：在使用危险化学品时，首先要熟悉化学品的性质、用途、危险等级等信息。
使用时先取少量进行试验，判断化学品是否正常，再逐步递加。
3.废弃物处理：实验结束后，必须按规定将危险化学品残余物进行灭活后处理，不能随意丢弃或排放。
薄层色谱的操作方法
薄层色谱的操作方法薄层色谱（Thin-Layer Chromatography，TLC）是一种常用的色谱技术，用于分离和分析混合物中的化合物。
以下是薄层色谱的基本操作方法：1. 准备薄层色谱板：选择合适的薄层色谱板，通常是由玻璃、铝箔或塑料片涂覆一层吸附性物质（如硅胶或氧化铝）制成。
根据需要，可以选择不同类型和厚度的色谱板。
2. 准备样品和标准溶液：准备待测样品和相应的标准溶液。
将它们溶解在适当的溶剂中，以得到均匀的溶液。
通常使用无色的溶剂，如氯仿、甲醇或丙酮等。
3. 准备开发槽：选择一个适当大小的玻璃槽或容器，添加足够的色谱溶剂，使其深度约为1-2厘米。
常用的色谱溶剂包括正己烷、乙酸乙酯和甲苯等。
4. 应用样品：使用微量注射器或吸管，在色谱板的一端（通常是底端）上沿直线或点状均匀地涂抹样品溶液。
注意，样品斑点的大小和浓度应适度，以避免过度扩散和重叠。
5. 进行开发：将涂有样品的色谱板垂直放入装有色谱溶剂的开发槽中，确保样品斑点不接触溶剂。
盖上盖子，使色谱槽密封。
色谱溶剂会在色谱板上升，沿着样品斑点上的吸附物向上运移。
6. 干燥和可视化：当溶剂前进到色谱板的一端时，取出色谱板，并迅速将其放在通风处晾干。
然后，根据所需的可视化方法，使用适当的染色剂、紫外线灯或热激发等技术，对色谱板上的斑点进行可视化。
7. 测量和解释：测量每个化合物斑点的迁移距离，并计算相对迁移率（Rf 值）。
Rf 值是化合物前进距离与溶剂前进距离之比，可用于标识和解释化合物。
薄层色谱操作的关键在于控制涂样、开发溶剂、色谱板和环境的条件，以获得准确、可重复和可靠的分离和分析结果。
根据需要，可以采用不同的变体和改进技术来适应特定的分离目标和样品特性。
薄层色谱法标准操作规程(SOP)
名称：薄层色谱法标准操作规程(SOP)关键词：薄层色谱；操作目的：进行药品的鉴别，杂质检查或含量测定背景知识：选填项目原理：薄层色谱法，是将适宜的固定相涂布于玻璃板上，成一均匀薄层。
等点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别，杂质检查或含量测定的方法。
主体内容：1 仪器与材料1.1 玻板：除另有规定外，用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的规格，要求光滑，平整、洗净后的不附水珠，晾干。
1.2 固定相或载体：最常用的有硅胶G、硅胶GF、硅胶H、硅胶HF254，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。
其颗粒大小，一般要求直径为10—40µm。
薄层涂布，一般可分无粘合剂和含粘合剂两种；前者系将固定相直接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的粘合剂，一般常用10—15%煅石膏（CaSO4·2H2O在140℃烘4小时），混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液（0.5—0.7%）适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上。
也有含一定展开液或缓冲液的薄层。
1.3 涂布器：应能使固定相或载体在玻璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。
1.4 点样器：常用具支架的微量注射器或定时毛细管，应能使点样位置正确集中。
1.5 展开室：应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密盖子，除另有规定外，底部应平整光滑，应便于观察。
2 操作方法2.1 薄层板制备：除另有规定外，将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2—0.3mm），取下涂好薄层的玻璃板，置水平台上于室温下晾干，后在110℃烘30分钟。
即置有干燥剂的干燥箱中备用。
使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。
2.2 点样：除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，点样直径为2——4mm，点间距离约为1.5—2.0cm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。
薄层色谱操作规程
薄层色谱操作规程
《薄层色谱操作规程》
一、实验目的
通过薄层色谱进行化合物分离和鉴定，掌握薄层色谱操作技术，提高实验操作能力。
二、实验仪器和试剂
1. 薄层色谱仪
2. 薄层色谱板
3. 色谱柱
4. 样品溶液
5. 各种溶剂
三、实验操作步骤
1. 准备薄层色谱板，标出样品点和色谱进样位置。
2. 准备好样品溶液，进行前处理工作，如筛选、过滤等。
3. 用吸头将样品溶液均匀地吸附在薄层色谱板上的样品点上，待干燥后再进行操作。
4. 将干燥后的薄层色谱板放置在色谱槽中，加入适量的色谱溶剂，使之在薄层色谱板上上升，直至触及顶部。
5. 将色谱板拿出，标记出色带位置，用紫外灯照射和标记，记录色带的长度和颜色。
6. 根据色带的长度和颜色，与标准色谱图对照，确定其成分。
7. 根据色带的长度和颜色，计算Rf值，并与标准值对照鉴定
成分。
四、注意事项
1. 操作过程中需轻拿轻放，避免薄层色谱板受损。
2. 使用各种溶剂时，要注意其挥发性和易燃性。
3. 色带观测和鉴定时，要在相应的波长下观察，如紫外灯波长254nm。
4. 操作结束后，要对薄层色谱仪进行清洁和维护。
通过《薄层色谱操作规程》的实验操作，可以掌握薄层色谱技术的基本操作流程，提高化合物分离和鉴定的能力。
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薄层色谱的操作公司标准化编码 [QQX96QT-XQQB89Q8-NQQJ6Q8-MQM9N]薄层色谱的操作1.方法原理薄层色谱是一种微量分析的分离过程，它将样品点在以玻璃板或铝、塑料等片材为载体的多孔吸附剂薄层的固定相上,利用流动相在特定的展开室中将混合物中的组份推移到不同距离处，在色谱展开整个过程中，样品的成份受到正反不同的力的作用。
(1) 流动相利用毛细管力带着样品穿过固定相。
(2) 样品与固定相的相互作用是指组份在移行过程中由于偶极 - （诱导） - 偶极相互作用，氢键和范德华力的作用而产生不同程度的延缓、吸附、分散、离子交换和络合等分离机理。
由于样品组份与流动相和固定相之间的相互作用力程度不同，整个毛细管流动过程中分离运动都在进行。
基于这点，TLC系统（流动相和固定相）必须与样品很好地匹配。
用显色试剂处理，许多组份可在日光或紫外灯光下检视。
色谱可用肉眼或使用光密度计和照相机记录或影像系统方法来评价。
2. 薄层板手工自制板玻璃板的要求:用于制备薄层板的玻璃板要求表面光洁、平整，最好使用厚薄1~2mm的优质平板玻璃，普通窗玻璃一般不宜用于制作薄层板，玻璃板需洗净至不挂水，晾干，贮存于干燥洁净处备用。
玻璃板反复使用时，应注意经常用洗液及碱液清洗，保持玻璃板面的光洁是保证薄层板质量的最基本要求制作方法:除另有规定外，将1份吸附剂加适量的水（如1份硅胶G一般加3份水），在研钵中用研杵沿一个方向小心研磨至成均匀的有适当粘稠度的胶浆,立即倾入涂布器中,均匀地向前推进涂布在玻璃板上;或按照不同涂布器的规定操作涂布;涂布好的薄层板于室温下在水平台上晾干,再在规定的温度(一般为105℃~110℃)下烘约30分钟活化,贮于干燥器中备用。
薄层板的厚度一般为~.。
商品化供应的预制板和高效板板的尺寸20x20cm 10x20cm 20x10cm 10x10cm图1 不同的板尺寸TLC/HPTLC预制板有不同的规格供应。
常用的尺寸为20 x 20，10 x 20，20 x 10，或10 x 10 cm。
使用的规格取决于TLC或HPTLC的类别和样品的数目。
TLC/HPTLC板的预洗及活化一般来说，色谱板应用溶剂如氯仿-甲醇(8:2)，甚至用更强的洗脱溶剂的混合物进行预洗。
具体操作可通过空白色谱展开来实现。
色谱板预洗完后,应在105°C加热1小时进行干燥，再在室温下置放至少2小时（需采取保护措施以防止实验室空气中的污染物重新附着在其上面，如放置在空的干燥器中）。
3. 样品点样3．1点状点样和条带状点样每次点样前，TLC/HPTLC板应在正常光线下和紫外灯下用肉眼检查薄层的损伤情况和杂质，只有无损伤、清洁的TLC/HPTLC板方可使用。
样品可进行点状或条带状点样。
要想获得最佳的薄层分辨率，必须保证移行方向中的起点要小，常规的TLC薄层点状点样每次点至5微升，相比之下，HPTLC薄层最大点样量为1微升。
点样量较大的样品可使用自动化装置点样，喷雾成条带状是一种可以点样量大而同时又能促成最有效分离的点样方法。
在常规操作过程中，人工点样一般使用微量毛细管（1/2/3和5 l），点样时毛细管必须完全充满和完全排空，要以垂直方向小心接触TLC/HPTLC板面，不要损伤薄层，受损的薄层会导致溶剂不规律地流动而在色谱上产生失真的TLC谱带。
人工点样建议使用Nanomat。
它点样位置精确并安全，使薄层免于受损。
用适当的介质干燥Nanomat也可用作单个量的多次点样。
样品体积大于5 l，通常用如Linomat或Automatic TLC Sampler III的方法用氮气喷雾成窄条。
若（就是）要求点状样品点样，Linomat 和Automatic TLC Sampler III应将条长度设定在1至2 mm。
样品点样位置起点的最佳位置如图2和3所示。
起点下缘的最小距离b取决于溶剂量。
两个起点之间的距离c必须令平行移行的主成份不会相互触及。
点状点样时原点的直径应小于或等于3mm（高效板原点的直径应更小）,条带的长度d由点样样品体积或样品的种类和相对于板的尺寸点样的数目来决定。
到板侧边的距离a必须足够大以避免分离区失真变形（见图2和3）。
图2：斑状样品点样的一般点样位置（a = 20mm, b = 10mm, c =两起点之间的距离。
）图3：条状样品点样的一般点样位置（a = 20mm, b = 10mm, c = 两起点之间的距离，d = 条的长度）。
4.层析展开室直立式双槽展开室具有节省溶剂、便于预平衡、可控制展开箱内的湿度等优点。
水平展开室可以从薄层板的两侧向中间水平地展开，这样可使一块薄层板所承受的样品个数比常规上行展开的薄层板增加一倍。
自动展开室(AMD) 可使用五种溶剂对同一薄层进行多次展开，自动控制预饱和、展开方式、展开距离和干燥条件，分离效率比传统方式提高三倍（可在80mm之内分离40种成分），符合GLP/GMP要求。
. 溶剂使用的溶剂必须是“分析纯”或“色谱纯”，溶剂组成采用体积量比（如正丁醇 - 冰乙酸 - 水 = 4：1：1，V/V/V），或者绝对量（如18ml甲苯 + 2 ml甲醇）。
其总量应足以使TLC/HPTLC板的浸入深度约为5mm。
展开剂要求新鲜配制，不要多次反复使用,如需分层，则按要求放置分层后取需要的一相（上层或下层），备用。
在双槽展开室中，对每种类型和规格和层析板，每槽通常注入的溶剂数量如表3。
表3：板的规格板的尺寸（宽×高）溶剂量预制板20×20cm20×10cm10×10cm 25ml15ml8ml高效板20×10cm10×10cm 10ml5ml展开室状况溶剂的蒸气相在展开箱中也参与色谱展开而形成三维的层析过程，展开箱的气体空间在层析过程中起着重要的作用。
以下有四种常见的情况（A、B、C、和D）。
方法A（展开室不饱和）方法A的特点：l 不呈饱和状态l 无滤纸l 只有一个槽内有溶剂l 每个展开室只有一块TLC/HPTLC板l 薄层向里（如图4）图4：有溶剂和TLC/HPTLC板的双槽展开室方法A的操作程序：TLC/HPTLC板在倒入相应量的展开剂后立即放至展开室中，薄导层板应垂直地竖放在溶剂中，薄层向里，展开室盖上后层析立即展开。
对某些分离过程，在产品专用方法中有明确的说明时，另一槽可盛放一些调节液体（乙酸，浓氨水等）。
方法B（部分饱和，无滤纸）方法B的特点：l 不完全饱和l 无滤纸l 在两个槽内盛放溶剂l 每个展开室只有一块TLC/HPTLC板l 薄层向里（如图5）图5：有溶剂和TLC/HPTLC板的双槽展开室方法B的操作程序：将展开剂倒入至两个槽内，盖上盖子，置放15分钟后，将盖子移向一边，TLC/HPTLC板涂层向时地竖放入溶剂中，盖上展开室，让TLC/HPTLC板开始展开。
对某些分离过程，在产品专门方法中有明确的说明时，另一槽可放置调节液体（乙酸，浓氨水等）。
方法C（展开室饱和，有滤纸）方法C的特点：l 用放入滤纸使饱和（至少30分钟）l 在两个槽内盛放溶剂l 每个展开室只有一块TLC/HPTLC板l 薄层面向滤纸（如图6）l图6：有溶剂、滤纸和TLC/HPTLC板的双槽展开室方法C的程序：将展开剂倒入至两个槽内，将与展开室相同型号的滤纸（如CAMAG序号）用规定量的溶剂湿润后贴在玻璃展开室正面，盖上盖子，放置30分钟（标准时间），然后将盖子移向一边, TLC/HPTLC板薄层面向着滤纸竖放入溶剂中，盖好展开室让板进行层析。
对某些分离过程，在产品专用方法中有明确说明时，另一槽可置放调节液体（乙酸，浓氨水等）。
方法D（展开室饱和，薄层预稳定）方法D的特点：l 薄层预稳定，放置滤纸使展开室饱和l 溶剂量增加一倍l 每个展开室只有一块TLC/HPTLC板l 薄层面向滤纸(如图7)图7：有溶剂，滤纸和TLC/HPTLC板的双槽展开室方法D的程序：将展开剂倒入至一个槽内，将与展开室相同型号的滤纸（如CAMAG序号）用规定量的溶剂湿润后贴在玻璃展开室正面，另一槽空着,TLC/HPTLC板薄层面向滤纸地置放在空槽中，除非产品专用方法另有规定，15分钟（标准时间）后，稳稳地倾斜使足够量的溶剂移至有TLC/HPTLC板的槽中（图8，只有用20x20和20x10cm的展开室才能这样做；若为10x10cm的展开室，溶剂需从外部用移液管或类似器材实现转移）。
图8：倾斜的双槽展开室图9：有溶剂，滤纸和经预稳定TLC/HPTLC板的双槽展开室，层析开始参数温度薄层色谱分析一般在室温中进行。
对这过程，温度在20 - 25C算不上是临界值。
在这过程，中无短期的温度波动才是更为重要（避免抽风）。
展开室应放置在无直射阳光和不通风处。
温度波动对层析结果不利，故将展开室放在靠近窗口或热源处是欠妥的。
空气湿度空气湿度极高或极低主要影响有非极性溶剂体系的无机涂层。
相对空气湿度高于70-80%会影响薄层钝化，使Rf值增加。
样品点样后，TLC薄层可置放在适当的硫酸和水的混合物的上面不少于30分钟，调整至指定的相对湿度。
有关这方面的更多资料可从HPTLC Vario系统的操作手册中获得。
另一方面，在样品点样前，TLC/HPTLC板可在105C再活化30分钟进行干燥。
然后薄层必须用一块玻璃板保护起来，只有起点区露出以便于样品点样。
若空气太干燥，可在干燥器中将TLC/HPTLC薄层置于水的上方以达到所要求的状况。
确定合适的层析条件的有效方法（用规定的湿度，溶剂蒸汽或溶剂调整使薄层达到要求的状况）是使用HPTLC Vario体系。
控制相对湿度用的硫酸溶液下表：相对湿度所需硫酸浓度（V/V）硫酸（ml） + 水（ml）32%47%42%58%65%72%88% 1005．层析后衍生作用若层析板分离的物质肉眼看不见又不能被紫外光活化，需加试剂方能显色或发射荧光者，则需使用适当的试剂浸渍或均匀喷洒于薄层板面上，直接观察或加热显色后观察。
加热显色者须注意加热时间和温度，尤其含羧甲基纤维素钠的薄层板，加热温度过高或时间过长，容易引起板面的焦化，如用硫酸等显色剂更易造成板面的炭化而影响显色效果。
有的成分加试剂后，如挥发油成分经香草醛硫酸显色，加热温度和时间长短不同或放置时间不同均可能使斑点的显色有所改变。
有的品种可熏以试剂或试液的蒸气（如碘蒸气、氨蒸气）显色。
喷雾试剂溶液以气溶胶的形式均匀地喷洒在薄层上。
电动的TLC喷雾器用最少的试剂溶液产生几近理想的气溶胶。
浸渍使用适当的设备如色谱浸渍设备III（Chromotogram Immersion Device III）,TLC/HPTLC板浸渍具有重现的结果。
通过设定垂直方向速度（进入，抽出）和规定停留时间，浸渍条件可被精确地标准化。