正相色谱使用手册
正相色谱和反相色谱
正相色谱和反相色谱正相色谱（Normal Phase Chromatography）正相色谱是一种将物质分离的方法，是一种基于极性差异的液相色谱法。
所谓正相色谱，是因为在正相色谱柱中，填充物通常是一些极性较高的固体相，例如硅胶（silica gel）和氧化铝（alumina）等。
正相色谱柱可以分离无电荷的极性化合物，例如一些羟基化合物和醇类分子。
在正相色谱中，毒理学家可以分离和鉴定一些有机物。
反相色谱（Reverse Phase Chromatography）反相色谱是一种将物质分离的方法，是一种基于亲疏水性质差异的液相色谱法。
所谓反相色谱，是因为在反相色谱柱中，填充物通常是由一个疏水的固体相组成，例如碳颗粒、聚合物等。
反相色谱柱可以分离各种极性分子，例如对有机药物、蛋白质、核酸等进行分离和纯化。
毒理学家可以使用反相色谱技术进行药物开发和毒性评估。
正相色谱和反相色谱之间的不同在正相色谱中，爱保者可以利用样品和固相之间的极性差异来分离和纯化物质。
正相色谱通常用于分离和纯化极性药物和天然产物，如氨基酸，多肽和糖。
在反相色谱中，爱保者利用样品和固相之间的非极性差异来分离和纯化化合物。
反相色谱通常用于分离和纯化疏水药物和天然产物，如脂肪酸，核酸和激素。
正相色谱和反相色谱在毒理学中的应用正相色谱和反相色谱都广泛应用于毒理学，尤其是药物开发和毒性评估。
毒理学家可以利用这些技术来分离和纯化化合物。
毒理学家应用表面增强拉曼光谱（surface-enhanced Raman spectroscopy，SERS）联用反相色谱分离和纯化天然产物，从而破解其分子结构。
结论正相色谱和反相色谱是两种最常用的色谱技术之一，它们是一种高效的分离和纯化化合物的方法。
在毒理学研究和药物开发中，正相色谱和反相色谱可广泛应用。
我们期待在今后研究中看到更多正相色谱和反相色谱的应用，以便更好地了解各种疾病和药物与人体的相互作用。
正相色谱和反相色谱的定义
正相色谱和反相色谱的定义
正相色谱和反相色谱是色谱分析中常用的两种分离模式。
正相色谱是指在色谱柱中使用带有亲水性固定相的柱子，以分离非极性或弱极性化合物。
在正相色谱中，样品中的化合物会被固定相中的极性官能团吸附，然后通过改变流动相中的极性或极性溶剂浓度，使吸附在固定相中的化合物逐渐被洗脱出来。
正相色谱常用于分离脂肪族化合物、芳香族化合物和天然产物等非极性或弱极性化合物。
反相色谱则是在色谱柱中使用带有疏水性固定相的柱子，以分离极性化合物。
在反相色谱中，样品中的化合物会被固定相中的疏水性官能团吸附，难以通过流动相中的极性溶剂洗脱出来。
因此，通常需要改变流动相中的疏水性或疏水溶剂浓度来实现分离。
反相色谱常用于分离极性化合物，如氨基酸、核苷酸、药物和天然产物等。
色谱柱使用手册
正相、反相和极性胶联柱使用手册分类:质量检验 2007.3.22 22:20 作者：LAI | 评论：0 | 阅读：146正相、反相和极性胶联柱使用手册Chrompack HPLC Normal-,Reversed phase and Polar bonded columns 注意:此色谱柱填充的是改性硅胶材料。
向柱内导入碱性溶剂（pH>7.0）或酸性溶剂（pH<2.0）会导致柱子损坏。
在使用这个柱子之前，你要充分地熟悉这本手册讲述的内容。
未正确地使用不能享受保修待遇。
1．简介此柱填充的是反相或者极性胶联型态的硅胶基质材料的硅胶。
硅胶形态的柱子用于正相（非水）条件。
反相（C8，C18，ODS，RP-8和RP-18）通常用于反相条件（水相）。
极性胶联型（APS，diol，CN和NH2）依照应用目的，可以用于正相和反相条件。
建议不要将一个相同的柱子用于差别非常大的条件下，这是因为柱子在特定的条件下，固定相的性质会发生变化，所以在其他的条件下，会影响柱效。
也不建议将硅胶柱用在反相条件下或者将方向柱用在正相条件下，这是因为这种过程会发生重复性差的问题（每一次注射之间和柱与柱之间的比较）。
2．色谱柱老化在开始分析工作以前，柱子必须经过正确的老化。
一个没有正确老化的柱子可能会带来问题，诸如很差的柱效或者分离情况发生变化等等。
A．在反相条件下老化要老化这类柱子，首先要使用乙腈或者甲醇淋洗，然后你选用的洗脱液进行平衡。
在发货以前，每根柱子都已经测试过并进行了老化。
因此没有必要在第一次使用时用水冲洗）。
如果流动相中使用了添加物（例如缓冲液或离子对试剂），建议使用正确比例的但不含此添加物的流动相进行缓冲冲洗。
缓冲冲洗应当首先以低流速进行，最后再使用正常流速。
B．在正相条件下老化柱效可能会受水与固定相的键合的严重影响。
柱子的干燥（激活）或润湿（失活）可能是需要的。
使用的溶剂可能是水饱和的或者是无水的。
干燥柱子可以使用无水的二氯甲烷。
反相色谱切换为正相色谱操作步骤
反相色谱切换为正相色谱操作步骤
a先将色谱柱用相应的溶剂冲洗干净，然后将色谱柱拆下来密封保存。
用双通将进样器与检测器连接。
b将贮液瓶内装入300ml的二次蒸馏水，将流速渐次提高到2.0ml/min冲洗系统1.5小时。
注意观查泵压。
c将流速渐次降到0ml/min，把二次蒸馏水更换为甲醇（HPLC），将流速渐次提高到2.0ml/min冲洗系统1小时。
d用相同的方法将甲醇依次更改为异丙醇、四氢呋喃（HPLC），冲洗系统各1小时。
e最后将四氢呋喃更换为预先配制好的流动相：异丙醇/正己烷＝15/85（V/V）混合液冲洗系统1小时(根据不同样品更换不同的流动相)。
同时将柱塞杆清洗系统内的10％异丙醇换为流动相，保持每分钟50-60滴的速度清洗柱塞杆。
然后将双通更换为Si60 250mm*4.6mm*5um色谱柱，待色谱柱平衡好以后分析样品。
正相色谱一定要确保系统内无水。
品管科
傅忠
2006-7-2。
色谱操作规程
色谱分析仪操作规程一、色谱分析仪启动1、打开色谱分析仪供电电源和载气瓶出口阀门；2、调节载气瓶出口压力在115psi左右；3、在2350A控制器中启动色谱分析仪（具体操作见色谱分析仪面板操作）；4、待色谱分析仪预热4—8小时后，可打开样气进气阀门，调节取样器上的压力调节阀，保证出口压力在20psi，色谱可进入正常分析状态。
二、色谱分析仪停运1、若短时间停运色谱分析仪，则在2350A控制器中停运色谱分析仪（具体操作见色谱分析仪面板操作）；2、若长时间停运色谱分析仪，先完成以上操作后，在断开色谱分析仪供电电源；3、关闭色谱分析仪样气进口阀、载气瓶出口阀、标气瓶出口阀。
三、色谱分析仪更换标气1、如果标准气瓶压力已低于20psi，则必须更换标准气瓶；2、关闭标准气瓶的阀门，确认压力调节阀的标准气瓶压力为0，更换标准气瓶；3、将备用标准气瓶换上，打开标准气瓶，调节压力调节阀，使输出压力为20psi左右；4、运行计算机上的MON2000软件，从“File”菜单选择“Connect”连接通讯；5、更换标准气瓶后标准气体的组分发生变化，需要在MON2000软件中重新输入标准气体的组分信息(如下图：)四、色谱分析仪更换载气正常情况下，载气瓶为一用一备，当在用载气瓶压力低于120psi时，打开备用载气瓶出口阀，将载气出口压力调节至115psi。
在更换空载气瓶，更换步骤如下：1、将气瓶出口阀门关闭；2、关闭三通阀，并将三通阀与气瓶口之间管段的载气放空；3、将新载气瓶换上，打开三通阀。
五、色谱分析仪面板操作1、从控制室内的控制器起用气相色谱分析仪A、按“ENTER”键，输入口令“DANIEL”，再按“ENTER”键，进入主菜单；输入方法为：1）输入“D”，左手按住“ALT”，右手按1次数字“2”键；2）输入“A”，左手按住“ALT”，右手按1次数字“1”键；3）输入“N”，左手按住“ALT”，右手按2次数字“5”键；4）输入“I”，左手按住“ALT”，右手按3次数字“3”键；5）输入“E”，左手按住“ALT”，右手按2次数字“2”键；6）输入“A”，左手按住“ALT”，右手按3次数字“4”键；B）起动自动分析“Auto”：1）进入主菜单，按“5”键，选择“GC Control（色谱分析仪控制）”；2）在“GC Control（色谱分析仪控制）”的子菜单中，按“1”键，选择“Auto”；3）然后出现“Auto Purge”字样，a)按“ENTER”键，再按“ESC ”键，接受默认“YES”设定，将进行自动分析；或b)按住“ALT”键，再按“SPAC E”键，出现“NO”，然后再按“ESC”键，将取消自动分析；4）当屏幕出现“Write Changes”字样时，按“ENTER”键，接受“YES”设定，60秒后进行自动分析；或按“ESC”键，取消自动分析；5）再按“ESC”键退回主菜单。
色谱使用手册
一、故障分析方法故障分析的基础：组成：由哪些部分组成？作用：各部分起什么作用？原理：各部分的工作原理是怎样的？判别：如何判别工作正常与否？注意事项：检修过程中哪些方面必须注意？故障分析的思路：注意事项：1.保护人体，安全第一，防止事故发生。
2.保护设备，避免故障扩大、转移。
确定范围：确定与该故障有关的部分和相关因素。
故障检查：1.顺序推理法：根据工作原理顺序推理，检查、寻找故障原因。
2.分段排除法：逐个排除，缩小范围，检查、寻找故障原因。
3.经验推断法：根据经验积累，检查、寻找故障原因。
4.比较检查法：参照工作正常的仪器，检查、寻找故障原因。
5.综合法：综合使用上述各种方法，检查、寻找故障原因。
GC故障的种类：气路部分故障：气体输入不正常、气体品种不对或纯度不够、气路泄漏、气路堵塞、气路污染、气路部件故障、流量设置不正常、色谱柱问题、等等。
主机电路部分故障：启动或初始化不正常、温度控制部分故障、键盘或显示部分故障、开关门不正常、点火不正常、电流设置不正常、量程或衰减设置不正常、其他功能性故障、等等。
检测器输出信号不正常：无信号输出、输出信号零点偏离、输出信号不稳定、输出信号数值不对、等等。
其他故障：气源不正常、电网电压不正常、二次仪表不正常、机械类故障、等等。
故障的判别：基础：检查、寻找故障原因的基础是掌握故障判别的方法。
掌握故障判别方法的基础是熟悉和了解仪器各部分的组成、作用、工作原理。
输入与输出：通常仪器的每个部分、部件、甚至零件都有它的输入和输出，输入一般是指该部分正常工作的前提，输出一般是指该部分所起的作用或功能。
举例：例如FID放大器，它的输入是FID检测器通过离子信号线传送过来的微电流信号、放大器的工作电源、以及放大器的调零电位器，它的输出是经过放大并送到二次仪表的电信号。
判别FID放大器是否工作正常的方法是：A.如果输入正常而输出不正常，则放大器故障。
B. 如果输入输出均正常，则放大器正常。
正相色谱柱的使用方法
正相色谱柱的使用方法正相色谱柱是化学分析领域中常用的分离技术之一，常用于化学试剂、生化制剂、化妆品等领域的研究工作中。
正因为其分离效果好、分离速度快、易于操作等特点，所以被广泛应用于科研、生产以及质量控制等方面。
在正相色谱柱的使用方面，有以下注意事项和使用方法。
注意事项选择柱子的密度首先，在购买正相色谱柱的时候，应该注意柱子的密度，密度高的柱子用于分离效果好的样品，密度低的柱子用于分离效果较差的样品。
同时，需要根据待分离的样品选择柱子的尺寸，以确保样品能完全覆盖柱子，从而获得更好的分离效果。
洗涤和保护正相色谱柱在使用之前和之后需要进行洗涤和保护工作，以保证柱子的稳定性和使用寿命。
洗涤方法基本都是相同的，主要采用纯水、乙醇、乙醚等有机溶剂进行清洗，在保证安全的情况下可以适当增加清洗强度，如采用强酸和强碱进行清洗。
在使用过程中，应该尽量避免高温和酸碱性物质的接触，这样可以有效地延长柱子的使用寿命。
储存方法正相色谱柱在存储过程中需要注意防潮、防晒，同时避免跌落和挤压等情况的发生。
储存的环境应该稳定，通风良好，温度在4-30℃之间，相对湿度不超过60%。
使用方法样品制备在使用正相色谱柱进行分离操作之前，需要对待分离的样品进行制备。
首先应该将样品溶解于合适的溶剂中，然后进行过滤和净化工作，以保证样品的纯度和稳定性。
实验条件设置在对样品进行分离的过程中，需要根据不同的实验目的和样品特性，分别设计不同的实验条件。
这些条件包括上样量、流速、温度、溶剂性质和比例等方面。
柱色调节在正相色谱柱使用的过程中，柱色的调节也是非常重要的一环。
根据柱子的类型和实验需要，可以通过调整柱子的机械位置或者采用外接装置，对流速、温度和压力等进行控制和调整。
数据分析在实验完成之后，需要对得到的数据进行分析和处理，评价分离的效果和柱子的稳定性。
数据处理方面需要恰当地选择评价指标和数据处理方法，以减少实验误差，提高分析的准确性和可靠性。
总结正相色谱柱在使用前和使用后需要进行洗涤和保护工作，在存储过程中需要注意防潮、防晒，同时避免跌落和挤压等情况的发生。
正相手性色谱柱使用说明
正相手性色谱柱（AD-H.OD-H）使用说明警告：（1）将色谱柱接到色谱仪之前，必须先用合适的溶剂冲洗流路（包括流通阀和定量环）。
如之前是反相系统，先用水把系统中可能含有的盐冲洗干净，再用异丙醇以2ml/min冲洗1小时左右，再接色谱柱。
（四根管路同时冲洗）（2）有些溶剂（比如丙酮、氯仿、DMF、二甲基亚砜、乙酸乙酯、二氯甲烷、THF）会破坏手性固定相，应禁用。
（3）如果使用的是自动进样器，进样间隔的冲洗液也必须更换成合适的溶剂。
操作限制:对于150 x 4.6 mm ID，250 x 4.6 mm ID分析柱：（1）流动相方向：参照色谱柱标签上的箭头（2）典型流速：0.5~1.0 ml/min，不能超过 1.5 ml/min。
最大流速也和流动相粘度（流动相成分）有关，必须小心不能超过柱压上限。
（3）柱压范围：< 50 Bar (约700 psi)，最高不能超过100 Bar (约1400 psi)。
（4）温度范围：0~40°C色谱条件：（1）流动相组成流动相条件：正己烷/异丙醇=100/0-0/100(V/V)正己烷/乙醇=100/0-0/100(V/V)*流动相中异丙醇换成乙醇，样品的保留时间缩短。
*流动相中醇含量增加，样品的保留时间缩短。
（2）如果分离碱性或者酸性化合物，可能需要在流动相加入少量添加剂碱性样品需要添加碱性添加剂，一般为二乙胺，比例一般为0.1%酸性样品需要添加酸性添加剂，一般为三氟乙酸，比例一般为0.1%色谱柱保养及注意事项：（1）样品检测前需仔细询问送样人员样品中可能含有的溶剂，如果工艺中用到丙酮、氯仿、DMF、二甲基亚砜、乙酸乙酯、二氯甲烷、THF，则需尽量烘干。
样品尽量溶解在流动相中，并用0.45μm滤膜过滤。
不能使用强碱性物质作为流动相添加剂或者溶解样品，因为这样会损坏填料中的硅胶成分。
（2）如果系统中或者色谱柱中含较高浓度的异丙醇或者乙醇时，由于他们的粘度比较大，平衡色谱柱时需特别注意压力变化，可采用低流速平衡，当柱压下降后再逐渐升高至要求的流速。
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硅胶柱使用注意事项
正相柱一般包括硅胶、CN基、Diol和氨基柱。
硅胶柱：
该色谱柱属于硅胶柱，由于分离原理跟反相相反，采用的常规流动相为非极性溶剂为流动相，如正己烷，石油醚等。
如同反相色谱不能接受有机溶剂一样，含水过多会将硅胶成分洗脱出来，所以在使用正相色谱时，需要注意，要将整个液相系统冲洗成不含水和盐的系统，同时液相的洗针溶剂，洗泵阀的溶剂也需要更换成异丙醇。
管路，密封圈中尽量避免peek材质，选用不锈钢材质可减小腐蚀的几率。
使用注意事项：
1、先将系统接两通，冲含水量较高的溶剂（例如20%的甲醇），将系统中的盐充分冲洗出系统。
2、依次换纯甲醇→异丙醇→正己烷，1ml/min流速，每次换相冲洗时间不少于1小时，如果是四元低压泵或二元高压泵，则要注意要将两个泵都冲洗成正相系统，切不可简单的切换泵冲洗。
异丙醇有较好的过渡性能，可考虑多冲一会。
3、接色谱柱，先冲正己烷，流速逐级升高，勿直接高流速冲柱，然后换流动相即可。
4、色谱柱活化，如样品杂质较多，可用纯异丙醇冲洗。
100%异丙醇的极性和正相洗脱能力足够把正相柱上的所有残留物清洗掉。
如果异丙醇的清洗还不足以恢复色谱性能，则说明色谱柱柱床有塌陷和空洞了，用清洗的方法无法解决这个问题。
5、色谱柱的保存，硅胶柱可直接用纯的正己烷保存，也可用异丙醇：正己烷（10:90）保存。
一般不考虑用纯的异丙醇保存，异丙醇黏度较大，不容易冲干净，而正相色谱中有较多的异丙醇时，会影响色谱的保留时间。