(KJ201705)水产品中硝基呋喃类代谢物的快速检测胶体金免疫层析法
硝基呋喃类药物及其代谢物检测方法的研究进展
硝基呋喃类药物及其代谢物检测方法的研究进展本文对于硝基呋喃类药物具体的种类和理化性质以及可能带来的危害进行了相关的分析，并且对于胶体金免疫和酶联免疫以及高效液相色谱，还有液相色谱串联质谱等一些当前被使用在对硝基呋喃类药物和其代谢物残留进行检查方式的具体使用情况进行研究，同时针对这一药物检测方式的有效应用给出了个人的一些建议。
标签：硝基呋喃类药物及代谢物;检测方法;研究进展1 硝基呋喃类药物简介硝基呋喃类药物其本身属于呋喃核的5位引入硝基以及2位被引入到其他基团中的一种通过人工合成方式生成的抗菌药。
因为这一类类药物其本身都存在C=N双键与5-硝基呋喃环的一种结构，因此四种药物的理化性质是相同的，其都属于一种无臭并且味苦，同时拥有稳定性质的一种黄色结晶粉末。
其本身对于光敏感和代谢会产生一定的影响，其在和蛋白质融合在一起的时候会构成一种相对稳定的蛋白结合物。
2 硝基呋喃类药物及其代谢物残留检测方法2.1 胶体金免疫法（GICA）胶体金免疫法其属于前处理的方式其进行反应的时间相对较短，并且仅仅需要使用肉眼就能够对其进行定性的一种检测方法。
我国的相关研究人员对于饲料中硝基呋喃抗生素胶体金检测试的纸条进行研究，检测出其中呋喃唑酮和呋喃它酮，以及呋喃西林与呋喃妥因进行检测的最低极限分别能够达到5，3，2，2 μg·kg-1，假阳性率能够达到2%，假阴性率则能够达到为0。
2.2 酶联免疫法（ELISA）酶联免疫吸附试验是一种具有高特异性和高灵敏度的半定量定量方法。
它操作简单，检测时间短。
它可以实现大量样品的同时检测。
因此，它经常被用作药物残留分析的筛选方法。
2004年，Cooper等首次制备了AOZ多长抗体，并提出了用于虾组织AOZ检测的ELISA方法。
该方法的建立为开发硝基呋喃代谢物的ELISA奠定了基础。
徐一平[24]建立了AHD的ELISA方法，检出限为0.085 mg·mL-1，通过测定猪肉样品的回收率确定了该方法的准确性。
胶体金免疫层析技术在水产品药残快速检测中的应用
胶体金免疫层析技术在水产品药残快速检测中的应用摘要近年来发展成熟的胶体金免疫层析快速检测技术，能从养殖到销售的各个环节对水产品中的药残进行监管。
阐述了胶体金免疫层析技术的原理、优点以及在水产品药残检测中的应用，以供参考。
关键词胶体金免疫层析技术；快速检测；水产品；药残我国是水产养殖和水产品消费大国，水产品的质量安全直接关系到消费者的生命健康，随着生活水平的不断提高，人们对水产品质量安全提出了越来越高的要求。
水产品中具有代表性的药物残留种类主要包括氯霉素、硝基呋喃类、孔雀石绿等[1-3]，是目前中国水产品最为严重的危害因素之一，对广大消费者造成了巨大损害。
因此，努力提高水产品质量安全水平，对于保护消费者合法权益和促进渔业经济可持续发展具有重大意义。
近年来，一些生物科技公司纷纷研发出了基于胶体金免疫层析技术的水产品药残快速检测试剂盒，本文对胶体金免疫层析技术的原理、优点以及在水产品药残检测中的应用做了简要的综述，现将其介绍如下。
1 胶体金免疫层析技术的原理胶体金免疫层析技术是胶体金标记技术结合免疫层析技术一种应用形式。
其原理是分别将药物抗原和二抗呈条带状固定在试纸膜上，形成2条固定的隐形线，分别为检测线（T线）和对照线（C线）。
当样品加入加样孔后，样品借助微孔膜的毛细管作用，慢慢沿着膜运动，样品中的残留药物与药物抗原发生特异性的结合，使该条形带显示一定的颜色[4]，用肉眼即可直观地判断检测结果：阴性（-）：T线（检测线）比C线（对照线）深或一样深，表示样品中被测物浓度低于检测限或不含被测物残留。
阳性（+）：T线比C线浅，或T线无显色，表示样品中被测物浓度高于检出限；T线相比C线越浅，表示样品中被测物浓度越高。
无效：未出现C线，表明检测失败或试剂条已变质失效。
2 胶体金免疫层析技术的优点2.1 快速胶体金免疫层析技术最大的优势就是快速耗时少，样品处理过程一般需要40 min左右，检测过程及结果判读需要10 min左右。
罗非鱼硝基呋喃代谢物残留检测方法的运用
养殖与饲料2019年第02期满足鸡舍生产、日照、通风、防护、交通和消防要求。
种植的蔬菜要以生长茂密、生产周期长、作业时间短的作物为主，如西红柿、黄瓜、豆角等多叶植物，效果较好，便于管理。
5结语肉鸡生态养殖场的建造，能改善肉鸡舍的空气环境，肉鸡呼吸道、病毒性疾病会大为减少，从而大大减少肉鸡生产用药；同时可与蔬菜大棚有机结合，蔬菜吸收肉鸡排出的二氧化碳，肉鸡呼吸蔬菜排放的氧气，减少了冬季排风换气，降低热量损耗，节约鸡舍供热成本，增加养殖效益，因此肉鸡生态养殖场值得大力推广。
【责任编辑：刘少雷】摘要罗非鱼是一种世界知名的淡水鱼，目前兽药残留在水产上也十分严重，硝基呋喃已成为国内外常用的兽药之一，呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃酮、呋喃妥因是具有代表性的几种，具有抗菌和抗炎作用，已被广泛应用。
但是，在食用含有硝基呋喃药物产生残留的动物后，会产生过敏等危害人体健康的疾病，因此需要建立快速、灵敏、准确的检测方法，本文结合实际情况，分析总结了国内外的硝基呋喃类分类和现行检测方法，以供参考。
关键词罗非鱼；动物源食品；硝基呋喃；兽药；代谢物残留罗非鱼硝基呋喃代谢物残留检测方法的运用甘柳红广东省深圳市龙岗区宝龙街道食物环境监管中心，广东深圳518000罗非鱼是一种世界知名的淡水鱼，深受人们的喜爱，然而近年来随着水产养殖业的兴起，很多兽药被用于水产养殖业，罗非鱼中很多的兽药残留间接的被人体食用，危害着人类的健康，因此，建立罗非鱼硝基呋喃代谢物残留检测方法十分重要，本文主要介绍了罗非鱼硝基呋喃代谢物残留的检测方法，以期为临床提供指导。
1硝基呋喃的概述硝基呋喃类药物对家禽具有一定的抗菌和抗炎效果，通常用于畜禽养殖，以及消毒和抗御水生动物的繁殖环境。
硝基呋喃类药物主要分为呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃酮和硝基呋喃硫酮，它们的结构类似，是比较常见的硝基呋喃类物质[1]。
然而，呋喃物质的稳定性差，并且动物的代谢物与组织蛋白质结合，并在弱酸性环境（如人胃酸）中释放，形成对耐药菌株敏感的稳定化合物。
食品快速检测实验室建设实施计划方案
附件 1：标准快速检测室建设方案一、区域功能划分表 1 区域功能划分表序号区域分类区域名称功能1样品制备区样品制备2样品前处理区实施农残、药残、添加剂等项目检测过程中理化分析的提取、净化等步骤3样品测试区实施农残、药残、添加剂等项目检测过程中的测试步骤区域设计示例：装修基本要求：样品室：地面平整、防滑，墙面为乳胶漆，有防鼠设施和空调。
理化实验室：地面平整、防滑防腐，墙面为乳胶漆，有空调。
二、快速检测实验室家具配置表 2 快速检测实验室家具配置表序号设备名称用途1实验边台操作台面2中央台操作台面3试剂柜存放固体试剂4样品柜存放样品5器皿柜（架）存放玻璃器皿6冰箱（带冷冻）存放样品和试剂7通风系统实验室通风8台式冲眼发生化学伤害时急救9不锈钢台微生物检验10吧台椅可升降（实验室用）11办公桌椅办公12文件柜存放文件三、设备选型及配置表 3设备选型及配置表序号设备名称 *用途及规格一检测设备1酶标仪兽药、真菌毒素检测2读卡仪农残、兽药检测3食品安全综合检测仪部分农药残留4pH 计酸度测定5肉类水分速测仪肉类水分含量，辨别是否为注水畜产品6重金属检测仪重金属检测7分子生物学检测平台食源性致病菌、动物源性食品8可移动食品安全检测平台-二辅助设备2 ～ 20 μL1移液器10 ～ 200 μL1mL2电子天平精度 0.01 g3离心机5000 r/min， 100mL、10mL、5mL 10000 r/min， 1.5mL4振荡器-5搅肉机-6粉碎机-7烘箱-8电热恒温水浴锅4 孔1 孔9纯水制备仪-10电炉500W 、100W 三办公用品1电脑数据分析和保存2打印机-3台式复印机-*可根据实际情况进行增减四、检测项目表 4 食品快速检测检测项目参考表大类小类叶菜类茄瓜果类根茎类新鲜蔬菜鳞茎类豆类水生类芽菜类其他类鲜肉类猪牛羊肉水产品淡水鱼茶叶茶叶检测项目检测方法试纸卡有机磷农药残留量或氨基农药残留检测仪甲酸酯类农药残留全项快筛系统酶标仪盐酸克伦特罗或莱克多巴胶体金胺或沙丁胺醇拉曼光谱食品安全快速综合分析仪酶标仪胶体金孔雀石绿（或硝基呋喃）多功能食品安全检测仪拉曼光谱食品安全快速综合分析仪全项快筛系统有机磷农药残留量或氨基试纸卡农药残留检测仪甲酸酯类农药残留全项快筛系统试剂盒或美术绿多参数食品安全检测仪全项快筛系统现场制售散装食品糕点硼砂试剂盒卤菜（熟肉）菌落总数微生物快速检测仪a 煎炸用食用油酸价食用油品质检测仪试剂盒试剂盒多功能食品安全检测仪豆制品吊白块拉曼光谱食品安全快速综合分析仪全项快筛系统粉丝、粉条、粉皮食用菌试剂盒二氧化硫多功能食品安全检测仪干果全项快筛系统干菜腌腊肉亚硝酸盐多功能食品安全检测仪鸭血甲醛试剂盒a：开展微生物快速检测，应设置微生物检测区。
免疫胶体金法快速检测水产品中硝基呋喃类代谢物的研究
免疫胶体金法快速检测水产品中硝基呋喃类代谢物的研究柳爱春;刘超;赵芸;桑丽雅;王振国;陈飞东【期刊名称】《浙江农业学报》【年(卷),期】2013(025)001【摘要】对水产品中硝基呋喃类代谢物(AOZ,SEM,AMOZ,AHD)快速衍生化方法的研究发现:理想的衍生化条件是在酸性条件下,加入4-羰基苯甲醛(4-CBA)或2-硝基苯甲醛(2-NBA)经60℃恒温水浴60 min；进一步对样品的洗涤、提取和净化方法进行了优化,在此基础上建立了水产品中硝基呋喃类代谢物免疫胶体金快速检测方法,研制出免疫胶体金快速检测试剂盒,对AOZ最低检出限为0.5μg· kg-1,对SEM,AMOZ和AHD最低检出限均为1.0μg·kg-1,最短检测时间约为90 min·个-1样品.胶体金法与液相—串联质谱法的检测结果进行对比,两者的符合率约为98％.胶体金法快速、简便、成本低,有很好的应用价值.【总页数】8页(P95-102)【作者】柳爱春;刘超;赵芸;桑丽雅;王振国;陈飞东【作者单位】杭州市农业科学研究院,浙江杭州310024;杭州市农业科学研究院,浙江杭州310024;杭州市农业科学研究院,浙江杭州310024;杭州南开日新生物技术有限公司,浙江杭州310022;杭州南开日新生物技术有限公司,浙江杭州310022;杭州市农业科学研究院,浙江杭州310024【正文语种】中文【中图分类】TS207.5【相关文献】1.免疫胶体金法快速检测水产品中喹诺酮类药物 [J], 柳爱春;刘超;张乐;童朝明;李锋;赵芸2.水产品中硝基呋喃类代谢物残留量高效液相色谱串联质谱快速检测法的研究 [J], 周道志3.高效液相色谱-串联质谱法检测水产品中硝基呋喃类代谢物的优化研究 [J], 赵东豪;黎智广;王旭峰;王强;李永贤;黄珂;李刘冬;4.超高效液相色谱-串联质谱法快速检测水产品中硝基呋喃类代谢物残留研究 [J], 李剑;陈泽暖;蔡楠5.酶联免疫法快速检测水产品中硝基呋喃类代谢物、氯霉素及氟苯尼考 [J], 区兑鹏;卢义博;严忠雍;张小军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
水产品中硝基呋喃类代谢物快速检测方法与液—质检测方法比较
水产品中硝基呋喃类代谢物快速检测方法与液—质检测方法比较摘要通过对58批次鱼样硝基呋喃类代谢物进行快速检测法与液-质检测法检测，结果表明，快速检测法20批次不合格，不合格率34.5%；液-质检测法8批次不合格，不合格率13.8%，排除假阳性12批次，不合格率降低20.7个百分点。
看似不合格率偏差较大，主要原因是快速检测法检出限是1.0 μg/kg，液-质检测法检出限是0.25 μg/kg，故试验将T线偏浅于C线的测试板即判定为阳性，严把质量关，然后再以液-质检测法确证，从而保证检测结果的准确性。
关键词水产品；硝基呋喃类代谢物；检测方法；比较硝基呋喃类药物（Nitrofurans）是人工合成的具有5-硝基呋喃基本结构的广谱抗菌药物，广泛用于家禽、家畜、水产、蜂等动物传染病的预防与治疗，当含有硝基呋喃类抗生素残留的食品被食用，将会对人类健康造成危害。
由于硝基呋喃类药物残留危害严重，我国农业部文件农牧发〔2002〕号也规定动物源性食品中呋喃唑酮的检出限为不得检出，但是硝基呋喃类药物残留超标事件时有发生，必须进一步强化对硝基呋喃类药物的管理。
据报道，用于检测硝基呋喃类抗生素及其代谢物残留的方法主要有色谱方法及其联用技术、分光光度法、免疫分析法等[1-4]。
沈阳市农业检测中心常采用免疫分析法，即速测法与液-质联用技术结合的方法。
通过对58批次淡水鱼的检测，比较、分析2种不同的检测方法的优缺点。
1 材料与方法供试材料为58批次鱼类样品。
1.1 快速检测方法（胶体金法）检测原理：采用免疫竞争法结合胶体金标记技术进行检测。
主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中。
检测试剂：氯霉素及硝基呋喃代谢物（AOZ、AMOZ、SEM）快速合检试剂盒，批号：EG10009，生产日期：2012-07-11，北京六角体科技发展有限公司。
水产品中硝基呋喃类代谢物残留量高效液相色谱串联质谱快速检测法的研究
样品衍生条件的优化。4 种硝基呋喃的分子量在 75 ～ 201，在这个质量范围内质谱背景噪音很大，4 种代谢产物 的电离效率比较低，因此它们的质谱检测灵敏度低。而在 酸性条件下，利用邻硝基苯甲醛上的醛基 ( 一 CHO) 可以 与 AMOZ、SEM、AHD、AOZ 等 4 种代谢物上的含氮亲核 基团胺基 ( 一 NH ) 发生醛胺亲核加成反应，可以分别形成 较好的特性衍生物，使衍生物的分子离子质荷比大于 200， 处于相对适于检测的质量区域，质谱检测灵敏度会有很大 提高。在实验室多年的硝基呋喃类检测的经验和参考相关 资料的基础上，选择采用盐酸水解，邻硝基苯甲醛衍生化。 本试验比较了 37℃恒温（空气浴）振荡 16h, 60℃恒温（空
分析步骤。 （1）提取步骤。称取经肉类组织粉碎机粉碎的试样 2g （精确至 0.01g）于 50mL 离心管中，加入 10mL 0.2 Mol/ L 盐酸溶液在匀浆机上以 16000r/min 速度匀浆 15 秒，用 5mL 0.2 Mol/L 盐酸溶液洗涤匀浆刀 , 合并提取液。 （2） 样 品 恒 温 孵 育 提 取。 离 心 管 中 加 入 400μL 100mMol/L 新配制的 2- 硝基苯甲醛（NBA）衍生试剂振 荡 1 分钟 ；放在 60℃恒温水浴锅中反应 0.5 小时。孵育过 程要注意避光操作。 （3）净化方法。离心管在 4500 r/min 下离心 10 min， 上清液转入另一离心管中，残渣弃去。上清液中加入 5 mL 0.1 Mol/L KH2PO4 溶液，用 1 Mol/L KOH 溶液调节 pH 值在 7 ～ 7.5 范围。离心管中加入 10mL 乙酸乙酯，在振荡器上震 荡 5 分钟，以 4500 r/min 速度离心 10 min，吸取 5mL 上 层清液（相当于 1g 样品）移至吹氮浓缩仪的吹氮管中，在 50℃下用氮气将试管内的溶剂挥干，残渣用 1mL 纯净水溶 解，漩涡振荡器上混漩 60 秒，加入 3 mL 正己烷，漩涡振 荡器上混漩 60 秒，在 4500 r/min 下离心 10 min 后，样液 经 0.22 μm 滤膜过滤后上机测定。 仪器参数与测定。 （1） 色 谱 测 定 条 件。 色 谱 柱 ： 菲 罗 门 C18，150 mm×2.0 mm（id）， 粒 度 5µm，luna ；流 动 相 ：乙 腈 +0.1% 甲酸水溶液，梯度洗脱模式。 （2）质谱条件。离子源 ESI，正模式，多反应选择离子 监测方式（MRM）。
水产品中硝基呋喃类药物及其代谢物残留检测技术的研究进展
水产品中硝基呋喃类药物及其代谢物残留检测技术的研究进展作者：杨惠宇张惠峰来源：《河北渔业》2017年第06期摘要：综述了水产品中硝基呋喃类药物代谢规律，分别介绍了硝基呋喃原药及其代谢物的检测方法，比较了各种方法在实际应用中的优缺点，并对检测方法进行了展望，以期为水产品中硝基呋喃类药物及其代谢物检测的研究提供帮助。
关键词：硝基呋喃类；代谢物；水产品；检测方法硝基呋喃类药物作为一种抗菌药物曾被广泛的应用于水产养殖中，现国内外对硝基呋喃类药物的控制都十分严格[1-2]，我国该类药物的检测标准也有明确的规定[3-5]。
硝基呋喃类药物虽然被禁止，但其在治疗水产养殖动物细菌性尤其是胃肠道等细菌性疾病方面快速有效，仍有渔民使用。
硝基呋喃类药物是检出率最高的违禁药物之一[6-8]，正严重威胁着人的健康安全，因此开展水产品中硝基呋喃药物及其代谢物的检测工作十分必要。
1 硝基呋喃类药物及其代谢物的基本性质及危害硝基呋喃类药物是一种合成的重要的抗感染性药物，常用的有呋喃唑酮（Furazolidone）、呋喃妥因（Nitrofurantion）、呋喃它酮（Furaltadone）、呋喃西林（Furacillin）。
其对应的代谢物分别为3-氨基-2-恶唑烷基酮（AOZ）、1-氨基-2-内酰脲（AHD）、5-甲基-吗啉-3-氨基-2-恶唑烷基酮（AMOZ）、氨基脲（SEM）。
硝基呋喃类药物是一种具有潜在致癌和诱导机体产生突变的物质[9-10]，对人类身体健康构成严重威胁[11]。
四种硝基呋喃原药、代谢物分子结构图如下：2 水产品中硝基呋喃类药物代谢规律硝基呋喃类药物在水产品中的代谢和残留规律研究，主要有呋喃唑酮和呋喃西林[12]。
通常情况下，硝基呋喃类在养殖动物体内的代谢速度非常快，3 d内就检测不到原药。
其中，呋喃唑酮的研究以口服和口灌药饵的方式为主，呋喃西林的研究以药浴的方式为主。
国内对呋喃唑酮的代谢和残留规律研究主要涉及草鱼、罗非鱼、牙鲆、鲤、杂交鳢、斑点叉尾鮰、异育银鲫、团头鲂、鳗鲡和大菱鲆等。
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附件5水产品中硝基呋喃类代谢物的快速检测胶体金免疫层析法（KJ201705）1范围本方法规定了水产品中硝基呋喃类代谢物快速检测方法。
本方法适用鱼肉、虾肉、蟹肉等水产品中呋喃唑酮代谢物（AOZ）、呋喃它酮代谢物（AMOZ）、呋喃西林代谢物（SEM）、呋喃妥因代谢物（AHD）的快速测定。
2原理样品中硝基呋喃类代谢物经衍生处理后，其衍生物与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和检测卡/试纸条中检测线（T线）上硝基呋喃类代谢物-BSA偶联物的免疫反应，从而导致检测线颜色深浅的变化。
通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中硝基呋喃类代谢物进行定性判定。
3试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。
3.1试剂3.1.1盐酸。
3.1.2三水合磷酸氢二钾。
3.1.3氢氧化钠。
3.1.4甲醇。
3.1.5乙醇。
3.1.6乙腈。
3.1.7邻硝基苯甲醛。
3.1.8三羟甲基氨基甲烷。
3.1.9乙酸乙酯。
3.1.10正己烷。
3.1.11邻硝基苯甲醛溶液（10mmol/L）:准确称取0.150g邻硝基苯甲醛，用甲醇（3.1.4）溶解并定容至100mL。
3.1.12磷酸氢二钾溶液（0.1mol/L）：准确称取22.822g三水合磷酸氢二钾（3.1.2），用水溶解并定容至1000mL。
3.1.13氢氧化钠溶液（1mol/L）：准确称39.996g氢氧化钠（3.1.3），用水溶解并稀释至1000mL。
3.1.14盐酸溶液（1mol/L）：取10mL盐酸（3.1.1）加入到110mL水中。
3.1.15三羟甲基氨基甲烷溶液（10mmol/L）：准确称取1.211g三羟甲基氨基甲烷（3.1.8），溶于80mL水中，加入盐酸（约42mL）调pH至8.0后用水定容至1L。
3.2参考物质3.2.1硝基呋喃类代谢物参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1，纯度≥99%。
表1硝基呋喃类代谢物参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量注：或等同可溯源物质。
3.3标准溶液的配制3.3.1标准储备液：分别准确称取适量参考物质（精确至0.0001g），用乙腈溶解，配制成100mg/L 的标准储备液。
-20℃冷冻避光保存，有效期12个月。
3.3.2混合中间标准溶液：准确移取标准储备液（3.3.1）各1mL于100mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配制成浓度为1mg/L的混合中间标准溶液。
4℃冷藏避光保存，有效期3个月。
3.3.3混合标准工作溶液：准确移取0.1mL混合中间标准溶液（3.3.2）于10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配制成浓度为0.01mg/L的混合标准工作溶液。
4℃冷藏避光保存，有效期1个月。
3.4材料3.4.1AOZ试剂盒（含胶体金试纸条或检测卡及配套的试剂）。
3.4.2AMOZ试剂盒（含胶体金试纸条或检测卡及配套的试剂）。
3.4.3SEM试剂盒（含胶体金试纸条或检测卡及配套的试剂）。
3.4.4AHD试剂盒（含胶体金试纸条或检测卡及配套的试剂）。
3.4.5固相萃取柱（强阴离子交换型）：规格1mL，填装量为60mg。
4仪器和设备4.1电子天平：感量分别为0.1g和0.0001g。
4.2均质器。
4.3水浴箱。
4.4离心机。
4.5氮吹仪或空气吹干仪。
4.6移液枪：10µL，100µL，1000µL，5000µL。
4.7涡旋振荡仪。
4.8胶体金读数仪（可选）。
4.9固相萃取装置（可选）。
4.10环境条件：温度15-35℃，湿度≤80%。
5分析步骤5.1试样制备按照方法要求，称取一定量具有代表性样品可食部分（注：甲壳类，试样制备时须去除头部），用于后续实验。
5.2试样提取和净化称取适量的匀浆样品（以试剂盒操作说明书要求来定，精确至0.01g）于50mL离心管。
5.2.1方法一（液液萃取法）称取2g±0.05g均质组织样品于50mL离心管中，依次加入4mL去离子水、5mL1mol/L盐酸（3.1.14）和0.2mL10mmol/L邻硝基苯甲醛溶液（3.1.11），充分振荡3min；将上述离心管在60℃水浴下孵育60min；依次加入5mL0.1mol/L磷酸氢二钾溶液（3.1.12），0.4mL1mol/L氢氧化钠溶液（3.1.13），乙酸乙酯6mL，充分混合3min，在室温（20—25℃）下4000r/min，离心5min；移取离心后的上层液体3mL于5mL离心管中，60℃下氮气/空气吹干；向吹干的离心管中加入2mL 正己烷，振荡1min，然后加入0.5mL10mmol/L三羟甲基氨基甲烷溶液（3.1.15），充分混匀30s，室温下4000r/min，离心3min（或静置至明显分层）；下层溶液即为待测液。
5.2.2方法二（固相萃取法）称取6g±0.05g均质组织样品于50mL离心管中，依次加入4mL去离子水、5mL1mol/L盐酸（3.1.14）和0.2mL10mmol/L邻硝基苯甲醛溶液（3.1.11），充分振荡3min；将上述离心管在60℃水浴下孵育60min；依次加入5mL0.1mol/L磷酸氢二钾溶液（3.1.12），0.4mL1mol/L氢氧化钠溶液（3.1.13），乙酸乙酯6mL，充分混合3min，在室温（20—25℃）下4000r/min，离心5min；移取离心后的上层液体3mL于15mL离心管中，加入10mL10%乙酸乙酯-乙醇溶液，上下颠倒混合4—5次，4000r/min离心1min（底部会有部分沉淀）。
连接好固相萃取装置，并在固相萃取柱（3.4.5）上方连接30mL注射器针筒，将上述上清液全部倒入30mL针筒中，用手缓慢推压注射器活塞，控制液体流速约1滴/秒，使注射器中的液体全部流过固相萃取柱，再重复推压注射器活塞2次，以尽可能将固相萃取柱中的溶液去除干净。
将固相萃取柱下方的接液管更换为洁净的离心管，再向固相萃取柱中加1mL10mmol/L三羟甲基氨基甲烷溶液（3.1.15）。
用手缓慢推压注射器活塞，控制液体流速约1滴/秒，使固相萃取柱中的液体全部流至离心管中后，离心管中的液体即为待测液。
5.3测定步骤5.3.1试纸条与金标微孔测定步骤吸取适量样品待测液于金标微孔中，抽吸5—10次混合均匀，室温（20—25℃）温育5min，将试纸条吸水海绵端垂直向下插入金标微孔中，温育3—6min，从微孔中取出试纸条，进行结果判定。
5.3.2检测卡测定步骤吸取适量样品待测液于检测卡的样品槽中，室温（20—25℃）温育5—10min，直接进行结果判定。
5.4质控试验每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。
5.4.1空白试验称取空白试样，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。
5.4.2加标质控试验准确称取空白样品适量（精确至0.01g）置于50mL具塞离心管中，加入适量硝基呋喃类代谢物标准工作液，使其浓度为0.5µg/kg，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。
6结果判定要求结果的判断也可使用胶体金读数仪判读，读数仪的具体操作与判读原则请参照读数仪的使用说明书。
采用目视法对结果进行判读，目视判定示意图如图1和图2所示。
6.1比色法6.1.1无效控制线（C线）不显色，表明不正确操作或试纸条/检测卡无效。
6.1.2阳性结果检测线（T线）不显色或检测线（T线）颜色比控制线（C线）颜色浅，表明样品中硝基呋喃类代谢物高于方法检测限，判为阳性。
6.1.3阴性结果检测线（T线）颜色比控制线（C线）颜色深或者检测线（T线）颜色与控制线（C线）颜色相当，表明样品中硝基呋喃类代谢物低于方法检测限或无残留，判为阴性。
图1目视判定示意图（比色法）6.2消线法6.2.1无效控制线（C线）不显色，表明不正确操作或试纸条/检测卡无效。
6.2.2阳性结果检测线（T线）不显色，表明样品中硝基呋喃类代谢物高于方法检测限，判为阳性。
6.2.3阴性结果检测线（T线）与控制线（C线）均显色，表明样品中硝基呋喃类代谢物低于方法检测限或无残留，判为阴性。
图2目视判定示意图（消线法）6.3质控试验要求空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果应为阳性。
7结论当检测结果为阳性时，应对结果进行确证。
8性能指标8.1检测限：AOZ、AMOZ、SEM、AHD均为0.5µg/kg。
8.2灵敏度：灵敏度应≥95%8.3特异性：特异性应≥95%。
8.4假阴性率：假阴性率应≤5%。
8.5假阳性率：假阳性率应≤5%。
注：性能指标计算方法见附录A。
9其他本方法的测定步骤和结果判读也可以根据厂家试剂盒的说明书进行，但应符合或优于本方法规定的性能指标。
本标准参比方法为GB/T21311《动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物残留量检测方法高效液相色谱/串联质谱法》。
附录A快速检测方法性能指标计算表本方法负责起草单位:深圳出入境检验检疫局食品检验检疫技术中心验证单位：上海市食品药品检验所、山东省食品药品检验研究院。
主要起草人：岳振峰，张恒，黄欣迪，李永吉，薛霞。