细菌内毒素检测方法验证方案
细菌内毒素检验方法验证方案
细菌内毒素检验方法验证方案一、背景介绍细菌内毒素是一种由细菌产生的有毒分子，它可以引起中毒反应并对人类健康造成危害。
因此，准确检测和验证细菌内毒素的方法非常重要。
本方案旨在验证细菌内毒素检验方法的准确性和可靠性。
二、实验目的本实验旨在验证细菌内毒素检验方法，确保其能够准确地检测细菌内毒素的含量。
三、实验材料和设备1. 细菌内毒素检验试剂盒2. 细菌培养基3. 细菌菌种4. 培养皿5. 恒温培养箱6. 试管7. 离心机8. 显微镜9. 无菌培养室四、实验步骤1. 准备工作a. 清洁实验桌面和实验器材，防止污染。
b. 准备所需要的材料和设备，并确保其干净和无菌。
2. 细菌培养a. 随机取一支细菌菌种采样放入培养基中并均匀涂抹于培养皿上。
b. 将培养皿置于恒温培养箱中，以适当的温度和时间培养细菌。
3. 细菌内毒素检验a. 取一份细菌内毒素检验试剂盒，根据说明书的指导进行试剂的调配和处理。
b. 等待试剂反应完成后，根据试剂盒的说明书进行结果的解读。
4. 结果分析a. 观察试剂盒结果，根据颜色变化和强度判断细菌内毒素的含量。
b. 结果符合预期的样本被认为是阳性，否则为阴性。
五、质量控制1. 测量前需进行必要的质量控制，包括试剂的稳定性和标准品的准确性。
六、风险控制1. 实验过程中需佩戴个人防护装备，如实验手套和口罩，以减少潜在的健康风险。
七、数据处理与结果1. 将实验所得数据进行整理和统计，并进行数据分析和结果的解读。
八、讨论与结论1. 讨论实验结果与预期结果之间的差异，分析可能的原因，并提出改进和优化的建议。
2. 结论验证细菌内毒素检验方法的准确性和可靠性。
九、参考文献参考实验所使用的细菌内毒素检验方法的相关文献。
以上是细菌内毒素检验方法验证方案的内容，该方案通过详细的步骤和操作说明，确保了实验的准确性和可靠性。
通过验证该方法，将可为细菌内毒素检验提供可靠的数据支持，为相关领域的研究和应用提供技术支持。
中国药典 细菌内毒素检验方法
中国药典细菌内毒素检验方法
中国药典细菌内毒素检验方法中，按以下步骤进行实验。
首先，制备试样溶液。
将待测样品溶解在合适的溶剂中，并通过过滤将溶液过滤至少两次以去除杂质。
然后，制备标准溶液。
将内毒素标准品按照指定浓度配制成溶液。
接下来，准备试管。
将标准溶液和试样溶液分别装入两个试管中，并加入适量的无菌生理盐水作为空白对照。
然后，进行混合。
轻轻旋转试管混合样品，确保溶液均匀混合。
接着，培养细菌。
将特定的细菌株接种在培养基中，分别加入试管中的样品溶液，并在适当条件下进行培养。
培养结束后，观察结果。
通过观察培养基的变化，比较试管中的样品溶液和空白对照的差异，判断样品中是否存在细菌内毒素。
最后，记录结果。
根据观察结果，记录样品的检验结果，并进行数据分析。
细菌内毒素检查验证方案
细菌内毒素检查验证方案文件编号：VP-QC-2015-06起草人：审核人：批准人：批准日期：年月日目录1 概述 12 验证目的及范围 13 验证小组人员组成及职责 14 验证依据 25 验证前准备 26 验证的实施 27 偏差处理 58 验证数据及评估 5 9验证报告及评审 510 再验证及周期 511 验证文件及归档 512 附件 51 概述细菌内毒素检查法系利用鲎试剂来检测或量化由格兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
细菌内毒素检查报告两种发放，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法，供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行实验。
公司自行制备的注射用水需进行细菌内毒素的检查，本方案将采用凝胶法进行试验。
2 验证目的和方法本验证方案适用于注射用水的细菌内毒素的检查，通过对鲎试剂灵敏度复核试验、干扰试验及凝胶限度试验，建立该产品的细菌内毒素检查方法，并对其有效性进行评价，确保检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求。
3.验证小组人员组成及职责：3.1验证小组由以下部门人员组成：质量部、QC、生产部。
3.2 验证小组组成及职责列表4 验证依据《中华人民共和国药典》2015版1143 细菌内毒素检查法5.验证前准备5.1验证人员培训：验证报告起草人有责任在方案批准后（且在验证实施前）对本次验证相关人员进行培训。
培训人员记录见附件1。
5.2 确认仪器仪表设施经过确认和校验，并填写确认记录。
6 验证的实施6.1实验材料及用具6.1.1电子天平6.1.2. 电热干燥箱6.1.3. 恒温恒湿箱6.1.4.水银温度计6.1.5. 旋涡混合器6.1.6. 鲎试剂（具有国家主管部门的批准文号）6.1.7.细菌内毒素工作标准品(由中国药品生物制品检定所统一发放的标准品)6.1.8.细菌内毒素检查用水：应符合灭菌注射用水标准，其内毒素含量小于0.015EU/ml，且对内毒素试验无干扰作用。
细菌内毒素检验方法验证方案
1 概述：为了符合2010版GMP的要求，为了确保生产检验出符合预定用途和注册要求的产品，确保产品质量合格。
保证用药安全。
确认检查方法的科学持续稳定可靠适用性理想。
本方案对注射用水细菌内毒素检查方法进行验证。
2 验证目的：为确保注射用水细菌内毒素检测方法的专属性、灵敏度在本实验室条件下的适用性保证检测结果科学准确可靠，特制定此方案对注射用水细菌内毒素检查方法进行验证。
3 验证方式：结合实验室实际情况，按照2010版药典附录细菌内毒素检查方法检查。
由合格的检验人员对同一批供试品进行检查同一操作方法同一批供试品检查重复检查3次记录检查结果对比，看检查结果是否符合要求，重复性稳定性是否符合要求。
4 验证范围：适用于注射用水细菌内毒素检查方法验证，按照2010版药典附录细菌内毒素检查方法检查项下要求逐一进行。
5 验证结果的评价：根据药典合格标准来验证确认，确认检查方法检查结果的重现性稳定性是否符合要求。
适用性是否理想。
6 验证机构组成6.1验证委员会根据验证工作需要，常设验证委员会，负责所有验证工作的领导和组织，负责审批验证方案和验证报告、发放验证证书。
验证委员会针对每一个具体验证项目成立专门的验证小组，负责该验证项目的验证方案起草，实施、组织与协调，负责验证结果记录与评定，负责完成验证报告。
6.2验证委员会组成：姓名部门及职务验证委员会中职务验证工作中职责6.4职责：6.4.1 验证委员会：6.4.1.1 负责验证方案的审批。
6.4.1.2 负责验证的总协调工作，以保证本验证方案顺利实施。
6.4.1.3 负责验证数据及结果的审核。
6.4.1.4 负责发放验证证书。
6.4.2 验证小组：6.4.2.1 负责验证方案的制定和实施。
6.4.2.2 负责验证工作的组织与协调。
6.4.2.3 负责验证数据的收集和结果评定。
6.4.2.4 负责完成验证报告。
7文件准备和培训7.1所需文件已准备齐全。
7.2培训：在确认实施前，依据验证小组通过的方案，对参加验证人员培训，明确分工。
细菌内毒素检测方法验证方案说明
细菌内毒素检测方法验证方案起草人__________起草日期________审核人__________审核日期________批准人__________批准日期________西安力邦制药有限公司细菌内毒素检测方法验证方案目的范围责任人内容1.实验材料及用具2实验准备3.具体验证步骤3.1.鲎试剂灵敏度复核3.2..干扰实验33供试品细菌内毒素检查4. 验证结附: 表1.鲎试剂灵敏度复核记录表2.干扰试验记录表3.细菌内毒素检查记录细菌内毒素检测方法验证方案目的：为确保盐酸罗哌卡因一水合物细菌内毒素检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求，特制定此方案。
范围：盐酸罗哌卡因一水合物细菌内毒素检测方法责任人：细菌内毒素检验员、QC主管内容：1.实验材料及用具1.1.电子天平12电热干燥箱13恒温水浴箱14水银温度计1.5.旋涡混合器16 鲎试剂（具有国家主管部门的批准文号）1.7.细菌内毒素工作标准品（由中国药品生物制品检定所统一发放的标准品）1.8.细菌内毒素检查用水1.9.实验用具：移液管、凝集管、三角瓶、试管、试管架、洗耳球、时钟、75%酒精棉、剪刀、砂轮。
2实验准备2.1.玻璃器皿的洗涤将玻璃器皿放入铬酸洗液或其他热原灭活剂或清洗液中充分浸泡，然后取出将洗液空干，用自来水将残留洗液彻底洗净，再用蒸馏水反复冲洗三遍以上，空干后放入适宜的密闭金属容器中或用锡箔纸包好后再放入金属容器内，放置入烤箱。
2.2.除去玻璃器皿表面可能存在的外源性内毒素玻璃器皿置烤箱后，将烤箱调至250C，待烤箱温度升至设定的温度后开始计时，干烤至少1小时。
达到规定时间后，关断电源，待烤箱温度自然降至室温。
在不打开金属容器的情况下，可在两天内使用；如果玻璃器皿用锡箔纸包装，在不打开包装的情况下可在两周内使用，否则须再次干烤除去可能存在的外源性内毒素。
3.具体验证步骤3.1.鲎试剂灵敏度复核3.1.1.实验操作3.1.1.1.细菌内毒素标准溶液的制备取细菌内毒素工作标准品一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开，启开过程中应防止玻璃屑落入瓶内。
细菌内毒素检查验证方案
细菌内毒素检查验证方案一、引言细菌内毒素是一类具有强毒性的生物毒素，可以由细菌产生并释放到环境中。
其存在对于人类和动物的健康具有潜在的危害。
因此，建立一种可靠有效的细菌内毒素检查验证方案至关重要。
本文将介绍一种基于实验室技术的细菌内毒素检查验证方案。
二、实验目的本实验的目的是开发一种验证细菌内毒素检测的方法，以确保检测结果的准确性和可靠性。
具体目标包括：1. 确定合适的细菌内毒素检测方法；2. 确定验证方案的实施步骤；3. 评估验证方案的可行性和有效性。
三、实验设计1. 材料准备- 细菌内毒素检测试剂盒（根据实验需求选择合适的试剂盒）- 多个细菌培养菌株- 培养基和培养用具- 杂质过滤器- 试管和离心管等实验室常用器具2. 实验步骤1) 培养细菌菌株：选择多个细菌菌株进行培养，确保含有多种不同类型的内毒素。
2) 提取内毒素：将培养的细菌离心，取上清液，通过杂质过滤器去除细菌细胞残留和固体杂质。
得到的上清液即为细菌内毒素提取物。
3) 验证检测方法：使用细菌内毒素检测试剂盒对提取物进行检测，按照试剂盒说明书进行操作。
根据试剂盒结果，评估其准确性和可靠性。
4) 重复实验：根据上述步骤，重复多次实验以确保实验结果的稳定性和可重复性。
5) 数据分析：收集实验结果并进行统计分析，评估所选择的细菌内毒素检测方法的可行性和有效性。
四、实验注意事项1. 实验过程中要严格遵守实验室操作规范，注意安全。
2. 选择合适的细菌内毒素检测试剂盒，确保其适用于所需检测的内毒素类型。
3. 在提取内毒素时，要注意避免细菌细胞的污染。
4. 实验过程中要确保操作的准确性和重复性，避免人为误差的干扰。
5. 对于实验结果的分析，要进行统计学处理，确保数据的准确性和可信度。
五、预期结果通过本实验，预计将得到以下结果：1. 确定合适的细菌内毒素检测方法，验证其具有较高的准确性和可靠性。
2. 提供一个详细的细菌内毒素检查验证方案，使其可应用于实际生产中。
细菌内毒素检验方法验证方案
细菌内毒素检验方法验证方案1 概述:为了符合2010版GMP的要求，为了确保生产检验出符合预定用途和注册要求的产品，确保产品质量合格。
保证用药安全。
确认检查方法的科学持续稳定可靠适用性理想。
本方案对注射用水细菌内毒素检查方法进行验证。
2 验证目的:为确保注射用水细菌内毒素检测方法的专属性、灵敏度在本实验室条件下的适用性保证检测结果科学准确可靠，特制定此方案对注射用水细菌内毒素检查方法进行验证。
3 验证方式:结合实验室实际情况，按照2010版药典附录细菌内毒素检查方法检查。
由合格的检验人员对同一批供试品进行检查同一操作方法同一批供试品检查重复检查3次记录检查结果对比，看检查结果是否符合要求，重复性稳定性是否符合要求。
4 验证范围:适用于注射用水细菌内毒素检查方法验证，按照2010版药典附录细菌内毒素检查方法检查项下要求逐一进行。
5 验证结果的评价:根据药典合格标准来验证确认，确认检查方法检查结果的重现性稳定性是否符合要求。
适用性是否理想。
6 验证机构组成6.1验证委员会根据验证工作需要，常设验证委员会，负责所有验证工作的领导和组织，负责审批验证方案和验证报告、发放验证证书。
验证委员会针对每一个具体验证项目成立专门的验证小组，负责该验证项目的验证方案起草，实施、组织与协调，负责验证结果记录与评定，负责完成验证报告。
6.2验证委员会组成: 姓名部门及职务验证委员会中职务验证工作中职责6.4职责:6.4.1 验证委员会:6.4.1.1 负责验证方案的审批。
6.4.1.2 负责验证的总协调工作，以保证本验证方案顺利实施。
6.4.1.3 负责验证数据及结果的审核。
6.4.1.4 负责发放验证证书。
6.4.2 验证小组:6.4.2.1 负责验证方案的制定和实施。
6.4.2.2 负责验证工作的组织与协调。
6.4.2.3 负责验证数据的收集和结果评定。
6.4.2.4 负责完成验证报告。
7文件准备和培训7.1所需文件已准备齐全。
细菌内毒素验证
2
鲎试剂灵敏度复核试验
• 根据鲎试剂灵敏度的标示值（ λ ），将细菌内毒素工作标准品加入1ml内毒素检查 用水溶解，用封口膜将瓶口封严，置旋涡混合器上混合15分钟。然后按所用的鲎 试剂灵敏度2λ、λ、0.5λ、0.25λ进行稀释。0.1ml鲎试剂+ 0.1ml标准品，平行4管； NC： 0.1ml鲎试剂+ 0.1mlBET用水，平行2管37℃±1℃孵育60min±2min。
8
干扰试验结果举例
例1、批号1——厂家1鲎试剂试验结果
2λ（ 2λ ） 1λ（ 1λ ） 0.5λ（ 0.5λ ） 0.25λ（ 0.25λ ）
阴性对照 -
+ + + + + +
+ + + + + +
- - -
- - -
2、批号1——厂家2鲎试剂试验结果
2λ（ 2λ ） 1λ（ 1λ ） 0.5λ（ 0.5λ ） 0.25λ（ 0.25λ ）
4
干扰试验预试验
• 结果一 供试品浓度 MVC0.25 MVC0.125 MVC0.06 MVC0.03 BET水
供试品溶液
供试品阳性 对照 • 结果二
-++
-++
-++
-++
-++
供试品无干扰或者干扰很小，可用上述任一浓度进行干扰试验
MVC0.25 MVC0.125 供试品溶液 供试品阳性 对照 ---++
A
—
—
—
2
B
2λ /供试品 溶液
供试品 溶液
1 2 4 8
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细菌内毒素检测方法验证方案起草人起草日期审核人审核日期批准人批准日期西安力邦制药有限公司目的-------------------------------------------------------------------------范围-------------------------------------------------------------------------责任人----------------------------------------------------------------------内容-------------------------------------------------------------------------1.实验材料及用具-------------------------------------------------------2 实验准备----------------------------------------------------------------3.具体验证步骤----------------------------------------------------------3.1. 鲎试剂灵敏度复核------------------------------------------------3.2..干扰实验--------------------------------------------------------------3.3.供试品细菌内毒素检查--------------------------------------------4.验证结论--------------------------------------------------------------附：表1.鲎试剂灵敏度复核记录表2.干扰试验记录表3.细菌内毒素检查记录目的：为确保盐酸罗哌卡因一水合物细菌内毒素检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求，特制定此方案。
范围：盐酸罗哌卡因一水合物细菌内毒素检测方法责任人：细菌内毒素检验员、QC主管内容：1.实验材料及用具1.1. 电子天平1.2. 电热干燥箱1.3. 恒温水浴箱1.4.水银温度计1.5. 旋涡混合器1.6. 鲎试剂（具有国家主管部门的批准文号）1.7.细菌内毒素工作标准品(由中国药品生物制品检定所统一发放的标准品)1.8.细菌内毒素检查用水1.9. 实验用具:移液管、凝集管、三角瓶、试管、试管架、洗耳球、时钟、75%酒精棉、剪刀、砂轮。
2 实验准备2.1. 玻璃器皿的洗涤将玻璃器皿放入铬酸洗液或其他热原灭活剂或清洗液中充分浸泡，然后取出将洗液空干，用自来水将残留洗液彻底洗净，再用蒸馏水反复冲洗三遍以上，空干后放入适宜的密闭金属容器中或用锡箔纸包好后再放入金属容器内，放置入烤箱。
2.2. 除去玻璃器皿表面可能存在的外源性内毒素玻璃器皿置烤箱后，将烤箱调至250℃，待烤箱温度升至设定的温度后开始计时，干烤至少1 小时。
达到规定时间后，关断电源，待烤箱温度自然降至室温。
在不打开金属容器的情况下，可在两天内使用；如果玻璃器皿用锡箔纸包装，在不打开包装的情况下可在两周内使用，否则须再次干烤除去可能存在的外源性内毒素。
3.具体验证步骤3.1. 鲎试剂灵敏度复核3.1.1. 实验操作3.1.1.1.细菌内毒素标准溶液的制备取细菌内毒素工作标准品一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开，启开过程中应防止玻璃屑落入瓶内。
按照标准品说明书，加入规定量的细菌内毒素检查用水溶解其内容物，用封口膜将瓶口封严，置旋涡混合器上混合15分钟。
然后进行稀释，制备成4个浓度的细菌内毒素标准溶液，即2λ、λ、0.5λ、0.25λ（λ为所复核的鲎试对的标示灵敏度），每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30 秒钟。
3.1.1.2.待复核鲎试剂的准备取规格为0.1ml/ 支的鲎试剂18支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，用砂轮在瓶颈轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶内。
每支加入0.1ml 检查用水溶解，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解，避免产生气泡。
3.1.1.3.加样将已充分溶解的待复核鲎试剂18支（管）放在试管架上，排成5列，其中4列4支（管），1列2支（管）。
4 支（管）4 列每列每支分别加入0.1ml 的2λ、λ、0.5λ、和0.25λ的内毒素标准溶液；另2支（管）加入0.1ml检查用水。
3.1.1.4.加样结束后，将鲎试剂用封口膜封口，轻轻振动混匀，避免产生气泡，连同试管架放入37℃±1℃水浴或适宜恒温器中，试管架保持水平状态，保温60±2分钟。
3.1.1.5. 观察并记录结果。
将试管架从水浴中轻轻取出，避免振动，将每管拿出缓缓倒转180°观察，管内形成凝胶，并且凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为（+）；未形成凝胶或凝胶不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为（－）3.1.2. 实验结果计算如最大浓度2.0λ4管均为阳性，最低浓度0.25λ4管均为阴性，阴性对照为阴性时实验为有效，按下式计算反应终点浓度的几何平均值即为鲎试剂灵敏度的复核结果（λc）。
λc = lg-1 (∑X/4)式中x为反应终点浓度的对数值（lg）。
反应终点浓度是系列递减的内毒素标准溶液中最后一个呈阳性结果的浓度。
3.1.3结果判断3.1.3.1.判断标准当λc在0.5λ～2λ（包括0.5λ和2λ）时判定该批鲎试剂灵敏度复核合格，可用于干扰实验和供试品细菌内毒素检查，并以λ（标示灵敏度）为该批鲎试剂的灵敏度。
3.1.3.2.判断结果：（记录附后）3.2..干扰实验3.2.1. 操作方法3.2.1.1.目的是检验在某一浓度下的供试品对于鲎试剂与内毒素的反应有无干扰作用。
使用的供试品溶液应为未检验出内毒素且不超过所使用的鲎试剂的最大有效稀释倍数的溶液。
3.2.1.2.制备内毒素标准对照溶液取1支细菌内毒素标准品，用细菌内毒素检查用水稀释成4个浓度的标准溶液即2λ、λ、0.5λ、0.25λ（方法同3.1.1.1.）。
3.2.2.3.制备含内毒素的供试品溶液将供试品稀释至预实验中确定的不干扰稀释倍数，再用此稀释液将3.2.3.1.中的同支细菌内毒素标准品稀释成4个浓度即2λ、λ、0.5λ、0.25λ的含内毒素的供试品溶液。
3.2.2.4.鲎试剂的准备取规格为0.1ml/支的鲎试剂36支，轻弹壁使粉末落入瓶底，用砂轮在瓶颈轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶内。
每支加入0.1ml检查用水溶解，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解，避免产生气泡。
3.2.2.5.加样将准备好的鲎试剂取其中18支（管）放在试管架上，排成5列，4列4支（管），1列2支（管）。
其中的4支4列每列每支分别加入0.1ml的2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ的内毒素标准溶液，另一列2支（管）加入0.1ml检查用水作为阴性对照。
将另外18支（管）鲎试剂放在试管架上，排成5列，4列4支（管），1列2支（管）。
其中的4支4列每列每支分别加入0.1ml的含2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ的内毒素的供试品溶液，另一列2支（管）加入0.1ml供试品溶液作为样品阴性对照。
加样结束后，用封口膜封口，轻轻振动混匀，避免产生气泡，连同试管架放入37±1℃水浴或适宜恒温器中，保温60±2分钟后，观察并记录结果。
3.2.3.实验结果计算如两组最大浓度2.0λ均为阳性，最低浓度0.25λ均为阴性，阴性对照, 管均为阴性时，按下式计算用检查用水制成的内毒素标准溶液的反应终点浓度的几何平均值(E s)和用供试品溶液或稀释液制成的内毒素溶液的反应终点浓度的几何平均值(E t).E s= lg-1 (∑X s/4)E t= lg-1 (∑X t/4)X s、X t分别为用检查用水和供试品溶液或稀释液制成的内毒素溶液的反应终点浓度的对数值（lg）。
3.2.4.结果判断3.2.4.1.判断标准当E s在0.5λ～2.0λ（包括0.5λ和2.0λ）时，且E t在0.5 E s～2.0E s（包括0.5 E s和2.0E s）时，则认为供试品在该浓度下不干扰实验，可在该浓度下对此供试品进行细菌内毒素检查。
当E t不在0.5 E s～2.0E s（包括0.5 E s和2.0E s）时，则认为供试品在该浓度下干扰实验。
3.2.4.2.判断结果：（记录附后）。
3.3.供试品细菌内毒素检查在细菌内毒素检查中，每批供试品必须做2支供试品管和2支供试品阳性对照，同时每次实验必须做2支阳性对照和2支阴性对照。
3.3.1.操作方法3.3.1.1.供试品溶液的制备：（稀释倍数不得超过MVD）3.3.1.2. 阳性对照溶液的制备用检查用水将内毒素标准品稀释制成2λ浓度的内毒素标准溶液（方法同3.1.1.1.）。
3.3.1.3.供试品阳性对照溶液的制备用待检测的供试品溶液或其稀释液将内毒素标准品制成2λ浓度的内毒素溶液。
（方法同3.2.1.3.2. 供试品阳性对照溶液的制备）。
3.3.1.4.阴性对照液用细菌内毒素检查用水3.3.1.5.鲎试剂的准备取规格为0.1ml/支的鲎试剂8支，轻弹瓶壁使粉末落入瓶底，用砂轮在瓶颈轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶内。
每支加入0.1ml检查用水溶解，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解，避免产生气泡。
3.3.1.6.加样取8支（管）溶解好的鲎试剂，其中2支加入0.1ml供试品溶液或其稀释液（其稀释倍数不得超过MVD）作为供试品管，2支加入0.1ml阳性对照溶液作为阳性对照管（PC），2支加入0.1ml检查用水作为阴性对照管（NC），2支加入0.1ml供试品阳性对照溶液作为供试品阳性对照管（PPC）。
3.3.1.7.将试管中溶液轻轻混匀后，用封口膜封闭管口，垂直放入37℃±1℃水浴或适宜恒温器中，保温60±2分钟。
保温和取放试管过程应避免受到振动造成假阴性结果。
3.3.2. 结果判断3.3.2.1.判断标准当阳性对照都为阳性、供试品阳性对照都为阳性且阴性对照都为阴性时，实验有效。
若供试品2管均为阴性，认为该供试品符合规定；如供试品2 管均为阳性，应认为不符合规定；如2 管中1管为阳性，1 管为阴性，按上述方法另取4支供试品管复试，4管中如有1管为阳性，即认为不符合规定。
若第一次实验时供试品的稀释倍数小于MVD而结果出现2 管均为阳性或2管中1管为阳性时，按同样方法复试，复试时要求将其稀释至MVD。