正相柱还是反相柱
正相色谱柱与反相色谱柱有哪些区别
正相色谱柱与反相色谱柱有哪些区别？色谱柱的安装：1、首先应确认柱和仪器的接头以及管路是否匹配。
为减少死体积，进样阀、柱子、检测器之间的连接管路内径尽可能使用内径较小的管线，同时控制进样器、色谱柱和检测器之间连接管线的长度。
安装色谱柱之前，确认流路系统中的溶剂是否正常。
对分析较复杂的样品建议安装保护柱。
2、为了使色谱柱与仪器系统达最佳的连接效果，应尽量使用与色谱柱接口相匹配的螺帽和锥形接头，如原来的接头长期匹配其他类型的色谱柱，建议在连接新色谱柱前应检查匹配情况，避免造成色谱柱的损坏或因色谱柱不匹配造成的漏液。
3、使用PEEK 材料的通用接头，只需用手拧紧不需要特定扳手，使用压力为5000psi；使用温度不得超过100℃。
流动相平衡：1、在进行样品检测前，至少使用20倍柱体积流动相使色谱柱充分平衡。
流动相一定要使用色谱级别的溶剂。
如使用水相的缓冲液应当天配制以保持新鲜避免细菌产生。
2、流动相使用前需用微孔滤膜过滤,消除流动相中颗粒对色谱系统和色谱柱的损坏。
缓冲液与其他流动相混合后应重新过滤避免溶解度变化造成产生新的沉淀。
不应使用纯水作为流动相冲洗C18色谱柱，以免柱性能损坏（添加5％的有机溶剂冲洗色谱柱，同时可以达到对缓冲盐清洗的作用。
还可以使色谱柱更容易平衡）。
3、流动相需脱气后使用，可避免因气泡导致的泵和检测器的工作不正常。
如果测试时使用的流动相与色谱柱保存使用的流动相有较大区别，应该使用过度分布的形式进行平衡。
避免由于流动相的突然变化造成柱压增加过大或流动相缓冲盐结晶造成对色谱柱和仪器系统的损坏。
正相色谱柱比反相色谱柱需要更长的平衡时间。
样品制备与操作：1、样品应当尽可能溶解在能与流动相相互溶的溶剂中。
除特殊指明外，如使用强溶剂溶解样品柱子的分辨率将可能降低。
2、样品溶液在进样前应使用针头式过滤器对样品预先过滤。
频繁改变流动相组成，会加速降低柱效。
3、色谱柱由高压匀浆法装填，能承受较高压力。
液相色谱柱型号名称
液相色谱柱型号名称液相色谱技术是一种广泛应用于实验室和工业生产中的分离、纯化和分析技术。
而液相色谱柱作为液相色谱技术中不可或缺的组成部分，不同柱材质、柱型号都对色谱分离过程产生着重要影响。
以下是常用的液相色谱柱型号名称列表及其特点。
1. C18柱C18柱是一种经典的反相柱，在反相液相色谱分离中被广泛应用。
其最基本的特点是使用碳端基（-C18H37O）覆盖的硅胶基质，使得C18柱能够与极性化合物获得良好的相互作用，从而在分离过程中实现良好的分离效果。
C18柱的使用寿命长，稳定性高，适用于大多数样品分离。
2. C8柱C8柱与C18柱相似，但其具有更弱的相互作用能力。
因此，C8柱适用于一些更具极性的化合物分离，例如酚类、酮类和醛类等。
3. CN柱CN柱是一种极性的正相柱，在正相液相色谱分离中被广泛应用。
CN柱使用的是氰基覆盖的硅胶基质，能够与酸性和极性化合物获得良好的相互作用，对一些醇类、醛类和酮类等分子分离效果较好。
4. NH2柱NH2柱是一种偏极性正相柱，在正相液相色谱分离中应用较广。
NH2柱使用的是氨基覆盖的硅胶基质，能够与极性分子发生氢键作用。
NH2柱适用于如醇类、酮类、醛类、糖类等极性分子分离。
5. Phenyl柱Phenyl柱是一种反相柱，与C18柱相似，但其具有苯环的结构。
该结构赋予了Phenyl柱更强的π-π堆积相互作用，使得其中的芳香族化合物和芳基侧链能够得到更好的分离和识别。
6. C30柱C30柱是一种新型反相柱，在C18和C8柱之间。
C30柱的使用范围更广，能够处理更多的化学样品，例如脂肪酸、天然产物和药物等。
总之，不同的液相色谱柱型号具有不同的柱材质、柱层厚度、柱孔径、填充剂种类等特点，使用场合不同，选择的柱也不同。
选择合适的液相色谱柱型号来分离样品，将会获得更好的分离结果。
使用正相柱还是反相柱
正相柱还是反相柱特别注意HPLC使用过后的系统清洗：含有缓冲盐溶液的流动相的清洗方法：1、先用100%的纯水冲洗，打开排放阀，用3~5ml/min的流量，洗二十分钟左右后停泵。
此举主要是针对吸液系统、泵头、进出口单向阀等体积较大的空间的清洗2、再用95：5的甲醇/水清洗整个系统，关闭排放阀，用1ml/min的流量，洗30~60分钟后停泵。
此举主要是用水清洗整个系统中的盐，用5%的甲醇主要是为了保护色谱柱。
3、最后用100%的甲醇清洗整个系统，用1ml/min的流量，洗2分钟左右，然后关机。
如果流动相中不含盐，则使用上述第三步清洗即可。
当固定相的极性大于流动相的极性时，可称为正相分配色谱或简称正相色谱.若固定相的极性小于流动相的极性时，可称为反相分配色谱或简称反相色谱.在用于正相色谱时，可使用如正己烷的低极性流动相，在用于反相色谱时，可使用甲醇或水的强极性流动相.正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。
这种填料做成的柱子就称为正相柱.反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相,常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等.这种填料做成的柱子就称为反相柱.正相柱和反相柱缘于，柱上固定相与流动相之间极性的对比。
若固定相极性大于流动相，为正相柱，反之，为反相柱。
通常为反相柱应用较多。
所有色谱均适用，包括纸色谱和薄层。
现在一般都用反相，正相在样品对水敏感等特殊情况下才使用。
正相的固定性是极性的，流动相是非极性的，适于分离强极性物质。
反相的固定性是非极性的，流动相是极性的，适于分离弱极性物质。
正相色谱柱与反相色谱柱的区别本质上是填料(固定相)的不同,正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强；反相色谱柱填料极性弱，洗脱顺序由强到弱。
以下是详细说明：1、正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。
正相柱和反相柱的溶剂
正相柱和反相柱的溶剂【原创实用版】目录1.引言2.正相柱和反相柱的定义和特点3.正相柱和反相柱所使用的溶剂类型4.溶剂选择对柱层析效果的影响5.结论正文一、引言在色谱分析中，柱层析是一种常用的分离技术。
根据固定相和流动相的极性关系，柱层析可以分为正相柱层析和反相柱层析。
正相柱层析中，固定相的极性大于流动相；反相柱层析则相反，流动相的极性大于固定相。
选择合适的溶剂对于柱层析效果至关重要。
本文将对正相柱和反相柱的溶剂进行探讨。
二、正相柱和反相柱的定义和特点正相柱层析是指在柱层析过程中，固定相的极性大于流动相。
这类柱层析通常采用极性溶剂作为流动相，如甲醇、乙醇等。
正相柱层析的优点是选择性高，对极性物质的分离效果较好。
反相柱层析则是指流动相的极性大于固定相。
这类柱层析通常采用非极性溶剂，如正己烷、乙腈等。
反相柱层析的优点是分离速度快，对非极性物质的分离效果较好。
三、正相柱和反相柱所使用的溶剂类型正相柱层析所使用的溶剂主要是极性溶剂，如甲醇、乙醇、水等。
这些溶剂能够更好地溶解极性物质，提高柱层析的分离效果。
反相柱层析所使用的溶剂主要是非极性溶剂，如正己烷、乙腈等。
这些溶剂对于非极性物质具有较好的溶解性，有助于提高柱层析的分离速度。
四、溶剂选择对柱层析效果的影响溶剂的选择对于柱层析效果具有重要影响。
在正相柱层析中，选择合适的极性溶剂可以提高对极性物质的分离效果；在反相柱层析中，选择合适的非极性溶剂可以提高对非极性物质的分离速度。
此外，溶剂的粘度和密度也会影响柱层析效果。
粘度较低、密度较大的溶剂可以提高柱层析的分离速度；粘度较高、密度较小的溶剂可以提高柱层析的分离效果。
五、结论总之，正相柱和反相柱的溶剂选择对于柱层析效果至关重要。
选择合适的溶剂可以提高对目标物质的分离效果和分离速度。
hplc色谱柱的选择
hplc色谱柱的选择
高效液相色谱（ HPLC）是一种广泛应用于分析化学领域的分离技术。
在（HPLC（分析中，色谱柱的选择是至关重要的，因为它直接影响分离效果和分析结果的准确性。
下面是一些选择（HPLC（色谱柱的要点：
1.（色谱柱类型：HPLC（色谱柱主要分为反相柱、正相柱和离子交换柱等类型。
根据待分析物的性质选择合适的色谱柱类型，例如，对于非极性化合物，通常选择反相柱；对于极性化合物，正相柱可能更合适。
2.（填料粒度：填料粒度越小，分离效率越高，但柱压也会相应增加。
一般来说，分析小分子化合物时选择细粒度填料，分析大分子化合物时选择粗粒度填料。
3.（柱子长度：柱子长度越长，分离效果越好，但分析时间也会延长。
根据分离要求和分析时间的限制选择合适的柱子长度。
4.（柱子内径：柱子内径越小，柱效越高，但柱压也会相应增加。
一般来说，分析小分子化合物时选择细内径柱子，分析大分子化合物时选择粗内径柱子。
5.（固定相：选择合适的固定相可以提高分离效果。
根据待分析物的性质选择合适的固定相，例如，对于非极性化合物，可以选择（C18（固
定相；对于极性化合物，可以选择硅胶固定相。
6.（品牌和价格：不同品牌的色谱柱质量和价格可能存在差异。
在选择色谱柱时，可以参考其他用户的评价和经验，选择性价比较高的产品。
在选择（HPLC（色谱柱时，需要综合考虑待分析物的性质、分离要求、分析时间和成本等因素。
如果对色谱柱的选择有疑问，可以咨询专业的色谱柱供应商或实验室技术人员。
色谱柱再生方法简介
高效液相柱是消耗品，会随使用时间或进样的次数增加，出现色谱峰高降低，峰宽加大或出现肩峰，柱效下降。
需要定期进行彻底清洗和再生。
1、反相柱
分别用甲醇：水＝90：10、纯甲醇、二氯甲烷等溶剂着流动相，依次冲洗，每种流动相流经色谱柱不少于20倍的色谱柱体积。
然后再以相反的次序冲洗。
2、正相柱
分别用正己烷、异丙醇、二氯甲烷、甲醇等溶剂做流动相，顺次冲洗，每种流动相流经色谱柱不少于20倍的柱体积（异丙醇粘度大，可降低流速，避免压力过高）。
注意使用溶剂的次序不要颠倒，用甲醇冲洗完后，再以相反的次序冲洗至正己烷。
所有的流动相必须严格脱水。
3、离子交换柱
长时间在缓冲溶液中使用和进样，将导致色谱柱离子交换能力下降，。
用稀酸缓冲溶液冲洗可以使阳离子柱再生，反之，用稀碱缓冲溶液冲洗可以使阴离子柱再生。
用户还可以选择能溶解柱内污染物的溶剂为流动相做正方向和反方向冲洗。
但再生后的色谱柱柱效是不可能恢复到新柱的水平的。
如果柱子装反了，可以调回来，但可能会造成柱内担体塌陷。
在不得已的情况下尽量不要反装色谱柱。
正相柱和反相柱的溶剂
正相柱和反相柱的溶剂1. 引言在分析化学中，正相柱和反相柱是常用的色谱柱类型。
它们在溶剂的选择上有一定的区别，本文将详细介绍正相柱和反相柱的溶剂选择及其原理。
2. 正相柱正相柱是指使用非极性固定相，极性溶剂作为流动相的色谱柱。
在正相色谱中，样品中的极性物质会与非极性固定相发生相互作用，从而分离出不同的组分。
2.1 溶剂的选择在正相色谱中，溶剂的选择至关重要。
一般来说，溶剂需要具有一定的极性，以与固定相发生相互作用。
常用的溶剂包括乙腈、甲醇、乙醇等。
需要注意的是，溶剂的纯度也会对色谱分离结果产生影响，因此应选择高纯度的溶剂。
2.2 溶剂的使用方法在正相色谱中，溶剂的使用方法也需要注意。
首先，溶剂应进行脱气处理，以去除其中的气泡和氧气，以免影响分离效果。
其次，溶剂的流速需要控制在一定范围内，过快的流速可能导致分离不完全，而过慢的流速则会延长分析时间。
此外，溶剂的温度也会对分离结果产生影响，应根据具体情况进行调节。
3. 反相柱反相柱是指使用极性固定相，非极性溶剂作为流动相的色谱柱。
在反相色谱中，样品中的非极性物质会与极性固定相发生相互作用，从而分离出不同的组分。
3.1 溶剂的选择在反相色谱中，溶剂的选择也非常重要。
一般来说，溶剂需要具有一定的非极性，以与固定相发生相互作用。
常用的溶剂包括乙腈、甲醇、异丙醇等。
同样地，溶剂的纯度也会对色谱分离结果产生影响，因此应选择高纯度的溶剂。
3.2 溶剂的使用方法在反相色谱中，溶剂的使用方法与正相色谱类似。
同样需要进行脱气处理，控制适当的流速和温度。
此外，对于某些特殊的样品，可能需要添加一些添加剂来改善分离效果，例如氨水或磷酸等。
4. 正相柱与反相柱的比较正相柱和反相柱在溶剂选择上有一定的区别，这导致了它们在分离效果上的差异。
正相柱适合分离极性物质，而反相柱适合分离非极性物质。
因此，在选择柱子和溶剂时，需要根据样品的性质和分离要求进行合理的选择。
此外，正相柱和反相柱的固定相也有所不同，这也会影响到分离效果。
色谱柱的保存
卡套柱的安装（加预柱） 卡套柱的安装（加预柱）
1．将卡套架套入柱芯 2．将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽， 使夹套高于柱芯（见左图） 3．将已套到柱芯上的卡套架向上 推，直至高过夹套片 4．将“子弹头”预柱放入卡套片 ．将“子弹头” 内 5．将卡套帽和卡套架旋在一起， 然后用手拧紧 6．然后依同样的顺序连接好柱子 的另一端 7．连接到液相色谱仪，PEEK接头 ．连接到液相色谱仪，PEEK接头 手拧即可；若为不锈钢接头应使 用专用扳手
色谱柱的老化
色谱柱安装和系统检漏工作完成后，就可以对色谱柱进行老化了。对 色谱柱升至一恒定温度，通常为其温度上限。特殊情况下，可加热至 高于最高使用温度10-20℃ 高于最高使用温度10-20℃左右，但是一定不能超过色谱柱的温度上限， 那样极易损坏色谱柱。当到达老化温度后，记录并观察基线。初始阶 段基线应持续上升，在到达老化温度后5 10分钟开始下降，并且会持 段基线应持续上升，在到达老化温度后5-10分钟开始下降，并且会持 续30-90分钟。当到达一个固定的值后就会稳定下来。如果在2-3小时 30-90分钟。当到达一个固定的值后就会稳定下来。如果在2 后基线仍无法稳定或在15-20分钟后仍无明显的下降趋势，那么有可能 后基线仍无法稳定或在15-20分钟后仍无明显的下降趋势，那么有可能 系统装置有泄漏或者污染。遇到这样的情况，应立即将柱温降到40℃ 系统装置有泄漏或者污染。遇到这样的情况，应立即将柱温降到40℃ 以下，尽快的检查系统并解决相关的问题。如果还是继续的老化，不 仅对色谱柱有损坏而且始终得不到正常稳定的基线。 一般来说，涂有极性固定相和较厚涂层的色谱柱老化时间长，而弱极 性固定相和较薄涂层的色谱柱所需时间较短。而PLOT色谱柱的老化 性固定相和较薄涂层的色谱柱所需时间较短。而PLOT色谱柱的老化 方法有各不相同。
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正相柱反相柱的使用特别注意HPLC使用过后的系统清洗：含有缓冲盐溶液的流动相的清洗方法：1、先用100%的纯水冲洗，打开排放阀，用3~5ml/min的流量，洗二十分钟左右后停泵。
此举主要是针对吸液系统、泵头、进出口单向阀等体积较大的空间的清洗2、再用95：5的甲醇/水清洗整个系统，关闭排放阀，用1ml/min的流量，洗30~60分钟后停泵。
此举主要是用水清洗整个系统中的盐，用5%的甲醇主要是为了保护色谱柱。
3、最后用100%的甲醇清洗整个系统，用1ml/min的流量，洗2分钟左右，然后关机。
如果流动相中不含盐，则使用上述第三步清洗即可。
当固定相的极性大于流动相的极性时，可称为正相分配色谱或简称正相色谱.若固定相的极性小于流动相的极性时，可称为反相分配色谱或简称反相色谱.在用于正相色谱时，可使用如正己烷的低极性流动相，在用于反相色谱时，可使用甲醇或水的强极性流动相.正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。
这种填料做成的柱子就称为正相柱.反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相,常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等.这种填料做成的柱子就称为反相柱.正相柱和反相柱缘于，柱上固定相与流动相之间极性的对比。
若固定相极性大于流动相，为正相柱，反之，为反相柱。
通常为反相柱应用较多。
所有色谱均适用，包括纸色谱和薄层。
现在一般都用反相，正相在样品对水敏感等特殊情况下才使用。
正相的固定性是极性的，流动相是非极性的，适于分离强极性物质。
反相的固定性是非极性的，流动相是极性的，适于分离弱极性物质。
正相色谱柱与反相色谱柱的区别本质上是填料(固定相)的不同,正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强；反相色谱柱填料极性弱，洗脱顺序由强到弱。
以下是详细说明：1、正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。
正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。
2、反向色谱反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。
反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。
样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。
色谱的正反相是根据固定相和流动相的相对极性比较而区分的。
一般情况如下：正相色谱：固定相极性大于流动相极性：常见的色谱柱有：硅胶色谱柱、氨基色谱柱、苯基色谱柱、氰基色谱柱等。
反相色谱：固定相极性小于流动相极性：常见的色谱柱有：C18色谱柱、C8色谱柱等。
“生化色谱网”在色谱方面非常专业，建议你去看看。
那里对色谱产品都按照“正相、反相”进行了区分。
你查一下就知道了。
正相色谱用的固定相通常为硅胶，以及其他具有极性官能团，如胺基团和氰基团的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基或其他团的极性较强，因此，分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小，即极性强弱的组份最先被冲洗出色谱柱。
正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如：正乙烷、氯仿、二氯甲烷等。
反相色谱填料常是以硅胶为基础，表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。
反相色色谱所使用的流动相极性较强，通常为水，缓冲液与甲醇，已腈等混合物。
样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合最先被冲出，而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反相填料有C18、C8、C4、C6H5等。
反相色谱切换正相色谱流程：1、先将色谱柱用相应的溶剂冲洗干净，然后将色谱柱拆下来密封保存。
用双通将进样器与检测器连接。
2、将贮液瓶内装入300ml的二次蒸馏水，将流速渐次提高到2.0ml/min冲洗系统1.5h。
注意观察泵压。
3、将流速渐次降到0ml/min，把二次蒸馏水更换为甲醇，，将流速渐次提高到2.0ml/min冲洗系统1h。
4、用同样的方法将甲醇更换为异丙醇、四氢呋喃，各冲系统1h。
5、最后将四氢呋喃更换为预先配制好的流动相冲系统1h，同时将柱塞杆清洗系统内的10%异丙醇更换为流动相，保持50-60滴/min的速度清洗柱塞杆。
再将双通更换为正相色谱柱，待色谱柱平衡好以后就可分析样品了。
请问正相色谱柱与反相色谱柱都有什么区别？在使用过程中，各需要注意哪些方面？另外，本人有一根正相的NH2柱，之前由于误用，使用甲醇和水作流动相，至今里面仍然残留有甲醇和水，但我现在想用乙腈和正己烷作流动相，请问如何才能把柱子里面残留的甲醇清洗掉？高效液相色谱法中反相柱的清洁和再生反相色谱是迄今在高效液相色谱中应用最广泛的技术，主要是因为它适用于分析极大多数的非极性物质和很多的可离子化的及离子化合物。
大多数用于反相色谱的固定相都是天然的疏水物质，因此，分析物是按照它们与固定相的疏水相互作用的大小来分离的，含有疏水的机制也能以同样的保留方式分离。
固定相上还有少数物质，如混合相（例如苯基－己基）、末端封闭和非末端封闭种类和极性嵌入相－也存在于这些键合硅胶上。
还有很多填料用于反相色谱，包括聚合物，聚合物表面涂上硅胶和氧化铝，无机－有机混合物，涂层氧化锆，和石墨化碳。
不同种类的固定相有他们自己的优点和缺点。
反相色谱柱利用各种流动相和添加物可以有很多的应用。
一些技术利用添加物可以改变或修饰填料的表面。
有时候这些添加物有可能会污染键合相表面。
硅胶表面因为有着疏水键合相而有一些别的化学性质。
残留的硅烷醇存在于所有的硅胶键合填料中。
这些硅烷醇具有弱酸性，因此能与某些待分析物合基质成分，特别是碱性成分。
因为硅烷醇的pKa值大约是4.5，离子化能在中性pH条件下发生因此与阳离子产生静电相互作用就有可能发生。
较老的A型硅胶能容纳高浓度金属离子（有时候100ppm或更多），而这能使硅胶表面的酸性更大甚至能发生金属鳌合现象或清除一些化合物。
残留硅烷醇在非末端封闭的硅胶合短链键合相如C2或C4上更让人烦恼。
使用者必须清楚他们所用的固定相表面特殊性质和可能的分析物－固定相表面的相互作用，这样当他们使用反相方法时才能考虑到可能的基质相互作用。
例如，非常疏水的样品基质如玉米油，高芳香物质，和蜡能粘住固定相装填表面并且改变他们的性质。
含有蛋白质物质的生物流体也能吸附在装填表面。
尽管分析者想尽最大努力来保护HPLC柱子，某些分析物－基质污染能使固定相受到有害的影响。
当柱子被污染，它的色谱行为和没被污染的柱子会有些不同。
被污染的柱子能产生反压问题。
被污染的反相柱子必须清洗和再生才能恢复原来的操作条件。
这部分的"柱子观察"将讨论可行的方法使柱子回复原来的或差不多原来的状态。
因为键合硅胶柱子是最受欢迎的，我重点讲述这种柱子。
最后，我将讨论别的反相柱子的清洁步骤。
什么导致反相柱子污染产生？通常，样品中含有一些对分析者来说不感兴趣的东西。
盐、脂质、含脂物质、腐质酸、疏水蛋白质和其它一些生物物质是一些可能在使用时与HPLC柱发生相互作用的物质。
这些物质有比分析者的目标物或少或大的保留值。
那些保留值较小的物质如盐类一般来说在空体积时就被冲出色谱柱。
这些非目标产物的干扰能被检测器检测到而且能形成色谱峰，气泡，基线上移或者是负峰。
如果样品成分在柱子中有很强的保留而且流动相溶液成分不足以把这些物质洗脱下来，多次上样后，这些吸附在柱子表面的物质通常就会积累在柱头。
这些行为通常只有通过平行实验才能发现。
有着中等保留值的样品能被缓慢洗出而且表现为宽峰，基线扰动，或者基线漂移。
有时候这些被吸附的样品成分累积到一定程度足以使他们开始形成新的固定相。
分析物能与这些杂质作用形成一定的分离机理。
保留时间会波动，拖尾会出现。
如果足够的污染产生，柱子的反压能超过泵所能承受的最大压力，使柱子无法工作以及在堵塞处产生空体积。
清洗硅胶键合柱子再生被污染HPLC柱子的关键是知道污染物的性质并且能找到适当的溶剂来去除。
如果污染是因为重复进样时强保留物质的累积引起的，利用简单的步骤来除去这些污染物往往能恢复其色谱行为。
有时候，经过多次操作以后的色谱柱用90～100％的溶剂B（双溶剂反相系统中较强的溶剂）冲洗20个体积可以清除污染物。
例如，柱子中残留的脂质就能用非水溶剂如甲醇、乙晴、四氢呋喃。
如果你使用的是缓冲液系统，不要直接切换到强溶剂，突然转换到高浓度有机溶剂可能会使HPLC流动体系中的缓冲液沉淀，这样会导致更大的问题如柱头堵塞、管道堵塞、泵泄漏、活塞损伤或进样阀转轴失灵。
应该先用无缓冲流动相（即把缓冲液换成水）。
冲洗5～10个体积以后才更换强溶剂。
有时候，强溶剂也没法把残留在色谱柱上的污染物洗掉。
那么更强的溶剂或者是一系列溶剂就有必要用来清洗柱子了，如果污染物是非生物物质，使用者可以跳过一个或多个另外的有机溶剂去除污染物。
溶剂与溶剂之间的组合有很多。
到柱子厂家的网页上能找到推荐的溶剂系统。
一般来说，所有的清洗方法都有类似的形式。
所用的溶剂都是随溶剂强度增加，经常最后一个溶剂是非常疏水的（如醋酸乙酯甚至是烃），可以用来溶解非极性物质如脂质和油类。
我们必须保证一系列溶剂中每个溶剂都能与下一个溶剂互混。
清洗过程要结束时，必须借助一个中等强度能互混的溶剂而回到原始溶剂系统。
例如，异丙醇是一个非常好的作为中间步骤的溶剂，因为它能与正己烷或二氯甲烷互溶又能与水相溶剂互溶。
但是异丙醇粘度非常大，必须确保较低的流速以免使泵压过高。
当然，如果使用紫外检测器的话，避免溶剂在紫外区域有吸收，要不然需使用大量的溶剂冲洗才能使基线平稳。
对于典型的硅胶键合柱来说如果没有缓冲溶液的话推荐使用以下溶剂系列：100％甲醇100％乙晴75％乙晴－25％异丙醇100％异丙醇100％二氯甲烷100％正己烷用二氯甲烷或正己烷以后，由于溶剂相容性柱子必须用异丙醇冲洗后才能用原来的水相溶剂。
每种溶剂至少冲洗10个柱体积。
如250mm×4.6mmHPLC 分析柱，分析者可以用1～2ml/min的流速来冲洗，要回复原来的溶剂体系，不需要每一步都冲洗，可以跳过中间步骤。
中间步骤推荐使用异丙醇，然后用没有缓冲的流动相，最后回复起始流动相配置。
四氢呋喃是另外一种比较受欢迎的去除污染的溶剂。
如果使用者怀疑柱子被严重污染，可以二甲基亚砜（DMSO）或者二甲基甲酰铵和水按50：50的比例混合用低于0.5ml/min的流速流过色谱柱。