DB33-T 625.3-2007 无公害豆芽 第3部分6-苄基腺嘌呤残留量和4-氯苯氧乙酸钠残留量的测定
关于豆芽生产过程中禁止使用6-苄基腺嘌呤等物质的公告（2015年第11号）
关于豆芽生产过程中禁止使用6-苄基腺嘌呤等物质的公告
（2015年第11号）
国家食品药品监督管理总局农业部国家卫生和计划生育委员会关于豆芽生产过程中禁止使用6-苄基腺嘌呤等物质的公告（2015年第11号）
根据《中华人民共和国食品安全法》、《中华人民共和国农产品质量安全法》等相关法律的规定，现就豆芽生产经营中禁止使用6-苄基腺嘌呤等物质的有关事项公告如下：
一、6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸钠、赤霉素等物质作为低毒农药登记管理并限定了使用范围，豆芽生产不在可使用范围之列，且目前豆芽生产过程中使用上述物质的安全性尚无结论。
为确保豆芽食用安全，现重申：生产者不得在豆芽生产过程中使用6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸钠、赤霉素等物质，豆芽经营者不得经营含有6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸钠、赤霉素等物质的豆芽。
二、凡在豆芽生产和经营过程中违反上述规定的，由食品药品监管、农业等相关部门依照法律法规予以处理。
特此公告。
食品药品监管总局农业部国家卫生计生委
2015年4月13日。
食品药品监管总局办公厅关于经营者经营芽苗类蔬菜中含6-苄基腺嘌呤等物质处置有关问题的复函
食品药品监管总局办公厅关于经营者经营芽苗类蔬菜中含6-苄基腺嘌呤等物质处置有关问题的复函
文章属性
•【制定机关】国家食品药品监督管理总局(已撤销)
•【公布日期】2016.03.04
•【文号】食药监办食监二函〔2016〕144号
•【施行日期】2016.03.04
•【效力等级】部门规范性文件
•【时效性】现行有效
•【主题分类】食品安全
正文
总局办公厅关于经营者经营芽苗类
蔬菜中含6-苄基腺嘌呤等物质处置有关问题的复函
食药监办食监二函〔2016〕144号福建省食品药品监督管理局：
你局《关于如何处置经营者经营芽苗类蔬菜中含6-苄基腺嘌呤等物质的请示》（闽食药监食流〔2016〕4号）收悉。
经商农业部门，现函复如下：
一、《关于豆芽生产过程中禁止使用6-苄基腺嘌呤等物质的公告》（食品药品监管总局、农业部、国家卫生计生委公告2015年第11号）（以下简称《公告》）现行有效，应当继续严格执行。
二、《绿色食品芽苗类蔬菜》（NY/T 1325-2015）为农业部发布的标准。
农业部认为，《公告》规定豆芽生产者不得在豆芽生产过程中使用6-苄基腺嘌呤，豆芽经营者不得经营含有6-苄基腺嘌呤的豆芽。
在修订《绿色食品芽苗类蔬菜》时，为落实《公告》规定，增加了绿色食品芽苗类蔬菜中6-苄基腺嘌呤的限量指标，参照《食品中6-苄基腺嘌呤的测定高效液相色谱法》（GB/T 23381—2009）
定量检出限0.02mg/kg,规定了绿色食品芽苗类产品中的6-苄基腺嘌呤限量值为0.02mg/kg，与《公告》要求一致，目的是防止非法添加。
食品药品监管总局办公厅
2016年3月4日。
部分不合格项目小知识
附件3部分不合格项目小知识一、不合格项目小知识1、二氧化硫残留量二氧化硫（以及焦亚硫酸钾、亚硫酸钠等添加剂）对食品有漂白和防腐作用，是食品加工中常用的漂白剂和防腐《食品安全国家标准食剂，使用后均产生二氧化硫的残留。
品添加剂使用标准》（GB 2760-2014）中规定，干制蔬菜中二氧化硫残留量应≤0.2g/kg,酱腌菜中二氧化硫残留量应≤0.1g/kg。
人体摄入的少量二氧化硫和亚硫酸盐会迅速以硫酸盐形式排出体外, 因此二氧化硫和亚硫酸盐的系统性毒性低。
但对二氧化硫有过敏反应的人（如哮喘病患者等），则会出现气喘、头痛或恶心等过敏症状。
因此过敏体质等人群应向食物供应者清楚说明自己的情况和需要，进食后如感到不适，应立即就医。
2、亚硝酸盐亚硝酸盐是一类无机化合物的总称，主要包括亚硝酸钠和亚硝酸钾。
亚硝酸盐作为护色剂和防腐剂，可以使肉制品呈现鲜艳的红色，也能够抑制肉毒梭菌的生长和繁殖，因此，被广泛应用于肉制品加工中。
根据《中华人民共和国卫生部国家食品药品监督管理局公告》（2012年第10号）中规定，餐饮服务单位禁止使用食品添加剂亚硝酸盐（亚硝酸钠、亚硝酸钾）。
亚硝酸盐进入血液后可将血液中的低血红蛋白氧化成高血红蛋白，且在酸性条件下（如胃液中）易与胺类物质发生反应，生成亚硝基化合物。
亚硝基化合物是最主要的化学致癌物之一，一次性食用过多或者误用亚硝酸盐均可引起急性中毒。
3、铝的残留量铝作为食品添加剂硫酸铝钾的重要成分，经常会添加在食物中作为膨松剂或稳定剂。
《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》（GB 2760-2014）中规定，油炸面制品中的铝的残留量应≤100mg/kg，粉丝、粉条中的铝的残留量应≤200mg/kg。
铝有一定的慢性毒性，经常摄入铝超标的食品，在体内可造成铝的蓄积，轻者会使食欲减退，引起贫血，重者会表现为神经毒性，使人运动失调、记忆力衰退等。
4、苯甲酸及其钠盐苯甲酸及其钠盐是食品工业中常见的一种防腐保鲜剂，对霉菌、酵母和细菌有较好的抑制作用。
北京市食品药品监督管理局关于印发《工业化豆芽生产许可证审查细则(2014版)》的通知
北京市食品药品监督管理局关于印发《工业化豆芽生产许可证审查细则(2014版)》的通知文章属性•【制定机关】北京市食品药品监督管理局•【公布日期】2014.08.27•【字号】•【施行日期】2015.01.01•【效力等级】地方规范性文件•【时效性】现行有效•【主题分类】食品安全正文北京市食品药品监督管理局关于印发《工业化豆芽生产许可证审查细则（2014版）》的通知各相关企业，各区县局，局机关各处室，各直属分局，各直属事业单位：《工业化豆芽生产许可证审查细则（2014版）》已于2014年8月18日经市局2014年第32次局长办公会议审议通过，现予印发，自2015年1月1日起正式实施，请遵照执行。
自2015年1月1日起，本市豆芽生产企业未取得食品生产许可，不得生产销售豆芽。
北京市食品药品监督管理局2014年8月27日工业化豆芽生产许可审查细则（2014版）一、发证产品范围及申证单元实施生产许可证管理的豆芽是指以筛选后的绿豆、大豆等豆类为原料，经洗豆、杀菌、浸豆、机械控温培育、机械清洗、预冷、包装等工序工业化生产的豆芽。
在生产许可证证书（正本、副本以及附页）上应注明获证产品名称、申证单元以及产品品种明细，即其他食品〔豆芽（工业化生产）〕。
生产许可证有效期为3年，其产品类别编号为：2801。
二、基本生产流程及关键控制环节（一）基本生产流程原料→筛选→洗豆→杀菌→浸豆→机械控温培育→采收→机械清洗→预冷→包装→成品（冷藏）（二）关键控制环节1.选料和清洗2.杀菌方式和时间3.机械控温培育时间、喷淋频次、温湿度控制4.生产加工中环境卫生控制5.成品的包装与贮藏条件三、必备的生产资源（一）生产环境工业化豆芽生产企业总使用面积应不少于4000平方米，其中生产车间使用面积不少于1000平方米。
豆芽生产企业选址、厂区环境、厂房和车间、设施与设备、卫生管理等整体条件应遵循GB 14881-2013《食品安全国家标准食品生产通用卫生规范》的要求。
豆芽中6-苄基腺嘌呤的研究现状
豆芽具有较高的营养价值，深受大家喜爱，因其价格低廉、爽口美味成为餐桌上最常见的蔬菜，它的质量安全对人们的身体健康有着重要影响。
随着媒体对毒豆芽事件的报道发现一些不法商贩为了提高豆芽产量、缩短生产周期，在豆芽生长过程中滥用添加剂，其中包括无根剂（主要成分为6-苄基腺嘌呤）严重影响了豆芽生产的总体安全水平，使其成为国内广受关注的食品安全问题之一。
毒豆芽是指在豆芽生产过程中非法添加对人体有害的工业原料、激素、农药、化学试剂、兽药、抗生素等，用来增加豆芽产量和改变外观，最后流入市场销售的豆芽，因添加对人体有害的物质，称为毒豆芽。
无根剂是一种广泛使用的添加于植物生长培养基的细胞分裂，主要成分为6-苄基腺嘌呤，简称6-BA，是目前国内外广泛使用的植物生长调节剂，用于诱导细胞分裂、调节细胞分化、延缓蛋白质和叶绿素的降解[1]。
1 豆芽概述1.1 豆芽简介豆类具有较高的营养价值，尤其是黄豆中含有大量的蛋白质，但吸收利用率较低，小部分人群大量食用后有时还会引起腹胀等现象。
以绿豆芽为例，有关科研数据显示：在良好生长条件下的绿豆芽，蛋白质分解为人体所需的氨基酸，其维生素C的含量可达绿豆原含量的7倍，维生素B2的含量增加2到4倍，吸收利用率提高了10%左右，引发胀气的棉子糖、鼠李糖等寡糖会被分解。
1.2 豆芽中的药物残留豆芽生产过程中滥用辅助剂的情况引起了广大消费者和国家的关注。
豆芽生产过程中添加的主要辅助剂品种较多，经多地抽样检测结果可知，残留超标的物质主要以农药为主，其次还有硫胺素和尿素等肥料以及头孢氨苄、诺氟沙星、青霉素等抗生素还有食品添加剂二亚硫酸钠。
豆芽中农药残留有很多潜在污染来源：①豆芽生产过程中农药的不规范使用是导致豆芽中产生农药残留的主要原因。
在监管力度不强、技术欠缺的情况下，一些豆芽生产商过量使用农药的情况十分普遍；②原料豆的污染。
豆子在种植过程中为了防止病虫害而使用农药，可导致原料豆中农药残留污染；③水体污染。
HPLC法测定豆芽中6-苄基腺嘌呤残留研究
HPLC法测定豆芽中6-苄基腺嘌呤残留研究李小平1,陈晓红1,姚浔平1,金米聪1,蒋经纬2(1.宁波市疾病预防控制中心,浙江宁波315010;2.宁波市卫生监督所,浙江宁波315010)李小平,陈晓红,姚浔平,等. HPLC法测定豆芽中6-苄基腺嘌呤残留研究[J].中国卫生检验杂志,2005,15(2):149-150,159 [摘要]目的：建立高效液相色谱法测定豆芽中6 -苄基腺嘌呤残留量的检测方法。
方法：豆芽样品经酸化甲醇提取，高速离心沉淀分离后,以甲醇+乙腈+0.1%醋酸(60+5+35)为流动相，采用ZORBAXSB C18柱(250 mm×4.6 mm×5μm)分离，UV267 nm检测，外标法定量。
结果：豆芽中6 -苄基腺嘌呤的线性范围在0～2.0 mg /L，回收率在81.3%～87.5%，RSD均小于6%，最低检出限为0.04 mg /kg。
结论：该方法具有快速、灵敏、简便、准确等优点，能满足实际工作的需要。
[关键词]高效液相色谱；豆芽；6 -苄基腺嘌呤Determination of 6-benzylaminopurine in bean-sprout by high performance liquid chromatography LiXiao-ping1, Chen Xiao-hong1, Yao Xun-ping1, JinMi-cong1, Jiang Jing-wei2(1.NingboMunicipalCenter for Disease Control and Prevention，Ningbo 315010，China；2.Ningbo Municipal Institute for Health Inspection and Supervision，Ningbo 315010，China)[Abstract]Objective：To establish an analytical method for determination of 6-benzylaminopurine(6 -BA)in bean–sprout by high performance liquid chromatography. Methods：Column：Zorbax SB C18column (250 mm×4.6 mm×5μm)，the mobile phase：CH3OH +CH3CN+0.1%HAC(60+5+35)，the flow rate：1.0 ml/min；the UV detector wavelength：267 nm. The bean-sprout samples were extracted by acidic CH3OH firstly and then perseverated by centrifugal precipitation. Results：The linear range was 0～2.0 mg /L and the limit of detection was 0.04 mg /kg. Extraction recoveries were between 81.3%～87.5%，RSD were less than 6%.Conclusion：Thismethod is found to be sensitive，fastand accurate.Therefore，itcan be successfully used for determination of6 -BA in bean -sprout.[Key words]Bean -sprout；6 -Benzylaminopurine；High performance liquid chromatography6-苄基腺嘌呤(6-benzylaminopurine)又称N-苄基腺苷，简科6-BA，分子式为C12H11N5，其结构式为，是一种人工合成的植物生长激素，对植物的生长、发育有着促进与调节作用，但如果人体过量摄入会刺激皮肤黏膜，并出现食道和胃黏膜损伤、恶心、呕吐等现象。
豆芽中6-苄基腺嘌呤检测
豆芽中6-苄基腺嘌呤检测--科标检测科标化工分析检测中心通过市场调查和实验结果，发现豆芽中激素添加超标现象严重，其中以6-苄基腺嘌呤尤为普遍。
6-苄基腺嘌呤（6-benzylaminopurine）简称6-BA，分子式为C12H11N5，是目前国内外广泛使用的植物生长调节剂，用于诱导细胞分裂、调节细胞分化、延缓蛋白质和叶绿素的降解，其水溶液能使豆芽粗壮且无根。
人体摄入过量的6-BA会刺激皮肤黏膜，伤害食道和胃黏膜，出现恶心、呕吐等现象。
卫生部《关于〈食品添加剂使用标准〉(GB2760-2011)有关问题的复函》，国家质检总局决定从2011年11月14日起，各省质量技术监督局不再受理6-苄基腺嘌呤作为食品添加剂的生产许可申请，已批准的生产许可证书，由监管部门撤回并注销，并于2011年12月20日前完成。
科标化工分析检测中心可依照ISO、ASTM、DIN、GB、HB等标准完成食品、饲料、药品、纺织品、农业、高分子材料、生物产品、建筑材料以及微生物产品理化性能、力学性能、电气性能等测试。
中心通过了中国国家认证认可监督管理委员会和中国合格评定国家认可委员会的二合一（CMA、CNAS）实验室认证认可，能出具权威的第三方检测报告。
豆芽中6-苄基腺嘌呤检测(高效液相色谱法)一、实验原理科标化工分析检测中心参照国标GB/T23381-2009食品中6-苄基腺嘌呤高效液相色谱法，试样经粉碎后用甲醇溶液提取、浓缩、固相萃取小柱净化，反相液相色谱柱分离测定，紫外检测器检测，外标法定量分析。
二、仪器和试剂Thermo scientific高效液相色谱仪带紫外检测器，RE-52AA旋转蒸发仪，HH-4数显恒温水浴锅，LG10-24A高速台式离心机；甲醇为色谱纯试剂，实验用水为超纯水。
三、试验方法1、提取称取经匀浆机捣碎的豆芽约10g（精确到0.01g）于50ml离心管中，加入20ml甲醇，超声提取15min，4000r/min离心10min，上清液转入50ml梨形瓶中，样品再次用20ml甲醇超声提取15min，离心合并上清液，用旋转蒸发仪（不超过60℃）浓缩近干。
DB11_T379-2006豆芽中4-氯苯氧乙酸钠、6-苄基腺嘌呤、2,4-滴、赤霉素、福美双的测定
ICS 67.080.20DB B 31备案号：19170-2006北京市地方标准北京市质量技术监督局发布目 次前 言 (II)1 范围 (1)2 4-氯苯氧乙酸钠残留量的测定 (1)3 6-苄基腺嘌呤残留量的测定 (3)4 2,4-滴（2,4-二氯苯氧乙酸）残留量的测定 (5)5 赤霉素残留量的测定 (7)6 福美双残留量的测定 (9)前 言本标准由通州区质量技术监督局提出。
本标准起草单位：北京市海淀区产品质量监督检验所（国家食品质量安全监督检验中心）。
本标准主要起草人：曹红、金瑛、刘艳琴、许华、王浩、田艳玲、林立。
豆芽中4-氯苯氧乙酸钠、6-苄基腺嘌呤、2,4-滴、赤霉素、福美双的测定1 范围本标准规定了豆芽中4-氯苯氧乙酸钠、6-苄基腺嘌呤、2,4-滴、赤霉素、福美双的测定方法。
本标准适用于豆芽中4-氯苯氧乙酸钠、6-苄基腺嘌呤、2,4-滴、赤霉素、福美双的残留量分析。
2 4-氯苯氧乙酸钠残留量的测定2.1 原理试样中的4-氯苯氧乙酸钠用稀碱提取后，在酸性条件下用固相萃取柱将样品中的4-氯苯氧乙酸吸附，使其与基体干扰物分离，再用甲醇洗脱并用高效液相色谱法测定，以保留时间定性，外标法峰面积定量。
2.2 试剂与材料2.2.1 2.2.2 2.2.3 2.2.4 2.2.5 2.2.6 2.2.7 2.2.8 2.2.9 2.2.10 2.2.11 2.2.12 2.3.1 2.3.2 2.3.3 2.3.4 2.3.5 2.4.1 氢氧化钠（AR）。
盐酸（AR）。
磷酸（AR）。
冰醋酸（AR）。
甲醇（HPLC）。
氢氧化钠溶液（0.01 mol/L）：称取0.40 g 氢氧化钠，溶于水并稀释至1000 mL。
亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾[K 4Fe(CN)6 ·3H 2O]溶于少量水中，并用水稀释至100 mL。
乙酸锌溶液：称取22.0 g乙酸锌[Zn(CH 3COO)2]溶于少量水中，然后加入3 mL冰醋酸并加水稀释至100 mL。
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DB33-T 625前言DB33/ 625－2007《无公害豆芽》分为三个部分：——第1部分：生产技术规程；——第2部分：质量安全要求；——第3部分：6-苄基腺嘌呤残留量和4-氯苯氧乙酸钠残留量的测定。
本部分为DB33/ 625－2007《无公害豆芽》第3部分。
本部分的附录A和附录B为资料性附录。
本部分起草单位：浙江省疾病预防控制中心、宁波市疾病预防控制中心、杭州市质量技术监督检测院、浙江省农业厅农作物管理局、宁波市卫生监督所、宁波市五龙潭蔬菜食品有限公司、宁波市质量技术监督局。
无公害豆芽第3部分：6－苄基腺嘌呤残留量和4－氯苯氧乙酸钠残留量的测定第一法豆芽中6-苄基腺嘌呤残留量的测定——LC-MS/MS法1 范围本方法规定了豆芽中6-苄基腺嘌呤的测定方法。
本方法适用于豆芽中6-苄基腺嘌呤的测定。
本方法检出限为1×10-6 mg/kg。
2 原理豆芽中残留的6-苄基腺嘌呤经酸化甲醇提取，反相柱分离，电喷雾离子化（ESI）和多离子反应监测（MRM）方式进行定量测定。
以试样峰的保留时间、母离子（m/z: 226.20[M+H]+）与子离子(226.20>91.0, 226.20>147.90)定性，以子离子(226.20>91.0)峰面积外标法定量。
3 试剂除非另有规定，仅使用分析纯试剂、蒸馏水或去离子水。
3.1 乙酸。
3.2 乙腈（HPLC）。
3.3 甲醇（HPLC）。
3.4 50%的甲醇水溶液。
3.5 酸化甲醇：每100 mL甲醇中加入乙酸50μL，混匀。
3.6 标准溶液的配置：3.6.1 标准储备溶液精密称取6-苄基腺嘌呤（含量＞98.0％）0.1000g于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，作为标准储备溶液。
此标准储备溶液每毫升相当于1.0 mg 6-苄基腺嘌呤。
标准使用液用甲醇稀释至每毫升含1μg的6-苄基腺嘌呤。
在4℃冰箱中储存，有效期1个月。
3.6.2 标准工作溶液3.6.2.1 空白豆芽萃取液制备选择在生产过程中未添加6-苄基腺嘌呤的豆芽菜。
按5.1 试样处理方法提取，经0.22μm有机滤膜过滤。
必要时使用LC-MS/MS分析，以确定在6-苄基腺嘌呤出峰处不存在干扰。
3.6.2.2 标准工作溶液系列配制准确吸取标注使用液1μL、2μL、4μL、6μL、8μL、10μL于进样瓶中，加空白豆芽萃取液（3.6.2.1）至1 mL。
配制成浓度依次为1 ng/mL、2ng/mL、4 ng/mL、6 ng/mL、8 ng/mL、10 ng/mL的标准溶液系列，供LC-MS/MS分析。
4 仪器4.1 组织捣碎机。
4.2 天平（精度0.01和0.0001g）。
4.3 高效液相色谱-电喷雾-串联四极杆质谱（LC-ESI-MS/MS）。
4.4 均质机（速度范围： 6,000－24,000 rpm）。
4.5 离心机(最高转速:15,000 RPM)。
5 分析步骤5.1 试样处理称取豆芽样品500g用食物粉碎机粉碎后，取5g样品（精确至0.01g）于50 mL聚丙烯离心管中，加入10 mL酸化甲醇，用均质机匀质3 min,10000 rpm离心10min，上清液转入50 mL容量瓶中，样品再用10 mL 酸化甲醇重复提取一次。
合并上清液，用水定容至刻度，摇匀，吸取2mL于10容量瓶中，用50%甲醇水溶液定容至刻度，摇匀，经0.2μm 滤膜过滤，供LC-MS/MS分析。
5.2 色谱参考条件色谱柱：Waters SunFire C18柱（2.1mm×150mm，5μm颗径）。
流动相A：水（0.1%甲酸）。
流动相B：甲醇（0.1%甲酸）。
流速：0.30 mL/min。
进样量： 10 uL。
柱温：35℃。
离子化方式ESI+。
毛细管电压 (kV) 3.00。
锥孔电压 (V) 57。
RF Lens 1 35.0。
Aperture (V) 0.0。
RF Lens 2 0.3。
源温度(℃) 120。
脱溶剂温度(℃) 350。
锥孔反吹气流 (L/Hr) 50。
脱溶剂气流 (L/Hr) 454。
LM 1 Resolution 12.0。
HM 1 Resolution 12.0。
离子能量 1 0.5。
LM 2 Resolution 12.0。
HM 2 Resolution 12.0。
离子能量 2 1.0。
光电倍增管 (V) 650。
碰撞池气压(mbar) 3.03e-3。
5.4 测定准确吸取10.0μL标准系列溶液和试样溶液注入液相色谱-质谱联用仪中，按照本标准5.2和5.3项条件进行检测，以保留时间及子离子226.20>91.0，>147.90进行定性，以子离子226.20>91.0的峰面积外标法定量。
参见附录A 。
5.5 结果计算按外标法计算试样中6-苄基腺嘌呤的含量。
见下式：10001000⨯⨯⨯=m f A X式中：X —试样中6-苄基腺嘌呤的含量，mg/kg ；A —试样中定量子离子面积对应的6-苄基腺嘌呤的质量，μg； f —试样的稀释倍数； m —试样的取样量，g 。
计算结果表示到三位有效数字。
6 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果绝对差值不得超过算术平均值的20%。
附录 A（资料性附录）226.20>91.0，>147.90子离子流图226.20>91.0，>147.90子离子流见图A.1。
图A.1 226.20>91.0，>147.90子离子流图第二法 4-氯苯氧乙酸钠残留量的测定1 范围本方法规定了豆芽中4-氯苯氧乙酸钠的测定方法。
本方法适用于豆芽中4-氯苯氧乙酸钠的测定。
本方法检出限为0.10 mg/kg。
2 原理豆芽中的4-氯苯氧乙酸钠用稀碱提取，酸化后用乙醚萃取，高效液相色谱紫外检测器测定，保留时间定性，外标法定量。
3 试剂除非另有规定，仅使用分析纯试剂、蒸馏水或去离子水。
3.1 氢氧化钠。
3.2 盐酸。
3.3 乙醚。
3.4 甲醇（HPLC）。
3.5 冰醋酸。
3.6 氢氧化钠溶液（0.01mol/L）：称取0.40g 氢氧化钠，溶于水并稀释至1000 mL。
3.7 盐酸溶液（1：1）：取100mL盐酸，加水稀释至200mL。
3.8 氯化钠酸性溶液（40 g/L）：于100mL氯化钠溶液（40 g/L）中加1.0mL 盐酸酸化。
3.9 磷酸盐缓冲液（0.01mol/L）：称取1.56 g的磷酸二氢钠（NaH2PO4.2H2O）加水溶解，并定容至1000mL，用50%的H3PO4溶液调节pH至4.0。
3.10 4-氯苯氧乙酸标准溶液：精密称取4-氯苯氧乙酸(含量＞99.0%，中国医药集团上海化学试剂公司)0.1000g，用甲醇溶解并移入100mL容量瓶中，稀释至刻度。
此溶液每毫升相当于1.00mg4-氯苯氧乙酸。
在4℃冰箱中储存，有效期1个月。
临用时用甲醇稀释至每毫升相当于0.10mg4-氯苯氧乙酸。
4 仪器4.1 组织捣碎机。
4.2天平（精度0.01和0.0001g）。
4.3 超声波仪。
4.4 均质机（速度范围： 6,500 – 24,000 rpm）。
4.5 旋转蒸发仪。
4.6 酸度计。
4.7 高效液相色谱仪（带紫外检测器）。
5 分析方法5.1 样品处理称取经组织捣碎机捣碎的豆芽试样10g（精确至0.01g）于50 mL比色管中，加入30mL氢氧化钠（3.6），用均质机均质（10,000 rpm）混匀3min，8000r/min离心10min，上清液转入50mL容量瓶中，样品再用少量氢氧化钠（3.6）重复提取1次，离心后。
合并上清液，并用氢氧化钠（3.6）定容至刻度，摇匀。
取此液10.0mL于150 mL分液漏斗中，加盐酸溶液（3.7）2.0mL，用50mL乙醚（3.3）萃取3次，每次振摇1min，合并乙醚层，用5.0mL氯化钠酸性溶液（3.8）洗涤，弃去水层，乙醚层用旋转蒸发仪蒸至近干，用甲醇溶解并定容至1.0mL，过0.45μm滤膜后，供高效液相色谱分析。
5.2 标准曲线准确吸取每毫升相当于0.10mg 的 4-氯苯氧乙酸0.20mL 、0.50 mL 、1.00 mL 、2.00 mL 、4.00mL 于100 mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度。
制成浓度依次为0.20mg/L 、0.50 mg/L 、1.00 mg/L 、2.00 mg/L 、4.00mg/L 的标准溶液，供高效液相色谱分析。
5.3 色谱参考条件色谱柱：ZORBAX SB C 18柱（ 4.6mm ×250mm × 5μm ）。
检测波长：228nm 。
流动相：甲醇+0.01mol/L 磷酸盐缓冲液（40+60）。
流速：1.0mL/min 。
柱温：30℃。
5.4 测定吸取10.0μL 标准使用液和试样液注入高效液相色谱仪，按照5.3项条件进行检测，以保留时间定性，标准曲线法定量。
5.5 结果计算按外标法计算试样中4-氯苯氧乙酸钠的含量。
见下式：12.110001000⨯⨯⨯⨯=m f A X式中：X —试样中4-氯苯氧乙酸钠的含量，mg/kg ；A —从标准曲线上求出的试样液中4-氯苯氧乙酸的质量，μg ； f —试样的稀释倍数； m —试样的取样量，g ；1.12—4-氯苯氧乙酸转换为4-氯苯氧乙酸钠的系数。
计算结果保留两位有效数字。
5.6 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。
附录 B(资料性附录)4-氯苯氧乙酸标准色图谱4-氯苯氧乙酸标准色图谱见图B.2。
图B.2 4-氯苯氧乙酸标准色图谱。