蒽酮硫酸法测多糖
蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量
蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量之南宫帮珍创作一. 实验原理糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色。
该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
该法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定。
二. 试剂器材蒽酮试剂：精密称取蒽酮，加80%浓H2SO4100 mL使溶解，摇匀。
当日配制使用；葡萄糖尺度液：将无水葡萄糖置于五氧化二磷干燥器中，12hr后精密称取100mg，用蒸馏水定容至100ml；其他器材：分析天平、分光光度计、容量瓶(100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器和废液缸等。
三. 操纵步调葡萄糖尺度曲线的制作取7支具塞试管，按下表数据精密配制一系列分歧浓度的葡萄糖溶液，每个浓度做2-3个重复：管号0 1 2 3 4 5 6 尺度葡萄糖溶液/mL 0 0.4 0.6 0.8蒸馏水/mL在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。
取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min。
在625nm波长下以第1管为空白，迅速测定其余各管吸光值。
以尺度葡萄糖含量(g)为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制尺度曲线。
样品的测定将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确吸取2mL置于干燥洁净试管中，在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。
取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做2-3个重复。
在625nm波长下迅速测定各管吸光值。
根据葡萄糖含量的尺度曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量。
四. 注意事项该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不单可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包含淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。
多糖含量的测定方法
多糖含量的测定方法有多种，以下列举其中几种常用的方法： 1. 酚硫酸法：将样品与酚硫酸反应生成稳定的紫色化合物，通过测定紫色化合物的吸光度来确定多糖含量。
2. 蒽酮-硫酸法：样品经热水溶解后，乙醇沉淀，除去其他可溶性糖及杂质的干扰，用热水溶解沉淀物并稀释定容。
此法操作简便，测定速度快，可用于多糖的实时快速测定和定性分析。
3. 刚果红显色法：在一定条件下，刚果红显色剂能与乙酰甘露聚糖生成有色复合物，而不与麦芽糖糊精、蔗糖和葡萄糖等发生明显的显色反应。
由此可以建立定量分析芦荟多糖含量的刚果红显色分光光度法。
此外，还有其他方法如色谱法、光谱法等也可以用于多糖含量的测定。
具体使用哪种方法需要根据实验目的、样品性质和实验条件等因素进行选择。
硫酸蒽酮法测定风柜斗草粗多糖含量
关键词 ： 风柜斗草 ； 多糖提取 ； 含 量测 定 ； 硫酸葸酮法
中图分类号 ： ０ ６ ５ ７ ． ３ １ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ ９ － ８ １ ４ ３ （ ２ ０ １ ７ ） ０ ６ － ０ ０ ５ ２ － ０ ４
Ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ９ － ８ １ ４ ３ ． ２ ０ １ ７ ． ０ ６ ． １ ２
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｐ ｏ ｌ ｙ ｓ ａ ｃ ｃ ｈ ａ ｒ ｉ ｄ ｅ ｓ ｆ ｒ ｏ ｍ Ｓ ａ ｒ ｃ ｏ ｐ ｙ ｒ ａ ｍｉ ｓ Ｎ ｅ ｐ ａ ｌ ｅ ｎ ｓ ｉ ｓ Ｗａ ｌ ｌ ｂ ｙ ｗａ ｔ ｅ ｒ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｎ ｇ —ａ ｌ ｃ ｏ ｈ ｏ ｌ ｐ ｒ ｅ ｃ ｉ ｐ ｉ ｔ ａ ｔ ｉ ｎ ｇ ． Ｔ ｈ ｅ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｏ ｐ ｔ ｉ ｍｉ ｚ ｅ ｄ ａ ｎ ｄ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｚ ｅ ｄ ｂ ｙ ｖ ｉ ｓ ｉ ｂ ｌ ｅ ｕ ｌ ｔ ｒ ａ ｖ ｉ ｏ ｌ ｅ ｔ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｐ ｈ ｏ ｔ ｏ ｍｅ ｔ ｒ ｙ， Ｔ ｏ ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ａ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｆ ｏ ｒ ｔ ｈ ｅ ｄ ｅ — ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｔ ｐ ｏ ｌ ｙ ｓ ａ ｃ ｃ ｈ ａ ｒ ｉ ｄ ｅ ｉ ｎ ｓ ａ ｒ ｃ ｏ ｐ ｙ ｒ ａ ｍｉ ｓ ｎ ｅ ｐ ａ ｌ ｅ ｎ ｓ ｉ ｓ ｗａ ｌｌ ｂ ｙ ａ ｎ ｔ ｈ ｒ ｏ ｎ ｅ — ｓ ｕ ｌ ｆ ｕ ｉ ｒ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ． Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｓ ｈ ｏ ｗｅ ｄ ｔ ｈ ａ ｔ
蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量
蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量
操作步骤
葡萄糖标准曲线的制作
取6支具塞试管，按下表数据精密配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液，每个浓度做2个重复：
管号0 1 2 3 4 5
标准葡萄糖溶液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
蒸馏水/mL 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0
在每支试管中立即加入蒽酮试剂4mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热10min。
取出，迅速浸于冰水浴中冷却10min。
在652nm波长下以第1管为空白，迅速测定其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量( g)为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。
样品的测定
将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确吸取2mL置于干燥洁净试管中，在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。
取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做2-3个重复。
在652nm波长下迅速测定各管吸光值。
根据葡萄糖含量的标准曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量。
Cri-J。
蒽酮——硫酸比色法测定枇杷叶中可溶性多糖的含量
蒽酮——硫酸比色法测定枇杷叶中可溶性多糖的含量摘要：目的：建立枇杷叶中可溶性多糖的含量测定方法。
方法：采用蒽酮—硫酸比色法。
结果：显示624nm处有最大吸收峰，线性关系较好(r=0.9999)，平均回收率为99.58%(n=5，RSD=2.85%)，枇杷叶可溶性多糖的含量为8%以上。
结论：该方法快速准确、重现性好，可为枇杷叶中水溶液多糖的检测提供参考方法。
关键词：枇杷叶多糖；蒽酮—硫酸比色法；含量测定枇杷叶为蔷薇科(Rosaceae)植物枇杷(Eriobotrya japonica Thunb Lindl)的干燥叶，在我国已有2200多年的栽培历史。
目前已报道枇杷叶中熊果酸和齐墩果酸的含量测定方法，但是采用蒽酮比色法测定枇杷叶中水溶性多糖含量方法的研究报道较少[1]。
本试验探讨了枇杷叶中水溶性多糖的含量测定方法，旨在为今后产业化利用枇杷资源的含量检测提供参考。
1 材料试验用枇杷叶采自成都中医药大学峨嵋学院植物种植园，由王书林教授鉴定为蔷薇科(Rosaceae)植物枇杷(Eriobotrya japonica Thunb Lindl)的干燥叶。
1.1 试药无水葡萄糖(AR)、枇杷叶、蒽酮(AR)、硫酸(AR)、无水乙醇。
1.2 主要仪器设备UV2450紫外-可见分光光度计、R-201旋转蒸发仪、101-2A电热恒温鼓风干燥箱、W201C数控恒温水浴锅、SHB-Ⅲ循环水真空泵、2G 10-2.4A离心机。
2 方法2.1 样品溶液的制备将枇杷叶洗涤后于60℃干燥，粉碎备用。
精密称取约10g，加水150mL，在80℃回流提取3h[1]，趁热过滤，重复提取一次，合并上述滤液，离心，上清液减压浓缩至约25mL，精密吸取浓缩液10mL，加乙醇调含醇量至含乙醇量为85%，密闭置4℃冰箱中静置过夜。
回收乙醇，沉淀用水适量超声溶解，摇匀定容至50mL，精密吸取上述定容液0.5mL用水定容至100mL作为待测液。
2.2 标准液的配制精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖100.00mg，加蒸馏水100mL，配置成浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液备用。
硫酸蒽酮法测定多糖含量的10条注意事项
硫酸蒽酮法测定多糖含量的10条注意事项：
1. 蒽酮不稳定，需要避光操作，保存也需避光保存。
2. 80%硫酸通常指体积分数。
3. 在配制80%硫酸的过程中，必须将硫酸缓慢沿容器壁加入到水中，并用比玻璃棒不断搅拌。
4. 蒽酮不是很好溶解，仔细观察硫酸蒽酮溶液是否澄清，如果没有，可以超声或加热使其溶解，溶解后为淡黄色澄清溶液。
5. 水浴温度为100℃，需要拿温度计量。
6. 冰浴最好量温度，每次保持一致。
7. 硫酸蒽酮不要加入过慢，否则会形成沉淀，以内局部硫酸被稀释，蒽酮会析出，呈乳白色。
加入后应及时涡旋或者其他方式混匀。
8. 冰浴不要太着急，让试管先适应一下温度的变化，否则可能会裂开，水会进入到试管中。
9. 试管要具塞，否则硫酸可能吸收空气中的水，而且便于混匀。
10. 糖的浓度设定要合适，使吸光度值落在0.2-0.8之间。
*有问题可联系我，一起探讨科学实验。
动物多糖--总糖的测定
1.硫酸蒽酮法（1）样品处理：称取0.1g样品（动物），以E/S比为1/25的比例，加入0.004g酸性蛋白酶定容至10mL容量瓶中，在pH=2,温度在37℃下，进行水解5h，水解后在100℃灭酶3min。
将经酶处理过的样品用5mL注射器经0.45um针孔滤膜过滤，收集滤液，并取1mL 滤液定容至50mL容量瓶中待用。
（2）紫外分光检测：准确称取0.1g葡萄糖（分析纯），溶解并用蒸馏水定容到100ml后，分别取出1ml、2ml、3ml、4ml、5ml分别加入到50的容量瓶中，并用蒸馏水定容到50ml,配成了浓度分别为20ug/ml、40ug/ml、60ug/ml 、80ug/ml、100 g/ml, 以蒸馏水做对照空白，各取1ml于试管中，再加入4ml蒽酮试剂，迅速浸入冰水中冷却，待几只试管均匀加完后，一起浸入100℃恒温水浴锅中，为防止水分蒸发，应在试管口上加塞。
自温度重新升至100℃起计时，准确保温10min后取出，用流动水冷却。
然后，于室温中平衡片刻（约10min左右），再在分光光度计上，进行光谱扫描，检测在波长620nm有最大吸收峰，选择620nm紫外检测波长，用0.5cm厚度的比色杯进行比色。
其标准曲线制作如表1.1 所示：表1.1 葡萄糖标准曲线结果标样号浓度（ug/ml）吸光度(ABS)1 20.000 0.067282 40.000 0.257233 60.000 0.438604 80.000 0.589235 100.000 0.74802多糖含量（%）=（样品浓度×稀释倍数×样品体积）/式样称重量×100%。
2．苯酚-硫酸法（1）标准曲线的制备: 准确称量干燥至恒重的葡萄糖标准品0.020g,置于体积500mL的容量瓶中定容并摇匀,得到葡萄糖的标准溶液。
以2.0mL蒸馏水作为空白样,依次取0.4mL, 0.6mL, 0.8mL, l.0mL, 1.2mL,1.4mL, 1.6mL,1.8mL 葡萄糖标准溶液,用蒸馏水补足至2.0mL,在每个样品中按顺序加入浓度为6%的苯酚溶液l.0mL,98%的浓硫酸5.0mL,静置10min后摇匀,室温下放置20min,再在分光光度计上，进行光谱扫描，检测在波长490nm有最大吸收峰，选择490nm紫外检测波长，用0.5cm厚度的比色杯进行比色，测得吸光值。
粗多糖检测方法
粗多糖（以葡萄糖计）的测定方法
1． 主要仪器
分光光度计；水浴锅；分析天平等
2． 试剂
蒽酮：分析纯；浓硫酸：分析纯；水为去离子水或蒸馏水。
蒽酮硫酸溶液：精密称取蒽酮0.1g ，加80%的硫酸溶液100ml 使溶解，摇匀。
3． 对照品溶液的制备
取葡萄糖对照品适量，于105℃干燥至恒重，精密称定，加水制成每1ml 含0.1mg 的溶液，即得。
4． 标准曲线的制备
分别精密量取对照品溶液0.2ml 、0.4ml 、0.6ml 、0.8ml 、1.0ml 、1.2ml ，置10ml 具塞试管中，加水至2.0ml ，精密加入硫酸蒽酮溶液6ml ，摇匀，置沸水浴中加热15分钟，取出，放入冰水浴中冷却15分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在625nm 波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
5． 供试品溶液的制备
精密量取本品1ml ，置于50ml 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取该溶液2ml 至20ml 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
6． 测定法
精密量取供试品溶液2ml ，置10ml 具塞试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“精密加入硫酸蒽酮溶液6ml ”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含葡萄糖的重量（mg ），计算，即得。
7． 结果计算
1000
1001⨯⨯⨯=V V m X 式中 X ——样品中粗多糖含量（以葡萄糖计）（g/100ml ）
m ——供试品溶液中含葡萄糖的重量（mg ）
V ——样品稀释倍数
V 1——比色时所取的样品溶液体积（ml ）。
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蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量
一. 实验原理
糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色。
该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
该法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定。
二. 试剂器材
蒽酮试剂：精密称取0.1g蒽酮，加80%浓H2SO4100 mL使溶解，摇匀。
当日配制使用；葡萄糖标准液：将无水葡萄糖置于五氧化二磷干燥器中，12hr后精密称取100mg，用蒸馏水定容至100ml；
其他器材：分析天平、分光光度计、容量瓶(100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器和废液缸等。
三. 操作步骤
样品的测定
将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确吸取2mL置于干燥洁净试管中，在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。
取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做2-3个重复。
在625nm波长下迅速测定各管吸光值。
根据葡萄糖含量的标准曲线，由样品溶液吸光值计
算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量。
四. 注意事项
该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不但可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。
在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值，但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，否则会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。
不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时则可避免此种误差。