水中微生物检测
水体微生物检测方法
水体微生物检测方法1 水体微生物检测方法水是生命存在的必要条件，水体中的微生物是水质健康状况的重要指示物，所以检测水体微生物是监测污染质量、污染程度以及保证水生态环境健康、生物多样性等的重要技术手段之一。
检测水体中的微生物，常用的方法有活性测定法、培养分离法、PCR以及荧光探针法等。
1.1 活性测定法活性测定是水体微生物检测中应用最为广泛的方法之一。
在活性测定法中，样品会添加选定的培养基，配合观察和测定时间、温度、湿度以及添加凝结剂等来选择培养条件，通过特殊的检测仪器可以观测到微生物的活动，得出结论。
优点是流程简单、方法全面、检测灵敏，适应性强；但方法不适用于菌类多样性检测。
1.2 培养分离法培养分离法是最常用的一种微生物检测方法，在样品中添加特殊培养基，用于培养水体中的微生物。
采集不同条件下培养出的细菌株进行形态学分析、生理与生化特性分析和分子生物学分析等操作，从而获取对应的菌类信息。
优点是检测单元多、可检测菌类多样性；缺点是方法较复杂，时间较长。
1.3 PCR聚合酶链反应法（PCR）是水质检测的一种快速、灵敏的检测方法，它能够实现对特定微生物核酸序列片段的快速，灵敏的检测。
PCR采用不同条件，以几个温度周期反复扩增，以此形成检测抗原特异性的DNA 片段，最终得出该片段的扩增结果，通过特殊的检测仪器，得出检测结论。
优点是抗原检测的特异性更高、检测灵敏度高，时间短；缺点是不能检测到活体细菌，技术成本较高。
1.4 荧光探针法荧光探针法是运用荧光或发射荧光的探针分子，通过其与特定抗原发生特异性结合，以检测活态微生物的一种分子方法。
从而检测水体中活态微生物类型及数量，快速精准地检测水样中的微生物活性。
与传统活性测定法相比，优点是检测时间短、灵敏度高、减少误报率，方法进行简单；缺点是设备成本较高。
以上就是四种常用的水体微生物检测方法，每种方法都有优缺点，检测人员根据实际情况来选择恰当的检测方法。
除此之外，正确使用相关设备、操作标准的熟悉度对水体微生物的检测也是非常重要的。
(2023)微生物实验报告水中细菌总数和大肠菌群的检测(一)
(2023)微生物实验报告水中细菌总数和大肠菌群的检测(一)水中微生物实验报告实验概述•实验名称：水中微生物总数和大肠菌群的检测•实验时间：2023年•实验地点：实验室实验目的•检测水中微生物总数和大肠菌群的存在情况•评估水质卫生状况，指导水资源管理和人群健康实验方法1.采集不同来源的水样。
2.将水样制成不同浓度的稀释液。
3.取一定量的水样稀释液注入培养皿中。
4.加入适当培养基，进行菌落计数和形态特征观察。
5.通过酶促法检测大肠杆菌。
实验结果•来源于自来水厂的水样中，微生物总数为100CFU/mL，大肠菌群未检测到。
•来源于河流的水样中，微生物总数为1000CFU/mL，大肠菌群为20CFU/100mL。
•来源于地下水的水样中，微生物总数为10CFU/mL，大肠菌群未检测到。
结论•来源于自来水厂的水样水质较好，不存在大肠菌群的污染。
•来源于河流的水样水质较差，大肠菌群的检出说明存在污染，需进行水质治理。
•来源于地下水的水样水质较好，不存在大肠菌群的污染。
实验意义•检测水中微生物总数和大肠菌群的存在情况，有利于保障人类健康和水资源的可持续利用。
•提供科学依据和技术支持，指导水资源管理和水质卫生监测。
实验注意事项•实验过程需严格遵守无菌操作规范，防止样本污染。
•实验前需对实验设备、培养基等进行消毒处理，确保实验环境洁净。
•实验结束后，需妥善处理实验产生的废液、废料等。
实验展望•未来可进一步开展对水中其他微生物种类的检测，深入了解水生态系统的生物多样性。
•结合近年来人类活动和气候变化的影响，对水质卫生进行长期监测，及时掌握水质变化趋势。
•根据实验结果，制定针对性的水资源管理和水质卫生治理措施。
结语该实验通过检测水中微生物总数和大肠菌群，评估了水质的卫生状况。
实验结果表明，水质卫生状况与水源的来源密切相关。
希望通过类似的实验，加强对水质卫生状况的监测和管理，确保水资源的可持续利用，保障人们的用水安全和健康。
水质微生物检测
第二节饮用水种类及卫生微生物指标
一、饮用水分类 1、生活饮用水：供人生活的饮水和生活用水 2、包装饮用水： • 饮用天然矿泉水 • 饮用天然泉水 • 其他天然饮用水 • 饮用纯净水 • 饮用矿物质水 • 其他包装饮用水
二、饮用水介绍
（一）、生活饮用水 • 新发布的产品标准 GB5749-2006 • 标准检验方法为 GB/T5750-2006 • 水质检验项目由原35项增加至106项，旧标准微生
0 MPN/100mL
0 CFU//250mL 0 CFU//250mL 0 CFU//50mL
各类水质的微生物指标要求(续)
瓶 装 饮 用 纯 净 GB17324 － 水卫生标准 1998
菌落总数 ≤ 大肠菌群 ≤
霉菌和酵母 ≤
致病菌（沙门氏菌、
志贺氏菌、金黄色葡萄
球菌）
瓶（桶）装饮用 GB19298 － 水卫生标准 2003
• PH：水中微生物适宜范围是pH6.5～8.5，这与一般自然水 的pH值范围相适应。 海水的pH7.5～8.5，海水中多数微生 物生长的最适pH7.2～7.6；
• 化学物质：有机物，无机物：氨、硝酸盐、磷酸盐、硫酸 盐、碳酸盐，金属离子：汞、铜；
• 营养物质：异养微生物，营养贫乏时，微生物倾向吸附颗 粒。
第三节生活饮用水微生物检测
一、水样中微生物项目检测方法 GB/T 5750.12
1 菌落总数
1 平皿计数法
2 总大肠菌群大肠菌群
1 多管发酵法
2 滤膜法
4大肠埃希氏菌
二、水微生物的种类
• 水微生物的种类很多，有细菌、真菌、病毒、藻 类和原生动物；
• 水中大多数微生物属于异养微生物，它能利用水 中有机物质生长，另一类为自养微生物，它只需 无机物质就能合成新的细胞。
水中微生物的测定-国标法(水质检测)
水中微生物的测定-国标法(水质检测)
摘要
本文介绍了水中微生物的测定方法，以国家标准法为基础。
水中微生物的测定是水质检测的重要环节，可以评估水的卫生状况，以及相关的环境健康风险。
引言
水是人类生活中必不可少的资源，保证水质安全对于人类健康至关重要。
水中微生物作为一种主要的水质指标，可以反映水中存在的微生物污染程度。
因此，精确测定水中微生物的数量是进行水质检测的基本要求之一。
国标法测定方法
样品收集与处理
1. 确定采样点及采样时间，避免样品受到外界干扰。
2. 使用干燥及密闭的收集水样，并尽量防止样品受到氧气、光照和高温的影响。
3. 避免采样与外界环境接触，以防止二次污染的发生。
样品制备与预处理
1. 根据国家标准法的要求，将收集的水样进行适当的稀释，使其微生物数量在可测量的范围内。
2. 使用适当的培养基进行预处理，以促进微生物的生长。
微生物测定方法
1. 平板计数法：将经稀释处理的水样均匀地分布在培养基上，通过培养基固化后，计数形成的菌落数量，并据此推算出水样中微生物的浓度。
2. 膜过滤法：通过将水样通过细孔滤膜，然后将膜过滤板放置在含培养基的平板上，根据过滤后膜上菌落的数量计算水样中微生物的浓度。
结论
本文介绍了水中微生物的测定方法，基于国家标准法。
这些测定方法可以用于水质检测，评估水的卫生状况，以及相关的环境健康风险。
采样、制备和处理样品的正确操作，以及准确的测定方法选择，对于保证测定结果的可靠性至关重要。
平板菌落计数法水中微生物的检测
钟，每个平板上生长得到的菌落不超过15 个——无菌室
1、采样： 四、实验步骤
1）自来水：先将自来水龙头用酒精灯火焰灼 烧灭菌，再开水龙头使水流5min，以灭菌 采样瓶接取水样备用。
(2)池水、河水或湖水等地面水源水：在距岸边5米处， 取距水面10—15cm的水样，先将灭菌的带塞的采样瓶， 瓶口向下浸入水层中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水 即流入瓶中，盛满后，将平塞盖好，从水中取出，若不 能在2h内检测的，需放入4℃冰箱中保存。
1、样品充分混匀，稀释时一个稀释度要换一支无 菌移液管（放菌液时 吸管尖不要碰到液面
2、由于细菌易吸附玻璃器皿表面，菌液加入后应 尽快倒培养基，立即摇匀；
3、倾注平板时的培养基温度冷却至45℃左右。 4、计数时，30―300个菌落的稀释度计算每毫升
的菌数最为合适 5、同一稀释度的三个重复的菌数不能相差很悬殊
295
46
1.6
3 2890
271
60
2.2
4 无法计数 4650 513
___
5 27
11
5
___
6 无法计数 305
12
___
7 无法计数 无法计数 无法计数 ___
16400 37750 27100
1.6×104 3.8×104 2.7×104
513000 270 30500
5.1×105 2.7×102 3.1×104 10-3 无法计数
菌落计数方法及原则：
1）若只有一个稀释度的平均菌落数在30-300范围 时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之。
2）若有两个稀释度，其生长的菌落数均在 30~300之间，则视二者之比值来决定，若 其比值小于2应报告两者的平均数。若大于 或等于2则报告其中较小的菌落总数。
微生物与水质检测
微生物与水质检测水是生命之源，对人类和其他生物而言，保持水质的安全和健康至关重要。
微生物在水质检测中起着至关重要的作用。
本文将探讨微生物在水质检测中的重要性以及常见的检测方法。
一、微生物与水质检测的重要性水质中的微生物可以直接或间接地影响人类健康。
例如，水中的细菌和寄生虫可以引起肠胃疾病，水中的藻类和细菌可以产生毒素，对周围环境和生物多样性产生不良影响。
因此，监测和评估水质中的微生物是确保公众健康和环境保护的关键环节。
二、常见的微生物检测方法1. 培养法培养法是最常用的微生物检测方法之一。
它涉及将水样品置于含有特定培养基的培养皿中，然后在恰当的温度、湿度和氧气条件下进行孵育。
随着时间的推移，如果水样中存在微生物，它们将在培养基上生长形成可见的生物群落。
2. PCR法聚合酶链反应（PCR）是一种灵敏且快速的微生物检测方法。
它利用水中微生物的DNA或RNA分子作为模板，在特定的温度环境下进行放大，从而使微生物的存在可以通过检测其特定的基因序列来确定。
3. 流式细胞仪流式细胞仪是一种高通量的微生物检测技术。
通过将水样中的微生物与荧光标记的抗体结合，流式细胞仪可以在短时间内准确地计数和鉴定微生物群落的成分。
4. 蛋白质分析法蛋白质分析法是一种基于水样中微生物蛋白质的定量和鉴定的方法。
通过分析水样中微生物的蛋白质组成，可以快速识别和鉴定微生物群落的类型和数量。
三、微生物检测的挑战和解决方案微生物检测在实践中面临一些技术和方法上的挑战。
首先，微生物群落的复杂性使得检测和识别变得困难。
其次，某些微生物可能存在背景噪声中，这可能会干扰检测结果的准确性。
为了克服这些问题，科学家们正在不断开发新的技术和方法，以提高微生物检测的敏感性和特异性。
其中一种解决方案是使用高通量测序技术。
通过对水样中微生物的DNA进行测序和分析，科学家们可以了解微生物群落的结构和功能，并对其进行定量和鉴定。
此外，一些新兴的技术如纳米生物传感器也显示出在微生物检测方面的潜力。
水中微生物的取样、检测及处理方法2024
引言：水中微生物是指存在于水体中的微生物种类，包括细菌、藻类、真菌等微生物。
它们在水体中具有重要的生态功能和环境影响，对水质的评估和监测具有重要意义。
本文旨在介绍水中微生物的取样、检测及处理方法，以帮助读者更好地理解和应用这些方法。
概述：水中微生物的取样、检测及处理是水环境监测的重要组成部分，在水资源管理、环境保护和水污染治理中起到关键作用。
准确、有效地进行水中微生物的取样、检测及处理对于判断水体是否受到微生物污染、评估水体生态健康状况具有重要意义。
本文将围绕水中微生物的取样方法、检测技术和处理方法展开讨论，以提供读者所需的专业知识。
正文内容：一、水中微生物的取样方法1.表面水样品的取样方法\t1.1.表层水样品的采集\t1.2.底层水样品的采集\t1.3.水体剖面取样方法2.地下水样品的取样方法\t2.1.井口取样法\t2.2.地下水位下降法\t2.3.地下水位抬升法3.沉积物样品的取样方法\t3.1.瓶采法\t3.2.气体驱动采样法\t3.3.容器示踪剂法二、水中微生物的检测技术1.传统微生物检测技术\t1.1.培养法\t1.2.电镜法\t1.3.染色法2.分子生物学检测技术\t2.1.PCR技术\t2.2.实时荧光定量PCR技术\t2.3.基因测序技术3.免疫学检测技术\t3.1.酶联免疫吸附试验（ELISA）\t3.2.免疫荧光分析技术\t3.3.免疫电泳技术三、水中微生物的处理方法1.混凝絮凝处理技术\t1.1.金属盐混凝剂处理法\t1.2.有机高分子絮凝剂法\t1.3.硝酸盐法混凝絮凝法2.过滤处理技术\t2.1.砂滤法\t2.2.膜过滤法\t2.3.离子交换法3.抗生素处理技术\t3.1.抗生素消毒法\t3.2.抗生素筛选法\t3.3.抗生素生物降解法四、水中微生物的监测与评估1.基于微生物指标的水质评价方法\t1.1.总大肠菌群指数测定法\t1.2.肠球菌体群指数测定法\t1.3.总菌落数测定法2.水中微生物的生态学指标\t2.1.生物多样性指数\t2.2.生物量指数\t2.3.功能状况指数3.进一步分析处理结果\t3.1.统计分析方法\t3.2.GIS技术\t3.3.模型模拟方法五、水中微生物的污染防治策略1.源头减排措施\t1.1.农田非点源污染治理\t1.2.工业废水治理\t1.3.城市雨水管理2.水体净化技术\t2.1.人工湿地技术\t2.2.高级氧化技术\t2.3.光催化技术3.微生物修复技术\t3.1.天然微生物修复技术\t3.2.基因工程微生物修复技术\t3.3.内源微生物修复技术总结：水中微生物取样、检测及处理方法的正确应用对于水环境管理与保护至关重要。
生活饮用水检验标准微生物指标
生活饮用水是人们日常生活中不可或缺的重要物质，其质量和卫生安全直接关系到人们的健康。
国家对生活饮用水的质量进行了严格的监管和检测。
其中微生物指标是评价生活饮用水卫生安全的重要指标之一。
以下将围绕生活饮用水检验标准中的微生物指标，进行详细的分析和阐述。
一、微生物指标的含义微生物指标是指生活饮用水中微生物的种类和数量。
微生物包括细菌、病毒、寄生虫等，在水中存在的微生物主要来自污染源，如粪便、废水等。
通过检测水中微生物的种类和数量，可以评估水质的污染程度，以及是否存在潜在的卫生风险。
二、生活饮用水检验标准中的微生物指标根据国家标准《生活饮用水卫生标准》，生活饮用水的微生物指标主要包括大肠杆菌、菌落总数、大肠埃希氏菌等。
这些微生物指标的含量和标准均是对水质卫生安全的重要保障。
1. 大肠杆菌大肠杆菌是一类常见的肠道微生物，在水中存在的数量和比例可以反映水质的卫生安全情况。
国家标准规定，每升生活饮用水中大肠杆菌的数量应当为0个。
这意味着生活饮用水中不应当存在大肠杆菌，如果水中发现大肠杆菌，就表明水质存在严重的卫生风险，不适宜饮用。
2. 菌落总数菌落总数是指水样中可增殖繁殖的微生物的总数目，通常用于评估水质的微生物污染程度。
国家标准对于生活饮用水中菌落总数的要求是每毫升不超过100个。
这表示生活饮用水的微生物污染应当控制在一个很低的水平，以保障水质的卫生安全。
3. 大肠埃希氏菌大肠埃希氏菌是一类肠道病原菌，其存在可以直接威胁人体健康。
国家标准规定，生活饮用水中大肠埃希氏菌的数量应当为0个。
这也是对水质卫生安全的严格要求，意味着生活饮用水中不应当存在大肠埃希氏菌。
三、微生物指标的检测方法针对生活饮用水中微生物指标的检测，通常采用的是微生物培养法和分子生物学检测法两种方式。
1. 微生物培养法微生物培养法是通过将水样放置在适当的培养基上，利用微生物自身的代谢特性，培养出各类微生物菌落，然后通过计数和鉴定来确定其中的微生物种类和数量。
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革兰氏染色，镜检
观察菌落形态，挑取特征菌落
证实试验（培养24±2h，有产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在 ）
检测方法
➢ 滤膜法（membrane filtration,MF ) —共需2-3天时间
➢ 用孔径为0.45μｍ的微孔滤膜过滤水样，细菌被截留在滤膜上，将滤膜贴在选择性培养基 上，经培养后，计数生长在滤膜上的典型大肠菌群菌落数 ,计数单位为菌落形成单位
水中微生物检测的全球领导者
水中微生物检测（新国标方法）
• 总大肠菌群/大肠埃希氏菌，耐热大肠菌群
固定底物技术酶底物法介绍
总大肠菌群 / 大肠埃希氏菌 及耐热(粪)大肠菌群
固定底物技术酶底物 法
微生物检测的重要性
地震等自然灾害过后水体中会被大量微生物所 污染，特别是粪便污染，如水体中含有肠道病 原菌株，并被人饮用则会爆发严重疾病如泌尿 系感染、菌血症和脑膜炎，少数肠道病原菌株 可引起急性腹泻。
菌落总数, 总大肠菌群, 大肠埃希氏或菌耐热大肠 菌 细菌总数, 总大肠菌群、耐热大肠菌
粪(耐热)大肠菌群
➢菌落总数:1ml; ➢大肠菌100ml
➢细菌总数1ml, ➢总大肠菌群/耐 热大肠菌群 :100ml
➢1L
准
GB/T 14848-93地下水质量标准 GB 9667-1996,游泳场所卫生标 准
CFU(colony forming unit)
储备培养基的制备>过滤（需器械灭菌等）>培养（22-24H）
阴性结果(无典型菌落）
革兰氏染色 镜检
观察菌落形态,挑取特征菌落
证实试验（培养24±2h，有产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在）
β-半乳糖苷酶
酶底物法总大肠菌群 阳性反应原理
β-半乳糖醛苷
β-葡萄糖醛酸酶
同时，（用上述方法检测）会有10%的假阴性结果，是因为大肠埃希 氏菌属有10％不会产气（注1）。
注1：目前的粪大肠菌群检测方法，产酸产气是预试验的阳性判断指标。
我国水质微生物指标(细菌)
标准
指标菌
检测量
GB5749-2006,生活饮用水标准
CJ/T206—2005 城市供水水质标准
GB3838-2002,地表水环境质量标
酶底物法( Enzyme Substrate Test, EST)
检测方法
➢ 多管发酵法（MTF）–共需3-5天时间
以100mL水样中大肠菌最可能数(most probable number, MPN)表示
培养基制备>试管培养（22－26小时）
阴性结果（无产酸，产气）
产酸，产气
平板培养18－24小时
3, 优点
• 假阳性,假阴性底 • 操作简单,快速 • 定性,定量（51孔/97孔定量盘法） • 50多个国家和组织认证
世界卫生组织WHO,美国EPA,水与废水标准检验法…….
科立得 应用
➢ 饮用水 ➢ 源水 ➢ 瓶装水 ➢ 再生水
➢ 废水 ➢ 食品水 ➢ 畜牧用水
➢ 医疗用水
收录于“标准测试法”内 – APHA(美国公共卫生协会), US EPA,
背景知识
大肠菌群，耐热大肠菌群，大肠埃希氏菌
大肠埃希氏菌
耐热大肠菌群 大肠菌群
目前的粪大肠群检测方法是实际上是检测耐热大肠菌群而不是大肠埃 希氏菌。
有关文献报道的试验结果表明, 有15%的阳性耐热粪大肠菌群实际上属 于总大肠菌群而不是大肠埃希氏菌。这种情况的发生多数是由于耐热的
克雷伯氏菌普遍存在于自然环境中，而非来源于人畜粪便，因此与人类 疾病的产生也没有绝对的关联。
通常人们用投放含氯消毒剂进行消毒，但消毒 效果如何还需要通过检测水体中是否含有总大 肠菌群和大肠埃希氏菌来判断。
指示菌的方法学定义
总大肠菌群（Total Coliforms) 大肠菌群系指一群在37℃培养24h能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无
芽孢杆菌。该菌群主要来源于人畜粪便，具有指标菌的一般特征故以此作为粪便污染指标评价 饮水的卫生质量。 耐热大肠菌群(Thermotolerant Coliforms) ，原名：粪大肠菌群（Fecal Coliforms )
AOAC, US NCIMS, UK DWI , IBWA ,WHO……
假阳性比较： vs 滤膜法
60%
50%
40% 30% 20% 10% 0%
US EPA 1989
Colilert MF
MF Colilert Lewis & Fricker et al Mak 1989 1995
假阳性比较：vs 滤膜法
细菌总数、 总大肠菌群
➢细菌总数 1ml; ➢总大肠菌群1L
检测方法
➢ 多管发酵法（Multiple Tube Fermentation, MTF) ➢ 滤膜法（Membrane Filtration, MF ) ➢ 固定底物技术酶底物法(Defined Substrate Technology, DST)
•报告者：英国泰晤士水务 •样品来源：泰晤士河，样品数450个
* Jacobs et al, AEM,1986. ** Fricker et al, Water Res., 1997
酶底物法大肠埃希氏菌 阳性反应原理
4-甲基-伞形葡萄糖苷酸
《生活饮用水标准检验方法》对酶底物法定义
1, 方法
本标准方法采用固定底物技术酶底物法 Defined Substrate Technology, DST
2，培养基：
采用Minimal Medium ONPG-MUG，简称 MMO-MUG培养基
用提高培养温度的方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分开，在44.5℃仍能 生长的大肠菌群，称为粪大肠菌群。是水体受人畜粪便污染的比较直接指标。 大肠埃希氏菌（大肠杆菌，E.Coli.)
大肠埃希氏菌是指能产生β-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase）分解ONPG（Orthonitrophenyl-β-D-galactopyranoside）使培养液呈黄色，能产生β-葡萄糖醛酸酶（βglucuronidase）分解MUG（4-methyl-umbelliferyl-β-D-glucuronide）使培养液在波长 366nm紫外光下产生荧光的细菌。大肠埃希氏菌是粪大肠菌群的组成部分，是水体受人畜粪便 污染的最直接指标，水中含有大肠埃希氏菌提示有粪便污染。