手性色谱柱的知识
手性色谱柱分离原理
手性色谱柱分离原理
色谱柱是分离色层的重要工具，它是利用溶剂(溶剂系统)中吸附剂配合物在色谱柱内不同地带缓慢分散的物理现象，来实现色层分离的一种技术。
色谱柱分离原理可以分为两大类：站立性色谱柱分离原理和层析性色谱柱分离原理。
站立性色谱柱分离原理：站立性色谱柱分离原理主要是利用溶剂中吸附剂配合物的相对持久性以及溶剂系统的气体泵作用，在色谱柱内不同地带缓慢分散，使不同溶质或分子阵列而形成色层，从而实现色层分离的技术。
层析性色谱柱分离原理：在层析性色谱柱分离原理中，对色层分离是采用溶剂中特定层析剂并结合气体泵运行作用原理，使特定溶质或分子阵列分散在色谱柱中，不同溶质或分子阵列会沿着吸附剂配合物的不同地带形成多个色层，从而实现分离色层的目的。
色谱柱分离原理是实现色层分离的一种重要技术，目前主要分为站立性色谱柱分离原理和层析性色谱柱分离原理。
在色谱柱分离中，能够获得高精度的色层分离效果，大大减少分离操作的时间和金钱投入，而且色谱柱分离过程实现工艺简单、操作简便，非常有利于现场应用。
手性色谱柱知识介绍
手性色谱柱知识介绍手性色谱柱（Chiral HPLC Columns）是由具有光学活性的单体，固定在硅胶或其它聚合物上制成手性固定相（Chiral Stationary Phases）。
通过引入手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异，从而达到光学异构体拆分的目的。
要实现手性识别，手性化合物分子与手性固定相之间至少存在三种相互作用。
这种相互作用包括氢键、偶级-偶级作用、π-π作用、静电作用、疏水作用或空间作用。
手性分离效果是多种相互作用共同作用的结果。
这些相互作用通过影响包埋复合物的形成，特殊位点与分析物的键合等而改变手性分离结果。
由于这种作用力较微弱，因此需要仔细调节、优化流动相和温度以达到最佳分离效果。
在手性拆分中，温度的影响是很显著的。
低温增加手性识别能力，但可能引起色谱峰变宽而导致分离变差。
因此确定手性分析方法过程中要考虑柱温的影响，确定最优柱温。
迄今为止，尚没有一种类似十八烷基键合硅胶（ODS）柱的普遍适用的手性柱。
不同化学性质的异构体不得不采用不同类型的手性柱，而市售的手性色谱柱通常价格昂贵，因此如何根据化合物的分子结构选择适用的手性色谱柱是非常重要的。
根据手性固定相和溶剂的相互作用机制，Irving Wainer首次提出了手性色谱柱的分类体系：第1类：通过氢键、π-π作用、偶级-偶级作用形成复合物。
第2类：既有类型1中的相互作用，又存在包埋复合物。
此类手性色谱柱中典型的是由纤维素及其衍生物制成的手性色谱柱。
第3类：基于溶剂进入手性空穴形成包埋复合物。
这类手性色谱柱中最典型的是由Armstrong 教授开发的环糊精型手性柱[2]，另外冠醚型手性柱和螺旋型聚合物，如聚（苯基甲基甲基丙烯酸酯）形成的手性色谱柱也属于此类。
第4类：基于形成非对映体的金属络合物，是由Davankov开发的手性分离技术，也称为手性配位交换色谱（CLEC）。
第5类：蛋白质型手性色谱柱。
手性分离是基于疏水相互作用和极性相互作用实现。
住友系列手性色谱柱安全操作及保养规程
住友系列手性色谱柱安全操作及保养规程1. 引言手性色谱柱是化学分析中常用的一种工具，用于分离和鉴定手性化合物。
住友系列手性色谱柱具有较高的分离效果和稳定性，在实验室中得到广泛应用。
本文档旨在提供住友系列手性色谱柱的安全操作及保养规程，以保证实验室成员的安全和色谱柱的长期使用。
2. 安全操作规程2.1 实验室准备工作在操作住友系列手性色谱柱之前，需要进行以下实验室准备工作：- 检查色谱仪和色谱柱的连接是否牢固，并确保电力和气体供应正常。
- 检查溶剂储存容器是否充足，并确保溶剂质量合格。
- 确保工作台面整洁，并准备好所需的试剂和器材。
2.2 色谱柱的装配和拆卸在装配和拆卸住友系列手性色谱柱时，需要遵循以下步骤： 1. 确保色谱仪电源已关闭，并确保色谱仪处于室温下。
2. 使用力量仪器将柱口连接器固定在色谱仪上，并确保连接紧密。
3. 用手轻轻旋转柱体，使连接更加牢固。
4. 在拆卸色谱柱时，首先关闭色谱仪电源，并等待柱体冷却后再进行操作。
5. 使用力量仪器轻轻旋转柱口连接器，松开连接。
2.3 溶剂的选择和使用在使用住友系列手性色谱柱时，应注意以下事项： - 使用优质的溶剂，并进行必要的预处理，以确保溶剂质量良好。
- 避免使用过酸性或过碱性的溶剂，以免损坏色谱柱。
- 避免使用带有悬浮固体的溶剂，以防止堵塞色谱柱。
2.4 色谱条件的设置在设置色谱条件时，应注意以下事项： - 根据实验要求，选择合适的流速、温度和柱洗条件。
- 避免超过色谱柱的最大压力和温度限制。
- 确保色谱仪和检测器的参数设置正确。
2.5 实验后的清洁工作在实验结束后，需要进行以下清洁工作： - 关闭色谱仪电源，并断开色谱柱与色谱仪的连接。
- 检查色谱柱是否有溶剂残留，如有需要，用无尘纸轻轻擦拭。
- 存储色谱柱前，确保其完全干燥，并使用防尘套进行保护。
3. 保养规程3.1 定期检查及维护为确保住友系列手性色谱柱的正常使用和延长其寿命，应进行定期检查及维护： - 每次使用后，应检查色谱柱是否有损坏或污染，如发现问题应及时更换。
手性色谱的名词解释
手性色谱的名词解释手性色谱（Chiral Chromatography）是一种用于分离手性化合物的色谱技术。
手性化合物是指在空间结构上具有非对称性的分子，它们分为左旋体和右旋体两种互为镜像的异构体。
在自然界中，许多有机分子都存在手性，包括药物、天然产物和生物分子等。
而手性分子的左旋体和右旋体对生物体的作用可能完全不同，因此手性分离对于药物的研发和质量控制至关重要。
手性分离的原理是利用手性色谱柱对手性化合物的不对称相互作用进行分离。
手性色谱柱是一种具有手性固定相的色谱柱，它能够与手性分子形成手性识别作用，从而实现手性分离。
手性色谱柱的固定相一般采用手性选择性较高的手性配体或化合物修饰而成。
常见的手性配体有含有氨基酸、糖类或天然产物等结构的配体。
手性色谱柱的固定相通过与手性分子之间的相互作用实现手性识别，并在流动相的作用下使手性分子发生差异迁移，从而实现手性分离。
手性色谱技术广泛应用于药物研发、药物分析和天然产物的分离等领域。
在药物研发中，手性分离可以帮助研究者提取和分离药物的不同旋光异构体，以便进一步研究其活性和毒性。
在药物分析中，手性色谱可以用于测定药物中的手性化合物的含量和纯度，以确保药物的质量。
在天然产物的分离中，手性色谱可以帮助分离和鉴定天然产物中的手性化合物，从而揭示其生物活性和药理作用。
手性色谱技术包括液相手性色谱（Chiral Liquid Chromatography）和气相手性色谱（Chiral Gas Chromatography）两种。
液相手性色谱主要用于分离极性化合物，如药物和天然产物；而气相手性色谱主要用于分离具有较低极性的化合物，如揮发性有机物和香料。
手性色谱的优势在于其高效、灵敏和选择性。
通过选择合适的手性色谱柱和流动相，可以实现对多种不同手性分子的分离和检测。
此外，手性色谱还可以实现手性化合物的纯化和拆分，为手性分析提供了有效的工具。
然而，手性色谱也存在一些挑战和限制。
高效液相色谱测定抗坏血酸对映体色谱柱选择
高效液相色谱测定抗坏血酸对映体色谱柱选择抗坏血酸（Vitamin C）是一种重要的营养成分，具有抗氧化、养颜美容、提高免疫力等多种功效。
然而，抗坏血酸存在两种对映体（D-型和L-型），其生物学效应和代谢过程有所不同。
因此，快速、准确地测定抗坏血酸对映体是非常重要的。
高效液相色谱（HPLC）是测定抗坏血酸对映体的常用方法之一，本文将介绍如何选择适合HPLC测定抗坏血酸对映体的色谱柱。
1. 手性色谱柱手性色谱柱是根据化合物分子中的手性中心（chiral center）的立体异构体而设计的。
手性色谱柱基质（matrix）通常由富含手性配体（chiral selector）的固体或涂层物组成，可以选择性地分离手性的立体异构体。
手性色谱柱可以分为手性分离和分子识别两种类型。
前者是通过镜像分子识别进行分离，后者是利用手性相互作用分离。
在HPLC测定抗坏血酸对映体时，手性色谱柱是一种比较好的选择。
反相色谱柱是HPLC中最常用的色谱柱之一，其中反相基质通常是C18（十八烷基硅胶）或C8（八烷基硅胶）。
反相色谱柱的基本原理是根据化合物与固定相表面的疏水作用进行分离。
在反相色谱中，可以使用乙腈和水的混合溶剂进行酸碱性调节，从而在HPLC中分离抗坏血酸对映体。
然而，反相色谱柱不能区分立体异构体，因此，需要其他类型的色谱柱配合使用。
3. 手性和反相双重识别柱手性和反相双重识别柱具有手性分离和反相分离的功能。
该柱选用具有手性基质的反相基质，可以同时利用反相作用和手性相互作用来分离抗坏血酸对映体。
手性和反相双重识别柱对于分析抗坏血酸立体异构体的效果非常好，然而其价格较高，不容易得到。
4. 范德瓦尔斯相互作用柱范德瓦尔斯相互作用柱是根据化合物分子间的范德瓦尔斯力做为分离基础的柱。
该柱对于对映体的疏水性差异和范德瓦尔斯力有着极好的选择性，因此也可以用于分析抗坏血酸对映体。
总的来说，手性色谱柱和手性和反相双重识别柱都是分析抗坏血酸对映体的较好选择。
手性色谱柱安全操作及保养规程
手性色谱柱安全操作及保养规程手性色谱柱是一种用于手性化合物分析和分离的高级色谱柱，在实验室中的应用越来越广泛。
为了确保手性色谱柱的正常工作并延长其使用寿命，我们需要掌握手性色谱柱的安全操作规程和保养规程。
本文将详细介绍手性色谱柱的安全操作及保养规程。
手性色谱柱的安全操作规程1. 安装和连接安装手性色谱柱时，应先查看安装位置是否稳定，以确保不会对分析精度造成影响。
使用支架支撑的柱子，要确保支架小臂下方的安全承载力，同时确保柱子垂直放置，避免柱子与流动相的接触位置发生任何改变。
连接方法通常分为手动法和工具法，新人不熟悉连接时可请教其他工作人员或技术人员。
连接手柄时要轻轻拧紧，避免过紧导致出现漏液、卡住或者更换柱子时不能正常拆卸等情况。
2. 样品的准备每个实验操作都需要事先准备标准品或校正样品，并根据需要合理配置流动相。
在选择检测器时，应根据样品的性质和通量要求选择合适的检测器。
在样品制备过程中，应注意不要弄丢样品或污染手性色谱柱。
3. 操作技巧为了得到高质量的分析结果，应掌握一些操作技巧。
在操作时，应保持手机色谱柱的温度稳定，避免突然的温度变化或者过高的温度对柱子的损害。
应根据实验要求慢慢调整流速，避免快速调整对手性色谱柱造成太大的压力。
针对不同的光谱，调整检测器的增益和增益设置。
4. 实验结束处理实验结束后需要进行柱子后续处理，避免对柱子造成损害。
应先停止流动相的进药口，建议在冲洗氮气中断开流除相和燃料进口阀门，在氮气中冲洗至极干，直到不再有气体流出，再把柱子上的残留液排除。
在该流程中，与自己身体有直接联系的任何设备（手套、护眼镜等）都应佩戴好。
手性色谱柱的保养规程手性色谱柱的保养中，可以分为自然保养和人为保养两部分。
1. 手性色谱柱的自然保养柱子在使用过程中，应该仔细保护，避免机械碰撞和震动，确保其环境湿度和温度均衡，并避免阳光直射。
柱子在使用时，应该减少大幅度的温度变化，避免由于突然的温度变化而造成损坏。
大赛璐手性柱注意事项
避免将手性柱暴露在强磁场或电场中，以防影响分离效 果。
使用后应将手性柱妥善存放，避免过度震动或碰撞。
03
使用过程中的注意事项
操作步骤
确保手性柱的安装稳固，避 免在使用过程中发生倾斜或 移动。
流动相的流速应保持稳定， 避免过快或过慢，以免对手 性柱造成损害。
在使用前，应先对手性柱进 行充分的平衡和排气，确保 柱内无气泡。
避免与强氧化剂接触
手性柱应远离强氧化剂和腐蚀性物质，以防损坏。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
使用过程中，应定期检查手 性柱的性能，如有问题应及 时处理。
安全防护
使用手性柱时应佩戴化学防护 眼镜和实验服，防止意外伤害
。
避免使用带有腐蚀性和氧化性 的流动相，以免对手性柱造成
损害。
在使用过程中，应保持室内通 风良好，防止有害气体积累。
对于易燃、易爆或有毒的试剂 和气体，应严格按照安全规定 进行操作。
适用范围
01
02
03
手性分离
适用于各种手性化合物的 分离，如氨基酸、糖类、 药物等。
生物活性物质分离
可用于生物活性物质如酶、 抗体和细胞等的分离纯化。
复杂样品分离
适用于复杂样品中手性化 合物的分离，如代谢产物、 天然产物等。
操作原理
手性识别
大赛璐手性柱通过手性固 定相与手性化合物的相互 作用，实现对手性分子的 拆分。
柱效降低
总结词
柱效降低可能是由于固定相流失、柱污染或长时间使用导致的。
详细描述
为解决柱效降低的问题，可以检查色谱柱的固定相是否流失，对色谱柱进行适当的清洗和维护。如果色谱柱使用 时间过长，可能需要更换新的色谱柱以恢复其性能。同时，确保流动相的质量和清洁度也是避免柱污染的关键措 施。
手性色谱柱知识介绍(4)
由于形成包合物速度较慢，因此可能导致色谱峰峰形较差，同样也影响了其在制备色谱中的应用。
环糊精固定相的选择性取决分析物的分子大小；α-环糊精只能允许单苯基或萘基进入，β-环糊精允许萘基及多取代的苯基进入，γ-环糊精仅用于大分子萜类。
β-环糊精手性固定相应用范围最广。
Ibuprofen通过β-环糊精色谱柱得到分离，说明了pH值对氢键的影响。
当流动相的pH=7时，观察不到拆分的迹象。
pH=4时，可达到好的分离效果。
通常分离氨基酸时，常采用低的pH值，以抑制酸性基团的离子化，同时也增强氨基的质子化。
磷酸三乙胺盐、乙酸三乙胺盐证明对β-环糊精色谱柱来说是很好的缓冲液。
通常缓冲液是0.1%三乙胺溶液，用磷酸或醋酸调节到合适的pH值。
高的流速会降低形成复合物的能力，低流速分离效果较好，0.5-1ml/min的流速最好。
另外，增加缓冲液的浓度可以克服流速的影响，因为它可以增加环糊精洞穴和流动相的吸引力。
常用缓冲液及其使用浓度如下表所示：缓冲液浓度目的TEAA（乙酸三乙胺盐）0.01-2% NH4NO310-500mM（用于减小包埋）柠檬酸盐10-200mM（特别适合于酸性化合物）醋酸铵10-200mM pH值选择见下表: 醇和胺pH4(加强NH的离子化) 酸 pH7 优化手性分离条件要考虑的方面有：pH值对分离度的影响；流速对分离度的影响；柱温、有机相比例、缓冲盐浓度对分离度的影响。
环糊精的修饰：最近，对环糊精的修饰使环糊精型手性色谱柱可以分离更多的化合物，并可用于气相手性色谱分离。
衍生化是通过将不同的基因键合到环糊精洞穴表面的羟基上。
衍生化反应包括乙基化、S-羟基丙基化、生成S或R-萘基乙基氨基甲酸盐、3，5二甲基苯基氨基甲酸盐和环状对甲苯酰酯。
这些新型的环糊精固定相有许多优点，它们可以分离更多化合物，价格上也有竞争力，由于改进了手性识别能力使其更适用于制备色谱。
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手性色谱柱（Chiral HPLC Columns）是由具有光学活性的单体，固定在硅胶或其它聚合物上制成手性固定相（Chiral Stationary Phases）。
通过引入手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异，从而达到光学异构体拆分的目的。
要实现手性识别，手性化合物分子与手性固定相之间至少存在三种相互作用。
这种相互作用包括氢键、偶级-偶级作用、π-π作用、静电作用、疏水作用或空间作用。
手性分离效果是多种相互作用共同作用的结果。
这些相互作用通过影响包埋复合物的形成，特殊位点与分析物的键合等而改变手性分离结果。
由于这种作用力较微弱，因此需要仔细调节、优化流动相和温度以达到最佳分离效果。
在手性拆分中，温度的影响是很显著的。
低温增加手性识别能力，但可能引起色谱峰变宽而导致分离变差。
因此确定手性分析方法过程中要考虑柱温的影响，确定最优柱温。
迄今为止，尚没有一种类似十八烷基键合硅胶（ODS）柱的普遍适用的手性柱。
不同化学性质的异构体不得不采用不同类型的手性柱，而市售的手性色谱柱通常价格昂贵，因此如何根据化合物的分子结构选择适用的手性色谱柱是非常重要的。
根据手性固定相和溶剂的相互作用机制，Irving Wainer首次提出了手性色谱柱的分类体系：第1类：通过氢键、π-π作用、偶级-偶级作用形成复合物。
第2类：既有类型1中的相互作用，又存在包埋复合物。
此类手性色谱柱中典型的是由纤维素及其衍生物制成的手性色谱柱。
第3类：基于溶剂进入手性空穴形成包埋复合物。
这类手性色谱柱中最典型的是由Armstrong教授开发的环糊精型手性柱[2]，另外冠醚型手性柱和螺旋型聚合物，如聚（苯基甲基甲基丙烯酸酯）形成的手性色谱柱也属于此类。
第4类：基于形成非对映体的金属络合物，是由Davankov开发的手性分离技术，也称为手性配位交换色谱（CLEC）。
第5类：蛋白质型手性色谱柱。
手性分离是基于疏水相互作用和极性相互作用实现。
但由于市场上可选择的手性色谱柱越来越多，此分类系统有时很难将一些手性柱归纳进去。
因此参考Irving Wainer的分类方法，根据固定相的化学结构，将手性色谱柱分为以下几种：∙刷（Brush）型或称为Prikle型∙纤维素（Cellulose）型∙环糊精（Cyclodextrin）型∙大环抗生素（Macrocyclic antibiotics）型∙蛋白质（Protein）型∙配位交换（|Ligand exchange）型∙冠醚（Crown ethers）型刷型：刷型手性色谱柱的出现和发展源于Bill Prikle及其同事的卓越工作。
六十年代，Bill Prikle 将手性核磁共振中的成果运用到手性HPLC固定相研究中，通过不断实践，发明了应用范围较广、柱效很好的手性色谱柱。
刷型手性色谱柱是根据三点识别模式设计的，属于Irving Wainer分类中的第一种类型。
刷型手性固定相分为π电子接受型和π电子提供型两类。
最常见的π电子接受型固定相是由（R）-N-3，5-二硝基苯甲酰苯基甘氨酸键合到γ-氨丙基硅胶上的制成。
此类刷型手性色谱柱可以分离许多可提供π电子的芳香族化合物，或用氯化萘酚等对化合物进行衍生化后进行手性分离。
π电子供给型固定相常见的是共价结合到硅胶上的萘基氨基酸衍生物，这种固定相要求被分析物具有π电子接受基团，例如二硝基苯甲酰基。
醇类、羧酸类、胺类等，可以用氯化二硝基苯甲酰、异腈酸盐、或二硝基苯胺等进行衍生化后，用π电子供给型固定相达到手性分离。
刷型固定相的优势在于其易于合成。
合成方法在Bill Prikle的著作中有详细的说明。
另外，刷型固定相具有高的容量因子，因此具有高的选择因子。
它的不利之处在于它仅对芳香族化合物有效，有时不得不进行衍生化反应。
但值得一提的是，这种衍生化反应是非手性衍生反应，所以不存在手性衍生的问题。
刷型手性色谱使用的流动相基本是极性弱的有机溶剂，这对于制备色谱来讲未必是缺点。
近来，刷型固定相出现了π电子供给和接受基因的混合固定相。
如：WHELK-O和BLAMO，及α-BURKE-Ⅱ固定相。
α-BURKE-Ⅱ相十分适用于β-阻断剂的手性分离。
典型的流动相为二氯甲烷-乙醇-甲醇混合物，比例为85：10：5。
加入10mM醋酸铵可以调整保留时间。
SS BLAMO Ⅱ，同时具有π电子供体区和受体区，形成手性裂缝，因此对于某些分子具有很高选择性。
纤维素型：纤维素型手性色谱柱的分离作用包括相互吸引的作用及形成包埋复合物。
它们属于Wainer分类中的第2种类型。
市售的手性色谱柱为微晶三醋酸基、三安息香酸基、三苯基氨基酸盐纤维素固定相。
很多化合物可通过此类型的色谱柱得到分离。
这种类型的手性色谱柱种类也很齐全。
流动相使用低极性溶剂，典型的流动相为乙醇-己烷混合物。
但特别要注意由于氯可以使纤维素从硅胶上脱落，因此要确保流动相中无含氯溶剂。
这种类型的手性色谱柱主要的制造商之一是日本的Daicel公司，他们生产的纤维素酯和氨基甲酸纤维素柱可以分离多种生物碱和药物。
特别值得一提的是OD柱。
在某手性化合物异构体的分离中，分离度超过了25，这意味着载样量可以很高，对于制备十分有利。
纤维素固定相的每个单元都为螺旋型，而且这种螺旋结构还存在极性作用、π-π作用及形成包埋复合物等手性分离因素。
淀粉代替纤维素制成的此类手性柱显示了和纤维素柱不同的选择性，但是稳定性较差。
因为淀粉是水溶性的，因此流动相中必须绝对无水才能保证柱子寿命。
目前此类型的柱子能分离80%左右可能面临到的所有手性化合物。
此类柱子通常用于正相系统，用正己烷-乙醇，正己烷-异丙醇混合溶剂为流动相。
OD柱也可用于反相的情况，但流动相必须含有高浓度的高氯酸盐缓冲液，以防止固定相溶解。
即使这样，使用较长时间以后色谱柱也难免要受到损害，但是在某些情况下使用反相系统分离效果要优于使用正相系统。
环糊精型：环糊精是通过Bacillus Macerans 淀粉酶或环糊精糖基转移酶水解淀粉得到的环型低聚糖。
通过控制环糊精转移酶的水解反应条件可得到不同尺寸的环糊精。
市售的环糊精主要是α、β、γ三种类型，分别含6、7、8个吡喃葡萄糖单元。
环糊精分子成锥筒型，构成一个洞穴，洞穴的孔径由构成环糊精的吡喃葡萄糖的数目决定。
环糊精类型及洞穴的孔径等见下表：2，3位仲羟基分布在环糊精洞口，6位伯羟基在环糊精分子的外部，这意味着洞穴内部是相对疏水的区域。
用环糊精手性固定相产生手性识别要求被拆分物的疏水部分能嵌入环糊精洞穴中，形成可逆的、稳定性不同的包合物，环糊精洞口的羟基和被拆分物的极性基团相互作用。
由于形成包合物速度较慢，因此可能导致色谱峰峰形较差，同样也影响了其在制备色谱中的应用。
环糊精固定相的选择性取决分析物的分子大小；α-环糊精只能允许单苯基或萘基进入，β-环糊精允许萘基及多取代的苯基进入，γ-环糊精仅用于大分子萜类。
β-环糊精手性固定相应用范围最广。
Ibuprofen通过β-环糊精色谱柱得到分离，说明了pH值对氢键的影响。
当流动相的pH=7时，观察不到拆分的迹象。
pH=4时，可达到好的分离效果。
通常分离氨基酸时，常采用低的pH值，以抑制酸性基团的离子化，同时也增强氨基的质子化。
磷酸三乙胺盐、乙酸三乙胺盐证明对β-环糊精色谱柱来说是很好的缓冲液。
通常缓冲液是0.1%三乙胺溶液，用磷酸或醋酸调节到合适的pH值。
高的流速会降低形成复合物的能力，低流速分离效果较好，0.5～1ml/min的流速最好。
另外，增加缓冲液的浓度可以克服流速的影响，因为它可以增加环糊精洞穴和流动相的吸引力。
常用缓冲液及其使用浓度如下表所示：pH值选择见下表:优化手性分离条件要考虑的方面有：∙pH值对分离度的影响；∙流速对分离度的影响；∙柱温、有机相比例、缓冲盐浓度对分离度的影响。
环糊精的修饰：最近，对环糊精的修饰使环糊精型手性色谱柱可以分离更多的化合物，并可用于气相手性色谱分离。
衍生化是通过将不同的基因键合到环糊精洞穴表面的羟基上。
衍生化反应包括乙基化、S-羟基丙基化、生成S或R-萘基乙基氨基甲酸盐、3，5二甲基苯基氨基甲酸盐和环状对甲苯酰酯。
这些新型的环糊精固定相有许多优点，它们可以分离更多化合物，价格上也有竞争力，由于改进了手性识别能力使其更适用于制备色谱。
配位交换型：手性配位交换色谱（Chiral Ligand Exchange Chromatography，CLEC）由Davankov 发明，是通过形成光学活性的金属络合物而达到手性分离，属于Irving Wainer分类中的第4类手性固定相，主要用于分离氨基酸类。
由于此类固定相是由手性氨基酸―铜离子络合物键合到硅胶或聚合物上形成，因此流动相中必须含有铜离子以保证手性固定相上的铜离子不至流失。
其它的过渡金属元素也已用于手性配位交换色谱，但铜离子应用最广。
形成络合物的过程十分缓慢，因此有时需提高柱温，最佳温度约50℃。
手性配位交换色谱仅对α- 氨基酸和其类似物有效。
β- 氨基酸很难用手性配位交换色谱得以分离。
手性配位交换色谱可用于制备，由于流动相中存在铜离子，虽然铜离子能用离子交换柱除去，但增加了样品处理的困难。
大环抗生素型：大环抗生素型手性色谱柱是最近发展起来的，通过将大环抗生素键合到硅胶上制成的新型手性色谱柱。
大环抗生素型手性色谱柱的出现归功于Dan Armstrong的贡献。
此类色谱柱常用的大环抗生素主要由三种：利福霉素（Rifamycin），万古霉素（Vancomycin），替考拉宁（Ticoplanin）。
利福霉素作为手性添加剂在毛细管电泳分离手性化合物方面得到了成功运用。
万古霉素和替考拉宁分子结构中存在“杯”状结构区和糖“平面”结构区。
此类色谱柱性质稳定，可用于多种分离模式。
手性分离基于氢键、π-π作用、形成包合物、离子作用和肽键等。
替考拉宁分子量为1885，结构中存在20个手性中心，3个糖基和4个环。
酸性基团在多肽“杯”/ “裂层”的一端，碱性基团在它的另一端。
酸性基团和碱性基团提供了离子作用点。
糖基在三个平面上，可折叠起来将化合物分子包埋在多肽“杯”中。
万古霉素分子量为1449，结构中存在18个手性中心，3个环。
万古霉素具有“篮状”结构，它的附近还有一个可弯曲的糖平面，可将分析物分子包埋在“篮子”中。
羧基和仲氨基分布在“篮子”的边缘，参与和分析物分子产生离子作用。
万古霉素手性色谱柱可用于反相模式、正相模式和极性模式。
万古霉素手性色谱柱可以分离胺类、中性酰胺、脂类。
但对于酸性化合物选择性较低。
在反相模式中，有机相常用四氢呋喃、乙腈和甲醇。
水相常用三乙胺-乙酸缓冲液。
色谱柱适用的pH范围为4-7。
通常优化碱性化合物手性分离条件时，选择pH=7 为起点比较好。
另外四氢呋喃、乙腈有最好的选择性。