正相色谱柱与反相色谱柱有哪些区别
高效液相色谱的正相与反相怎么区分
正相反相取决于固定相的极性高于流动相是正相反之则反。
流动相极性大于固定相，称之为反相。
流动相极性小于固定相，称之为正相。
看色谱柱的固定相填料是什么：
正相色谱法：采用极性固定相（如聚乙二醇、氨基与腈基键合相）；流动相为相对非极性的疏水性溶剂（烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。
常用于分离中等极性和极性较强的化合物（如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等）。
反相色谱法：一般用非极性固定相（如C18、C8）；流动相为水或缓冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。
适用于分离非极性和极性较弱的化合物。
RPC在现代液相色谱中应用最为广泛，据统计，它占整个HPLC应用的80%左右。
根据流动相，固定相之间的极性大小来区分的。
流动相极性大于固定相，称之为反相。
流动相极性小于固定相，称之为正相。
hplc色谱柱的选择
hplc色谱柱的选择
高效液相色谱（ HPLC）是一种广泛应用于分析化学领域的分离技术。
在（HPLC（分析中，色谱柱的选择是至关重要的，因为它直接影响分离效果和分析结果的准确性。
下面是一些选择（HPLC（色谱柱的要点：
1.（色谱柱类型：HPLC（色谱柱主要分为反相柱、正相柱和离子交换柱等类型。
根据待分析物的性质选择合适的色谱柱类型，例如，对于非极性化合物，通常选择反相柱；对于极性化合物，正相柱可能更合适。
2.（填料粒度：填料粒度越小，分离效率越高，但柱压也会相应增加。
一般来说，分析小分子化合物时选择细粒度填料，分析大分子化合物时选择粗粒度填料。
3.（柱子长度：柱子长度越长，分离效果越好，但分析时间也会延长。
根据分离要求和分析时间的限制选择合适的柱子长度。
4.（柱子内径：柱子内径越小，柱效越高，但柱压也会相应增加。
一般来说，分析小分子化合物时选择细内径柱子，分析大分子化合物时选择粗内径柱子。
5.（固定相：选择合适的固定相可以提高分离效果。
根据待分析物的性质选择合适的固定相，例如，对于非极性化合物，可以选择（C18（固
定相；对于极性化合物，可以选择硅胶固定相。
6.（品牌和价格：不同品牌的色谱柱质量和价格可能存在差异。
在选择色谱柱时，可以参考其他用户的评价和经验，选择性价比较高的产品。
在选择（HPLC（色谱柱时，需要综合考虑待分析物的性质、分离要求、分析时间和成本等因素。
如果对色谱柱的选择有疑问，可以咨询专业的色谱柱供应商或实验室技术人员。
正相柱还是反相柱
正相柱反相柱的使用特别注意HPLC使用过后的系统清洗：含有缓冲盐溶液的流动相的清洗方法：1、先用100%的纯水冲洗，打开排放阀，用3~5ml/min的流量，洗二十分钟左右后停泵。
此举主要是针对吸液系统、泵头、进出口单向阀等体积较大的空间的清洗2、再用95：5的甲醇/水清洗整个系统，关闭排放阀，用1ml/min的流量，洗30~60分钟后停泵。
此举主要是用水清洗整个系统中的盐，用5%的甲醇主要是为了保护色谱柱。
3、最后用100%的甲醇清洗整个系统，用1ml/min的流量，洗2分钟左右，然后关机。
如果流动相中不含盐，则使用上述第三步清洗即可。
当固定相的极性大于流动相的极性时，可称为正相分配色谱或简称正相色谱.若固定相的极性小于流动相的极性时，可称为反相分配色谱或简称反相色谱.在用于正相色谱时，可使用如正己烷的低极性流动相，在用于反相色谱时，可使用甲醇或水的强极性流动相.正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。
这种填料做成的柱子就称为正相柱.反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相,常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等.这种填料做成的柱子就称为反相柱.正相柱和反相柱缘于，柱上固定相与流动相之间极性的对比。
若固定相极性大于流动相，为正相柱，反之，为反相柱。
通常为反相柱应用较多。
所有色谱均适用，包括纸色谱和薄层。
现在一般都用反相，正相在样品对水敏感等特殊情况下才使用。
正相的固定性是极性的，流动相是非极性的，适于分离强极性物质。
反相的固定性是非极性的，流动相是极性的，适于分离弱极性物质。
正相色谱柱与反相色谱柱的区别本质上是填料(固定相)的不同,正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强；反相色谱柱填料极性弱，洗脱顺序由强到弱。
以下是详细说明：1、正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。
色谱柱知识讲解
1、反相色谱的流动相不再需要烃类、氯仿这些 更危险的有机溶剂，使用起来更加简单和安全。 2、而极性强的化合物由于分子间作用力更强， 往往沸点不低，不适合用气相分析，更适合用反 相液相色谱分析
1、反相色谱的流动相有更多的参数选择：PH、缓冲盐种类、浓 度等，能更好地调整分离效果，而正相色谱可调整的流动相参数 非常有限
1、当样品流经凝胶色谱柱时，直径较大的化合物，不易进入凝 胶颗粒的微孔中，所以很快出峰。/2、而直径较小的化合物会进 入凝胶颗粒的微孔中，并不断的进出和扩散，因此，较晚出峰。
主要内容
正相 色谱 反相 离子对 色谱
色谱ห้องสมุดไป่ตู้
色谱
亲水作 用色谱
凝胶 色谱
正相色谱
固定相极性大于流动相极性 流动相是弱极性：如正己烷、石油醚等 固定相是有极性：布满硅羟基的硅胶
极性大的化合物 极性小的化合物
固定相（极性大） 流动相（极性小）
出峰慢 出峰快
反相色谱
流动相极性大于固定相极性 流动相是强极性：如甲醇、水
离子对色谱
又叫离子交换色谱
适用：化合物极性特别强， 一言不合就电离
原理：可增强离子和固定相 的相互作用，使不同的化合 物得到分离
凝胶色谱
又叫体积排阻色谱
不管是正相、反相还是离子交换色谱，化合物出峰的情况都是和极性相 关的，而凝胶色谱的出峰却只和化合物的大小有关，所以也叫体积排阻 色谱。
1、当样品流经凝胶色谱柱时，直径较大的化合物，不易进入凝 胶颗粒的微孔中，所以很快出峰。/2、而直径较小的化合物会进 入凝胶颗粒的微孔中，并不断的进出和扩散，因此，较晚出峰。
正相色谱柱和反相色谱柱的区别
正相色谱柱和反相色谱柱的区别
本质上是填料(固定相)的不同,正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强；反相色谱柱填料极性弱，洗脱顺序由强到弱。
以下是详细说明：
1、正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。
正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。
2、反向色谱反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。
反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。
样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。
正相色谱vs反相色谱
正相色谱vs反相色谱点击次数：986 发布时间：2009-11-9现代高效液相色谱中,分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择.但是色谱填料的选择范围很宽,要做合适的选择,必须对此有一定的认识和了解.1,正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica),以及其他具有极性官能团,如胺基团 (NH2,APS)和氰基团(CN,CPS)的键合相填料.由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他团的极性较强,因此,分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小,即极性强弱的组份最先被冲洗出色谱柱. 正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如:正乙烷(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等.2,反相色谱反相色谱填料常是以硅胶为基础,表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相. 反相色谱所使用的流动相极性较强,通常为水,缓冲液与甲醇,已腈等混合物. 样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合最先被冲出,而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留. 常用的反相填料有C18(ODS),C8(MOS),C4(B),C6H5(Phenyl)等.二,聚合物填料聚合物调料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等,其主要优点是在PH值为1～ 14均可使用. 相对与硅胶基质的C18填料,这类填料具有更强的疏水性;大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效. 现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料,色谱柱柱效较低. 三,其他无机填料其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化.由于其特殊的性质,一般仅限于特殊的用途.如石墨化碳也用于正逐渐成为反相色谱填料.这种填料的分离不同与硅胶基质烷基键合相,石墨化碳的表面即是保留的基础,不再需其它的表面改性,该柱填料一般比烷基键合硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强,石墨化碳可用于分离某些几何导构体,又由于HPLC流动相中不会被溶解,这类柱可在任何PH与温度下使用.氧化铝也可用于HPLC, 氧化铝微粒刚性强,可制成稳定的色谱柱柱床,其优点是可在PH高达12的流动相中使用. 但由于氧化铝与碱性化合物作用也很强,应用范围受到一定的限制,所以未能广泛应用, 新型氧化锆填料也可用于HPLC,商品化的仅有聚合物涂层的多孔氧化锆微球色谱柱,应用PH范围1～14,温度可达100℃.由于氧化锆填料几年才开始研究,加之面临的实验难度,其重要用途与优势尚在进行中.怎样选择填料粒度目前,商品化的色谱料粒度从1um到超过30um均有销售,而目前分析分离主要用3um, 5um和10um填料,填料的粒度主要影响填充柱的两个参数,即柱效和背压.粒度越小,填充柱的柱效越高;小于3um的填料应用,在相同选择性条件下,提高柱效可提高分离度, 但不是唯一的因素.如果固定相选择是正确,但是分离度不够,那么选择更小粒度的填料是很有用的,3um填料填充柱的柱数比相同条件下的5um填料的柱效提高近30%;然而, 3um的色相谱的背压却是5um的2倍.与此同时,柱效提高意味着在相同条件下可以选择更短的色谱柱,以缩短分析时间,另外,可以采用低粘度的溶剂做流动相或增加色谱柱的使用温度,比如用乙腈代替甲醇,以降低色谱柱的压力.如何选择液相色谱仪发布日期：[2009-10-30] 共阅[241]次如何选择液相色谱仪一台品质优良的液相色谱系统应从以下几个方面考虑：一．主要技术指标优异首先是如何看指标。
反相色谱法
反相色谱法高效液相色谱（HPLC）法因其选择性高、灵敏度高、分析速度快，已成为现代分离测试的重要手段。
色谱柱作为高效液相分离系统的中的重要环节，色谱柱的类型决定了色谱系统的性质，色谱柱的粒径和长度影响了分析时间和分析效率。
液相色谱有正相和反相之分，那么，正相色谱和反相色谱如何区分呢？1、正相色谱正相色谱（HIC）是采用极性固定相(如带有二醇基、氨基、和氰基的固定相及硅胶、三氧化二铝等)、非极性流动相(如正己烷等)的分离方法，是一种根据分子的极性大小将其分开的液相色谱技术。
划重点：正相色谱=固定相极性>流动相极性正相色谱以吸附效应作为分离基础，也称为吸附色谱。
在正相色谱中，样品分子与载体基质的硅醇基团发生特异的极性相互作用，与固定相产生强极性相互作用的极性样品分子比较难被洗脱，在柱内停留比较长的时间，反之，极性较弱或非极性分子与硅胶之间产生相对较弱的相互作用，比较容易被洗脱，因而在柱内停留的时间较短。
因此，正相色谱可以根据溶剂极性差别而达到分离的目的。
划重点：正相色谱洗脱顺序=极性小>极性大拆分样品种类正相色谱主要适用于分离水溶性或极性较大的化合物，如生物碱、苷类、糖类、有机酸等。
2、反相色谱反相色谱(RPC)是指利用非极性的反相介质为固定相，极性有机溶剂的水溶液为流动相，根据溶质极性(疏水性)的差别进行溶质分离与纯化的洗脱色谱法。
反相色谱（RPC）固定相大多是硅胶表面键合疏水基团，基于样品中的不同组分和疏水基团之间疏水作用的不同而分离。
在生物大分子分离中，多采用离子强度较低的酸性水溶液，添加一定量乙腈、异丙醇或甲醇等与水互溶的有机溶剂作为流动相。
拆分样品种类：反相色谱(RPC)主要应用于相对分子质量低于5000，特别是1000以下的非极性小分子物质的分析和纯化，如蛋白质、肽、氨基酸、核酸、甾类、脂类、脂肪酸、糖类、植物碱等含有非极性基团的各种物质。
正相色谱与反相色谱区分总结：1、固定相不同：正相色谱具有极性基表面，而反相硅胶是经过改性，极性更小。
正相色谱和反相色谱名词解释
正相色谱和反相色谱名词解释
正相色谱和反相色谱是色谱分离中两种常见的操作模式。
正相色谱：指在使用这种色谱方法时，固定相为极性的物质，流动相为非极性的物质。
常见的固定相为蛋白质、硅胶等极性物质，而流动相为水、醇类等非极性物质。
这种色谱方法主要用于分离极性化合物，如氨基酸、多肽、核苷酸等。
反相色谱：指在使用这种色谱方法时，固定相为非极性的物质，流动相为极性的物质。
常见的固定相为碳链、苯乙烯等非极性物质，而流动相为水、乙醇等极性物质。
这种色谱方法主要用于分离非极性化合物，如脂肪酸、类固醇、荷尔蒙等。
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正相色谱柱与反相色谱柱有哪些区别？
色谱柱的安装：
1、首先应确认柱和仪器的接头以及管路是否匹配。
为减少死体积，进样阀、柱子、检测器之间的连接管路内径尽可能使用内径较小的管线，同时控制进样器、色谱柱和检测器之间连接管线的长度。
安装色谱柱之前，确认流路系统中的溶剂是否正常。
对分析较复杂的样品建议安装保护柱。
2、为了使色谱柱与仪器系统达最佳的连接效果，应尽量使用与色谱柱接口相匹配的螺帽和锥形接头，如原来的接头长期匹配其他类型的色谱柱，建议在连接新色谱柱前应检查匹配情况，避免造成色谱柱的损坏或因色谱柱不匹配造成的漏液。
3、使用PEEK 材料的通用接头，只需用手拧紧不需要特定扳手，使用压力为5000psi；使用温度不得超过100℃。
流动相平衡：
1、在进行样品检测前，至少使用20倍柱体积流动相使色谱柱充分平衡。
流动相一定要使用色谱级别的溶剂。
如使用水相的缓冲液应当天配制以保持新鲜避免细菌产生。
2、流动相使用前需用微孔滤膜过滤,消除流动相中颗粒对色谱系统和色谱柱的损坏。
缓冲液与其他流动相混合后应重新过滤避免溶解度变化造成产生新的沉淀。
不应使用纯水作为流动相冲洗C18色谱柱，以免柱性能损坏（添加5％的有机溶剂冲洗色谱柱，同时可以达到对缓冲盐清洗的作用。
还可以使色谱柱更容易平衡）。
3、流动相需脱气后使用，可避免因气泡导致的泵和检测器的工作不正常。
如果测试时使用的流动相与色谱柱保存使用的流动相有较大区别，应该使用过度分布的形式进行平衡。
避免由于流动相的突然变化造成柱压增加过大或流动相缓冲盐结晶造成对色谱柱和仪器系统的损坏。
正相色谱柱比反相色谱柱需要更长的平衡时间。
样品制备与操作：
1、样品应当尽可能溶解在能与流动相相互溶的溶剂中。
除特殊指明外，如使用强溶剂溶解样品柱子的分辨率将可能降低。
2、样品溶液在进样前应使用针头式过滤器对样品预先过滤。
频繁改变流动相组成，会加速降低柱效。
3、色谱柱由高压匀浆法装填，能承受较高压力。
为获得最佳分离效果，使用时请不要超过200kgf，而且避免压力突然上升或变化，否则会造成硅胶填料的破坏，减少色谱柱的使用寿命。
除特殊要求外最高操作温度不要超过60℃。
保存色谱柱：
1、如果流动相含有酸或无机盐，应当先用去离子水（20倍柱体积）冲洗干净。
然后用用100％乙腈或甲醇保存色谱柱。
最后用柱子的接头密封，并放在稳定的环境中存放。
2、应避免色谱柱受到直接的机械冲击或摔落，避免造成色谱柱性能的降低。
色谱柱的再生：
1、用相当于20倍柱体积的溶剂按下列顺序冲洗柱子，建议按柱子的箭头方向冲洗，尽可能不反冲：冲洗时使用的的参考溶剂顺序是水、甲醇、氯仿、异丙醇、甲醇。