炭疽芽胞杆菌
炭疽芽胞杆菌的鉴定分析
炭疽芽胞杆菌的鉴定分析摘要】探讨炭疽芽胞杆菌的微生物学检验的方法与鉴定。
炭疽芽胞杆菌是炭疽病的病原菌，炭疽病的病原菌，为人、畜共患性疾病，快速有效的检验和鉴定炭疽牙孢杆菌是最为重要的。
采取直接涂片染色镜检，分离培养与鉴定及药物敏感试验方法进行检查。
快速的病原学诊断在控制疾病流行中有重要意义。
【关键词】炭疽牙胞杆菌；微生物学；检查方法【中图分类号】R37 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）21-0397-02炭疽芽胞杆菌(B.anthracis)俗称炭疽杆菌，是炭疽病的病原菌，为人、畜共患性疾病，常在牧区暴发流行。
由于炭疽杆菌宿主广泛，传播方式多样，芽胞的抵抗力极强，故恐怖分子可利用该菌制造“生物恐怖”危害人类。
炭疽芽胞杆菌是需氧芽胞杆菌属中致病力最强的革兰阳性大杆菌。
引起人与动物炭疽病。
1.炭疽芽胞杆菌的生物学特性1.1 形态与染色本菌为致病性细菌中最大的革兰阳性杆菌。
大小为5～10μm×1～3μm，两端平切，无鞭毛。
新鲜标本直接涂片常单个存在或呈短链。
经培养后则形成长链，呈竹节状排列。
细菌在有氧条件下可形成芽胞，芽胞小于菌体、椭圆形、位于菌体中央。
有毒菌株可有明显的荚膜。
1.2 培养特性本菌为需氧或兼性厌氧，营养要求不高，最适生长温度为30～35℃。
无毒菌株在普通琼脂培养基上形成灰色、扁平、干燥、粗糙型(R)菌落，低倍镜下观察菌落边缘呈卷发状。
在血液琼脂平板上培养12～15h菌落周围不溶血，24h后有轻度溶血[1]。
在肉汤培养基中由于形成长链而呈絮状沉淀生长。
在明胶培养基中37℃培养18～24h，由于细菌沿穿刺线向四周扩散生长，使明胶表面液化成漏斗状。
有毒菌株在NaHCO3血琼脂平板上置5％的CO2环境中37℃培养24～48h可产生荚膜，变为黏液型(M)菌落。
用接种针挑取时呈黏丝状。
1.3 生化反应能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、蕈糖，有些菌株迟缓发酵甘油和水杨酸，产酸不产气；不发酵鼠李糖、半乳糖等其他糖类；能还原硝酸盐为亚硝酸盐；不产生吲哚和硫化氢，不利用枸橼酸盐，不分解尿素；卵磷脂酶弱阳性、触酶阳性。
第17章 炭疽杆菌课件
三种蛋白：保护性抗原（PA）、水肿 因子（EF）、致病因子（LF）构成的复合物， 只有当PA与EF或LF中任何一种成分结合，才
能显示毒性作用
2019/12/4
11
（二）传播途径
炭疽芽胞杆菌主要感染草食动物，如羊、 牛、马等
人则因接触患病动物或其尸体、皮毛 以及吸入带菌气溶胶等而被感染
2019/12/4
2019/12/4
3
2019/12/4
4
2019/12/4
5
2019/12/4
6
（二）培养特性 需氧或兼性厌氧 普通琼脂培养基上生长 形成灰色粗糙型菌落 低倍镜下观察可见卷发状边缘
2019/12/4
7
2019/12/4
8
（三） 抗原构造
具有三种主要的细胞抗原 ① 菌体多糖抗原 与毒力无关，耐热，能与特异性抗体 发生环状沉淀，称Ascoli反应 ② 荚膜多肽抗原 具有抗吞噬作用，与细菌毒力有关 ③毒素蛋白抗原 具有免疫原性和抗吞噬作用
第十七章
炭疽芽胞
（Bacillus anthracis）
2和人类炭疽 的病原菌
主要感染牛、羊等草食动物
人可通过接触或食用患病动物及畜产 品而感染
2019/12/4
2
一、生物学性状
(一)炭疽芽胞杆菌为致病菌中最大的细菌 菌体两端平截 经人工培养后常排列成长链状，形成竹节 革兰染色阳性 芽胞在有氧条件下或人工培养基中形成 呈椭圆形 位于菌体中央 不大于菌体
2019/12/4
9
（四） 抵抗力 芽胞抵抗力强
煮沸10min或干热140˚C3h才能杀灭 耐干燥、紫外线、γ射线及多种消毒剂 对碘及氧化剂敏感
（1：2500碘液10min，3%H2O21h) 对青霉素及其他广谱抗生素均敏感
炭疽病流行病学特征
炭疽病流行病学特征炭疽病是一种由炭疽芽胞杆菌感染引起的急性、致死性传染病。
它主要影响草食性动物（如牛、羊、马等）和人类，还可以感染某些植物。
炭疽病的流行病学特征包括以下几个方面：1. 病原体：炭疽芽胞杆菌（Bacillus anthracis）是引起炭疽病的主要病原体。
它是一种革兰氏阳性杆菌，具有胶原酶和多糖胶质囊。
这种菌可以形成芽胞，在适宜条件下可以长期存活。
芽胞进入宿主体内后，可以释放毒素并引起疾病。
2. 传播途径：炭疽病的传播途径主要有三种：空气传播、消化道传播和皮肤直接接触传播。
空气传播是最常见的传播途径，通常是通过吸入感染悬浮在空气中的芽胞。
消化道传播主要是通过摄入被芽胞污染的食物或水源而引起感染。
皮肤直接接触传播则是指芽胞通过皮肤破损处进入体内。
3. 宿主：炭疽病的宿主主要包括草食性动物（如牛、羊、马等）和人类。
草食性动物常通过进食被芽胞污染的草料感染病菌，而人类则常通过接触染菌动物或其产品（如皮毛、肉类等）而感染病原体。
4. 临床表现：炭疽病的临床表现取决于感染的部位。
在人类中，最常见的感染方式是通过皮肤损伤引起炭疽病疖肿型。
患者皮肤上出现水疱，随后变成有脓的疖肿，伴有局部红肿、潮红、疼痛和淋巴结肿大等症状。
如果芽胞进入呼吸道或胃肠道，则可能引起呼吸道感染或胃肠道感染，并出现相应的症状。
5. 流行病学特点：炭疽病具有一定的流行性，但不易大规模扩散。
它在人群中的流行存在一定的季节性，主要发生在温度较高、湿度较大的季节。
此外，炭疽病在野生动物中也有一定的传播风险，这可能导致人类通过与野生动物接触而感染。
6. 预防与控制措施：炭疽病的预防和控制主要包括以下几个方面：通过注射疫苗来提高人和动物的免疫力；采取适当的卫生措施，如对食物进行消毒和煮熟，避免接触可能被芽胞污染的动物和环境；对可能与炭疽病有关的动物和环境进行监测和调查等。
总之，炭疽病是一种严重的传染病，其流行病学特征包括特定的病原体、多种传播途径、特定的宿主群体、不同的临床表现以及一定的流行规律。
炭疽芽孢杆菌 PPT课件
8
8
生物学性状
（二）培养特性 条件：需氧或兼性厌氧（有氧或无氧都可） 最适温度30~35℃ 有毒株在NaHCO3的血脂平板或含5%血清的营养 基内，5%CO2孵箱37℃培养24~48小时，形成 粘液状菌落（有荚膜），而无毒株则为粗糙状。
9
生物学性状
n （三）抗原结构
结构抗原：荚膜、菌体和芽胞等抗原成分
12
生物学性状
（四）抵抗力
芽胞抵抗力强，在干燥的室温环境中可存活20年以上，在皮 毛中可存活数年。牧场一旦被污染，芽胞可存活20～30年 。经直接日光曝晒100小时、煮沸40分钟、l40℃干热3小 时、110℃高压蒸汽60分钟、以及浸泡于10%甲醛溶液15 分钟、新配苯酚溶液(5%)和20%含氯石灰溶液数日以上， 才能将芽胞杀灭。
和压痛，也无脓肿形成。经有效抗生素治疗，病死率 低于1%。
17ห้องสมุดไป่ตู้17
吸入性炭疽（肺炭疽）
罕见，吸入炭疽芽孢杆菌引起感染； 潜伏期不完全确定，一般1~7d，最长可达43d； 有流感样前驱症状，高热，呼吸困难，可有胸痛及咳
嗽，咯粘液血痰。肺部体征常只有散在的细湿罗音。 X射线的主要表现为纵膈影增宽。常见胸腔积液。 胸水切片免疫组化染色或PCR检测；脑脊液（CSF） 培养
18
肠炭疽
少见，占3~6%； 口咽型病变多位于扁桃体、可见溃疡及其上的假膜，
咽喉疼痛明显，颈部肿胀、淋巴结肿大；培养咽试子 阳性高于血液 胃肠型症状轻重不一，呕吐（呕吐物中含血丝及胆汁 ）、腹痛、腹泻，通常为血样便或血水样便； 潜伏期：1~7d 沾血粪便可培养出炭疽杆菌 因容易误诊，病死率较高（25~60%）；
炭疽芽胞对碘特别敏感，对青霉素、红霉素、氯霉素等敏感
炭疽病
炭疽病一、概况炭疽（Anthrax）是由炭疽芽孢杆菌（Bacillus anthracis）引起的一种人与动物共患传染病，主要存在于食草动物和牲畜群落之中，并能造成环境的广泛污染。
由于炭疽芽孢具有对外界环境极强的抵抗力，造成这种污染常持续存在。
二、流行病学炭疽的传染源主要是食草动物，如牛、马、羊、驴、骡，其次是猪、犬、猫等，人是次要的传染源。
病畜主要经尿和粪便排菌，病畜死亡后其皮毛、血液及肉中含有大量炭疽杆菌。
人的炭疽往往在畜疫发生后随之出现，传播途径有三：1、直接或间接接触病畜及其染菌的皮毛等，引起皮肤炭疽；2、吸入含有芽孢的尘埃引起肺炭疽；3、进食病畜的肉、乳及带菌的水引起肠炭疽。
在牧区及特殊情况下（如水灾时），应特别警惕炭疽的传播与流行。
该菌主要从皮肤侵入引起皮肤炭疽，使皮肤坏死形成焦痂溃疡与周围肿胀和毒血症，也可引起肺炭疽或肠炭疽，均可并发败血症。
传播途径：直接或间接接触病畜和染菌的皮、毛、肉、骨粉等可引起皮肤炭疽；吸入带芽孢的尘沫可引起肺炭疽；进食带菌肉类可引起肠炭疽。
（一）传染源主要为患病的食草动物，如牛、羊、马、骆驼等，其次是猪和狗，它们可因吞食染菌食物而得病。
人直接或间接接触其分泌物及排泄物可感染。
炭疽病人的痰、粪便及病灶渗出物具有传染性。
（二）传播途径1．经皮肤粘膜由于伤口直接接触病菌而致病。
病菌毒力强可直接侵袭完整皮肤。
2．经呼吸道吸入带炭疽芽胞的尘埃、飞沫等而致病。
3．经消化道摄入被污染的食物或饮用水等而感染。
（三）人群易感性人群普遍易感，但多见于农牧民、屠宰、皮毛加工，兽医及实验室人员。
发病与否与人体的抵抗力有密切关系。
（四）流行特征在动物和人群间发病有一定关系，造成家畜流行的诸因素也与人群中流行的因素有关。
本病世界各地均有发生，夏秋发病多。
三、临床表现由于感染途径不同，炭疽的临床表现多样。
炭疽的潜伏期一般为1-3天。
1．体表感染型（皮肤）炭疽：主要经皮肤破伤感染，偶有被昆虫叮咬或经黏膜感染者，约占90%以上炭疽病例为体表感染型（皮肤）炭疽。
炭疽芽胞杆菌的核酸检测
附录 D（规范性附录）炭疽芽胞杆菌的核酸检测D.1 聚合酶链式反应（PCR）检测炭疽芽胞杆菌特异基因D.1.1 目标基因从标本中检测炭疽芽胞杆菌核酸时，以炭疽芽胞杆菌毒素基因和荚膜合成相关基因作为目标基因，也可选择其他特异性基因。
D.1.2 试剂选择可使用商品化试剂盒，按操作说明书进行操作，也可按以下步骤进行。
D.1.3 参考引物参考引物序列见表D.1。
合成的引物通常为冻干产品，开盖前应进行短暂离心，使用时需要溶解并稀释成储存液。
按照10 µL/nmol的量加入纯水，即可配制成100 µmol/L储存液，用时稀释10倍即为工作浓度（10 µmol/L）。
表D.1 PCR用参考引物序列D.1.4 模板制备D.1.4.1 试剂盒法原始标本使用商品化基因组DNA提取试剂盒，具体操作方法按试剂盒说明进行。
D.1.4.2 煮沸法已经分离培养的细菌菌落使用煮沸法进行简易模板制备。
细菌接种于营养琼脂平板，37℃培养18 h～24 h；刮取菌苔1接种环（约2 µL～5 µL）放入装有800 µL纯水或TE的1.5 mL离心管内，混匀；100℃加热10 min；12 000 ×g离心10 min；吸取上清用0.22 µm滤器过滤；滤液即为PCR模板。
D.1.5 PCR反应体系一次总量25 µL的反应体系包含：酶和缓冲液（2×）12.5 µL，上游引物（10 µmol/L）和下游引物（10 µmol/L）各1 µL，待测模板1 µL～5 µL，用纯水补足体积至25 µL。
反应设立质控参数：使用纯水作为阴性对照；用已知炭疽芽胞杆菌模板作为阳性对照。
加样顺序：首先加入阴性对照，然后加待测模板，最后加入阳性对照。
D.1.6 PCR扩增95℃预变性5 min；95℃变性1 min，55℃退火1 min，72℃延伸1 min，共30个循环；最后72℃延伸5 min。
(医学课件)炭疽杆菌PPT演示课件
二、流行特点
（一）易感动物：各种家畜、野生动物 和人都有不同程度的易染性。绵羊、牛、 驴、马、骡、山羊、鹿最多发病，骆驼、 水年及野生动物次之，猪发病较少，犬、 猫最低，家禽一般不感染，野生动物， 如狼、狐狸、豹等吞食炭疽尸体而发病， 并可成为本病的传播者。人主要通过污 染炭疽杆菌的畜产品而感染。
.
（三）传染的途径： 第一 主要通过消化道感染，因采食被炭疽 杆菌污染的草料，或饮过被污染的井水、河水， 以及在污染牧地受到感染。 第二 是通过皮肤感染，主要是由带有炭疽 杆菌的吸血昆虫叮咬及创伤（如绵羊的剪毛、 断尾、去势及口、咽粘膜创伤等）而感染。 第三，通过呼吸道感染，是由于吸入混有 炭疽芽孢的灰尘，经过吸道粘膜侵入血液而发 病。
炭疽芽孢杆菌
（B.anthracis）
.
炭疽芽孢杆菌
（B.anthracis） 炭疽芽胞杆菌习惯称为炭疽杆菌，是 引起的各种家畜、野生动物和人类共患 的传染病——炭疽（Anthrax）的病原体 。在临诊上表现为急性、热性、败血性 症状。在病理变化上的特点是呈败血症 变化、天然孔出血、血液凝固不良、脾 脏显著肿大、皮下有浆膜组织出血性胶 样浸润。
.
.
颌下淋巴结病变
肠系膜淋巴结病变
.
四、诊断 、治疗及防疫
（一）诊断： （1）临诊及流行情况诊断 对于原因 不明而突然死亡或临诊上出现体温升高、 腹痛、痈肿、血便、病情发展急剧，死 后天然孔出血等病状时，首先要怀疑为 炭疽病 。 （2）细菌学诊断 取血液涂片，用姬 姆萨或瑞氏染色液染色，镜检，可以看 到单个或短链有荚膜的两端平截竹节状 大杆菌，即可确诊。
.
呼 吸 困 难
.
咽 喉 部 红 肿
.
炭疽芽孢杆菌——总结
炭疽芽孢杆菌1.形态及染色特性革兰阳性大杆菌，芽孢椭圆形，位于菌体中心。
在动物组织和血液中，菌体单在或呈2〜5个相连的短链，相连的菌端平截而呈竹节状，围绕以丰厚的荚膜。
在牛、绵羊体内形成的荚膜，经染色后镜检最明显，马、骡次之，猪则史次，往往轮廊不淸。
荚膜具有较强的抗腐败能力，当菌体因腐败而消失后，仍有残留荚膜显示，称为菌蜕。
动物体内的炭疽杆菌只有当露接触空气中的氧气之后，方能形成芽胞。
2.培养特性本菌为需氧菌，i但在厌氧条件下也可生长。
可生长温度范围为15〜4℃，最适生长温度30〜37℃。
最适PH为7.2〜7.6。
营养要求不高，普通培养基中即能生长良好。
培养24h 后，强毒菌株形成灰白色、表面干燥、边缘呈卷发状的粗糙（R)型菌落），无毒或弱毒菌株形成稍小而隆起、表面较为光滑湿润、边缘比较整齐的光滑（S）型菌落。
在培养基中常形成长链，并于培养I8〜24h后开始形成芽胞。
在普通培养基中不形成荚膜，但若在血液，血清琼脂或碳酸氢钠琼脂上，于10%〜20% CQh中培养，则形成荚膜。
在明胶穿剌培养中，细菌沿穿刺线生长，形成倒立的雪松状。
培养2〜3d后，明胶上部逐渐液化呈漏斗状。
在含青霉索0.5IU/ ml的培养基中，由于细胞壁的肽聚糖合成受到抑制，原生质体相互链接成串，若培养基中青霉索含量加至lOIU/ml,则可能完全不生长。
此特点可与其他需氧需氧芽孢杆菌鉴别。
3.生化特性发酵葡萄糖产酸而不产气，不发酵阿拉伯糖、木糖和甘露醇。
水解淀粉、明胶和酪蛋白。
VP试验阳性，不产生吲哚和H2S，还原硝酸盐。
牛乳经2—4h凝固，然后缓慢胨化。
卵磷脂酶阳性或弱反应，笨丙氨酸脱氧酶和磷酸酶阴性，触媒阳性。
不能活微弱还原美兰。
4.细菌菌落形态5.炭疽杆菌在显微镜下的形态。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
•所致疾病
皮肤炭疽:接触感染，最多见（面部黑色焦痂） 肺炭疽:吸入感染（吸入含芽胞尘埃） 肠炭疽:吃未煮熟的病畜肉、乳制品后，
出现呕吐,肠麻痹、便血. 三者均可并发败血症、炭疽性脑膜炎
•免疫性细：菌持武久器 免疫
典型症状：炭疽焦痂
•免疫性
病后获持久免疫力
三、微生物学检查
1.严禁无保护条件下剖检病畜尸体, 应在无菌条件下割取耳尖或舌尖送检
致病菌中 最大的革 兰阳性粗 大杆菌;
有氧环境 产生芽胞
有毒株在 体内和血 清培养基 产生荚膜
•抗原结构
1.结构抗原 荚膜多肽抗原、菌体多糖抗原和芽胞特异抗原
（抗吞噬、血清学诊断价值、Ascoli热沉淀反应） 2 .炭疽毒素复合物
保护性抗原、致死因子和水肿因子组成 三者结合才能发挥毒性作用
•抵抗力
爱护动物，就是爱护人类自己！
2、该病病原菌炭疽杆菌是用显微镜从染病动 物材料中检出的第一种微生物。
3、该病是以纯培养物在实验动物中人 工感染成功的第一种疫病。
4、1880年~1881年巴斯德用该病原研制 成功第一种活菌减毒疫苗，并有力的 推动了现代免疫学的发展。
郭霍法则（Koch’s postulates，1884年）
一.生物学 性状
*芽胞抵抗力强 煮沸10min或干热140ºC 3h灭活； 在干燥土壤或皮毛中能存活数年至20年； 对化学消毒剂抵抗力强(5%石炭酸5d杀死）； 对碘及氧化剂较敏感；
*繁殖体的抵抗力弱 对青霉素、红霉素、氯霉素敏感 （青霉素串珠试验）
二、致病性与免疫性
•致病物质:主要有二种
荚膜:由质粒编码,具有抗吞噬作用
炭疽毒素:由质粒编码（致死主要因素）
保护性抗原（protective antigen,PA）
水肿因子 （edema factor ， EF）
致死因子 factor,LF）
(lethal factor,LF)（Lethal
•致病机理
1.损伤微血管内皮细胞,使血管通透性增 加,局部出现水肿. 2.微循环回流血量减少,血液呈高凝状态, 导致DIC和感染性休克. 3.炭疽杆菌可阻塞毛细血管,使组织缺氧` 缺血,形成血栓.
第三节 炭疽芽胞杆菌
（ B.anthracis ）
• 需氧芽胞杆菌属：
需氧，形成芽胞，革兰阳性大杆菌
•炭疽芽胞杆菌：炭疽
蜡样芽胞杆菌：食物中毒
其他: 不致病
枯草芽胞杆菌
或条件致病 嗜热脂肪芽胞杆菌
是炭疽ຫໍສະໝຸດ 人人类最早认识和研究的重要疫病之一。
该病对现代微生物学的奠基和发展具有重要历
史意义
1、1876年，Koch首次以该病作为描述细菌 性病因的第一种模型。
2.直接镜检和分离培养 . 与类炭疽区别:
*青霉素串珠试验: ( 0.05u/ml) 炭疽杆菌形态呈串珠状排列； * NaHCO3 培养基菌落特点: R-M； *细菌产生荚膜
四、防治原则
1.治疗首选环丙沙星或青霉素等 2.加强病畜管理,病畜严格隔离或焚烧深埋， 严禁室外尸解取材 3.易感家畜及密切接触人员特异性预防—— 接种炭疽减毒活菌苗(1881年研制）