最新002胸膜肺炎放线杆菌
猪胸膜肺炎放线杆菌Ⅱ型毒素—抗毒素系统的鉴定与功能研究
华中农业大学硕士学位论文猪胸膜肺炎放线杆菌II型毒素-抗毒素系统的鉴定与功能研究Research on identification and function of type Ⅱtoxin-antitoxin system in Actinobacillus pleuropneumoniae 研究生 : 赵席功学号 : 2015302110163指导教师 : 贝为成教授指导小组：周锐教授申邦教授栗绍文副教授王喜亮副教授郑金水副教授专业：预防兽医学研究方向：动物传染病获得学位名称：农学硕士获得学位时间：2018年6月华中农业大学动物科技与动物医学院二○一八年六月猪胸膜肺炎放线杆菌II型毒素-抗毒素系统的鉴定与功能研究目录摘要 (i)Abstract (ii)缩略词表（Abbreviation） (iv)第1章文献综述 (1)1.1 胸膜肺炎放线杆菌 (1)1.1.1 病原学 (1)1.1.2 流行病学 (2)1.1.3 致病机理 (3)1.1.4 诊断及防治 (5)1.2 毒素-抗毒素系统（Toxin-antitoxin system, TAS） (6)1.2.1 毒素-抗毒素系统的研究进展 (6)1.2.2 胸膜肺炎放线杆菌中的II型TA系统 (7)第2章研究目的与意义 (9)第3章材料和方法 (10)3.1 实验材料 (10)3.1.1 菌株、质粒和培养条件 (10)3.1.2 实验所用酶、试剂和仪器 (15)3.1.3 主要培养基及抗生素配制 (15)3.1.4 主要溶液的配制 (16)3.1.5 引物 (17)3.1.6 实验动物 (19)3.2 实验方法 (20)3.2.1 生物信息学预测分析 (20)3.2.2 TA系统的共转录分析 (20)3.2.3 验证毒素的作用 (21)3.2.4 毒素的杀菌作用 (24)3.2.5 验证抗毒素的作用 (25)3.2.6 毒素抗毒素的相互作用 (25)3.2.7 大肠杆菌WM3064和β2155感受态细胞的制备 (26)3.2.8 抗毒素对TA操纵子的自动调节 (27)3.2.9 TA系统在APP各血清型中的分布 (29)3.2.10 突变株的构建与鉴定 (29)3.2.11 胸膜肺炎放线杆菌电转化感受态制备及电转化 (30)3.2.12 互补菌株的构建与鉴定 (31)3.2.13 突变株与互补菌株生物学特性 (31)第4章结果与分析 (33)4.1 猪胸膜肺炎放线杆菌TA系统的预测 (33)4.2 TA系统共转录分析 (33)4.3毒素在大肠杆菌生长中的毒性作用 (34)4.4抗毒素作用的评估 (36)4.5毒素抗毒素的相互作用 (37)4.6抗毒素对TA操纵子的自动调节作用 (38)华中农业大学2018届硕士研究生学位（毕业）论文4.7 TA系统在APP各血清型中的分布 (39)4.8突变株的构建与鉴定 (41)4.9突变株的遗传稳定性 (41)4.10互补菌株的构建与鉴定 (42)4.11互补菌株的遗传稳定性 (43)4.12突变株与互补菌株的生长特性 (43)4.13突变株对小鼠的存活实验 (44)第5章讨论 (45)第6章结论 (47)参考文献 (48)附录 (57)致谢 (58)猪胸膜肺炎放线杆菌II型毒素-抗毒素系统的鉴定与功能研究摘要胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae，APP）是一种能够引起临床上以急性出血和坏死性、慢性纤维素性胸膜肺炎为主要特征的高度接触传染性疾病猪传染性胸膜肺炎（Porcine Contagious Pleuropneumoniae，PCP）的病原菌，一旦发病，将给国内外养猪业带来很大的经济损失。
猪传染性胸膜肺炎的发病特点及综合防控
摘要：近年来，随着我国饲料禁抗令的实行，各类细菌性疾病在养殖业中的检出率呈上升趋势，对养殖业的危害日渐突出。
猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌引起的以猪只发生纤维素性出血性和坏死性胸膜肺炎为特征的呼吸道疾病，具有高度传染性和致死性。
该病在我国猪群中的感染率达30%以上，一旦感染，损失惨重。
为了能使广大养猪户更全面的了解该病的发病特点，掌握该病科学的预防和治疗措施，本文结合猪传染性胸膜肺炎近几年的研究进展，对该病的流行趋势及综合防治措施进行了详细总结，以期能为广大养猪业同行提供参考和借鉴。
关键词：猪；传染性胸膜肺炎；发病特点；综合防治猪传染性胸膜肺炎的发病特点及综合防控王华丽1，王俊杰2，安然3（1.荣成市港湾畜牧兽医站山东威海264308；2.荣成市人和畜牧兽医站山东威海264308；3.荣成市桃园畜牧兽医站山东威海264309）doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2023.08.009收稿日期：2022-11-03作者简介：王华丽（1982.12—），女，山东荣成人，本科，兽医师，从事畜牧兽医工作。
猪传染性胸膜肺炎最早于1987年在我国首次报道，自此之后，在我国各个省市多次出现流行。
尤其是2000年以后，猪传染性胸膜肺炎在我国多地呈暴发性流行，以江浙、上海、湖南、湖北等地区最为严重[1]。
该病发病率高，传播迅速，且极易与猪伪狂犬病、猪圆环病毒病、副猪嗜血杆菌病、猪肺疫等混合感染，给疾病诊断带来了巨大挑战。
此外，抗生素的长期大量使用，不仅造成了耐药菌株的不断出现，还严重影响了公共卫生安全和生态环境的良性循环。
寻找猪传染性胸膜肺炎有效的防治途径，彻底消灭该病对养猪业的危害，成为广大科研工作者和一线兽医人员不断奋斗的目标。
本文结合猪传染性胸膜肺炎近几年的研究进展，对该病的流行趋势及综合防治进行了详细总结，以期能为广大养猪业同行提供参考和借鉴。
1猪传染性胸膜肺炎流行特点猪胸膜肺炎放线杆菌（actinobacillus pleuropneumoniae ，APP ）是一种嗜肺性革兰氏阴性短杆菌，共有16个血清型，各个菌株之间甚至同一血清型的不同菌株之间致病力差异较大，交叉保护能力复杂。
猪胸膜肺炎放线杆菌与副猪嗜血杆菌分离鉴定和药敏试验
５０４ ； ． １６ ２ ２ 福建农林大学动物 科学学 院， 福建 福州
文章编号： ｏ — ９ ７２ ０ ）１０ ４ — ２ １ ２ １５ （０ ８０ — ０ ９ ０ ０
３００） ５ ０ ２
文献标志码 ：Ｂ
猪胸 膜肺 炎放线 杆菌 ｃ ｎｂｃ ｕ ｌ ｒ — 监 察所 。 ｔ ｏ ａｉ ｓｐ ｕｏ ｉ Ｕ ｅ ｐ
一
１ ． 细茵的分 离 ２ 打开胸腔，用无菌接种环挑取肺气管 中的分泌
物和 胸腔 内纤 维素性渗 出物接种 于巧克力培 养基。 置５ ０ 培养箱 中３ ℃培养２ 。观察菌落状态， ％Ｃ ７ ４ ｈ 然 后挑取可疑菌落进行纯培养 。 １ 细茵形态及生化特性检查 ． ３ １ ． 形态学检查 挑单菌落均匀涂布于有生理盐 ．１ ３ 水的载玻片上， 革兰 氏染色， 镜检。 １ ． 培 养特性 将细菌接种 于普通鲜血 平板 、 ．２ ３ 含 Ｖ因子 的鲜 血平板 、 乳糖 营养 肉汤 、 Ｖ因子 的营 含 养肉汤 、Ｓ Ｔ Ａ平板 、 ｖ因子 的 Ｔ Ａ平板 、 含 Ｓ 麦康凯培 养基 以及 巧克力培养基中， 察细菌 的生长情况 。 观 １ ． 卫星现 象试 验 将细 菌接种 于 不含 Ｖ 因子 ．３ ３ 的鲜血琼脂平板上 ， 用金黄色葡萄球菌垂直划线 ， 置 ３ Ｏ 培养箱 中 ２ ， ７ｏ Ｃ Ｃ ４ 观察细菌的生长状况 。 ｈ １ ． 生化试验 先于生化管中加入 ｖ因子． ．４ ３ 使其 浓度达 １０ ／ Ｌ 然后接种分 离的细菌 ， Ｃ ０ ｇ ， ｍ 置 Ｏ 培 养 箱中，４ ２ ｈ后观察生化反应情况。 １ ． Ｃ ＭＰ试验 在鲜血 平板上 先划线接种金黄 ．５ Ａ ３ 色葡萄球菌 ， 再垂直于金黄色葡萄球菌划线方 向， 间 距 ３ ５ ｍ处分别接种 分离菌 ，置含 ５ Ｏ 培养箱 ～ ｍ ％Ｃ ， 中，７ ３ ℃培养 ２ ｈ 观察溶血现 象。 ４ ， ｌ ． Ｐ Ｒ鉴定 根据 Ｇ ｎ ａｋ上发表 的序列 ， ＿６ Ｃ ３ ｅＢ ｎ 设 １ 材料与方法 计 了扩增 副猪嗜血杆菌（ｌ ２ Ｐ、 ） Ｐ 和胸膜肺炎放 线杆菌 ｌ 试验材料的准备 ＿ １ 胰大豆琼脂培养基（Ｓ ） 于北京普 博欣 公司； Ｔ Ａ购 Ｐ 的引物 ， ４ ） 由广 州赛 百盛基 因技术 有 限公 司合 巧克力平板 培养基 、 鲜血 平板 培养基 、 普通 琼脂平 成 弓物 。Ｐ： Ｇ Ｔ Ｔ Ｇ Ａ Ａ Ｔ Ｇ Ｃ Ｃ Ｃ Ａ 一 ｌ ， 一 ＣＣ ｒＧ Ａ Ｃ ｒＧ Ａ ＴＴ Ａ ５ 板培养基 由实验室 自制； Ｖ因子 （ 烟酰胺腺嘌呤二核 ３； ２ Ｔ Ａ Ｃ Ｔ Ｇ Ｔ Ｔ Ｃ Ｔ Ｇ Ｃ ３， 增 长 度 Ｐ： 一 Ｔ Ｇ Ｃ Ｔ Ｃ Ｃ ｒ Ｔ Ａ Ｃ 一 扩 ５ ０ ｐ； ３ ５ Ｔ ＇ ＡＴＩ 苷酸 ）Ｐ Ｒ相 关试剂购 于大连 宝生 物工 程有 限公 １ ９ ０ ｂ Ｐ ： 一 ＡＴＧＧＡＴＣＣＡＴＧＧＣＡＴＩ ＴＧＧＣＡ 、Ｃ 司； 微量生化鉴 定管由杭 州天和微生物试剂 有 限公 Ｃ一３ ； ： ＣＣＣＡＡＧＣＴｒＩ Ｐ ～ ５ ＴＣＧＴ ＧＴＹ ＡＡＡＧＣＡＧ ＡＴ ＡＴ 一 扩增长度 ５ ２ｂ 。 ２ Ｄ 检测副猪嗜血杆菌反应体 系 司提供 ； 金黄色 葡萄球 菌标 准菌株 ， 自中国兽药 Ｃ ３， 购 为： ０ Ｐ ＲＢ ｆ ｒ． ，Ｎ Ｐ ２ ｍ ｌ ） ，１ １ｘ Ｃ ｕ ｅ ５ ２ Ｌ ｄ Ｔ ｓ（． ｍ ｏ Ｌ２ Ｐ ５ ／ Ｌ 收稿 日期 ：０７ ｌ～ ６收稿 ，０ ７ １ —０修 回 ２０一Ｏ １ ２０—０２ （ ｍ ｌ ） Ｐ（ ｍ １ ） ０ ．， ａ （ Ｉ／ Ｌ ２ ｐ ｏ Ｌ 和 ２ ０ｐ ｏ Ｌ 各 ． ｐ ｒ ｑ５ Ｕ ￣ ） ０ ／ ２ ］ ５ ＬＴ 作 者 简 介 ： 欣 （９ ０ ） 男 ， 东临 朐 人 ， 士 ， 要 研 究 方 向 张 １８ 一 ， 山 硕 主 ０２ ， ． Ｌ模板 １ ， Ｌ灭菌双蒸水 １ ． 。混合均匀后 ８ Ｌ ３ 为家畜传染病 学． 置 核 酸扩 增 仪 中 执行 以下 程 序 ： ９ ４℃ ４ｍ ｎ９ ｉ，４℃ 通讯作 者： 罗满林 ， 教授 ， 主要从事动物传 染病学研 究． Ｅ— ｉ ｌ ｏ ＠ｓ １ ｄ ． ｎ ｍａ ｌ ｕ ｍｌ ｃ Ｉ． ｕ ｃ ： ａ ｅ １ ｎ５ 。 ｍｉ ０℃ １ ｉ， ｎ ２℃ ３ｍ ｎ运行 ３ ｍ ７ ｉ， ０个循 环 ； 最后
猪放线杆菌性胸膜肺炎的诊治
胸 膜 与 心 包 粘 连 三 原 检 查 病 分 别 取 病 死 猪 的 肺 、 Ｊ 及 心 血 脯膜 猪 放 线 杆 菌 胸 膜 肺 炎 是 由 猪 触 片 ． 革 兰 氏 染 色 后 镜 检 。 革 兰 经 见 胸 膜 肺 炎 放 线 杆 菌 引起 的 一 种 伴 有 氏 阴 性 卵 圆 形 两 极 浓 染 球 杆 菌 和 长 胸 膜 炎 的出 血性 坏 死肺 炎 ． 可发 生 于 丝 状 菌 存 在 四 、 对 方 法 应 仟 何 年 龄的 猪 只 ，呈 世 界性 分 布 。 目 该 菌对 复 方新 诺 明 、 磺胺 甲基 嘧 前 已 有 ３ 多 个 困 家 和 地 区 报 道 有 该 Ｏ 磺 磺 林 病 发 生 ． 国 际 公 认 的 危 害 现 代 养 啶 、 胺 二 甲基 嘧 啶 、 胺 异噫 唑 、 是 结 杆 红 土 猪业 五大 重要 传 染病 之 一 ． 其 在集 可 霉 素 、 晶 紫 、 菌 肽 、 霉 素 、 尤 用 约 化 养 猪 场 ． 旦 发 生 会 造 成 重 大 经 霉 索 、 那 霉 索 高 度 敏 感 ， 药 时 可 一 、 济 损 失 ． 国 该 病 的 发 病 率 有 逐 年 增 选 以 上 药 物 ． 我 发 病 猪 群 应 立 即 隔 离 ， 死 猪 对 加 的 趋 势 用 江 苏 省 近 年 来 猪 放 线 杆 菌 性 胸 只 进 行 无 害 化 处 理 清 理 圈 舍 。 消 对 膜 肺 炎 时 有 发 生 ． 大 地 同 扰 着 养 殖 毒杀 菌 药 消毒 、 发病 猪 只 每 头叭 注 极 ０ 磺 支 户 ．给 养 猪 业 带 来 了 严 重 的 损 失 、 本 卡邢霉 素５ 万 单 位 、 胺类 药 物 １ ，
猪传染性胸膜肺炎防控及净化策略探讨
猪传染性胸膜肺炎（Porcine Contagious Pleuropneumonia ， PCP ）是由胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae ，APP ）感染引起的一种传播迅速、传染性强的猪呼吸道传染病。
最急性型和急性型时，病猪无先兆症状，突然死亡。
耐过猪只可能转归为亚临床感染，不表现临床症状，但持续排出病菌，导致感染猪群中很难控制和根除该病（Bosse 等，2002）。
1 病原学胸膜肺炎放线杆菌（APP ）是一种典型球杆状菌体、有荚膜的革兰氏阴性菌。
根据体外生长时是否依赖烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD ），APP 可分成生物Ⅰ型（NAD 依赖型）和生物Ⅱ型（NAD 不依赖型）两种。
根据细菌细胞壁外荚膜中荚膜多糖（CPS ）的成分不同，APP 分为19个血清型，但仍有一些菌株无法分型（Stringer 等，2021）。
2 流行病学在大多数案例中，猪传染性胸膜肺炎是由亚临床感染的猪只排菌引起（Klinkenberg 等，2014）。
本病一年四季皆可发生，但在冬春（寒猪传染性胸膜肺炎防控及净化策略探讨赵月桥 1，胡耀方 1，于学祥 1，陆时娟 2，王久红 3，李文涛 1，何启盖 1 *（1.华中农业大学动物科技学院动物医学院，湖北 武汉 430070；2.广西扬翔股份有限公司，广西 贵港 537000；3.湖北金林原种畜牧有限公司，湖北 武汉 430200）基金项目：财政部和农业农村部：国家现代农业（生猪）产业技术体系（CARS-35）共同作者：赵月桥，女，硕士研究生；胡耀方，女，博士研究生*通信作者：何启盖，男，华中农业大学教授，E-mail ：*************** 冷）季节发病率高；各阶段猪只均对APP 易感，但90日龄左右猪只最为易感。
APP 在猪群内主要是通过口腔或是鼻腔分泌物接触传播，或通过0.5～3 μm 大小的气溶胶液滴在2 m 内短距离传播。
一种猪传染性胸膜肺炎放线杆菌培养基、分离鉴定方法及培养方法[
专利名称：一种猪传染性胸膜肺炎放线杆菌培养基、分离鉴定方法及培养方法
专利类型：发明专利
发明人：董发明,李凯明,邱妍,杨国栋,邢艳丽,梁立钦,李凯强
申请号：CN201910935161.2
申请日：20190929
公开号：CN110540953A
公开日：
20191206
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种猪传染性胸膜肺炎放线杆菌培养基、分离鉴定方法及培养方法，属于微生物分离培养技术领域。
本发明以鸡血清替代传统所用的牛、羊、马血清，制备猪传染性胸膜肺炎放线杆菌培养基，其中以5%左右的鸡血清的加入比例效果良好，该培养基价格便宜，来源广泛。
用其分离鉴定猪传染性胸膜肺炎放线杆菌，从56份病料中分离鉴定出猪传染性胸膜肺炎放线杆菌51株，其分离率为97%；而传统的牛血清培养基仅从56份病料中分离鉴定出42株猪传染性胸膜肺炎放线杆菌，其分离率为75%；本发明的分离鉴定方法具有更高的分离效率。
申请人：河南科技大学
地址：471003 河南省洛阳市涧西区西苑路48号
国籍：CN
代理机构：郑州睿信知识产权代理有限公司
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国家二类新兽药——泰地罗新
葩动态本栏目主要是及时报道国家批准 的新兽药和企业內部研制的新产品（包 括原料药、成品药、疫苗及各种检测 试纸），为广大读者提供最新的兽药信 息，着重介绍药物的特点、作用机理、 作用用途及临床应用效果。
欢迎来稿！E —mail:sysc.zn@引领兽药市场/直面兽药销售/沟通兽药产销/探索营销之道国家二类新兽药——泰地罗新齐鲁动物保健品有限公司根朋（韓甸粋刖条例》，该衬药符A 规定，准片辻.册，特•发此证.: >in V •注分类i 一真K * R.齐BJAVWAff »!»►«].齐費诵物伙公吋.屮诫鸵*矢？泰地罗新、泰地罗新注射液,2019年通过农业部审批获得国家二类新兽药,证号:（2019）新兽药证字 18、19号遥一、主要成分及其作用泰地罗新注射液最早于2011年5月在欧盟地区批准上市，在猪上主要用于治疗和补救性预防由对泰地罗新敏感的胸膜肺炎放线杆菌、支气管败血波 氏杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌引起的猪呼吸系统疾病；在牛上用于治疗和预防由对泰地罗新敏感的溶血性曼氏杆菌、多杀性巴氏杆菌和睡眠嗜组织菌引起的牛呼吸系统疾病遥2012年5月,美国FDA 批准了其在牛的使用遥在中国，齐鲁动物保健品有限公司研发的泰地罗新原料及注射液在国内首家上市,被农业部批准为 国家二类新兽药,制剂商品名为昂乐欣,靶动物为猪遥（一）理化性质及作用机制泰地罗新（20,23-di-piperidinyl-mycaminosyl-tylonolide ）,是最新动物专用的大环内酯类半合成抗生素，为泰乐菌素的衍生物遥分子式为C^H^O s ,分子量为734.02,白色至淡黄色粉末,泰地罗新以多晶型物存在，微溶于 水，可溶于极性有机溶剂（如甲醇、丙酮等）遥泰地罗新作用机理同其他大环内酯类药物,能与敏感菌的核糖体50S 亚基结合，通过对转肽作用和/或mRNA 位移的阻断而抑制肽链的合成和延长,影响细菌蛋白质的合成,进而起到抑菌和杀菌作用遥ch 3新药动态词编辑部电话：*************业务微信131****1261 编辑微信alili108913（二）药效学泰地罗新为广谱抗菌药,对支原体、革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌均具有抗菌活性,主要包括引起猪呼吸系统疾病的胸膜肺炎放线杆菌、支气管败血波氏杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌,以及引起牛呼吸系统疾病的溶血性曼氏杆菌、多杀性巴氏杆菌和睡眠嗜组织菌遥EAMA提供了2005-2010年间不同欧洲国家（德国,法国，荷兰,匈牙利，西班牙，比利时，丹麦，波兰和英国）中影响牛（n=349）和猪（n=256）呼吸道疾病的分离菌株中与流行病学无关的靶病原的MICs,总结如下表遥表1-1菌株名称菌株数MIC结果(|ig/ml)MIC50(gg/ml)MIC90(gg/ml)猪胸膜肺炎放线杆菌1002~1688支气管败血波氏杆菌870.5-824多杀性巴氏杆菌990.125-20.51副猪嗜血杆菌630.032〜40.51对大部分细菌而言，与替米考星比较有更强的抗菌活性，对于在2005-2010期间，欧洲不同国家感染呼吸疾病的牛和猪中，分离出的病原体对泰地罗新进行了最小抑菌浓度测试,泰地罗新对分离细菌抑菌效果良好遥（三）药动学泰地罗新注射液单剂量颈部肌内注射后，其平均消除半衰期Twp约为121.90±24.35h,达峰时间丁唤和峰值浓新药动态EI9表1-2最小抑菌浓度（MIC；ng/ml）比较菌种泰地罗新替米考星金黄色酿脓葡萄球菌193 3.130.39金黄色葡萄球菌FDA209p 6.250.39金黄色葡萄球菌史密斯12.5 1.56藤黄微球菌PCI10010.780.2枯草杆菌25 1.56大肠杆菌 3.1325肺炎杆菌 3.1325痢疾志贺菌 6.25100肠炎沙门氏菌0.78 6.25产气肠杆菌 6.25100灵杆菌100100变形杆菌 6.25100溶血巴斯德菌0.39 1.56度Cmax分别为0.167±0.00h和1116.49±48.90ng/ml,平均药时曲线下面积AUCg为5.62±0.48ug・h・ml-1,AUC。
关于一起猪传染性胸膜肺炎案例的思考
摘要：2022年10月26日，四川省渠县某猪场发生育肥猪呼吸道疾病死亡事件。
为了解疫病状况，查明原因并采取针对性措施以减少猪场的经济损失，赴现场开展了调查。
综合流行病学调查信息、生猪的临床症状和剖检变化，以及实验室检测结果判断其死亡原因是传染性胸膜肺炎引起。
通过药物治疗，并改善饲养管理，猪群发病死亡情况得到有效控制。
该案例提示，良好的饲养环境和管理，才能应对气候等应激因素的变化，从而降低本病的危害程度。
关键词：传染性胸膜肺炎；猪；调查；防治关于一起猪传染性胸膜肺炎案例的思考何丽霞1，邢云云2，何勇君3，师清博4，赵小波5*（1.渠县动物疫病预防控制中心四川达州635200；2.山东德青制药有限责任公司山东德州251200；3.城固县老庄镇农业农村综合服务中心陕西汉中723200；4.汉中市动物疫病预防控制中心陕西汉中723000；5.达州市动物疫病预防控制中心四川达州635000）收稿日期：2023-03-26*通信作者doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2024.02.060猪传染性胸膜肺炎（porcine contagious pleuropneumonia ）是由胸膜肺炎放线杆菌引起的一种高度接触性、致死性呼吸道传染病[1]。
病猪以急性出血性纤维素性胸膜肺炎和慢性纤维素性坏死性胸膜肺炎为特征。
潜伏期，自然感染1~2d ，各种年龄、性别的猪均易感，但以6周至6月龄的猪多发，发病率和死亡率通常在50%以上，最急性型的死亡率可高达80%~100%。
病猪和带菌猪是本病的传染源。
本病传播迅速，多为最急性型或急性型，突然死亡。
常发生于4—5月和9—11月，具有明显的季节性。
主要传播途径是气源感染，以飞沫方式在猪群间传播[2]。
目前在全球范围内流行，给养猪业造成了巨大经济损失，是国际公认的危害现代养猪业的重要传染病之一。
2022年10月26日，渠县动物疫病预防控制中心接到报告，某猪场近期生猪大量发病死亡。
放线杆菌实验报告
一、实验背景猪传染性胸膜肺炎（PCP）是由猪胸膜肺炎放线杆菌（APP）引起的一种猪呼吸道疾病，具有高度的传染性和致死性。
该病在全世界范围内广泛流行，给养猪业造成了巨大的经济损失。
APP的主要致病因子包括荚膜多糖、脂多糖、外膜蛋白、转铁结合蛋白和溶血毒素（Apx）。
其中，溶血毒素Apx在APP的致病过程中起着重要作用。
本研究旨在提取纯化APP溶血毒素ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ，并研究其对小鼠的致病性和免疫原性，为研制有效的疫苗提供理论依据。
二、实验材料1. 实验动物：SPF级昆明小鼠，体重18-22g。
2. 菌株：猪胸膜肺炎放线杆菌（APP）血清10型、血清7型、血清3型。
3. 试剂：DNA提取试剂盒、PCR试剂盒、质粒提取试剂盒、DNA连接试剂盒、限制性内切酶、DNA聚合酶、Taq酶、琼脂糖、琼脂糖凝胶回收试剂盒、DNA marker、蛋白marker、SDS-PAGE凝胶制备试剂盒、Western blot试剂、抗体等。
4. 仪器：PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、离心机、超净工作台、孵育箱、培养箱、显微镜等。
三、实验方法1. APP溶血毒素ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ的提取与纯化（1）分别将APP血清10型、血清7型、血清3型接种于LB液体培养基，37℃培养过夜。
（2）收集菌液，12,000r/min离心10min，弃上清，收集菌体。
（3）将菌体用PBS缓冲液重悬，加入溶菌酶，37℃水浴处理1h。
（4）12,000r/min离心10min，收集上清液。
（5）对上清液进行Sephadex G-50凝胶柱层析，收集ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ峰。
（6）对ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ峰进行透析，去除盐分。
（7）对透析后的ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ进行SDS-PAGE电泳，鉴定纯度。
2. APP溶血毒素ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ对小鼠的致病性研究（1）将小鼠分为A、B、C三组，每组10只。
（2）A组：正常小鼠。
猪传染性胸膜肺炎的诊断和治疗
猪传染性胸膜肺炎（PCP）是由胸膜肺炎放线杆菌（APP）引起的一种高度接触性、致死性呼吸道传染病，临床上以急性败血症、发热、咳嗽、高度呼吸困难为特征，是被国际公认的危害现代养猪业的重要疫病之一，给集约化养猪业带来了巨大的经济损失；特别是近年来本病的流行呈迅速上升且混合型感染趋势，危害日趋严重，务必引起高度重视。
一、病原与流行病学猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌(APP)引起的一种呼吸道传染病。
APP 是革兰氏阴性、有荚膜的多形球杆菌，迄今已发现两个生物型共15个血清型，其中生物Ⅰ型中的1、5、9、10、11五种血清型致病力最强，生物Ⅱ型中的13和14致病性比生物Ⅰ型要弱。
我国以1、3、7血清型为主，免疫学研究证明，由于主要血清型之间缺乏交叉免疫保护作用，给本病的诊断及疫苗防治带来一定的困难。
不同品种、性别及年龄的猪对该病都有易感性，其中6周龄至5月龄的猪较多发，但以3月龄仔猪最为易感，病猪和带菌猪是本病的传染源。
APP 主要通过空气飞沫传播，在感染猪的鼻汁、扁桃体、支气管和肺脏等部位是病原菌存在的主要场所，病菌随呼吸、咳嗽、喷嚏等途径排出后形成飞沫，通过直接接触而经呼吸道传播；也可通过被病原菌污染的车辆、器具以及饲养人员的衣物等间接接触传播；小啮齿类动物和鸟类也可能传播本病。
该病的发生具有明显的季节性，多发生于4～5月和9～11月，在恶劣气候条件下极易暴发流行；此外，饲养环境突然改变、猪群的转移或混群、拥挤或长途运输、通风不良、密度过大、湿度过高、气温骤变等应激因素，均可引起本病发生或加速疾病传播，使发病率和死亡率增加。
二、流行特点近年来，随着规模化养猪业的兴起，猪传染性胸膜肺炎呈现以下新的流行特点。
1．由于饲养管理条件差，断奶仔猪发病率和死亡率明显增高。
以往虽然仔猪发病率较高，但病情一般不太严重，死亡率也较低，现在仔猪发病率和死亡率都有明显增加的趋势。
特别是不少中小型养殖户，断奶后刚转入保育舍的仔猪，由于饲养管理条件差，在气候突变、分群、变换饲料等产生的应激因素下，极易导致该病的发生，常常造成大批仔猪死亡。
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临床症状－急性型
流行病学 易感猪群－所有的动物可被感染 发病率非常高 死亡率通常也很高 病原体的传播与任何管理因素没有明显的关系 疫苗效果显著，因为其阻止了猪的死亡
目前很不常见，但是可见于健康良好的猪群
含有溶血素的菌苗
这些要经过允许，大多数商业菌苗里缺少溶血素 许可的溶血素－强化的菌苗已可使用 可能会有严重的继发反映
管理控制
减少传播
猪舍之间要分割开 减少混养 全进全出 厂区外的系统可有效地控制该病
根除的难度，但是是可以的
减群保育猪和育肥猪（也许仅保育猪？） 给经产母猪饲喂高剂量抗生素 抗体检测，淘汰阳性的 不喂抗生素 30天后再检测 其它办法：清群－复群
症状 高热 有些咳嗽 严重 呼吸困难 死亡 死亡时从鼻中流出血液
临床症状－慢性型
稍大些的猪感染
通常发生在育肥猪 发病率为60％ 死亡率为2％至4％ 也许所有的猪并不表现症状 通常与血清型7和12有关－血清5、1型较少
症状
几乎没有症状 成年猪通常有一定程度的咳嗽，呼吸困难 无先兆的死亡
治疗
仅注射 青霉素
一些不同的剂型 1000国际单位/磅 药敏试验
泰妙菌素
可以口服 药物活性很强
壮观霉素 头孢菌素
效果非常好 昂贵
疫苗接种控制
疫苗 需要特异的血清型 肌内注射油佐剂菌苗
能控制死亡和一定程度的损伤 可提高 日增重－料肉比 在屠宰会发现有些产生了肉芽肿 有限油佐剂腹膜液 刺激产生更强的免疫力 产生较少的肉芽肿/脓肿 很少被使用
诊断
临床症状 尸体剖检 病原体分离 血清型鉴别可直接用协同凝集试验检测肺
损伤
肺的50％至90％受累及 充血 组织变脆 局灶性坏死 纤维素性胸膜炎 心包炎 胸膜积液
组织病理学
出血－血管炎 水肿 坏死
混合感染猪繁殖与呼吸综合征病毒和胸膜肺炎放线杆菌的自然病例的肺
胸膜肺炎放线杆菌感染的胸膜炎
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