水蛭的化学成分研究
水蛭化学成分及其药理作用探讨综述
水蛭化学成分及其药理作用探讨综述水蛭是一种典型的血吸虫类动物，它的唾液含有许多药理活性成分，对于很多疾病有着广泛的治疗作用。
本文将对水蛭化学成分及其药理作用进行综述。
一、水蛭的化学成分水蛭的口吸器分泌有丰富的唾液，唾液成分主要包括以下物质：粘蛋白、过氧化物酶、酰胺酶、活性酪氨酸、蛋白酶、胶原酶、糠酸酯酶、利多卡因、肝素类物质、抗凝血酶、纤溶酶、生物碱等10多种成分。
其中，唾液中的利多卡因是一种局部麻醉剂，它可以减轻器械操作时的疼痛感；肝素类物质可以抑制血液凝固；抗凝血酶、纤溶酶等物质则有药理活性，可以促进血管扩张、增强微循环，达到降血压、抗血栓、抗心肌缺血等药理作用。
二、水蛭的药理作用1、抗凝血作用水蛭的口吸液中含有的肝素类物质、抗凝血酶、纤溶酶等成分，可以抑制血小板聚集和纤维蛋白的形成，具有明显的抗凝血作用。
同时，水蛭的唾液中含有的活性酪氨酸也可以通过一系列生物反应产生的一氧化氮，促进血管扩张，进一步增强了水蛭的抗凝血作用。
水蛭的唾液中含有很多生物活性成分，如粘蛋白、酰胺酶、过氧化物酶和多种酶类等，这些成分具有明显的抗炎活性。
研究表明，水蛭唾液中的一种脂多糖物质（LMWL）可以显著抑制人外周血中单核细胞和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）刺激下的白细胞介素-8（IL-8）的释放，从而发挥了抗炎作用。
3、抗肿瘤作用水蛭的唾液中含有多种生物碱，如卡汀、伯氨喹、升降氨等，这些化合物具有抗肿瘤功效。
研究表明，水蛭唾液提取物能够显著抑制小鼠腹膜巨细胞瘤的生长，并且能够显著降低血清中肿瘤标志物浓度，从而发挥了抗肿瘤作用。
水蛭唾液中含有多种酶类，如过氧化物酶、酰胺酶、蛋白酶等，这些成分具有显著的抗菌作用。
研究表明，水蛭唾液中的过氧化物酶可以通过产生一氧化氮、超氧化物等多种自由基，对各种病原菌具有明显的抗菌作用。
综上所述，水蛭唾液中含有丰富的生物活性成分，具有明显的抗凝血、抗炎、抗肿瘤和抗菌等多种药理作用。
因此，水蛭在传统医学中，一直被广泛用于治疗各种疾病，如高血压、心脏病、肝炎、癌症等。
水蛭化学成分
水蛭化学成分
水蛭是一种常见的水生动物，它们以吸食其他生物的血液为生。
水蛭的化学成分非常丰富，其中包括许多对人类有益的物质。
水蛭的唾液中含有一种叫做“水蛭素”的物质，它具有强烈的抗凝血作用。
这种物质可以防止血液凝结，从而使水蛭能够顺利地吸食血液。
同时，水蛭素还具有抗炎、镇痛等作用，因此被广泛应用于医学领域。
水蛭的唾液中还含有一种叫做“水蛭酶”的物质，它能够分解蛋白质和纤维蛋白，从而促进伤口愈合。
因此，水蛭素和水蛭酶常被用于治疗各种疾病，如静脉曲张、深静脉血栓等。
水蛭的唾液中还含有一些抗菌物质，如“水蛭素B”和“水蛭素C”。
这些物质可以抑制细菌的生长和繁殖，从而起到抗菌作用。
因此，水蛭素B和水蛭素C也被广泛应用于医学领域，用于治疗各种感染性疾病。
除了上述物质外，水蛭的唾液中还含有一些其他的化学成分，如组织胺、血管紧张素等。
这些物质可以影响血管的扩张和收缩，从而调节血压和血流量。
因此，水蛭素也被用于治疗高血压、心脏病等疾病。
水蛭的化学成分非常丰富，其中包括许多对人类有益的物质。
这些物质不仅可以用于治疗各种疾病，还可以用于研究和开发新药物。
因此，水蛭的研究和利用具有重要的意义。
水蛭的化学成分研究
水蛭的化学成分研究荆文光1，符江1,2，刘玉梅3，刘安1*（1.中国中医科学院中药研究所，北京，100700；2.江西中医药大学，南昌，330004；3.西南交通大学，成都，610031）[摘要] 目的：提取、分离、鉴定水蛭化学成分。
方法：采用硅胶柱色谱法、Sephadex LH-20 柱色谱以及制备HPLC等方法进行分离纯化，根据波谱学数据和理化性质进行结构鉴定。
结果：从水蛭甲醇提取物中分离鉴定了18个化合物，分别为胆甾醇（1）、十六烷基甘油醚（2）、菜油甾醇（3）、烟酸（4）、尿嘧啶（5）、尿苷（6）、次黄嘌呤（7）、次黄嘌呤核苷（8）、黄嘌呤（9）、苯丙氨酸（10）、丙氨酸（11）、腺苷（12）、脯氨酸（13）、缬氨酸（14）、异亮氨酸（15）、丙三醇（16）、棕榈酸（17）、琥珀酸（18）。
结论：化合物4 ~ 6, 8 ~ 10, 12 ~ 14, 16, 17均首次从水蛭中分离得到。
[关键词] 水蛭；化学成分；生物碱；氨基酸Research on Chemical Constituents of Hirudo nipponica Whitman JING Wen-guang1, FU Jiang1,2, LIU Yu-mei3, LIU An1*（1.Institute of Chinese Materia Medica, China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100700,China; 2.Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine, Nanchang 330006,China; Southwest Jiaotong University, Chengdu, 610031, China）[Abstract]Objective: To extract, separate and identify the chemical constituents from Hirudo nipponica Whitman.Method:Chemical constituents were isolated by various chromatographic methods and were identified by physicochemical characters and spectroscopic analysis or comparison with standard compounds. Result: From the MeOH extract of the Hirudo nipponica Whitman, eighteen compounds were isolated and identified as cholesterol （1）, hexadecyl ethers of glycerol （2）, campesterol （3）, nicotinic acid （4）, uracil （5）, uridine （6）, hypoxanthine （7）,inosine （8）, xanthine （9）, phenylalanine （10）, propylamine （11）, adenosine （12）, proline （13）, valine （14）, L-Isoleucine （15）, glycerin （16）, palmiticacid（17）, succinic acid （18）. Conclusion: Compounds 4-6, 8-10,12-14, 16 and 17 were all obtained from the Hirudo nipponica Whitman for the first time．[Key words]Hirudo nipponica Whitman; chemical constituents; alkaloid; amino acid水蛭始载于《神农本草经》：“主逐恶血，疲血，月闭，破血痕积聚，无子，利水道”。
水蛭现代研究
水蛭现代研究主要成分主要含蛋白质。
亦含铁、锰、锌等多种微量元素。
新鲜水蛭唾液中含有一种抗凝血物质名水蛭素（Hirudin），属于多肽，由于其分子组成中没有色氨酸和精氨酸，故有抗凝血作用。
但在干燥药材中水蛭素已被破坏。
水蛭唾液中还分泌有组胺样物质、肝素及抗血栓素等，与水蛭素有协同作用。
药理作用1．对血液的作用水蛭素能阻止凝血酶对纤维蛋白的作用，阻碍血液凝固。
水蛭素不受热或乙醇之破坏。
水蛭尚可分泌一种组胺样物质，因而可扩张毛细血管而增加出血。
水蛭醇提取物抑制血液凝固的作用较虻虫、虫、桃仁为强，水蛭醇制剂的作用较水制剂的作用为强。
水蛭素20mg可阻止100g人血的凝固。
水蛭水提取物对ADP诱导的大鼠血小板聚集有明显抑制作用，亦能明显抑制正常人的血小板聚集，有抗血栓形成的作用。
实验表明：水蛭在体外对纤维蛋白有较强的纤溶作用，其活性显著高于丹参和大黄；在体内亦有纤溶活性，能使家兔优球蛋白溶解时间（ELT）显著缩短。
因此水蛭能活化纤溶系统，溶解血栓。
亦有报告指出，水蛭素对实验性血栓形成有明显抑制作用，对凝血酶所致之实验性静脉血栓有溶解作用。
水蛭水提取液能降低大鼠的全血比黏度和血浆比黏度。
缩短红细胞电泳时间。
临床研究表明：水蛭对缺血性脑血管病患者因血液流变性异常而出现的浓、黏、聚状态有改善作用。
2．对心血管系统的作用有报告指出，水蛭对心肌营养性血流量有一定程度的增加作用；对组织缺血缺氧有保护作用。
水蛭素能对抗垂体后叶素引起的家兔冠状动脉痉挛，有抑制心肌缺血的治疗作用。
水蛭能明显消退主动脉粥样硬化斑，使斑块内胶原纤维增生，胆固醇结晶减少。
提示水蛭对防治动脉粥样硬化有潜在的应用价值。
水蛭有扩张毛细血管、改善微循环、增加肾脏血流量的作用。
其改善微循环的作用，与肝素相仿，只是作用时间短暂。
实验表明：水蛭有扩张外周血管、增加血流量和减少血管阻力的作用，该作用与盐酸罂粟碱作用相似。
3．对妊娠的作用实验表明：水蛭对小鼠各个时期妊娠（包括着床及妊娠的早、中、晚期）均有终止妊娠作用。
水蛭的综合研究近况
水蛭的综合研究近况关键词：水蛭研究情况综合分析水蛭始载于《神农本草经》，别名蚂蟥、肉钻子。
是经典的破血逐瘀类中药，它以干燥全体入药，含有水蛭素和蛋白质等成分，现代养殖、制剂、临床、实验等诸方面综合研究证明，水蛭力专效宏。
由于国内外对水蛭的需求量大，故越来越引起医药界广泛、深入研究。
现将近年来对水蛭研究情况综合分析如下。
1养殖研究水蛭易养易管，自然界中的池塘、沟渠、水田均可以放养，也可人工建造饲养池，同精养鱼池基本相似。
因此，人工养殖水蛭前景看好。
［1］目前，我国用于大量制中成药的主要以宽体金线蛭和茶色蛭为主，人工养殖也就以这两种为好。
养殖水温宜保持在15～30℃，水蛭繁殖快，再生力强。
人工饲养的水蛭可在10月捕捉，捕捉后洗净，按不同种类进行加工。
因其供需矛盾突出，近几年来已成为世界性的紧俏中药材之一，故应掌握水蛭养殖技术。
2制剂研究2.1制备工艺研究。
复方水蛭口服液是由水蛭和川芎制成的纯中药复方制剂。
以复方水蛭口服液中的水蛭为主要研究对象，用含氮物质的提取率和药效学试验数据为指标，比较了醇提、水提以及先醇提再水提3种制备工艺的提取效果，从而制订了采用先醇提再水提的制备工艺，不仅提取率比单一醇提或水提高得多，且药效学作用也更强。
故认为其制备工艺较科学、合理。
［2］2.2炮制研究。
考历史文献，水蛭制用有3个目的：①防止入腹生子为害；②降低毒性；③矫臭矫味，利于粉碎。
现代研究发现水蛭的炮制要考虑到加热处理对水蛭中有效成分及水蛭临床疗效的影响，故应对其炮制方法进行系统研究。
［3］3临床研究近年来发现水蛭在临床上应用越来越广。
3.1治疗输卵管阻塞。
方药由庶虫虫、水蛭各等量组成，装入胶囊(庶虫蛭散)。
自月经来潮第五天开始服药，每次5粒(约6克)，日3次。
治疗95例，结果：有效85例，无效10例。
［4］3.2有人经临证多年发现，水蛭具有祛瘀而不伤正之功，且宜生而不宜炙，在临床上还用于输卵管积水，精液不化症，效果甚佳。
水蛭化学成分研究进展
１ ８・ Ｏ
Ｃ ｎｅ ｅ ｏ ｒ ａｌ ｈｉ ｓ Ｊ ｕ ｎ ｏｆ Ｉ ｆ ｍ ｎ ｏｒ ａｔｉ ｎ ｎ Ｃ ｏ ｏ Ｔ Ｍ
Ｄｅ ．２ １１ ｃ Ｏ ＶＯ１ ８ ｏ． ２ ．１ Ｎ １
水蛭化学成分研 究进 展
刘玉梅 ， 匙峰 ， 。章军 ， 刘安
（． １西南交通大学生命科学与工程学院， 四川 成都 ６ ０ ３ ；２ 中国中医科学院中药研 究所， １０ １ ． 北京 １０ ０ ） ０ ７０ 关键词：水蛭；化 学成分 ；综述
成分 。近年来， 不少学者针 对水蛭中水蛭 素类 多肽 成分进行 过 综述 ， 但笔者通过 查阅相关文献， 发现 对水蛭 中小分子化 学 成分 的综述鲜有报道。 现将近年来分离得到的多肽类成分和小 分子化学物质作一综述， 同时也对水蛭研究中存在一个抗凝血多肽， 命名 为“ 蚂蟥多肽 （ｈ ｔ ａ ｉ ） ， ｗ ｉｍ ｎ ｎ ”
Ｄ ｌ １ ． ９ ９ ｊ ｉ ． ０ ５ ５ ０ ． ０ １ １ ． ５ Ｏ ： ３ ６ ／ ． ｎ １ ０ — ４ ２ １ ． ２ ０ １ ０ Ｓ ｓ ３
中图分类号：Ｒ ８ ２４
文献标识码：Ａ
文章编号 ：１０ —３ ４２ １）２０ ０ —３ ０ ５５０ （０ １１ １ ８０ １ 多肽和蛋白类等 大分子成分 目前从水蛭 中报道 了一系列具有抗凝作用 的肽类成分 ， 其 中以水蛭素 的研究最为透彻 。 它是从水蛭唾液腺 中分离得到的
一
水蛭始载于 《 神农本草经》 主逐恶血， ：“ 瘀血 ， 闭， 血 月 破 瘕积聚， 无子， 利水道 。 ”其味咸 、苦， 性平， 归肝经， 具有破血通 经 、逐瘀消瘕之功， 主治血瘀经闭、瘕瘕 痞块 、中风偏 瘫、跌 打损伤等 。２ １ ０ ０年版 《 中华人 民共和 国药典》（ 以下简称 “ 药 《 典 》 ） 载 的水 蛭 为 水 蛭 科 动 物 蚂 蟥 肋 ｍ ｎ ａ ｐ ｇ ａ ” 收 ｔａ ｉ ｉｒ Ｗ ｉｍ ｎ、 水 蛭 Ｅ ｒ ｄ ｉｐ ｎ ｃ ｈ ｔ ａ 或 柳 叶 蚂 蟥 ｈｔａ ｉ ｕ ｏ ｎｐ ｏ ｉａ Ｗ ｉｍ ｎ
水蛭药理研究资料搜集册
水蛭功效的药理学研究2009-10-26 20:14水蛭为水蛭科动物蚂蟥、水蛭或柳叶蚂蟥干燥体。
水蛭主要含蛋白质，新鲜水蛭唾液中含有一种抗凝血物质——水蛭素。
水蛭味咸、苦，性平；有小毒。
归肝经。
「药理作用」1.抗血栓形成去头水蛭醇提物对胶原蛋白-肾上腺素诱导的小鼠体内血栓和大鼠动-静脉旁路血栓形成有显著抑制作用，水蛭素对实验性血栓形成有明显的抑制作用。
水蛭素抗血栓作用与抑制血小板聚集、抗凝血、促进纤溶过程有关。
抗血小板聚集水蛭及其制剂，或水蛭唾液，给动物灌胃或注射，均能明显降低血小板表面活性，抑制血小板聚集，也能抑制胶原、ADP、肾上腺素或花生四烯酸等诱导的血小板聚集，降低血小板黏附性。
抗凝水蛭素能选择性抑制凝血酶，抗凝作用强大。
促纤溶水蛭的水提取物能降低纤溶酶原抑制剂（PAI）的活性，使纤溶酶原激活剂（t-PA）的活性提高。
2.对血液流变学的影响水蛭提取物可使血液黏度降低，红细胞电泳时间缩短。
水蛭粉对缺血性中风病人的医学教.育网搜集整理血细胞比容、血浆比黏度、全血比黏度、红细胞电泳时间、纤维蛋白原含量及血沉方程K值，均有明显降低。
3.降血脂水蛭能抑制血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）的升高。
对食饵性高脂血症家兔，水蛭粉预防或治疗给药，均能使血中胆固醇和甘油三酯含量降低，同时使主动脉与冠状动脉病变较对照组减轻，斑块消退明显，可见胶原纤维增生，胆固醇结晶减少。
4.抗肿瘤新鲜水蛭唾液中的抗凝血物质——水蛭素注入实验性肺癌小鼠体内，能防止肿瘤细胞的扩散，对实验性肝癌小鼠也有同样抑制作用。
5.对实验性脑血肿及皮下血肿的影响水蛭能促进血肿吸收，减轻周围脑组织炎症反应及水肿，缓解颅内压升高，改善局部血流循环，保护脑组织免遭坏死，有利于神经功能的恢复。
本药又名蚂蟥。
【性味与功效】味苦、成，性平。
功效：活血破瘀，通经消积。
【传统应用】主治血滞闭经、外伤瘀血、癥瘕积聚等病症。
本药常用于以下传统方剂：①抵当汤、抵当丸(《伤寒论》)：水蛭、虻虫、桃仁、大黄，治疗伤寒蓄血，少腹满痛；②夺命散(《济生方》)：红蛭、大黄、黑牵牛，治疗金疮打损，心腹疼痛，大小便不通。
水蛭化学成分及其药理作用探讨综述
水蛭化学成分及其药理作用探讨综述关键词：水蛭Discussiononthechemicalcomponentsandp harmaceuticalactionofHirudoaipponicaW hitman.水蛭，为环节动物水蛭科水和蚂蝗或柳叶蚂蝗等的全体。
扁长圆栓形，体多弯曲扭转，长2～5cm，宽～。
水蛭为破血通瘀、通经药，其主要有效药用成分为水蛭素。
1化学成分水蛭主含蛋白质，其水解氨基酸含量达%，水蛭的唾液中含一种抗凝血物质，即水蛭素［1］。
hayraftJB于1884年首先发现新鲜医用水蛭的提取物中含有抗凝血物质。
直到1955年德国学者Fmarkwardt及其同事从医用伞蛭的唾液中成功地分离出这种抗凝物质的纯品，而定名为水蛭素，并鉴定为一种氨基酸多肽。
水蛭素是含65个氨基酸的多肽，分子量为7000左右，含3个二硫键，已分离鉴定7种异构体。
水蛭素的二级和三级结构对其抗凝活性起决定性作用，二硫键是决定其分子结构的稳定性，保持高抗凝活性的关键。
如果二硫桥键被氧化或还原，或子分子发生了蛋白降解，或失去酸性的一端氨基酸也会失去与凝血酶结合的能力［1］。
20世纪80年代初期-有Budzynskiaz等从蚂蝗的唾液腺中抽提出一种新的抗凝物质，谭恩先等人称之为吻蛭素［2］。
此外，从水蛭及其分泌的唾液中，还提取出肝素，抗血栓素以及一种组胺样物质等。
水蛭中还含有多种化学元素，抗血栓素以及一种组胺样物质等。
水蛭中还含有多种化学元素，氨基酸成分及蛋白质等营养成分。
在80年代末期国内学者胡玉清等人用高频电感耦合等离子体发射光谱法测定水蛭中镍、铁、锌、硒、钼、锰等28种元素含量，并研究出水蛭的抗癌、抑癌药理活性与锰、镁和锌含量较高有关［3］。
2药理学研究50年代中期德国学者从医用水蛭中分离并鉴定了水蛭素之后，对于水蛭素的药理学，包括抗凝作用，对血小板各种细胞的影响，抗血栓效果，降血脂作用及对脑血肿，皮下血肿的影响，药物动力学等都进行了全面、深入的研究，取得了科学的药理研究成果。
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水蛭的化学成分研究荆文光1，符江1,2，刘玉梅3，刘安1*（1.中国中医科学院中药研究所，北京，100700；2.江西中医药大学，南昌，330004；3.西南交通大学，成都，610031）[摘要] 目的：提取、分离、鉴定水蛭化学成分。
方法：采用硅胶柱色谱法、Sephadex LH-20 柱色谱以及制备HPLC等方法进行分离纯化，根据波谱学数据和理化性质进行结构鉴定。
结果：从水蛭甲醇提取物中分离鉴定了18个化合物，分别为胆甾醇（1）、十六烷基甘油醚（2）、菜油甾醇（3）、烟酸（4）、尿嘧啶（5）、尿苷（6）、次黄嘌呤（7）、次黄嘌呤核苷（8）、黄嘌呤（9）、苯丙氨酸（10）、丙氨酸（11）、腺苷（12）、脯氨酸（13）、缬氨酸（14）、异亮氨酸（15）、丙三醇（16）、棕榈酸（17）、琥珀酸（18）。
结论：化合物4 ~ 6, 8 ~ 10, 12 ~ 14, 16, 17均首次从水蛭中分离得到。
[关键词] 水蛭；化学成分；生物碱；氨基酸Research on Chemical Constituents of Hirudo nipponica Whitman JING Wen-guang1, FU Jiang1,2, LIU Yu-mei3, LIU An1*（1.Institute of Chinese Materia Medica, China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100700,China; 2.Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine, Nanchang 330006,China; Southwest Jiaotong University, Chengdu, 610031, China）[Abstract]Objective: To extract, separate and identify the chemical constituents from Hirudo nipponica Whitman.Method:Chemical constituents were isolated by various chromatographic methods and were identified by physicochemical characters and spectroscopic analysis or comparison with standard compounds. Result: From the MeOH extract of the Hirudo nipponica Whitman, eighteen compounds were isolated and identified as cholesterol （1）, hexadecyl ethers of glycerol （2）, campesterol （3）, nicotinic acid （4）, uracil （5）, uridine （6）, hypoxanthine （7）,inosine （8）, xanthine （9）, phenylalanine （10）, propylamine （11）, adenosine （12）, proline （13）, valine （14）, L-Isoleucine （15）, glycerin （16）, palmiticacid（17）, succinic acid （18）. Conclusion: Compounds 4-6, 8-10,12-14, 16 and 17 were all obtained from the Hirudo nipponica Whitman for the first time．[Key words]Hirudo nipponica Whitman; chemical constituents; alkaloid; amino acid水蛭始载于《神农本草经》：“主逐恶血，疲血，月闭，破血痕积聚，无子，利水道”。
其味苦、咸，性平，归肝经，具有破血通经、逐瘀消癥之功，主治血瘀经闭、中风偏瘫、癥瘕痞块、跌打损伤等症[1]。
2010年版《中华人民共和国药典》收载的水蛭为水蛭科动物蚂蟥Whitmania pigra Whitman、水蛭Hirudo nipponica Whitman或柳叶蚂蟥Whitmania acranulata Whitman的干燥全体[2]。
水蛭素是从水蛭唾液腺中分离得到的一种由66个氨基酸残基组成的单链多肽，具有很强的抗凝活性，被认为是水蛭活血化瘀的主要成分，但是水蛭传统用药多为炮制后入药或者口服用药，水蛭素很容易在高温下被破坏或者被消化酶所分解，因此是否还有其它未知成分构成水蛭活血化瘀的物质基础尚需深入研究[3,4]。
为阐明水蛭药效物质基础，笔者对水蛭进行了化学成分研究，从水蛭甲醇提取物中分离得到18个化合物，根据理化性质和波谱数据进行分析，分别鉴定为：胆甾醇（cholesterol，1）、十六烷基甘油醚（hexadecyl ethers of glycerol，2）、菜油甾醇（campesterol，3）、烟酸（nicotinic acid，4）、尿嘧啶（uracil，5）、尿苷（uridine，6）、次黄嘌呤（hypoxanthine，7）、次黄嘌呤核苷（inosine，8）、黄嘌呤（xanthine，9）、苯丙氨酸（phenylalanine，10）、丙氨酸（propylamine，11）、腺苷（adenosine，12）、脯氨酸（proline，13）、缬氨酸（valine，14）、异亮氨酸（L-Isoleucine，15）、丙三醇（glycerin，16）、棕榈酸（palmiticacid，17）琥珀酸（succinic acid，18）。
1 仪器与试剂XT4A型显微熔点测定仪（温度未校正，上海荆和分析仪器有限公司），BrukerAM-600型核磁共振波谱仪（瑞士布鲁克公司，TMS内标），旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司，型号：EYELAN-1100），闪式提取器（西安太康生物科技有限公司，型号：JHBE-50S）。
薄层色谱及柱色谱硅胶（青岛海洋化工厂），Sephadex LH-20型葡聚糖凝胶（美国GE公司），反相硅胶（德国Merck公司），制备HPLC（北京创新通恒公司），甲醇（分析纯，北京化工厂），其他试剂（分析纯，市售）。
水蛭于2008年10月购于河北省安国市长安中药材有限公司，经中国中医科学院中药研究所何希荣研究员鉴定为水蛭科动物水蛭Hirudo nipponica Whitman 的干燥全体。
2 提取和分离水蛭8kg，粉碎，过40目筛，用8倍量甲醇浸泡过夜，用闪式提取器提取3次，过滤，将滤渣用5倍量甲醇浸泡0.5h，同法提取3次，合并滤液回收溶剂得浸膏约850g。
400g浸膏上100-200目硅胶柱粗分，依次用石油醚、石油醚-丙酮系统（10:1、3:1）、氯仿-甲醇系统（2:1、0:1）各洗脱3个体积，收集流份，TLC 检识，合并相同组分，得到5个组分（Fr. 1 ~ Fr. 8）。
组分Fr. 2部分经硅胶柱色谱分离，以石油醚-丙酮系统（12:1~0:1）梯度洗脱得化合物1（25g）；Fr. 3部分经硅胶柱色谱分离，以石油醚-丙酮系统（5:1~0:1）梯度洗脱得化合物2（72mg）、化合物3（19 mg）、化合物17（20 mg）、化合物18（12 mg）；组分Fr. 3 经硅胶柱色谱分离，以氯仿-甲醇系统（20:1～3:1）梯度洗脱，洗脱部分经Sephadex LH-20柱色谱分离，以甲醇洗脱，再用甲醇重结晶得化合物4（21mg）、化合物7（18 mg）、化合物8（11 mg）；经过半制备HPLC，采用5%甲醇等度洗脱得到化合物5（13 mg），化合物6（7 mg），化合物9（5 mg），化合物12（9 mg）；组分Fr. 5反复经过硅胶柱色谱分离，用氯仿-甲醇-水系统（3:2:0.5）洗脱得化合物10（36 mg）、化合物11（22mg）、化合物13（16 mg）、化合物14（12 mg）、化合物15（11 mg）、化合物16（13 mg），反复重结晶得到化合物19（27 mg）。
3 结构鉴定化合物1白色针晶（丙酮），mp 143.5 ~ 146℃。
1H-NMR（600 MHz, CDCl3）δ：5.32（1H, m, 6-H）,3.50（IH, m, 3-H）,0.68（3H, s, 18-H）。
13C-NMR（150 MHz, CDCl3）δ：140.7（C-5）,121.7（C-6），71.8（C-3），56.7（C-14）,56.1（C-17）,50.1（C-9）,42.3（C-4）,42.3（C-13）,39.8（C-16）39.5（C-24）,37.2（C-1）,36.5（C-10）,36.2（C-22）,35.8（C-20）,31.9（C-7）,31.9（C-8）,31.7（C-2）,28.2（C-12）,28.0（C-25）,24.3（C-23）,23.9（C-15）,22.8（C-27）,22.6（C-26）,21.1（C-11）,19.4（C-19）,18.8（C-21）,11.9（C-18）。
以上数据与文献报道[5]对照一致，确定化合物1胆甾醇（cholesterol）。
化合物2白色固体（丙酮），浓硫酸-香草醛加热显紫红色斑点。
1H-NMR（600 MHz, CDCl3）δ：5.27（1H, t, J = 6.0 Hz, 6-H）,3.52（1H, m, 3-H）,1.18（3H, d, J = 7.0 Hz, 21-H）,1.02（3H, s, 18-H）,0.98（3H, s, 19-H）,0.84（6H, d, J = 6.5 Hz, H-26, H-27）,0.66（3H, d, J = 7.0 Hz, H-28）；13C-NMR（150 MHz, CDCl3）δ：140.7（C-5）,121.7（C-6）,71.8（C-3）,56.8（C-14）,56.1（C-17）,50.1（C-9）,42.3（C-4）,42.3（C-13）,39.8（C-16）,39.5（C-24）,37.2（C-1）,36.5（C-10）,36.2（C-22）,35.8（C-20）,31.9（C-7）,31.9（C-8）,31.7（C-2）,29.7（C-28）,28.2（C-12）,28.0（C-25）,24.3（C-23）,23.8（C-15）,22.8（C-27）,22.5（C-26）,21.1（C-11）,19.4（C-19）,18.7（C-21）,11.9（C-18）。