实验十三微生物生理生化
生理性生化实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解细菌生理生化反应原理；2. 掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法；3. 了解生理生化反应在鉴别细菌中的意义。
二、实验原理通过测定微生物校内某些酶类的有无、对某些糖的利用能力、代谢产物的类型等来研究微生物的多样性。
某些细菌产生色氨酸酶，能分解培养基蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚，吲哚与对二甲基氨基苯甲醛发生反应，形成红色的玫瑰吲哚，为吲哚反应阳性。
微生物发酵葡萄糖成丙酮酸，2分子丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。
乙酰甲基甲醇在碱性条件下与肌酸类物质反应，生成红色物质，为甲基红反应阳性。
三、实验方法1. 吲哚试验：将细菌接种于含有色氨酸的培养基中，加入吲哚试剂，观察颜色变化。
2. 甲基红试验：将细菌接种于含有葡萄糖的培养基中，加入甲基红试剂，观察颜色变化。
四、实验结果1. 吲哚试验：接种了大肠杆菌的试管在加入乙醚和吲哚试剂后，能在乙醚和液体培养基的交界面上产生红色环状物质，大肠杆菌的吲哚试验显阳性。
2. 甲基红试验：大肠杆菌甲基红试验阳性，即大肠杆菌在培养期仍维持酸性pH。
五、实验分析1. 吲哚试验失败原因分析：可能是因为乙醚加量太少，影响实验现象的观察；另一个可能的原因是大肠杆菌菌种有问题。
2. 甲基红试验结果分析：大肠杆菌在培养后仍能维持酸性，而产气杆菌则转化为非酸性末端产物。
六、实验结论1. 通过本实验，我们了解了细菌生理生化反应原理；2. 掌握了细菌鉴定中常见的生理生化反应方法；3. 认识到生理生化反应在鉴别细菌中的意义。
七、实验注意事项1. 实验过程中要严格按照操作规程进行，避免污染；2. 注意观察实验现象，记录实验数据；3. 分析实验结果，找出实验失败的原因。
第2篇一、实验目的1. 了解生理性生化实验的基本原理和方法。
2. 掌握常用的生理性生化指标及其检测方法。
3. 通过实验，学会使用生理性生化检测仪器，提高实验技能。
二、实验原理生理性生化实验是研究生物体内各种生化反应及其代谢过程的重要手段。
微生物生理生化反应
微生物生理生化反应实验原理通过测定微生物细胞内某些酶类的有无、对某些底物的利用能力、代谢产物的类型等来研究微生物代谢的多样性。
某些细菌产生色氨酸酶，能分解培养基蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚，当吲哚遇到含有对二甲基氨基苯甲醛试剂，形成红色的玫瑰红吲哚，为吲哚反应阳性。
V-P反应也称乙酰甲基甲醇试验。
微生物发酵葡萄糖产生丙酮酸，2分子丙酮酸脱羧形成乙酰乳酸，继续脱羧形成乙酰甲基甲醇，后者在碱性条件下与胍类、肌酸类物质反应，形成红色化合物，为V-P反应阳性。
有些细菌发酵糖类产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，使发酵液的pH下降到4.2以下，当加入甲基红试剂后，使发酵液变红色。
某种微生物能以某种糖类为碳源，产酸产气，则判断为发酵这种糖。
实验材料和方法：材料：培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖和蔗糖）、酚红半固体培养基、牛肉膏蛋白胨固体培养基；菌种：大肠杆菌（E. coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus arueus）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、变形杆菌（Proteus vulgaris）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、丙酮丁醇梭菌（Clostridium acetobutylicum）；试剂：V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、1.6%溴甲酚紫指示剂、抗生素；仪器及用具：酒精灯、接种环、超净工作台、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅、恒温水浴锅、试管、移液管、滴管、杜氏小管、记号笔等。
实验方法：1.V-P反应取5只装有葡萄糖蛋白胨水培养基的试管，以无菌操作分别接种大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形均、枯草芽孢杆菌菌液0.1mL至上述相应试管的培养基中，空白对照不接种。
置于37℃恒温箱中培养48小时。
取出培养物，分别从中取出2.5mL培养液，再加入等量V-P试剂，充分震荡后放置在37℃培养箱中温育30min。
生理生化实验报告
微生物实验报告微生物的生理生化实验侯汶青201300140031 组别：周四下午五组同组者：李璇、李倩茜实验完成时间：2014年12月6号一、实验目的1、证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。
2、掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。
3、了解糖发酵的原理，掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
4、了解吲哚和甲基红试验的原理以及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。
5、熟习生理生化反应培养基的配制原理和一般方法步骤。
6、巩固无菌实验操作。
二、实验器材1、菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、铜绿假单胞菌（大分子水解实验）；大肠杆菌、变形杆菌（糖发酵实验）；大肠杆菌、产气杆菌（吲哚实验）；大肠杆菌、产气杆菌（甲基红实验）；2、培养基：（1）固体淀粉培养基，固体油脂培养基（淀粉和油脂的大分子水解实验）；（2）葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基试管每组共5支，而且内装有倒置的德汉氏小管（糖发酵实验）；（3）蛋白胨水培养基（吲哚实验）（4）葡萄糖蛋白胨水培养基（甲基红实验）3、溶液和试剂：卢戈氏碘液，乙醚，吲哚试剂，甲基红试剂，蒸馏水，去离子水、氢氧化钠溶液、中性红试剂、溴甲酚紫乙醇溶液等4、仪器或其他用具：成套培养皿，试管，玻璃棒、酒精灯，烧杯，德汉氏小管，接种环、吸管、滴管、洗耳球、无菌操作台、量筒、试管架等三、实验原理1、微生物的生理生化反应原理：在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢。
代谢过程主要是酶促反应过程。
许多细菌产生胞外酶，这些酶从细胞中释放出来，以催化细胞外的化学反应。
各种细菌由于具有不同的酶系统，致使它们能利用不同的底物，或虽然可以利用相同的底物，却产生不同的代谢产物，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别细菌。
微生物代谢重要特征之一，就是代谢类型的多样性，因此使得微生物在自然界的物质循环中起着重要的作用，同时也为人类开发利用微生物资源提供更多的机会与途径。
微生物鉴定中常用的生理生化试验
一、实验目的1.证明不同微生物对各种有极大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。
2.掌握微生物大分子物质水解实验的原理和方法。
3.了解糖发酵的原理和在肠细菌鉴定中重要作用。
4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
5.了解IMViC的原理。
二、实验原理由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。
具体的原理如下：1.淀粉水解试验：在淀粉固体培养基上接种两种细菌（枯草杆菌，大肠杆菌），培养两天以后，再往培养基中加碘液染色，若该细菌能分泌胞外淀粉酶，则能利用其周围的淀粉，淡然在染色后，其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈。
2.糖发酵试验：不同的细菌分解糖的能力不同，有些细菌能利用糖发酵产酸和产气，有些则不能。
酸在加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。
若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无气体。
3.IMVC实验主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌。
（1）吲哚试验：在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。
本次不做该试验。
（2）甲基红试验（MR）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者进而被分解产生甲酸，乙酸和乳酸等多种有机酸，是培养液PH值降至4.2以下，加入甲基红后溶液呈红色。
三、实验材料1.菌种大肠杆菌（Escherichia coli），金黄色葡萄球(Staphyloccocus aureus Rosenbach)，铜绿假单胞菌（P.Aeruginosa），枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis Cohn），产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)，普通变形杆菌（Proteus.vulgaris)。
细菌生化试验
实验十三细菌鉴定中常用的生理生化试验一、实验目的1、了解不同微生物对不同的生物大分子的分解利用情况，认识微生物代谢类型的多样性；2、掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法。
二、基本原理各种微生物在代谢类型上表现有很大的差异，表现在对生物大分子糖类和蛋白质分解能力，以及最终代谢产物的不同，反映出它们具有不同的酶系。
微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物，因此，微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一。
微生物生化反应的多样性一是使自然界的有机分子都有可能得到分解，二是使不同微生物之间有了相互作用和依赖的基础。
微生物对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质降解，胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大的物质为小的化合物，使其能被运输至细胞内。
三、实验器材1、菌种枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、产气肠杆菌，普通变形杆菌2、培养基固体油脂培养基、固体淀粉培养基，葡萄糖发酵培养基，乳糖发酵培养基3、溶液或试剂革兰氏染色用碘液，酚红，溴甲酚紫4、仪器及其他用具无菌平板、无菌试管、接种环、接种针、试管架四、实验方法及步骤（一）淀粉水解实验试验方法：以18-24h的纯培养物，涂布接种于淀粉琼脂斜面或平板（一个平板可分区划“+“字接种，）或直接移种于淀粉肉汤中，于36±1℃培养24-48h，或于20℃培养5天。
然后将碘试剂直接滴浸于培养表面，若为液体培养物，则加数滴碘试剂于试管中。
立即检视结果，阳性反应（淀粉被分解）为琼脂培养基呈深蓝色、菌落或培养物周围出现无色透明环、或肉汤颜色无变化。
阴性反应则无透明环或肉汤呈深蓝色。
淀粉水解系逐步进行的过程，因而试验结果与菌种产生淀粉酶的能力、培养时间，培养基含有淀粉量和pH等均有一定关系。
培养基pH必须为中性或微酸性，以pH7.2最适。
淀粉琼脂平板不宜保存于冰箱，因而以临用时制备为妥。
细菌生理生化实验
细菌生理生化试验—小木虫微生物生理生化反应就是指用化学反应来测定微生物得代谢产物,生理生化反应常用来鉴别一些在形态与其它方面不易区分得微生物。
因此微生物生理生化反应就是微生物分类鉴定中得重要依据之一,微生物鉴定中常用得生理生化反应如下所示:(一)糖、醇发酵试验原理:不同微生物分解利用糖类得能力有很大差异,或能利用或不能利用,能利用者,或产气或不产气。
可用指示剂及发酵管检验、有些细菌分解某些糖(醇、苷)产酸(符号:＋)、产气(符号:○),培养基由紫(蓝)变黄(指示剂溴甲酚紫或溴百里酚蓝由紫或蓝遇酸变黄得结果),并有气泡;有些产酸,仅培养基变黄;有些不分解糖类(符号:－),培养基仍为紫(蓝)色、培养基配制:一般细菌常用休与李夫森二氏培养基:蛋白胨:2g,Ｋ2ＨPO4 :0.2ｇ,NaCl:5g,糖(醇、糖苷):1％,水洗琼脂:5～６g,蒸馏水:1０0０mL,PＨ:6、８～７.0,溴百里酚蓝:1％水溶液３mL(先用少量得9５％乙醇溶解后,再加水配成1％水溶液)。
先调PH后再加指示剂。
芽孢杆菌培养基配制:(NH４)2ＨＰO4:１g ,ＭｇＳO4:０.2g ,KCl:0。
２ｇ,酵母膏:０.２g ,糖(醇、糖苷):1％水洗琼脂:5～6g ,蒸馏水:100０mL ,溴甲酚紫:0、４％乙醇液2mL,ＰH:６、8~7。
0。
先调PH后再加指示剂。
将以上培养基分装试管,培养基高度约为４～5cｍ,115℃灭菌20min、测定得糖(醇、糖苷)类可以包括:葡萄糖、蔗糖、甘露糖、乳糖(１、5%)、半乳糖(１.５％)、D—山梨醇、果糖、阿拉伯糖、麦芽糖、纤维二糖、木糖、水杨苷等。
注意:以上亦可用液体培养基。
接种与观察结果:用18～２4h得幼龄菌种,用穿刺针接种于培养基中,适温培养1d,３d,5d后观察,颜色变黄为阳性,不变为阴性;有气泡产生为产气。
结果记录:产酸:+,产气:○,不产酸长气:- 。
(二)淀粉水解试验原理:某些细菌可以产生分解淀粉得酶,把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。
微生物生理生化反应实验报告
微生物的生理生化反应一、实验目的1.掌握细菌鉴定中常用生理生化反应的测定方法。
2.了解细菌代谢类型的多样性。
3.了解细菌生长现象及代谢产物在鉴别中的意义。
4.学习接种技术。
二、实验原理在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢，代谢过程主要是酶促反应过程，由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌。
1.糖发酵试验：糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应,绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源,但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异.有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳酸,醋酸,丙酸等)和气体(如氢气,甲烷,二氧化碳等);有些细菌只产酸不产气.例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气。
产酸后再加入溴甲酚紫指示剂后会使溶液呈黄色，且杜氏小管中会收集到一部分气体。
若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且杜氏小管中无气体。
2.甲基红试验（MR）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者进而被分解产生甲酸，乙酸和乳酸等多种有机酸，培养基就会变酸，使加入培养基中的甲基红指示剂由橙黄色转变为红色，即甲基红反应。
大肠杆菌为阳性，产气肠杆菌为阴性。
3.伏-普试验（VP）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成非酸性或中性末端产物，某些细菌产生丙酮酸，再将丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇，在碱性条件下被氧化成二乙酰，二乙酰与胍基作用，生成红色化合物，为阳性。
4.靛基质（吲哚）试验：是用来检测吲哚的产生，在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。
但并非所有的微生物都具有分解色氨酸产生吲哚的能力，所以吲哚实验可以作为一个生物化学检测的指标。
大肠杆菌吲哚反应阳性，产气肠杆菌为阴性。
5.硫化氢实验：某些细菌分解含硫的氨基酸，产生硫化氢，硫酸铵亚铁等铁盐可与硫化氢反应生成不溶性硫化亚铁之黑色沉淀，为硫化氢实验阳性。
细菌生理生化实验报告
细菌生理生化实验报告细菌生理生化实验报告引言细菌是微生物界中最为广泛存在的一类生物，其在自然界中扮演着重要的角色。
为了更好地了解细菌的生理生化特性，我们进行了一系列的实验研究。
本报告将详细介绍实验的目的、方法、结果和讨论。
实验目的本次实验的目的是通过对细菌的生理生化特性进行观察和分析，探究其对环境的适应能力以及与人类的关系。
实验方法1. 细菌培养与分离：我们从自然环境中采集了多个样品，经过适当的稀释后，分别在琼脂平板上进行涂布，培养出各自的菌落。
2. 形态观察：通过显微镜观察细菌的形态特征，包括形状、大小、颜色等。
3. 静态培养：将细菌接种到含有特定营养物质的培养基中，观察其生长情况。
4. 生化反应：利用生化试剂对细菌进行一系列的生化反应测试，包括氧化酶试验、碳水化合物发酵试验等。
5. 抗生素敏感性测试：通过纸片扩散法，测试细菌对不同抗生素的敏感性。
实验结果1. 形态观察：我们观察到不同细菌的形态各异，有的呈球形，有的呈棒状，还有的呈螺旋形。
大小也有差异，从微小的球菌到较长的杆菌都有。
2. 静态培养：在不同培养基上，我们观察到细菌的生长情况有所差异。
有些细菌在富含葡萄糖的培养基上生长迅速，而在其他培养基上生长较慢。
3. 生化反应：细菌的生化反应也表现出多样性。
通过氧化酶试验，我们发现有些细菌能产生氧化酶，而有些则不具备这一能力。
碳水化合物发酵试验结果也显示了不同细菌的差异。
4. 抗生素敏感性测试：我们测试了多种常用抗生素对不同细菌的敏感性。
结果显示，不同细菌对抗生素的敏感性存在差异，有些细菌对某些抗生素表现出耐药性。
讨论通过本次实验，我们对细菌的生理生化特性有了一定的了解。
细菌的形态、生长特性、生化反应以及抗生素敏感性都表现出多样性。
这种多样性使得细菌能够适应不同的环境，并在自然界中发挥重要的作用。
然而，细菌也与人类密切相关。
有些细菌是人类的益生菌，可以帮助我们维持肠道健康；而有些细菌则是致病菌，会引发各种疾病。
实验13细菌的生理生化实验
牛奶分解
• 石蕊牛奶试验 • 接种普通变形杆菌和金黄色葡萄球菌于 石蕊牛奶培养基中，置于35℃培养24～ 48h后观察培养基颜色变化情况。石蕊在 酸性条件下为粉红色，碱性为紫色，而 被还原时为白色。
实验报告
• 将结果添入下表，“+”表示阳性，“-”表示阴性
菌名 枯草芽孢杆菌 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 普通变形杆菌 淀粉水解试 验 明胶液化试 验 石蕊牛奶试 验
实验十二 细菌的生理生化反应
实验目的 巩固微生物无菌接种技术； 证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力
不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统；
掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法。
微生物的生理生化反应
微生物细胞在酶的催化下进行各种各样的生理生
化反应
把微生物细胞在一定的条件下培养，通过观察生
淀粉水解实验
淀粉培养基 淀粉培养基
接种
+
+
培养24h
变色圈，水解圈 加卢哥氏碘液 I-KI
+
结果： 有水解圈—淀粉水解实验阳性，用 + 表示； 无水解圈—淀粉水解实验阴性，用 - 表示；
明胶液化实验
明胶培养基
接种
明胶培养基
培养24h
结果观察
结果观察
• 培养1，3，5。在20℃以下的室温观察生长情 况和明胶是否液化。如菌已生长，明胶表面无 凹陷且为稳定的凝块．则为明胶水解阴性。 • 如明胶凝块部分或全部在20℃以下变为可流动 的液体，则为明胶水解阳性。如菌已生长，明 胶末液化，但明胶表面菌苔下出现凹陷小窝(须 与末接种的对照管比较，因培养过久的明胶因 水分失散也会凹陷)也是轻度水解，按阳性记录 。若细菌未生长．则或是不在明胶培养基上生 长，或是基础培养基不适宜。
微生物生理生化鉴定
了解细菌生理生化反应原理以及在细 菌鉴定中的重要作用
掌握通过生理生化反应鉴别不同细菌 的基本方法
基本原理
糖发酵试验：是鉴别肠道细菌的常用生化 反应。绝大多数细菌都能利用糖类作为碳 源和能源，但是它们在分解糖的能力上有 很大的差异，例如大肠杆菌能分解乳糖和 葡萄糖产酸并产气；普通变形杆菌分解葡 萄糖产酸产气，不能分解乳糖。
甲基红试验
大肠杆菌：+ 产气杆菌： –
阳性 阴性
伏-普试验原理
产气杆菌： V.P.试验阳性 大肠杆菌： V.P.试验阴性
V.P试验
大肠杆菌：– 产气杆菌：+
阳性 阴性
IMViC 试验
柠檬酸盐试验：用来检测细菌利用柠檬酸的 能力。有些细菌能分解柠檬酸形成CO2，由 于培养基中钠离子的存在而形成碳酸钠，使 pH升高，当用溴麝香草酚蓝作为指示剂时， 培养基颜色发生变化。溴麝香草酚蓝变色范 围为，pH6.0-7.6呈绿色，pH＞7.6时呈蓝色。
糖发酵试验
大肠杆菌：产酸产气
大肠杆菌分解糖类产生多种有机酸，使培养液呈 酸性；产生的甲酸在酸性条件下可进一步裂解生 成H2和CO2
发酵产酸时，溴甲酚紫指示剂由紫色(pH6.8)变为 黄色(pH5.2)；气体的产生可由倒置的德汗氏小管 中有无气泡来证明。
乳糖发酵试验
大肠杆菌：+ 变形杆菌： –
IMViC 试验
结果观察
柠檬酸盐试验：观察培养基颜色变化，含有 溴麝香草酚蓝的斜面呈蓝色者为阳性反应， 呈绿色者为阴性反应。
H2S试验
IMViC是吲哚试验（indol test）、甲基红试验 （methyl red test）、伏-普试验（Voges-Prokauer test） 和柠檬酸盐试验（citrate test）四个试验的 缩写。这四个试验主要用来鉴别大肠杆菌与产气肠 杆菌，而且主要是用于水的细菌学检查，因为大肠 杆菌虽非致病菌，但在饮水中若大肠杆菌超过一定 数量则表示受粪便污染，而产气肠杆菌则广泛存在 于自然界中，因此，检查水时要将二者区分开来。
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基本原理
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
• 伏-普试验。某些细菌可利用葡萄糖产生丙酮 酸，丙酮酸进行缩合，脱羧变成乙酰甲基甲醇，
此物在碱性条件下能被空气中的氧气氧化成二
乙酰。二乙酰与蛋白胨中精氨酸的胍基作用， 生成红色化合物，即伏-普反应阳性，没有红 色化合物产生则为阴性。其反应过程如下：
•
产气肠杆菌伏-普反应阳性，大肠杆菌伏-
9
实验材料
• 菌种：大肠杆菌，产气肠杆菌； • 培养基：蛋白胨水培养基，葡萄糖蛋白胨
水培养基，柠檬酸盐斜面培养基 。 • 试剂：甲基红试剂，40％KOH，5％α-萘
酚，乙醚，吲哚试剂等 。
10
实验步骤
• 1.接种与培养 • 将上述二菌分别接种于2支蛋白胨水
培养基中（做吲哚试验），4支葡萄糖蛋 白胨水培养基中（做甲基红试验与伏-普 试验），2支柠檬酸盐斜面培养基中。置 37℃温室培养48 h以上。
★在培养基内或在培养完成之后加入特定的指示剂就可 确定所发生的生理生化反应类型。
★常用的试验：糖代谢试验、氨基酸和蛋白质代谢试验、 氮源和碳源的利用试验及酶的试验等。
4
基本原理
• IMViC是吲哚(indol test)、甲基红(methy1 red test)、 伏一普(Voges-Prokauer test)和柠檬酸盐(citrate test)四个 试验的缩写，I是在英文中为了发音方便而加上的。这 四个试验主要是用来快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌 (Enterobacter aerogenes)，多用于水的细菌学检查。大 肠杆菌虽非致病菌，但在饮用水中若超过一定数量， 则表示受粪便污染。产气肠杆菌也广泛存在于自然界 中，因此检查水时要将两者分开。
• 大肠杆菌吲哚反应阳性，产气肠杆菌为阴性。
6
基本原理
• 甲基红试验。某些细菌在糖代谢过程中，将培 养基中的糖先分解为丙酮酸，丙酮酸再分解为 甲酸、乙酸、乳酸等，因而使培养基变酸，用 甲基红指示剂[pH4．2（红色）-6．3（黄色）]， 可使培养基由原来的桔黄色变为红色，即甲基 红阳性反应。
• 大肠杆菌为阳性反应，产气肠杆菌为阴性反应。
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基本原理
• 吲哚试验是用来检测吲哚的产生。有些细菌能产生色 氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。 吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰吲 哚。但并非所有微生物都具有分解色氨酸产生吲哚的 能力，因此吲哚试验可以作为一个生物化学检测的指 标。 色氨酸水解反应：
• 吲哚与对二甲基氨基苯甲醛反应：
个人观点供参考，欢迎讨论！
• 将实验结果填入下表。 “ +”表示阳性反应； “-”表示阴性反应。
菌名 大肠杆菌
IMViC试验 吲哚试验 甲基红试验 伏-普试验 柠檬酸试验
产气肠杆菌
13
实验报告
• 2.思考题 （1） 为什么说进行生理生化试验必须是纯培 养？ （2） 培养物中的吲哚是怎样产生的？又是通 过什么方法来测定的？
14
实 验 十三
微生物生理生化反应 —IMViC试验
1
微生物生理生化反应（IMViC）
• 目的要求 • 基本原理 • 实验材料 • 实验步骤 • 实验报告
2
目的要求
• 了解微生物生理生化反应的类型及意义； • 掌握IMViC反应的原理及其在肠道菌鉴
定中的意义和方法。
3
基本原理
★ 微生物体内各种酶系统控制的复杂多样的生化反应完 成 ；测定微生物某些酶类的有无、对底物作用与否、 反应的条件、反应的产物及代谢方式都属于生理生化 实验内容。
培养基变红色者为阳性，变黄色者为阴性。
•
(3)伏-普试验：培养物中加入等量的VP试剂，用力振荡，再
放入37℃温箱中保温15-30 min，以加快反应速度。若培养物呈现
红色者为伏-普反应阳性。
•
(4)柠檬酸盐试验：观察柠檬酸盐培养基上有无细菌生长和是
否变色。蓝色为阳性，绿色为阴性。
12
实验报告
• 1.结果
普反应阴性。
8
基本原理
• 柠檬酸盐试验。有些细菌能利用柠檬酸钠作为 碳源，例如大肠杆菌；而另一些细菌不能利用 柠檬酸钠，例如产气肠杆菌。细菌在分解柠檬 酸盐及培养基中的磷酸铵后，产生碱性化合物， 使培养基的pH升高，在有1%溴麝香草酚蓝指 示剂的情况下，培养基由绿色变为深蓝色。溴 麝香草酚蓝的指示范围为：pH小于6．0时呈黄 色，pH在6．0-7．6时为绿色，pH大于7．6时 呈蓝色。
11
实验步骤
• 2.结果观察
•
(1)吲哚试验：培养后取出，先加入乙醚约1ml（使呈现明显
的乙醚层），充分震荡后，沿试管壁缓缓滴加吲哚试剂5-10滴，
观察有无红色环出现。注意：加入吲哚试剂后不可再动摇!有红色
环出现者为阳性，反之为阴性 。
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(2)甲基红试验：将葡萄糖蛋白胨水培养物加甲基红试剂 2滴，