正相色谱柱的使用
OD-H色谱柱使用注意事项
Q：正相手性色谱柱使用前需要注意什么?A：将正相手性色谱柱AD-H、AS-H、OD-H、OJ-H接上液相色谱仪之前先要保证液相色谱系统中的所有管路均为正相流动相。
如果液相系统里面是反相溶液，比如水/乙腈=50/50(v/v)。
那么需要先用无水乙醇或者无水异丙醇冲洗液相的所有管路（包括所有溶剂入口、六通阀、检测器等），然后用正相流动相冲洗液相的所有管路，最后再接上正相手性色谱柱；如果液相系统的反相流动相中含有缓冲盐，要先用纯水冲洗HPLC系统，然后用无水乙醇或者无水异丙醇冲洗液相的所有管路，最后用正相流动相冲洗。
Q：正相手性色谱柱中保存液是什么?A：正相手性色谱柱AD-H、AS-H、OD-H、OJ-H中的保存液是正己烷/异丙醇=90/10(v/v)。
其它手性色谱柱的保存液请查阅使用说明书上的说明。
Q：新柱CHRALPAK IA和CHRALPAK IB与原来的大赛璐手性柱有什么区别？A：CHRALPAK IA和CHRALPAK IB是将多糖衍生物共价键合在硅胶上，而大赛璐原来的手性柱固定相都是将多糖衍生物涂敷在硅胶表面的。
正因为是共价键合，所以CHRALPAK IA和CHRALPAK IB柱能使用任何液相流动相，比如四氢呋喃、氯仿、丙酮、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯等。
CHRALPAK IA和CHRALPAK IB与大赛璐原有的正相柱相比，扩大了溶剂选择的范围，增加了新的分离选择性，在原来大赛璐手性色谱柱上分不开的化合物有可能在CHRALPAK IA和CHRALPAK IB上得以分开。
Q：CHIRALPAK AD-H、CHIRALPAK AS-H、CHIRALCEL OD-H、CHIRALCEL OJ-H四款正相色谱柱的区别是什么？A：区别是固定相的种类不同。
CHIRALPAK AD-H、AS-H的硅胶表面涂敷的是直链淀粉衍生物；CHIRALCEL OD-H、OJ-H的硅胶表面涂敷的是纤维素衍生物。
CHIRALPAK AD-H的硅胶表面涂敷的是直链淀粉－三(3,5－二甲苯基氨基甲酸酯)；CHIRALPAK AS-H硅胶表面涂敷有直链淀粉-三[(S)-α-甲基苄基氨基甲酸酯；CHIRALCEL OD-H硅胶表面涂敷有纤维素-三[3,5-二甲苯基氨基甲酸酯]; CHIRALCEL OJ-H硅胶表面涂敷有纤维素-三[4-甲基苯甲酸酯]。
色谱柱使用手册
正相、反相和极性胶联柱使用手册分类:质量检验 2007.3.22 22:20 作者：LAI | 评论：0 | 阅读：146正相、反相和极性胶联柱使用手册Chrompack HPLC Normal-,Reversed phase and Polar bonded columns 注意:此色谱柱填充的是改性硅胶材料。
向柱内导入碱性溶剂（pH>7.0）或酸性溶剂（pH<2.0）会导致柱子损坏。
在使用这个柱子之前，你要充分地熟悉这本手册讲述的内容。
未正确地使用不能享受保修待遇。
1．简介此柱填充的是反相或者极性胶联型态的硅胶基质材料的硅胶。
硅胶形态的柱子用于正相（非水）条件。
反相（C8，C18，ODS，RP-8和RP-18）通常用于反相条件（水相）。
极性胶联型（APS，diol，CN和NH2）依照应用目的，可以用于正相和反相条件。
建议不要将一个相同的柱子用于差别非常大的条件下，这是因为柱子在特定的条件下，固定相的性质会发生变化，所以在其他的条件下，会影响柱效。
也不建议将硅胶柱用在反相条件下或者将方向柱用在正相条件下，这是因为这种过程会发生重复性差的问题（每一次注射之间和柱与柱之间的比较）。
2．色谱柱老化在开始分析工作以前，柱子必须经过正确的老化。
一个没有正确老化的柱子可能会带来问题，诸如很差的柱效或者分离情况发生变化等等。
A．在反相条件下老化要老化这类柱子，首先要使用乙腈或者甲醇淋洗，然后你选用的洗脱液进行平衡。
在发货以前，每根柱子都已经测试过并进行了老化。
因此没有必要在第一次使用时用水冲洗）。
如果流动相中使用了添加物（例如缓冲液或离子对试剂），建议使用正确比例的但不含此添加物的流动相进行缓冲冲洗。
缓冲冲洗应当首先以低流速进行，最后再使用正常流速。
B．在正相条件下老化柱效可能会受水与固定相的键合的严重影响。
柱子的干燥（激活）或润湿（失活）可能是需要的。
使用的溶剂可能是水饱和的或者是无水的。
干燥柱子可以使用无水的二氯甲烷。
正相色谱柱的使用
0.10 mL 0.06 mL 0.03 mL
平衡时间 流速
1.0 mL/min
5 min 3 min 1.5 min 15 min 平2衡5m时i间n 流速 0.2 mL/min5 min 3 min 1.来自 min1.0mL/min
60 sec 36 sec 18 sec
单次样品运行时间 = 分析时间 + 色谱柱平衡时间 色谱柱平衡时间 = 10倍柱内体积 ÷ 流•. 速
•.
附录：色谱柱柱内体积和平衡时间
色谱柱 尺寸 (mm)
4.6 x 50 4.6 x 30 4.6 x 15 4.6 x 150 4色.6谱x柱250 尺寸 (mm)
2.1 x 50 2.1 x 30 2.1 x 15
柱内 体积 (Vm)
0.5 m 0.3 mL 0.15 mL 1.54 mL 2柱.5内7 mL 体积 (Vm)
分离模式的选择
分子量<2000 样品
溶于有机溶剂 溶于水
溶于正己烷 溶于甲醇或甲醇/水 或乙腈或乙腈/水
溶于四氢呋喃
非离子化
离子化
分子量>2000
溶于有机溶剂 溶于水
•.
用硅胶的正相模式 用键合相的正相模式
用键合相的反相模式 用键合相的反相模式 低分子凝胶渗透色谱 用键合相的反相模式
抑制电离反相键合相色谱 离子对键合相的反相模式
一些厂家就用纯甲醇封柱。
2、异丙醇过渡：粘度大高柱压；小流速：0.2mL·min-1；先 流路后过柱；约0.5h后换上流动相；若有缓冲盐，则应先 用不含盐的同比例的流动相过柱，避免析出。
•.
氨基柱柱效检测
流动相：10％乙酸乙酯＋90％正己烷 流速：1.0mL·min-1 标准溶液：乙苯（或甲苯）＋苯甲酸甲酯 检测波长：254nm 参考(标准JB5226-91)液相色谱仪测试用标准色谱 柱
正相色谱柱的使用
正相色谱柱的使用首先，正相色谱柱的使用要根据样品性质来选择合适的柱型和填料。
常用的填料有C18、C8等，它们基本为非极性填料。
对于极性物质的分离，可以选择相应的极性色谱柱，如氨基柱。
其次，使用前需要对色谱柱进行开通。
开通的方式通常是用纯溶剂或样品溶液通过色谱柱，去除填料中的杂质和残留溶剂。
开通过程需要注意的是溶液流速不宜过大，以免发生柱堵塞或柱床破裂。
在进行色谱操作时，首先将样品溶液通过进样装置注入色谱柱，然后使用固定相流动相进行洗脱。
流动相的选择要根据样品性质来确定，一般采用有机溶剂与水的混合溶液。
需要注意的是，流动相的组成要提前优化，以获得最佳的分离效果。
在色谱柱操作过程中，需要控制流速和压力，避免流速过快或压力过高造成柱床破裂。
同时，还需注意保持恒定的温度，避免温度变化导致分离效果的不稳定。
在柱床渗透性变差时，需要及时进行柱床再生。
常用的再生方法有反冲洗法和溶剂再生法。
反冲洗法是将一定量的洗脱溶液按反向通入色谱柱，去除堆积在柱床中的杂质。
溶剂再生法是将无机溶剂或有机溶剂按一定比例混合，在一定流速下通过柱床，将堆积在柱床中的杂质溶解出来。
使用结束后，需要对色谱柱进行保存和维护。
首先应用纯溶剂将色谱柱洗净，去除残留样品和溶剂。
然后将色谱柱用纯溶剂封存，防止填料干燥或被污染。
在下次使用前，需要将色谱柱再次开通，确保柱床的洁净程度。
总结起来，正相色谱柱的使用需要根据样品性质选择合适的柱型和填料，并进行适当的开通。
在色谱操作过程中，需要控制流速、压力和温度，以获得最佳分离效果。
柱床渗透性变差时需要进行柱床再生，使用结束后要进行适当的保存和维护。
通过正确的使用方法和注意事项，正相色谱柱能够有效地帮助实验人员进行样品的分离和纯化。
色谱柱的使用说明
1、色谱柱的使用说明：（1）色谱柱使用前注意事项：色谱柱的储存液无特殊说明，均为评价报告所示的流动相。
在使用前，一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。
在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出，堵塞色谱柱。
（2）流动相：流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯，配流动相的水最好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。
如果将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。
另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。
以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0-8.0，BDS C18适合于碱性化合物，PH值适用范围为2.0-10.0。
当必须要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时，每次使用结束后立即用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗，并完全置换掉原来所使用的流动相。
（3）样品：样品也要尽可能清洁，可选用样品过滤器或样品预处理柱（SPE）对样品进行预处理；若样品不便处理，要使用保护柱。
在用正相色谱法分析样品时，所有的溶剂和样品应严格脱水。
2、色谱柱的保存（1）反相色谱柱每天实验后的保养：使用缓冲液或含盐的流动相，实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。
注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。
（2）长期保存色谱柱：如色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度最好是室温。
3、色谱柱的再生因为色谱柱是消耗品，随着使用时间或进样次数的增加，会出现色谱峰高降低，峰宽加大或出现肩峰的现象，一般来说可能是柱效下降。
正相色谱柱的使用方法
正相色谱柱的使用方法正相色谱柱是化学分析领域中常用的分离技术之一，常用于化学试剂、生化制剂、化妆品等领域的研究工作中。
正因为其分离效果好、分离速度快、易于操作等特点，所以被广泛应用于科研、生产以及质量控制等方面。
在正相色谱柱的使用方面，有以下注意事项和使用方法。
注意事项选择柱子的密度首先，在购买正相色谱柱的时候，应该注意柱子的密度，密度高的柱子用于分离效果好的样品，密度低的柱子用于分离效果较差的样品。
同时，需要根据待分离的样品选择柱子的尺寸，以确保样品能完全覆盖柱子，从而获得更好的分离效果。
洗涤和保护正相色谱柱在使用之前和之后需要进行洗涤和保护工作，以保证柱子的稳定性和使用寿命。
洗涤方法基本都是相同的，主要采用纯水、乙醇、乙醚等有机溶剂进行清洗，在保证安全的情况下可以适当增加清洗强度，如采用强酸和强碱进行清洗。
在使用过程中，应该尽量避免高温和酸碱性物质的接触，这样可以有效地延长柱子的使用寿命。
储存方法正相色谱柱在存储过程中需要注意防潮、防晒，同时避免跌落和挤压等情况的发生。
储存的环境应该稳定，通风良好，温度在4-30℃之间，相对湿度不超过60%。
使用方法样品制备在使用正相色谱柱进行分离操作之前，需要对待分离的样品进行制备。
首先应该将样品溶解于合适的溶剂中，然后进行过滤和净化工作，以保证样品的纯度和稳定性。
实验条件设置在对样品进行分离的过程中，需要根据不同的实验目的和样品特性，分别设计不同的实验条件。
这些条件包括上样量、流速、温度、溶剂性质和比例等方面。
柱色调节在正相色谱柱使用的过程中，柱色的调节也是非常重要的一环。
根据柱子的类型和实验需要，可以通过调整柱子的机械位置或者采用外接装置，对流速、温度和压力等进行控制和调整。
数据分析在实验完成之后，需要对得到的数据进行分析和处理，评价分离的效果和柱子的稳定性。
数据处理方面需要恰当地选择评价指标和数据处理方法，以减少实验误差，提高分析的准确性和可靠性。
总结正相色谱柱在使用前和使用后需要进行洗涤和保护工作，在存储过程中需要注意防潮、防晒，同时避免跌落和挤压等情况的发生。
大赛璐手性柱AD-H、OD-H操作常见问题及解决办法
大赛璐手性柱AD-H 、OD-H 操作常见问题及解决办法1. 正相手性色谱柱AD-H 、OD-H 使用前需要注意什么?将正相手性色谱柱AD-H 、AS-H 、OD-H 、OJ-H 接上液相色谱仪之前先要保证液相色谱系统中的所有管路均为正相流动相。
如果液相系统里面是反相溶液，比如水/乙腈=50/50(v/v) 。
那么需要先用无水乙醇或者无水异丙醇冲洗液相的所有管路(包括所有溶剂入口、六通阀、检测器等)，然后用正相流动相冲洗液相的所有管路，最后再接上正相手性色谱柱；如果液相系统的反相流动相中含有缓冲盐，要先用纯水冲洗HPLC 系统，然后用无水乙醇或者无水异丙醇冲洗液相的所有管路，最后用正相流动相冲洗。
2.正相手性色谱柱中保存液是什么?正相手性色谱柱AD-H 、AS-H 、OD-H 、OJ-H 中的保存液是正己烷/ 异丙醇=90/10(v/v) 。
其它手性色谱柱的保存液请查阅使用说明书上的说明。
3■新柱CHRALPAK IA 和CHRALPAK IB 与原来的大赛璐手性柱有什么区别？CHRALPAK IA 和CHRALPAK IB 是将多糖衍生物共价键合在硅胶上，而大赛璐原来的手性柱固定相都是将多糖衍生物涂敷在硅胶表面的。
正因为是共价键合，所以CHRALPAK IA 和CHRALPAK IB 柱能使用任何液相流动相，比如四氢呋喃、氯仿、丙酮、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯等。
CHRALPAK IA 和CHRALPAK IB 与大赛璐原有的正相柱相比，扩大了溶剂选择的范围，增加了新的分离选择性，在原来大赛璐手性色谱柱上分不开的化合物有可能在CHRALPAK IA 和CHRALPAK IB 上得以分开。
4. CHIRALPAK AD-H 、CHIRALPAK AS-H 、CHIRALCEL OD-H 、CHIRALCEL OJ-H 四款正相色谱柱的区别是什么？区别是固定相的种类不同。
CHIRALPAK AD-H 、AS-H 的硅胶表面涂敷的是直链淀粉衍生物；CHIRALCEL OD-H 、OJ-H 的硅胶表面涂敷的是纤维素衍生物。
大赛璐手性柱AD-H、OD-H操作常见问题及解决办法
大赛璐手性柱AD-H、OD-H操作常见问题及解决办法1.正相手性色谱柱AD-H、OD-H使用前需要注意什么?将正相手性色谱柱AD-H、AS-H、OD-H、OJ-H接上液相色谱仪之前先要保证液相色谱系统中的所有管路均为正相流动相。
如果液相系统里面是反相溶液，比如水/乙腈=50/50(v/v)。
那么需要先用无水乙醇或者无水异丙醇冲洗液相的所有管路（包括所有溶剂入口、六通阀、检测器等），然后用正相流动相冲洗液相的所有管路，最后再接上正相手性色谱柱；如果液相系统的反相流动相中含有缓冲盐，要先用纯水冲洗HPLC系统，然后用无水乙醇或者无水异丙醇冲洗液相的所有管路，最后用正相流动相冲洗。
2.正相手性色谱柱中保存液是什么?正相手性色谱柱AD-H、AS-H、OD-H、OJ-H中的保存液是正己烷/异丙醇=90/10(v/v)。
其它手性色谱柱的保存液请查阅使用说明书上的说明。
3.新柱CHRALPAK IA和CHRALPAK IB与原来的大赛璐手性柱有什么区别？CHRALPAK IA和CHRALPAK IB是将多糖衍生物共价键合在硅胶上，而大赛璐原来的手性柱固定相都是将多糖衍生物涂敷在硅胶表面的。
正因为是共价键合，所以CHRALPAK IA和CHRALPAK IB柱能使用任何液相流动相，比如四氢呋喃、氯仿、丙酮、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯等。
CHRALPAK IA和CHRALPAK IB与大赛璐原有的正相柱相比，扩大了溶剂选择的范围，增加了新的分离选择性，在原来大赛璐手性色谱柱上分不开的化合物有可能在CHRALPAK IA和CHRALPAK IB上得以分开。
4.CHIRALPAK AD-H、CHIRALPAK AS-H、CHIRALCEL OD-H、CHIRALCEL OJ-H四款正相色谱柱的区别是什么？区别是固定相的种类不同。
CHIRALPAK AD-H、AS-H的硅胶表面涂敷的是直链淀粉衍生物；CHIRALCEL OD-H、OJ-H的硅胶表面涂敷的是纤维素衍生物。
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色谱柱的分类
按固定相 作用性质
分类
高效反相液相色谱柱 高效正相液相色谱柱 高效亲水液相色谱柱 高效离子交换液相色谱柱 InnovationTM高效多功能液相色谱柱 高效手性液相色谱柱 高效GPC凝胶液相色谱柱
高效Hilic液相色谱柱
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色谱柱的rO2柱等
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附录：色谱柱柱内体积和平衡时间
色谱柱 尺寸 (mm)
4.6 x 50 4.6 x 30 4.6 x 15 4.6 x 150 4色.6谱x柱250 尺寸 (mm)
2.1 x 50 2.1 x 30 2.1 x 15
柱内 体积 (Vm)
0.5 m 0.3 mL 0.15 mL 1.54 mL 2柱.5内7 mL 体积 (Vm)
0.10 mL 0.06 mL 0.03 mL
平衡时间 流速
1.0 mL/min
5 min 3 min 1.5 min 15 min 平2衡5m时i间n 流速 0.2 mL/min
5 min 3 min 1.5 min
1.0mL/min
60 sec 36 sec 18 sec
单次样品运行时间 = 分析时间 + 色谱柱平衡时间 色谱柱平衡时间 = 10倍柱内体积 ÷ 流. 速
抑制电离反相键合相色谱 离子对键合相的反相模式
用硅胶的正相模式 离子交换模式 凝胶渗透色谱 凝胶过滤色谱
大孔填料的离子交换模式 用大孔填料的反相模式
正相色谱
正相吸附色谱
极性:固定相 > 流动相
固定相 - 极性 流动相(己烷, 庚烷)- 非极性 极性物质后出峰
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正相色谱柱的特点
正相色谱比反相色谱柱压低 使用的溶剂容易旋蒸除去 吡咯等蒸发性溶剂彻底改善了碱性有 机化合物在B型球形硅胶, Diol和PEG 正相液相色谱柱上的峰形。
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色谱柱再生（除水再生）
诸如保留时间漂移等选择性改变的一些色谱症状，可以归 因除于水方固案定：相用的含改2变.5，%但二是甲填氧料基可丙能烷还（是di完me好th的ox。yp这ro是pa因ne 为参）正数和相，2色.5大谱%部固冰分定醋溶相酸剂的的都水正内分己含含烷有量冲小常洗部常色分是谱的个柱溶影3解0响个水选柱分择体性，积的柱，关子可键在以 长去期除使色用谱后柱吸中附水的分水并分恢使复柱色效谱下柱降原，来此或时所应需除要水的使选柱择效性恢 复。
正相液相色谱柱的使用与维护
色谱柱分类 正相色谱柱活化
色谱柱冲洗与再生
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分离模式的选择
分子量<2000 样品
溶于有机溶剂 溶于水
溶于正己烷 溶于甲醇或甲醇/水 或乙腈或乙腈/水
溶于四氢呋喃
非离子化
离子化
分子量>2000
溶于有机溶剂 溶于水
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用硅胶的正相模式 用键合相的正相模式
用键合相的反相模式 用键合相的反相模式 低分子凝胶渗透色谱 用键合相的反相模式
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氰基柱的使用
氰基柱作反相色谱，操作和维护和C18柱完全相同 ， 氰但基是柱与用氨于基正柱相一使样用，时反没相什使么用问时题-，NH当2与柱-子CN使会用水一解定。 时尤间其后，pH柱在效1.下5-7降.0，范老围化以，外这可种按极如端下酸清性洗或方碱法性恢条复件柱下 性柱能寿。命清会洗下时降依很次快用，10使倍用柱时体应积注的意下。列溶液冲洗：氯 仿、异丙醇、二氯甲烷再走流动相即可。
一些厂家就用纯甲醇封柱。
2、异丙醇过渡：粘度大高柱压；小流速：0.2mL·min-1；先 流路后过柱；约0.5h后换上流动相；若有缓冲盐，则应先 用不含盐的同比例的流动相过柱，避免析出。
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氨基柱柱效检测
流动相：10％乙酸乙酯＋90％正己烷 流速：1.0mL·min-1 标准溶液：乙苯（或甲苯）＋苯甲酸甲酯 检测波长：254nm 参考(标准JB5226-91)液相色谱仪测试用标准色谱 柱
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色谱柱的分类
按柱子尺 寸分类
毛细管柱 微柱 窄径柱 常规柱 半制备柱 制备柱
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正相液相色谱柱
1、氨基柱 2、硅胶柱 3、氰基柱 4、Diol柱
正反相使 用均可
绝不可沾 水
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正相色谱柱的活化
活化注意要点： 1、保存溶剂：一般正相新柱出厂是用95%的正己烷：5%乙
醇或纯异丙醇或正己烷保存； 例外：比如氰基柱既可以用作正相柱，也可以用作反相柱，
此方法同时适用氰 基柱、硅胶柱
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氨基柱使用后冲洗
正相条件适用后： 首先50倍柱体积异丙醇（注意低流速） 其次50倍柱体积甲醇 最后异丙醇过渡到正相流动相条件
柱子长期不用的情况下，冲洗干净后用异丙醇或者 正己烷保存。
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色谱柱再生
柱子使用一定时间后：柱效下降、老 化，可以用以下方法清洗柱子恢复柱 性能
方案1：依次用甲醇、异丙醇、氯仿、正己烷 、氯仿、异丙醇、甲醇冲柱子（各以 0.5ml/min的流速，20倍柱体积），再换流动 相
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色谱柱再生
方案2：清洗时依次用10倍柱体积的下列溶液冲 洗：95％水/5％乙腈 THF四氢呋喃 95％乙腈/5 ％水 再走流动相即可
若反相使用后柱效下降再生冲洗方法同上过程，并保 持95％乙腈/5％水继续冲洗，以低流速0.2-0.5mL/min 过夜冲洗