微生物学检验(第3版)2012不动杆菌与脑脊液PPT课件
合集下载
《微生物检验学》PPT课件
膜磷壁酸 壁磷壁酸 表面蛋白：SPA、M蛋白
Ｇ－菌细胞壁 特殊结构 (外膜)
磷脂
脂蛋白
类脂Ａ：毒性部分
脂多糖（LPS，内毒素）： 核心多糖：属和组特异
特异多糖：种和型特异
完整版课件ppt
22
Ｇ＋和Ｇ－菌细胞壁差异：
特征 强度 厚度
肽聚糖层数 肽聚糖含量
磷壁酸 外膜 结构
革兰氏阳性菌 较坚韧
厚，20～80nm
牛痘、巴斯德（霍乱、炭疽、狂犬疫苗）、白喉抗毒素动 物血清治愈白喉。
（３） 抗生素的发现：
目前遇到的问题：滥用导致耐药性增高
完整版课件ppt
9
3． 现代微生物学时期：近二、三十年
（1）新病原微生物的发现
a．传统病原卷土重来； b．新型病原。
（2）致病机理的深入研究
a．采用新技术； b. 各种致病因素的分子机理及调控。
完整版课件ppt
34
（二）细菌的变异现象
形态与结构变异 培养特性变异 毒力变异 耐药性变异
完整版课件ppt
35
（三）细菌变异的机制
突变
基因的转移和重组
转化（transformation）是受体菌直接摄取供体菌 游离的DNA片段，通过与染色体重组，获得了供体 菌的部分遗传特性。
转导(transduction)是噬菌体为媒介，把供细菌的基 因转移到受体菌内，导致后者基因改变的过程。
微生物的进化分类、生命活动规律及与动植 物、人类、自然相互关系。 按研究对象分：细菌、病毒、真菌学 按应用领域分：工业、农业、医学、兽医 按研究方向分：基础微生物、分子微生物学、
微生态学 等
完整版课件ppt
6
医学微生物学(medical microbiology)：与医 学有关病原微生物的生物性状、致病机理、免 疫性及有关技术和理论的应用。
不动杆菌课件
2014年中国CHINET细菌耐药性监测
菌株患者及标 本来源
• 菌株标本以呼吸道标本为主，占41.6%
50 41.6 40
30
22.4
20
13.3
9.7
10
4.7 4.8 1.2 2.2
0
1
• 79588株菌株，84.9%的菌株来自住院患者
4/2/2024 汪复等.中国感染与化疗杂志.2014；13(5):321-330.
医院环境
•床垫、床头框架 •枕头 •窗帘 •洗涤槽 •垃圾桶 •电脑键盘等
4/2/2024 Garnacho-Montero J et al. Curr Opin Infect Dis.2010;23:332–339
鲍曼不动杆菌全球流行
• 近年，多重耐药、广泛 耐药、全耐药鲍曼不动 杆菌已呈世界性流行， 成为全球抗感染领域的 挑战。
7530
33.1
2006年
12
33811
23062 68.2 10749 31.8
2007年
12
36001
23637 65.7 12364 34.3
2008年
12
36216
25184
69.5
11032
30.5
2009年
14
43670
31002 71.0 12668 29.0
2010年
14
47850
34282
常用于治疗鲍曼不动杆菌感染的抗菌药物利 福平、多粘菌素E、替加环素
4/2/2024
常用于治疗鲍曼不动杆菌感染的抗菌药物碳 青霉烯类、舒巴坦及含舒巴坦的合剂
4/2/2024
感染的治疗—常用抗菌药物
不动杆菌感染讲课PPT课件
PART FOUR
明确诊断：确定感染部位和病原菌
选用敏感药物：根据药敏试验结果选择敏感 药物
剂量和疗程：根据病情和病原菌特性确定剂 量和疗程
联合用药：必要时采用联合用药，以增强疗 效并减少耐药性
预防耐药性：避免长期、大量使用同一种抗 菌药物
监测疗效：定期监测患者病情和药物疗效， 及时调整治疗方案
抵抗力
免疫调节剂： 使用免疫调节 剂，调节机体 免疫功能，提 高对不动杆菌
的抵抗力
疫苗：研发针 对不动杆菌的 疫苗，提高机 体对不动杆菌
的抵抗力
PART FIVE
加强医护人员的培训和意识提升
加强病房和医疗器械的清洁和消毒
严格执行无菌操作和消毒隔离措施
加强患者和家属的健康教育和宣传
加强医务人员的 培训，提高防控 意识
抗菌药物选择：根 据细菌耐药性选择 合适的抗菌药物
联合用药：根据病 情严重程度和细菌 耐药性选择联合用 药
剂量和疗程：根据 细菌耐药性调整抗 菌药物的剂量和疗 程
抗菌药物轮换：根 据细菌耐药性进行 抗菌药物轮换，以 减少耐药性的产生
联合治疗：使 用多种抗生素 联合治疗，提
高疗效
免疫治疗：通 过增强机体免 疫功能，提高 对不动杆菌的
紧张和焦虑
遵守医嘱，按 时服药，积极
配合治疗
PART SIX
病例选择： 选择具有代 表性的不动 杆菌感染病 例
病例概述：简 要介绍病例的 基本情况，包 括患者年龄、 性别、职业、 发病时间、症 状等
诊断过程：详 细描述病例的 诊断过程，包 括实验室检查、 影像学检查等
治疗方案： 介绍病例的 治疗方案， 包括药物选 择、剂量、 疗程等
治疗效果：有效 控制感染，改善 症状
微生物检验相关知识PPT课件
13
血液、骨髓、脑脊液标本
❖ 然后涂片革兰染色镜检，把镜检结果及时电话 通知临床医生，并填写初检结果临床通知单。
❖ 常规培养5天，认为阴性者，报告无菌生长， 正常人的血液、骨髓是无菌的，标本中检出 细菌，都应视作病原菌 ﹝需排除污染﹞
14
血液、骨髓、脑脊液标本
脑脊液： ❖ 涂片查抗酸杆菌：脑脊液
24
尿液、粪便标本
粪便 ❖ 涂片检查：当检查霍乱弧菌以及菌群失调优势
菌时需作直接涂片检查。取新鲜标本涂片革兰 染色镜检：
①有无革兰阴性呈鱼群排列的弧菌； ②各种菌在涂片中所占相对比例、推断主 要优势菌； ③有革兰阳性芽生孢子和假菌丝即报告检 出酵母样菌。真菌也可湿片检查。
25
尿液、粪便标本
❖ 一般培养：直接挑取标本中脓血部分接种SS平 板和血平板严格按照三区划线，保证有单个菌 落的分离，置35℃培养。
（正常人的眼内，中耳及鼻窦内是无菌的。）
30
脓液标本的处理
❖ 涂片检查：脓液标本在培养的同时均须涂片， 涂片的结果一方面为临床提供最初的诊治依据， 另一方面可作为分离培养的质量指标。
❖ 涂片直接做革兰染色，镜下可观察细菌和酵母 样菌。涂片做抗酸染色镜检查抗酸杆菌。
31
脓液标本的处理
❖ 注意：对无菌部位的感染，从分泌、粪便标本
❖真菌培养：将标本接种两个TTC-沙氏平板及血 平板，置25℃-30℃和35℃孵育24-48h。真菌性 腹泻多继发于抗生素治疗后，常见有白色假丝 酵母菌。
27
眼耳鼻喉拭子
❖ 根据这些部位感染细菌的特点，须用血平板和 巧克力平板作分离培养，必要时加选麦康凯， 需分区划线。巧克力平板在CO2 环境中孵育， 利于肺炎链球菌、嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟菌的 生长。
血液、骨髓、脑脊液标本
❖ 然后涂片革兰染色镜检，把镜检结果及时电话 通知临床医生，并填写初检结果临床通知单。
❖ 常规培养5天，认为阴性者，报告无菌生长， 正常人的血液、骨髓是无菌的，标本中检出 细菌，都应视作病原菌 ﹝需排除污染﹞
14
血液、骨髓、脑脊液标本
脑脊液： ❖ 涂片查抗酸杆菌：脑脊液
24
尿液、粪便标本
粪便 ❖ 涂片检查：当检查霍乱弧菌以及菌群失调优势
菌时需作直接涂片检查。取新鲜标本涂片革兰 染色镜检：
①有无革兰阴性呈鱼群排列的弧菌； ②各种菌在涂片中所占相对比例、推断主 要优势菌； ③有革兰阳性芽生孢子和假菌丝即报告检 出酵母样菌。真菌也可湿片检查。
25
尿液、粪便标本
❖ 一般培养：直接挑取标本中脓血部分接种SS平 板和血平板严格按照三区划线，保证有单个菌 落的分离，置35℃培养。
（正常人的眼内，中耳及鼻窦内是无菌的。）
30
脓液标本的处理
❖ 涂片检查：脓液标本在培养的同时均须涂片， 涂片的结果一方面为临床提供最初的诊治依据， 另一方面可作为分离培养的质量指标。
❖ 涂片直接做革兰染色，镜下可观察细菌和酵母 样菌。涂片做抗酸染色镜检查抗酸杆菌。
31
脓液标本的处理
❖ 注意：对无菌部位的感染，从分泌、粪便标本
❖真菌培养：将标本接种两个TTC-沙氏平板及血 平板，置25℃-30℃和35℃孵育24-48h。真菌性 腹泻多继发于抗生素治疗后，常见有白色假丝 酵母菌。
27
眼耳鼻喉拭子
❖ 根据这些部位感染细菌的特点，须用血平板和 巧克力平板作分离培养，必要时加选麦康凯， 需分区划线。巧克力平板在CO2 环境中孵育， 利于肺炎链球菌、嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟菌的 生长。
脑脊液检验 ppt课件
其他
肺炎、尿毒症等出现中枢神经系统症状时，脑脊液蛋白 质含量也可增高
第十五章 脑脊液检验
ppt课件 20
二、 葡萄糖
CSF中的葡萄糖约为血液的60％。
1.参考范围
成 人 腰 椎 2.5~4.4mmol/L ； 小 脑 髓 池 2.8~4.2mmol/L；脑室2.8~4.2mmol/L。
2.临床应用:
第十五章 脑脊液检验
ppt课件 26
六、酶学检查
正常时,血清酶不能通过血脑屏障。 1. ADA ：TBM显著高于其他脑（膜）炎。
2. LD ↑：脑组织损伤、细菌感染。
3. CK ↑：脑实质破坏。
4. AST ↑：脑组织坏死、出血、脑萎缩等。 5.溶菌酶↑：细菌感染。
第十五章 脑脊液检验
ppt课件 27
第十五章 脑脊液检验
ppt课件 41
（2）建立室内质控
定期校正实验所用的仪器和设备。 选择建立适当的检测方法。 保证所用检验试剂的质量。 采用适当的质控物。
第十五章 脑脊液检验
ppt课件 42
二、临床应用
1、适应证 ①有脑膜刺激症状。 ②疑有颅内出血。 ③中枢神经系统肿瘤。 ④不明原因的剧烈头痛、昏迷、抽搐或瘫痪。 ⑤中枢神经系统疾病需管内给药治疗及手术前麻醉、造影等。
灵敏度高，标本少， 结果易观察，操作 标本可现弱阳性 简便 检测球蛋白，操作 灵敏度较弱 简便
分别检测球蛋白和 清蛋白
ppt课件
操作较繁琐
第十五章 脑脊液检验
16
２．定量法
方法 优点 缺点
比浊法
简 便 ， 快 速 ， 无 需 标 本 量 大 ， 对 两 种蛋 白 特殊仪器 沉淀能力不同
染料结合法 快 速 ， 灵 敏 度 高 ， 对实验条件的 pH 值要求 考马斯亮蓝 标本量少 较高
脑脊液标本的微生物学检验
（1）直接涂片检查 革兰染色、抗酸染色或
金胺“O”染色、墨汁染色 （2）分离培养 培养基选择、菌落性状、生
化鉴定
2020/2/6
3
中枢神经系统感染病
中枢神经系统（Central nervous system，CNS）
感染系指病原微生物侵犯CNS实质、被膜及血管等
引起的急性或慢性炎症性（或非炎症性）疾病。
畏寒、头疼、烦躁、惊厥、 特菌
喷射性呕吐、意识障碍等中 毒症状。脑膜刺激征阳性。。
B群链球菌
大肠埃希菌
2020/2/6
11
结核性脑膜炎常见临床特征 及其细菌
结核性脑膜炎起病缓慢，早 期有低热、盗汗、食欲不振、
结核分枝杆菌
恶心、便秘、易激动等症状。
1~2周后病情加剧，出现典
型的脑膜刺激征。部分患者
2020/2/6
15
中枢神经系统感染病
可传播性海绵样脑病朊病毒 疾病，是人和动物共患的一 类遗传性、传染性和散发性 的中央神经系统退行性脑病， 最终可以导致患者死亡，它 能在人和动物中进行传染
克-雅病潜伏期长，最初临 床症状表现在精神和感觉方 面，继而出现共济失调，进 一步发展为肌肉痉挛并伴有 痴呆，最终导致死亡。发病 年龄多在50岁以上。
2020/2/6
6
中枢神经系统感染病 常见病原微生物
2020/2/6
7
中枢神经系统感染 的一般临床特征
中枢神经系统感染除可出现与其他急性 感染相似症状如：发热、不适、食欲不 振、恶心、乏力外，还可出现头疼、喷 射性呕吐及颈强直症状脑膜刺激征。
2020/2/6
8
中枢神经系统感染 的一般临床特征
中枢神经系统感染病
金胺“O”染色、墨汁染色 （2）分离培养 培养基选择、菌落性状、生
化鉴定
2020/2/6
3
中枢神经系统感染病
中枢神经系统（Central nervous system，CNS）
感染系指病原微生物侵犯CNS实质、被膜及血管等
引起的急性或慢性炎症性（或非炎症性）疾病。
畏寒、头疼、烦躁、惊厥、 特菌
喷射性呕吐、意识障碍等中 毒症状。脑膜刺激征阳性。。
B群链球菌
大肠埃希菌
2020/2/6
11
结核性脑膜炎常见临床特征 及其细菌
结核性脑膜炎起病缓慢，早 期有低热、盗汗、食欲不振、
结核分枝杆菌
恶心、便秘、易激动等症状。
1~2周后病情加剧，出现典
型的脑膜刺激征。部分患者
2020/2/6
15
中枢神经系统感染病
可传播性海绵样脑病朊病毒 疾病，是人和动物共患的一 类遗传性、传染性和散发性 的中央神经系统退行性脑病， 最终可以导致患者死亡，它 能在人和动物中进行传染
克-雅病潜伏期长，最初临 床症状表现在精神和感觉方 面，继而出现共济失调，进 一步发展为肌肉痉挛并伴有 痴呆，最终导致死亡。发病 年龄多在50岁以上。
2020/2/6
6
中枢神经系统感染病 常见病原微生物
2020/2/6
7
中枢神经系统感染 的一般临床特征
中枢神经系统感染除可出现与其他急性 感染相似症状如：发热、不适、食欲不 振、恶心、乏力外，还可出现头疼、喷 射性呕吐及颈强直症状脑膜刺激征。
2020/2/6
8
中枢神经系统感染 的一般临床特征
中枢神经系统感染病
医学微生物学PPT课件
四体
3 恙虫病立克次体：
（1）传染源：携带病原体野鼠，家鼠 （2）传播媒介：恙螨 （3）所致疾病：恙虫病 （4）传播途径：
恙螨幼虫叮咬
带菌鼠
人体
局部红色丘疹
全身淋巴结肿大，肺，肝，水疱，中央溃疡，形成黑
脾，脑损害
色焦痂
2024/3/4
43
四体
四 衣原体
一类严格细胞内寄生，具有独特发育周期，并 能通过细菌滤器的原核细胞型微生物。
四体
一 螺旋体
(spirochete )
概念：螺旋细胞型微生物。基本结 构与细菌相似，例如有细胞壁、原始核质，以二分 裂方式繁殖和对抗生素等药物敏感等
主要类型：
疏螺旋体属：
回归热螺旋体 伯氏螺旋体
密螺旋体属：
梅毒螺旋体
钩端螺旋体属：
钩端螺旋体
四体
1.寄居泌尿生殖道，传播途径为性接触和母婴传播。 致病机制与侵袭性酶有关。吸附后产生磷脂酶分 解胞膜中的磷脂，脲酶分解尿素产氨，影响宿主 细胞生物合成。产生IgA蛋白酶，破坏IgA的局部 抗感染作用，有利于粘附和致病。
四体
2.引起非淋菌性尿道炎(NGU) ，上行感染，可引起 前列腺炎或附睾炎；阴道炎和宫颈炎，并可导致 流产。因为与人精子膜有共同抗原，对精子可造 成免疫损伤而致不育。
四体
(3)ELISA
检测IgM抗体对早期诊断有价值。 立克次体抗原吸附于载体。泛影葡胺梯度离心纯化
抗原为优，检出血清的抗体效价高，纸上ELISA测 定抗体，方法简便。将感染卵黄囊悬液加于玻片 (经氯仿·甲醇洗净)上，凉干、固定，加稀释血清 于抗原点上，每张玻片上包括阳性和阴性对照，加 酶标兔抗人IgM/G于抗原·血清点作用后，将浸透新 鲜配制的底物无灰滤纸覆盖在玻片上约4-6min，可 见滤纸条上阳性对照点位置显紫棕色，取下滤纸条 (即终止反应)，观察是否显色，与对照比较判定结 果。此法简便，并可保存实验记录。
脑脊液标本的微生物学检验医学PPT
并发症处理
采集后需密切观察患者有无头痛、恶心呕吐 等并发症，及时处理。
02
脑脊液微生物学检验方法
直接显微镜检查
直接显微镜检查
瑞氏染色法
通过直接观察脑脊液标本，可以初步 判断是否存在细菌、真菌或寄生虫等 微生物。
瑞氏染色法可以用于检查脑脊液中是 否存在真菌或寄生虫，如隐球菌、囊 尾蚴等。
革兰染色法
05
脑脊液微生物学检验的局限 性
检验方法的局限性
培养方法的限制
脑脊液微生物学检验主要依赖于培养方法，但有 些微生物可能难以在培养基上生长，导致漏检。
培养时间较长
培养方法需要一定时间才能得到结果，可能影响 患者的及时治疗。
培养特异性不高
培养方法对于某些相似菌种的区分能力有限，可 能出现误判。
微生物种类的局限性
诊断感染性疾病
脑脊液微生物学检验是诊断中枢神经 系统感染性疾病的重要手段，通过对 脑脊液中病原微生物的分离和鉴定， 可以确定感染的病原体类型，为临床 提供准确的诊断依据。
脑脊液微生物学检验还可以帮助判断 感染的严重程度，为制定治疗方案和 评估预后提供参考。
评估治疗效果
通过脑脊液微生物学检验，可以监测 治疗效果和评估病情变化。如果治疗 后脑脊液中病原微生物消失或数量显 著减少，说明治疗有效。
断病原菌的抗原成分。
抗体检测
抗体检测
通过检测脑脊液中免疫球蛋白的含量，可以间接判断是否存在感 染。
IgG和IgM检测
检测脑脊液中免疫球蛋白G（IgG）和免疫球蛋白M（IgM）的含 量，有助于判断感染的类型和病程。
补体结合试验
通过检测补体结合试验可以判断感染的程度和病程，为临床治疗提 供依据。
03
脑脊液标本的微生物学检验 医学
采集后需密切观察患者有无头痛、恶心呕吐 等并发症，及时处理。
02
脑脊液微生物学检验方法
直接显微镜检查
直接显微镜检查
瑞氏染色法
通过直接观察脑脊液标本，可以初步 判断是否存在细菌、真菌或寄生虫等 微生物。
瑞氏染色法可以用于检查脑脊液中是 否存在真菌或寄生虫，如隐球菌、囊 尾蚴等。
革兰染色法
05
脑脊液微生物学检验的局限 性
检验方法的局限性
培养方法的限制
脑脊液微生物学检验主要依赖于培养方法，但有 些微生物可能难以在培养基上生长，导致漏检。
培养时间较长
培养方法需要一定时间才能得到结果，可能影响 患者的及时治疗。
培养特异性不高
培养方法对于某些相似菌种的区分能力有限，可 能出现误判。
微生物种类的局限性
诊断感染性疾病
脑脊液微生物学检验是诊断中枢神经 系统感染性疾病的重要手段，通过对 脑脊液中病原微生物的分离和鉴定， 可以确定感染的病原体类型，为临床 提供准确的诊断依据。
脑脊液微生物学检验还可以帮助判断 感染的严重程度，为制定治疗方案和 评估预后提供参考。
评估治疗效果
通过脑脊液微生物学检验，可以监测 治疗效果和评估病情变化。如果治疗 后脑脊液中病原微生物消失或数量显 著减少，说明治疗有效。
断病原菌的抗原成分。
抗体检测
抗体检测
通过检测脑脊液中免疫球蛋白的含量，可以间接判断是否存在感 染。
IgG和IgM检测
检测脑脊液中免疫球蛋白G（IgG）和免疫球蛋白M（IgM）的含 量，有助于判断感染的类型和病程。
补体结合试验
通过检测补体结合试验可以判断感染的程度和病程，为临床治疗提 供依据。
03
脑脊液标本的微生物学检验 医学
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
6
器材和试剂
❖ 4、试剂：氧化酶纸片、3%过氧化氢、革 兰染色液、无菌生理盐水及生化管配套试 剂
❖ 5、其它 ：显微镜、培养箱、小试管、载 玻片、接种针、接种环、酒精灯、火柴、 非发酵菌生化编码表等。
7
标本的采集
➢ 由临床医师以无菌方法采集脑脊液1-3ml， 置于无菌试管中立即送检。
8
检验程序
➢ 3) 抗酸染色：取沉淀做小而集中的涂片，用抗酸 染色后镜检，发现有红色的抗酸杆菌，可报告“找 到抗酸杆菌”。
11
脑脊液标本检验操作流程 及报告方式
➢ 2、培养
普通培养：将脑脊液直接或经离心沉淀后，接种 在血平板和巧克力平板上，分别放置在普通培养箱 和5％-10％CO2培养箱中，35℃孵育18-24h。观察 菌落形态，涂片染色观察。
13
脑脊液标本常见的分离菌
球菌
革兰阳性细菌
金黄色葡萄球菌、化脓性 链球菌、B群链球菌、肺 炎链球菌、消化链球菌
革兰阴性细菌
脑膜炎奈瑟菌、卡他 布兰汉菌
杆菌
结核分枝杆菌、产单核李 斯特菌
流感嗜血杆菌、大肠 埃希菌、产气肠杆菌、 肺炎克雷伯菌、变形 杆菌、铜绿假单胞菌、 不动杆菌、脑膜炎败 血黄杆菌、类杆菌
脑脊液标本 离心沉淀
革蓝染色 抗酸染色 墨汁染色
血平板 巧克力平板 罗氏培养 沙保弱培养
显微镜观察 初步报告
菌落、形态、生化 血清学鉴定 药敏试验
最终报告
9
脑脊液标本检验操作流程 及报告方式
➢ 1、涂片检查：将脑脊液3000r／min离心10-15min， 取沉淀涂片。
➢ 1) 革兰染色镜检：如查见革兰阴性、凹面相对的双球菌， 分布在细胞内或外时，可报告“找到革兰阴性双球菌，位于 细胞内(外)，形似脑膜炎奈瑟菌”；如查见革兰阳性、矛头 状的双球菌，有明显的荚膜存在，可报告“找到革兰阳性双 球菌，形似肺炎链球菌”。进一步用肺炎链球菌全价血清做 荚膜肿胀试验，阳性者报告“荚膜肿胀试验检出肺炎链球 菌”。如查见其他革兰阳性、阴性细菌，则根据细菌形态和 染色性，报告“找到革兰×性×菌”。
其它 新型隐球菌、白色念珠菌 钩端螺旋体
14
注意事项
❖ 1、标本采集应在抗菌药物使用前采取。 ❖ 2、引起脑膜炎的细菌都比较娇嫩，容易
死亡或自溶，因此应立即送检并尽快处理， 最好床边接种。
流行性脑脊髓膜炎是法定传染病，从脑脊 液中分离并鉴定出脑膜炎奈瑟菌，应按规定 报告法定部门。从脑脊液中分离到的流感嗜 血杆菌以B型菌为多，能产生TEM型β-内酰胺 酶，对青霉素耐药，纸片法测定常不正确， 需单独测定β-内酰胺酶。
与不分解糖的产碱杆菌鉴别
4
目的要求
❖ 1. 掌握脑脊液标本的细菌学检验和报告方 法。
❖ 2. 掌握不动杆菌的培养特征、主要微生物 特性及鉴定方法。
5
器材和试剂
❖ 1、标本：脑脊液标本 ❖ 2、菌种：不动杆菌 ❖ 3、培养基：血平板、中国蓝平板、巧克
力平板、克氏双糖斜面培养基、半固体培 养基、非发酵菌微量生化管。
17
非发酵细菌生化鉴定编码表
1
2
3
4
O-F试验 厌氧 需氧
拘 氧橼 化酸 酶盐
麦 芽 糖
精 氨 酸 酶
精 对
甘 露 醇
木 糖
硝
酸
盐
还 原
酶
DNA
乙 酰 氨 酶
原来 颜色
淡绿
淡绿
无色 淡绿
淡绿
黄 黄 色
阳性 颜色
黄色
黄色
紫色
蓝色 黄色 红色
黄 色
黄 色
黄红灰红 色色白色
标记为红色的加石腊油
18
具体实验操作
第二天的主要操作：
❖ 1. 取出标本分离培养的血平板、巧克力平 板、中国蓝平板观察平板上的菌落形态、 颜色
19
具体实验操作
第二天的主要操作：
❖2. 观察半固体培养基
20
具体实验操作
第二天的主要操作：
❖3. 观察克式双糖培养基
21
具体实验操作
第二天的主要操作：
如果怀疑新型隐球菌感染或直接涂片发现有新 型隐球菌，则接种沙保弱琼脂或血琼脂平板分别于 25℃及35℃培养，一般2-3天长出白色或淡褐色菌落。 非致病性菌落35℃不生长。根据菌落形态、涂片染 色、荚膜和生化反应等进行鉴定。参照 “隐球菌 属”。
如为其他形态的菌落和细菌，则参照相关均属 进行鉴定。
如经3天的培养未见细菌生长，可报告“经3天 培养无细菌生长”。
15
注意事项
❖ 3、脑膜炎奈瑟菌对外界环境抵抗力差， 特别对寒冷和干燥敏感，因此要注意将标本 在25-37℃保温，不可放置冰箱冷藏或低温 保存。防止标本干燥和避免日光直接照射。
16
具体实验操作
第一天的主要操作：
❖ 一、脑脊液标本 分区画线接种到血平板、巧克力平板、中国蓝平板
❖ 二、提供的菌落 ❖ 1、进行涂片G染色观察细菌形态； ❖ 2、触酶试验、氧化酶试验； ❖ 3、接种于半固体、克式双糖培养基； ❖ 4、接种到各种非发酵菌生化鉴定培养基中； ❖ 三、放入35℃恒温培养箱进行培养
如为中等大小、半透明、灰蓝色、湿润的菌落， 革兰阴性双球菌，氧化酶和触酶均阳性，只分解葡 萄糖和麦芽糖，可报告“检出脑膜炎奈瑟菌”。就 可参照 “奈瑟菌属”的鉴定。
12
脑脊液标本检验操作流程 及报告方式
如在血平板上有草绿色溶血、扁平的小菌落生 长，革兰阳性双球菌，触酶阴性，参照 “链球菌属” 进行鉴定。
10
脑脊液标本检验操作流程 及报告方式
➢ 2) 墨汁染色：用墨汁负染，在黑暗的背景中见到 折光性很强的菌体及周围透明的宽大荚膜，有时可 见到长出的单芽，可报告“墨汁负染找到宽厚荚膜 的单芽细胞，形似新型隐球菌”。也可用O.1％甲苯 胺蓝染色法，新型隐球菌菌体呈红色，荚膜不着色， 白细胞深蓝色，红细胞不着色。
脑脊液标本的微生物检查 及不动杆菌的培养鉴定
1
不动杆菌
❖ 革兰阴性球杆菌，单个或成双排列，有时呈 丝状或链状；无芽孢、无荚膜，无鞭毛。
❖ 不动杆菌属的细菌进行革兰染色时不易脱色， 有时易染成革兰阳性，误认为是革兰阳性球 菌，应注意鉴别。
2
3
❖氧化酶: ❖ O/F：O ❖硝酸盐还原: ❖ KIA: K/K ❖ 动力：❖ 枸櫞酸盐利用: + ❖ 注意与形态相似的奈瑟菌鉴别；注意
❖4. 观察生化反应，查表鉴定
22
非发酵细菌生化鉴定编码表
1
2
3
4
O-F试验 厌氧 需氧
拘 氧橼 化酸 酶盐
麦 芽 糖
精 氨 酸 酶
精 对
甘 露 醇
木 糖
硝
酸
盐
还 原
酶
DNA
乙 酰 氨 酶
器材和试剂
❖ 4、试剂：氧化酶纸片、3%过氧化氢、革 兰染色液、无菌生理盐水及生化管配套试 剂
❖ 5、其它 ：显微镜、培养箱、小试管、载 玻片、接种针、接种环、酒精灯、火柴、 非发酵菌生化编码表等。
7
标本的采集
➢ 由临床医师以无菌方法采集脑脊液1-3ml， 置于无菌试管中立即送检。
8
检验程序
➢ 3) 抗酸染色：取沉淀做小而集中的涂片，用抗酸 染色后镜检，发现有红色的抗酸杆菌，可报告“找 到抗酸杆菌”。
11
脑脊液标本检验操作流程 及报告方式
➢ 2、培养
普通培养：将脑脊液直接或经离心沉淀后，接种 在血平板和巧克力平板上，分别放置在普通培养箱 和5％-10％CO2培养箱中，35℃孵育18-24h。观察 菌落形态，涂片染色观察。
13
脑脊液标本常见的分离菌
球菌
革兰阳性细菌
金黄色葡萄球菌、化脓性 链球菌、B群链球菌、肺 炎链球菌、消化链球菌
革兰阴性细菌
脑膜炎奈瑟菌、卡他 布兰汉菌
杆菌
结核分枝杆菌、产单核李 斯特菌
流感嗜血杆菌、大肠 埃希菌、产气肠杆菌、 肺炎克雷伯菌、变形 杆菌、铜绿假单胞菌、 不动杆菌、脑膜炎败 血黄杆菌、类杆菌
脑脊液标本 离心沉淀
革蓝染色 抗酸染色 墨汁染色
血平板 巧克力平板 罗氏培养 沙保弱培养
显微镜观察 初步报告
菌落、形态、生化 血清学鉴定 药敏试验
最终报告
9
脑脊液标本检验操作流程 及报告方式
➢ 1、涂片检查：将脑脊液3000r／min离心10-15min， 取沉淀涂片。
➢ 1) 革兰染色镜检：如查见革兰阴性、凹面相对的双球菌， 分布在细胞内或外时，可报告“找到革兰阴性双球菌，位于 细胞内(外)，形似脑膜炎奈瑟菌”；如查见革兰阳性、矛头 状的双球菌，有明显的荚膜存在，可报告“找到革兰阳性双 球菌，形似肺炎链球菌”。进一步用肺炎链球菌全价血清做 荚膜肿胀试验，阳性者报告“荚膜肿胀试验检出肺炎链球 菌”。如查见其他革兰阳性、阴性细菌，则根据细菌形态和 染色性，报告“找到革兰×性×菌”。
其它 新型隐球菌、白色念珠菌 钩端螺旋体
14
注意事项
❖ 1、标本采集应在抗菌药物使用前采取。 ❖ 2、引起脑膜炎的细菌都比较娇嫩，容易
死亡或自溶，因此应立即送检并尽快处理， 最好床边接种。
流行性脑脊髓膜炎是法定传染病，从脑脊 液中分离并鉴定出脑膜炎奈瑟菌，应按规定 报告法定部门。从脑脊液中分离到的流感嗜 血杆菌以B型菌为多，能产生TEM型β-内酰胺 酶，对青霉素耐药，纸片法测定常不正确， 需单独测定β-内酰胺酶。
与不分解糖的产碱杆菌鉴别
4
目的要求
❖ 1. 掌握脑脊液标本的细菌学检验和报告方 法。
❖ 2. 掌握不动杆菌的培养特征、主要微生物 特性及鉴定方法。
5
器材和试剂
❖ 1、标本：脑脊液标本 ❖ 2、菌种：不动杆菌 ❖ 3、培养基：血平板、中国蓝平板、巧克
力平板、克氏双糖斜面培养基、半固体培 养基、非发酵菌微量生化管。
17
非发酵细菌生化鉴定编码表
1
2
3
4
O-F试验 厌氧 需氧
拘 氧橼 化酸 酶盐
麦 芽 糖
精 氨 酸 酶
精 对
甘 露 醇
木 糖
硝
酸
盐
还 原
酶
DNA
乙 酰 氨 酶
原来 颜色
淡绿
淡绿
无色 淡绿
淡绿
黄 黄 色
阳性 颜色
黄色
黄色
紫色
蓝色 黄色 红色
黄 色
黄 色
黄红灰红 色色白色
标记为红色的加石腊油
18
具体实验操作
第二天的主要操作：
❖ 1. 取出标本分离培养的血平板、巧克力平 板、中国蓝平板观察平板上的菌落形态、 颜色
19
具体实验操作
第二天的主要操作：
❖2. 观察半固体培养基
20
具体实验操作
第二天的主要操作：
❖3. 观察克式双糖培养基
21
具体实验操作
第二天的主要操作：
如果怀疑新型隐球菌感染或直接涂片发现有新 型隐球菌，则接种沙保弱琼脂或血琼脂平板分别于 25℃及35℃培养，一般2-3天长出白色或淡褐色菌落。 非致病性菌落35℃不生长。根据菌落形态、涂片染 色、荚膜和生化反应等进行鉴定。参照 “隐球菌 属”。
如为其他形态的菌落和细菌，则参照相关均属 进行鉴定。
如经3天的培养未见细菌生长，可报告“经3天 培养无细菌生长”。
15
注意事项
❖ 3、脑膜炎奈瑟菌对外界环境抵抗力差， 特别对寒冷和干燥敏感，因此要注意将标本 在25-37℃保温，不可放置冰箱冷藏或低温 保存。防止标本干燥和避免日光直接照射。
16
具体实验操作
第一天的主要操作：
❖ 一、脑脊液标本 分区画线接种到血平板、巧克力平板、中国蓝平板
❖ 二、提供的菌落 ❖ 1、进行涂片G染色观察细菌形态； ❖ 2、触酶试验、氧化酶试验； ❖ 3、接种于半固体、克式双糖培养基； ❖ 4、接种到各种非发酵菌生化鉴定培养基中； ❖ 三、放入35℃恒温培养箱进行培养
如为中等大小、半透明、灰蓝色、湿润的菌落， 革兰阴性双球菌，氧化酶和触酶均阳性，只分解葡 萄糖和麦芽糖，可报告“检出脑膜炎奈瑟菌”。就 可参照 “奈瑟菌属”的鉴定。
12
脑脊液标本检验操作流程 及报告方式
如在血平板上有草绿色溶血、扁平的小菌落生 长，革兰阳性双球菌，触酶阴性，参照 “链球菌属” 进行鉴定。
10
脑脊液标本检验操作流程 及报告方式
➢ 2) 墨汁染色：用墨汁负染，在黑暗的背景中见到 折光性很强的菌体及周围透明的宽大荚膜，有时可 见到长出的单芽，可报告“墨汁负染找到宽厚荚膜 的单芽细胞，形似新型隐球菌”。也可用O.1％甲苯 胺蓝染色法，新型隐球菌菌体呈红色，荚膜不着色， 白细胞深蓝色，红细胞不着色。
脑脊液标本的微生物检查 及不动杆菌的培养鉴定
1
不动杆菌
❖ 革兰阴性球杆菌，单个或成双排列，有时呈 丝状或链状；无芽孢、无荚膜，无鞭毛。
❖ 不动杆菌属的细菌进行革兰染色时不易脱色， 有时易染成革兰阳性，误认为是革兰阳性球 菌，应注意鉴别。
2
3
❖氧化酶: ❖ O/F：O ❖硝酸盐还原: ❖ KIA: K/K ❖ 动力：❖ 枸櫞酸盐利用: + ❖ 注意与形态相似的奈瑟菌鉴别；注意
❖4. 观察生化反应，查表鉴定
22
非发酵细菌生化鉴定编码表
1
2
3
4
O-F试验 厌氧 需氧
拘 氧橼 化酸 酶盐
麦 芽 糖
精 氨 酸 酶
精 对
甘 露 醇
木 糖
硝
酸
盐
还 原
酶
DNA
乙 酰 氨 酶