高效液相色谱操作手册

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HP1100高效液相色谱使用说明书注意事项:

1使用前，应申明样品名称和特性以及使用的流动相。

2更换色谱柱应由中级仪器实验室完成。

3溶剂必须经微孔滤膜过滤，所有废弃物(溶液等)请带走自行处理。

4不得在计算机上进行与实验无关的操作。

5注意适时更换废液收集瓶，防止废液溢出。

6认真登记实验记录。

7相关论文发表后，应送一份复印件给中级仪器实验室。

北京大学化学学院中级仪器实验室

一、概述

HPLC1100系统构成如下：

1 流动相A B C D

2 真空脱气装置3、6、9、11 电缆

4 输液泵

5 自动进样器（无）7 柱温箱8 检测器（DAD）

10 数据接收处理控制系统（计算机）12 打印机13 手动进样器

1．指示灯状态

每个部件接通电源后，LED灯显示绿色；

黄色Not Ready

绿色Run

红色Error

2．四元泵系统的工作原理图

3．柱温箱的特征

●可以在低于室温10℃至80℃间恒温

●空间大，可以容纳三根30cm长的柱子

●安装柱识别可以记录进样次数

●两个单独的加热区

●可以程序升温

4．检测器

HP1100高效液相色谱仪配置的单光路二极管阵列检测器的光路如下所示：

光源发出的复合光经消除色差透镜系统聚焦后，照射到流通池上，透射光经全息凹面衍射光栅色散后，投射到一个由1024个二极管组成的二极管阵列上而被检测。此光路系统中光闸是唯一的运动部件，它有三个动作位置：（1）光闸将入射光束全部遮挡，以进行暗电流补偿；（2）将氧化钬滤光片插入光路，对衍射后的波长进行精确校正；（3）打开光闸使入射光通过样品流通池照在光栅上。

HP1100系统所有控制和操作基本在计算机上完成，熟悉软件十分重要。本系统操作是基于Windows NT的多窗口多任务操作系统，要注意窗口之间可能覆盖。

根据所选色谱柱的性能，本系统可用于分子量小于2000的各种化合物的分离分析。目前中级仪器实验室仅备有ODS反相柱（可用于弱极性化合物及弱离子型化合物的分析）。一般要求自备色谱柱。自备色谱柱应使用HP系列接口，大连化物所及天津Autoscience公司可提供，一般分析柱的价格在1600－2000元之间，HP进口柱价格在4000元人民币左右。

本系统可提供多达四元体系的各种梯度淋洗，但在选择溶剂时须十分小心。流动相选择对分离分析有着重要的影响。

二、开机

打开各部分电源，脱气装置、输液泵、柱温控制、检测器的指示灯变黄。

开启计算机，若有选项，选择开启Windows NT4.0。点START－PROGRAM－HPChemStation－Instl online，计算机开始与仪器联接，并打开各控制界面，此时，各单元指示灯变绿，在工具条的View中选择界面为Runcontrol。

在第一个小窗口中利用下拉菜单，选择显示界面为Method and Run Control；

在第二个小窗口中选择已设定的使用方法（若是旧用户则有记录），新用户先编辑实验方法，然后选工具栏中Method－Save Method As（具体见后）。

第三个小窗口中显示LC操作条件。

三、样品分析

1．溶剂的处理和设置

不干净的溶剂或在溶剂瓶中长菌的溶剂会阻塞溶剂过滤器，降低泵的性能。遵从下列建议可以提高性能，延长溶剂过滤器的寿命：

●使用无菌溶剂瓶避免溶剂长菌

●用滤膜过滤溶剂去除微生物

●每二天更换或过滤溶剂

●避免溶剂瓶直接日照

各洗脱液应分别过滤，注意有机相和水相应使用不同的滤膜。

避免使用下列对不锈钢有腐蚀性的溶剂：

●卤化物碱金属溶液和相应的酸溶剂

●高浓度的无机酸例如：硝酸和硫酸

●能够形成卤素自由基或酸的卤化物试剂及其混合物

●含有过氧化物的色谱级醚必须用氧化铝干燥剂过滤吸收氧化物

●在有机溶剂中的有机酸溶剂

●含有强络合剂的溶液

●四氯化碳和异丙醇或THF混合物

溶剂的设置：

在输液泵图标上按鼠标左键，在出现的小菜单中选Setup Pump，在Solvents栏中输入A、B、C、D溶剂名称；点溶剂瓶图标，在Solvent Bottles Filling中输入A、B、

C、D各溶剂的实际体积数。点OK确定并退出。

2．设置泵的参数

点输液泵图标，选Setup Pump，出现流速控制界面。设定流速flow rate（一般ODS

柱为1ml/min）；设定A、B、C、D各溶剂比例，其中B、C、D可设置。OK。

点输液泵图标，选pump control，点ON打开泵，OK，泵即开始工作，图标亦变为绿色。泵压一般不要超过150bar。

若要设置各种淋洗变换程序如梯度洗脱，点输液泵图标，在此界面下面的空栏中，用Append添加一栏，依次输入时间、浓度、流速。可用Cut删去某一行或多行。设定好后，点OK退出本界面。

其压力及时间程序过程在图标上的指示框里显示，

3．设定柱温

在柱子图标上按鼠标左键，选Setup Column Thermostat设置柱温，可在室温以下10度至80度稳定控制，精度达到0.1度。设定后点OK退出，再点此图标，选Control 打开恒温器。但若设定温度后直接点OK，则出现一英文对话框，询问是否打开温控，按yes钮即可。一般温度设置在30－50度之间。若不需控温，则在Setup Column Thermostat窗口中选not control。

4．检测器参数设定

注意：为了延长氘灯和钨灯的使用寿命，在开始分析前进行预平衡时（每次分析前最好用待用流动相平衡20个柱体积以上）或所有分析完成后淋洗色谱柱时，不需打开检测器，仅在分析样品前10分钟左右打开即可。因此，在检测器的control窗口中，一定不要选择At power on , turn UV/VIS lamp on。

在检测器图标中按鼠标左键，选Setup DAD Signals，出现检测器参数设定窗口，在此设定存储及检测信号：

每一谱图可选5个通道（A、B、C、D、E）检测。若需某个波长的信号，则在任一通道的小方框中打上X，然后设定检测波长及参比波长。其它参数如波长范围、时间、灯开关等，基本都不用变化，若需变化请与工作人员联系。完成后点OK退出。注：一般情况下可将参比波长OFF，（点▼即可）。为减少噪音，可选择待分析化合物吸收为零处的某一段波长为参比波长。

若想鉴定某化合物纯度，若其吸收光谱为，可选检测在λ2，参比在λ1，因为ξλ2/ξλ1一定，若为纯化合物，所测色谱峰为形。为便于观察，可再在检测器图标下选择On－Spectra，可观察到检测器中的紫外可见吸收光谱图。

常用溶剂的紫外吸收

Solvent UV Cutoff(nm)

Acetonitrile 190

Water 190

Cyclohexane 195

Hexane 200

Methanol 210

Ethanol 210

Diethyl Ether 220

Dichloromethane 220

Chloroform 240

Carbon Tetrachloride 265

Tetrahydrofuran 280(210)

Toluene 210