不规则抗体筛查与鉴定分析
不规则抗体筛查在临床输血患者中的检出结果及分析
不规则抗体筛查在临床输血患者中的检出结果及分析摘要目的探討并分析不规则抗体筛查在临床输血患者中的检出结果，为保证临床输血安全减少输血反应及临床疑难输血提供依据。
方法17521例住院患者，应用微柱凝胶抗球蛋白法筛查其血清中不规则抗体，对阳性患者进行抗体特异性检测并分析。
结果17521例受血者不规则抗体阳性率为0.35%（61/17521），检出血型同种不规则抗体61例。
男性阳性检出率为0.30%（21/6952），女性阳性检出率为0.38%（40/10569）。
结论输血前不规则抗体筛检能发现有临床意义的不规则抗体，特别是对血液病、肿瘤、多次输血及有多次妊娠史患者可提前预警，以保证患者输血安全。
关键词不规则抗体；筛查；微柱凝胶法；输血安全不规则抗体是指ABO 血型系统以外所有红细胞血型抗体，包括红细胞同种抗体和自身抗体，可导致血型鉴定及交叉配血困难，引起溶血性输血反应（HTR）及新生儿溶血病（HDN），自身抗体还可导致自身免疫溶血性疾病（AIHA）[1]。
输血前对受血者进行不规则抗体的筛查和鉴定，尤其对有输血史、妊娠史及短期内有多次输血患者筛检具有临床意义的抗体，选择相应抗原阴性、交叉配血相合的红细胞输注，对有效减少或避免溶血性输血反应的发生，保证临床输血安全具有重要意义。
现报告如下。
1 资料与方法1. 1 一般资料选取2013年1月～2015年9月住院申请输（备）血的17521例患者，其中男6952例，女10569例。
输血前1～3 d常规采集患者静脉血3 ml EDTA-K2 抗凝，充分离心分离血浆待查。
1. 2 试剂与仪器Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ0.8%标准抗体筛查细胞、谱细胞由上海市血液生物医药有限公司提供并在有效期使用，抗人球蛋白微柱凝胶卡（含抗-IgG + C3d）、微柱孵育器、离心机由长春博讯生物制品有限公司提供，并严格按说明书进行操作。
1. 3 检测方法[2] 不规则抗体筛查及特异性鉴定：使用抗人球蛋白微柱凝胶卡，离心患者血液标本分离血浆与红细胞，吸取分别被检者血浆50 μl和抗体筛查细胞50 μl加入抗球蛋白检测卡Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号中，置37℃孵育15 min， 1 000 r/min 离心10 min，肉眼观察结果。
输血中不规则抗体的筛查及临床意义
输血中不规则抗体的筛查及临床意义不规则抗体定义不规则抗体，是指血清中抗-A、抗-B以外的其他血型抗体。
在人群中检出频率为0.3-2％。
不规则抗体产生的原因不规则抗体主要是经大量输血或妊娠等免疫刺激产生，在盐水介质中不能凝集而只能致敏表达相应抗原的红细胞，必须通过特殊介质才能使致敏红细胞出现凝集反应。
不规则抗体检测的重要性由于其它血型系统的不规则抗体会导致输血反应:轻者引起寒战、发热，影响治疗效果；重者破坏输入的不配合的红细胞或缩短其寿命，产生溶血性输血反应，危机病人生命；此外，对孕妇而言，不规则抗体会引起新生儿溶血病，影响新生儿脏器的发育，并使其智力发育受到伤害，严重者则会危及新生儿的生命安全。
因此，不规则抗体筛选是很必要而且必须的。
不规则抗体检测方法采用抗人球蛋白(IgG+C3d)检测卡(徽柱凝胶法)检测人血清(浆)中的血型不规则抗体。
通过对患者进行输血前不规则抗体筛查，能够发现有临床意义的不规则抗体，避免输入不相合血液，以达到安全输血之目的。
不规则抗体检测的原理将血型血清免疫学的抗原抗体特异性凝集反应与微柱凝胶分子筛技术以及离心技术有机结合。
患者血清(浆)与筛选红细胞经过在微柱凝胶上层反应池中孵育，凝集或致敏的红细胞因体积大在离心力的作用下不能通过凝胶间隙而留在凝胶上层或分散在凝胶中，即为阳性反应。
未凝集的游离红细胞因体积小在离心力的作用下能通过凝胶间隙沉积在微柱凝胶管底部，形成“红细胞扣”即为阴性反应。
不规则抗体筛选适用以下情况1、ABO血型鉴定发现受检者血清中有不规则抗体时；2、供血者血清抗体筛检；3、输血前受者血清抗体检查；4、输血后溶血反应疑为由同种抗体引起时；5、孕妇血清的抗体检查；6、新生儿溶血病血液中抗体检查；7、直接抗人球蛋白试验阳性红细胞上抗体的检查。
不规则抗体筛选的临床意义1、献血者的血清或血浆进行抗体筛查，可以防止含有不规则抗体的血液输注给病人，避免由于献血者血液中的不规则抗体引起病人红细胞的破坏而引起的溶血性输血反应，同时可以减少血液浪费，可将有不规则抗体的血液制备成抗体血清，用于稀有血型的检测。
输血前不规则抗体筛查结果及其临床意义分析
表3控制菌验证结果组别金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌白色念珠菌试验组阳性阳性阳性阳性对照组阳性阳性阳性阴性对照组阴性阴性阴性划线平板甘露醇氯化钠琼脂漠化十六烷基三甲胺琼脂平板沙氏葡萄糖琼脂平板4讨论医用超声耦合剂中含有的卡波姆是一种高分子材料，是一类非常重要的流变调节剂,形成凝胶状,有增稠、悬浮等重要用途，具有良好的涂展性，还可以消炎杀菌％本实验中，利用氯化钙溶液屏蔽了卡伯姆的羧酸基，使相互排斥作用减弱,而二价离子有可能和羧酸根结合形成盐类物质从而影响了卡伯姆凝胶的粘度，使其容易通过滤膜，加上卵磷脂和吐温80的中和灭活作用，消除了抑菌物质的抑菌性，寻找出以卡伯姆作为基质,盐酸聚六亚甲基胍作为防腐剂的医用超声耦合剂的微生物检验方法。
参考文献［1］孟勇涛，饶丽平•卡波姆在凝胶制剂中的使用问题的探讨［J］・齐鲁药事,2010,29(12)：708-709.［2］熊佳佳，王柏•卡伯姆凝胶流变学特性及其影响因素研究［J］.海峡药学,2006,18(4)：34-37.［3］国家药典委员会•《中国药典》2015年版第四部通则［M］.北京：中国医药科技出版社,1105-1106.［4］曲萍，仇丽霞,赵思俊，等•卡波姆抑菌凝胶剂微生物限度检查方法的建立［J］.药物分析,2013,33(8)：1317-1312.［5］檀巧婷，严佳，周欣，等•快手洁手消毒凝胶的微生物限度检查方法学验证［J］・药学实践杂志,2014,32(5)：366-367,382.(收稿日期：2020-08-04)输血前不规则抗体筛查结果及其临床意义分析白明华输血是临床治疗多种疾病的常用方式,具有补充血容量、调节血液循环、增加携氧能力、改善凝血功能等多种作用,利于抗休克和防止出血性休克等疾病［1'2］o但血液制品内成分较为复杂，输血前筛查不规则抗体是保障输血安全性的重要措施。
目前，血型抗体可分为规则抗体和不规则抗体,其中ABO型血型内的抗体称为规则抗体,因检测技术的发展，该类抗体引起的溶血反应已大幅减少［3,4］%而不规则抗体主要指ABO型以外的抗体，在怀孕、器官移植或输血等因素影响下,体内血型意外抗体明显增多,给输血带来严重安全隐患,轻则输血失败，重则发生溶血反应威胁患者生命［5］o因此，临床更应重视输血前的精确检测,以筛查不规则抗体,准确了解患者不规则抗体类型，从而减少输血不良反应，保证输血安全。
实验四不规则抗体筛选与鉴定、效价测定
2.鉴定 2.鉴定
标管： ⑴标管：11支1-10、自c 加样： ⑵加样：Ps2滴+谱细胞1滴 离心、观察结果： ⑶离心、观察结果： ①直接观察 ②4℃10min观察 ③恢复室温观察，有格局为IgM ④37℃观察有无凝集 ⑤凝聚胺法或抗人球法（上谱细胞），观 察格局可判断有无IgG抗体 测效价： ⑷测效价：若有抗体，测效价
操 作
1.筛选 1.筛选
(聚凝胺法 聚凝胺法) 聚凝胺法 (抗人球法 抗人球法) 抗人球法
⑴标管8支:S1、S2、S3、S1’、S2’、S3’、K、自c 标管8 ⑵加样：受检血清2滴+上述细胞1滴检测 加样 ⑶观察结果:阳性进行不规则抗体鉴定 观察结果: ⑷测抗体效价（室温、4℃10min、恢复室温 测抗体效价 10min、37℃3min ）
注意事项 1.更换滴管， 1.更换滴管，防止干扰 更换滴管 2.防止前带现象， 2.防止前带现象，看结果从高稀释度开始 防止前带现象 3.试剂细胞 3.试剂细胞 4.稀释液体积越小， 4.稀释液体积越小，产生误差越大 稀释液体积越小
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
思考题
1.为何不规则抗体筛选与鉴定要在盐水、 1.为何不规则抗体筛选与鉴定要在盐水、 为何不规则抗体筛选与鉴定要在盐水 聚凝胺、抗人球介质中进行。 聚凝胺、抗人球介质中进行。 2.抗体效价检测的临床应用 2.抗体效价检测的临床应用
目的 掌握抗体效价的测定方法 原理 Ab经过倍比稀释加入悬浮红细胞，以肉眼可 见“±”凝集的最高稀释倍数为抗体效价。 器材 试剂 小试管、记号笔、滴管、离心机 悬浮红细胞、血清、生理盐水
实验步骤 1.标记管号 标记管号：1、2、4、8、16、32…… 标记管号 2.从2号开始各管分别加生理盐水50ul 从 号开始各管分别加生理盐水50ul 3.加血清 加血清：1、2管各加血清 加血清 4.倍比稀释 倍比稀释：将2号管混匀，从中吸出50ul移入 倍比稀释 第3管，混匀；再从第3管吸出50ul移入第4 管，以此类推，至最后一管，吸出50ul弃去。 5.加悬红 加悬红：每管各加50ul ，混匀。 加悬红 6.3000r／min离心 离心15秒，直接观察结果 观察结果、 离心 观察结果 4℃10min、室温10min、37℃3min观察结果。
不规则抗体筛选和鉴定标准操作规程
不规则抗体筛选和鉴定标准操作规程1.检验目的不规则抗体筛选和鉴定可在交叉配合之前进行或一起进行，这样有利于患者抗体的早期确认及鉴定，发现临床上有意义的抗体，避免一些可能的情况而造成病情的延误。
2.检验方法分盐水介质法、抗球蛋白法和微柱凝胶法。
3.检验原理让待检者的血清与已知血型的试剂红细胞即筛选红细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ套）起反应，以发现在37℃中有反应活性的抗体。
这种抗体可引起新生儿溶血病、溶血性输血反应、或使输入的红细胞存活期缩短等。
当不规则抗体筛选试验阳性后，再进行不规则抗体鉴定，即利用谱红细胞（11套鉴定细胞）与待检者的血清反应，根据反应结果判断机体所产生的同种抗体类别。
4.标本要求受检者不抗凝静脉血4.0ml，分离血清，48小时内使用5.试剂5.1.筛选红细胞：由2或3人份的O型红细胞组成为一套试剂，每套试剂筛选红细胞中至少有以下常见的抗原：D、C、E、c、e、M、N、S、s、P、Le a、Le b、K、k、Fy a、Fy b、Jk a、Jk b等。
每次用3套试剂（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）进行抗体筛选，见表1005-1。
5.2.鉴定谱细胞：除包括常见的抗原以外还有：C w、Kp a、Kp b、Js a、Js b、Lu a、Lu b、Xr/min a等。
每次用11套试剂进行抗体鉴定，见表1005-2。
5.3.抗球蛋白试剂：多特异性抗球蛋白血清（IgG、C3d）。
5.4.致敏红细胞（质控细胞）。
5.5.0.9%生理盐水。
5.6.Coombs微柱凝胶卡。
6.器材试管、吸管、37℃水浴箱、台式离心机、滤纸、微量加样器等。
7.操作程序7.1.盐水介质法7.1.1．取受检者血清2滴于标记有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的3支小试管中。
7.1.2．对应加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ套2%～5%筛选红细胞生理盐水悬液1滴，37℃孵育30分钟。
7.1.3.以3000r/min离心10秒，观察凝集和溶血情况，并记录反应情况于表1005-1中。
如果抗体筛选试验阳性，继续做以下试验。
不规则抗体筛查与分析(1)
02抗体的筛查与 分析
03抗体的鉴定与 分析
01凡遇有下列情况必须按《全国临床检验操 作规程》有关规定作抗体筛选实验：交叉 配血不合时；对有输血史、妊娠史或短期 内需要接收多次输血者。
02不做抗筛直接盲配有风险，对于弱抗体， 若供血者为杂合子（剂量效应）则有可能 为阴性结果。所以筛选（鉴定）对抗体的 检测比交叉配血更敏感和可靠。
抗筛的目的是通过受检的血清和已知的带有
不同抗原的三人份O型筛选红细胞反应，来 测定血清中有无抗A和抗B以外的意外抗体 （也称不规则抗体）
对疑难交叉配血有重要的指导意义，降低盲 配风险
补体依赖性抗体 补体非依赖性抗
体
完全抗体 不完全抗体
天然抗体 免疫抗体
冷抗体 温抗体
自身抗体 同种抗体
临床有意义抗体：一般为免疫性抗体，在体 温条件（37度）具有反应性的同种抗体。
+ （抗-E/-cE约占1/3，此类患者筛选相合的血液 是很容易的）
+ Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ全部阳性，且强度一致；自c阳 性：结合病情，优先考虑自身抗体
+ Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ全部阳性，自c阴性：考虑同种 抗体，如病人血型为Rh阴性，优先考虑抗-D
+
+ 抗筛结果排除假阴性，一定是阴性结果吗？
+ 解答：“抗筛阴性”并不能代表“同种抗体阴性”。 + 筛选细胞和谱细胞有人种差异，如Mia，
+ 抗人球蛋白试剂：IgG抗体通过抗人IgG类免 疫球蛋白抗体（简称抗人球）“搭桥”，使已 致敏了不完全抗体的RBC发生凝集。
+ 抗筛要求用抗IgG+C3的多特异性抗人球蛋白 试剂，若用单抗IgG的单特异性抗人球蛋白 试剂，可能对某些抗体造成漏检。
不规则抗体筛查及鉴定培训7.27
情况一：抗筛阳性反应强度不一，自身对照阴性
表型与抗体互相验证
情况二：抗筛全部呈阳性反应，反应强度大致相同， 自身对照阳性
情况二：抗筛全部呈阳性反应，反应强度大致相同， 自身对照阳性
3 抗筛阳性输血原则
抗筛阳性患者输血
确认只有不规则抗体
自身（-）、抗体筛选（+）
配血时患者血清中的同种抗体与供 者红细胞上相应抗原起反应。
P 血型 系统抗体
最常见的表型 ：P1、P2 P1 红细胞上有两种不同的 抗原：P1 和 P；P2 红细胞 上只有 P 抗原，可以产生 抗-P1。
不规则抗体种类（其他）
Lewis血型系统抗体： 多为IgM类，属自然产生的抗体，37℃一般不发生反应
Lutheran 血型系统抗体： LU抗原剂量效应，导致混合凝集、临床意义一般不大
结果判读：根据谱细胞的反应格局一般可以鉴定常见的抗体,但有 一定的局限性，有可能漏检常见的组合抗体
排除法：纯合子表达抗原无反应则直接排 除对应的抗体（举例：与5号细胞dCCee、11 号细胞DCCEe、12号细胞DCcEE反应均为阴性， 表明不存在单特异性抗-C）
情况一：抗筛阳性反应强度不一，自身对照阴性
操作:抗体鉴定谱细胞分别与被检血清进行间接抗球 蛋白试验，同时做自身对照
自身细胞检查：确定患者血清内是否有自身抗体或自身抗体与同 种抗体并存，只有是阴性时，才能排除自身抗体或其他凝集素导 致的谱细胞凝集；
使用试剂谱细胞：谱细胞一般是由8～16单人份的已知血型表型的O 型红细胞配套组成，具有各种不同的抗原成分；
聚凝胺介质法
1.红细胞上已有不完全抗体致敏
2.加入聚凝胺，缩短红细胞之间的距离，不完全 抗体同时与两个红细胞结合使其特异性凝集
3774例输血患者不规则抗体筛查及鉴定结果分析
3774例输血患者不规则抗体筛查及鉴定结果分析目的了解本院输血患者的不规则抗体的发生率及分布，探讨不规则抗体检测在临床输血中的作用，提高输血的安全性及有效性。
方法选取我院2010年12月～2012年12月预备输血或手术备血患者标本进行抗体筛查，对于结果阳性者用谱细胞再进行抗体的鉴定试验，统计不规则抗体的发生率。
结果在3774例患者标本中不规则抗体阳性者为9例，发生率为0.24%，其中抗一Ec1例、抗一E 2例、抗一Ce各2例、抗一D 1例、抗一M及抗一Mur各1例，抗-Leb 1例。
其中血液肿瘤科患者发生率最高，占44.4%，其次为妇产科占33.4%。
结论输血前患者进行不规则抗体筛查及鉴定显得尤为重要，避免溶血性输血反应的发生，提高输血的安全性及有效性。
标签：抗体筛查和鉴定；微柱凝胶法；输血；安全血型抗体主要分为规则抗体和不规则抗体两类.一类是ABO血型系统的规则抗体.而另一类则是指抗A、抗B、抗AB以外的其它血型抗体，多为IgG抗体。
有临床意义的不规则抗体会造成急性或迟发性输血不良反应，破坏输入的不配合的红细胞或缩短其寿命，产生溶血性输血反应，轻则影响治疗效果，重则危机患者生命[1]。
目前随着血型鉴定试剂灵敏度的提高、输血技术的进步及同型血、成分血的运用，由ABO血型不合造成的溶血反应几乎不可能发生。
但是由于多次输血、多次妊娠或血液制品的免疫刺激等产生的不规则抗体引起的迟发性溶血反应也是不容忽视的。
因此，筛查及鉴定不规则抗体对临床安全输血中有重要的意义。
我院对3774 例临床申请输血患者进行不规则抗体筛查及鉴定，效果较好，现报告如下。
1资料与方法1.1一般资料我院2010年12月～2012年12月预备输血或手术备血患者3774 例，其中男2096例，女1678 例。
女性患者中，孕妇205 例，非孕妇1473 例。
年龄3～91 岁。
对患者标本均做不规则抗体筛查，对9例筛查阳性患者进行不规则抗体鉴定。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
产生：免疫刺激； 免疫抗体 分类：IgG类抗体为主 IgM类抗体少
IgM抗体
多以五聚体形式存在，分子最大 在盐水介质中能直接连接相应的红细胞， 使之发生肉眼可见的凝集反应，又称为完全 抗体
IgG 抗体
单体形式存在，分子量较小 盐水介质中只能致敏相应抗原的红细胞，而不能 使之凝集，又称为不完全抗体 必须通过特定的方法使致敏红细胞发生凝集 聚凝胺法
步骤繁琐，耗时较多
临床意义
献血者：防止含有不规则抗体的血液输注给病 人，避免溶血性输血反应
受血者：有助于血液选择，充分的时间选择相合 的血液
孕妇：早发现，孕期进行新生儿溶血病的预防和 治疗，减少不规则抗体对胎儿或新生儿带来的伤 害
小结
1.不规则抗体两类：IgG型、 IgM型
2.不规则抗体筛查方法：先盐水介质法，后聚凝胺 介质法或抗人球蛋白法 3.盐水介质法只能检测IgM型不规则抗体； IgG型抗 体需要选择聚凝胺介质法或抗人球蛋白法
思考题
1.不规则抗体筛选为何先在盐水介质中进行？
2.能否只选择聚凝胺介质法或抗人球蛋白介 质法一种方法进行不规则抗体的筛查？
参考资料
1.临床输血与检验
2.人类血型
人民卫生出版社
科学出版社
3.免疫血液学
4.中国输血协会
上海科学技术出版社
/
21
22
3.加入抗人球蛋白
4.抗人球蛋白同时和两个 不完全抗体的Fc段结合， 从而把红细胞连接在一起
方法学评价
盐水介质法：最基本，检测IgM型血型抗体
聚凝胺介质法：速度快，实验时间5分钟左右 ； 不适合于Kell系统抗体的检测，但汉
族人群至今无Kell系统抗体检出报道 抗人球蛋白介质法：检测IgG型血型抗体最为经典方法，
抗人球蛋白法
不规则抗体筛查方法
盐水介质法 聚凝胺介质法（最常用）
抗人球蛋白介质法（经典）
不规则抗体检测原理 图 62 ：红细胞表面电荷及其相互之间的距离
自由移动的 正电荷 内层正电荷 随红细胞移动 表面负电荷 红细胞
红细胞间由静电维 持最小距离约 24nm
不规则抗体检测原理
35.7nm
受伤严重，需要 立即输血！！！
教学目标
1.掌握不规则抗体筛查方法 2.熟悉不规则抗体筛查的概念、方法学评价 及临床意义
不规则抗体
概念：不符合ABO血型系Landsteiner 法 则的血型抗体，即抗-A、抗-B 以外的血 型抗体
Landsteiner法则
不规则抗体
概念：不符合ABO 血型系Landsteiner法则的血 型抗体，也就是抗-A、抗-B 以外的血型抗体
不规则抗体检测原理
14nm
聚凝胺介质法
1.红细胞上已有不完全 抗体致敏
2.加入聚凝胺，缩短红细 胞之间的距离，不完全抗 体同时与两个红细胞结合 使其特异性凝集
3.加入枸橼酸钠中和聚凝胺
4.不完全抗体的结合， 特异性凝集不消失
聚凝胺 枸橼酸钠 不完全抗体
抗人球蛋白介质法
1.红细胞彼此之间有一定的间 距 2.不完全抗体结合在红细胞表 面,但是不能和两个红细胞同 时结合（致敏）