三：菌种的管理和保藏[2]
菌种保藏室管理制度
菌种保藏室管理制度第一章总则第一条为规范菌种保藏室的管理，确保菌种资源的使用和保护，提高菌种的保存质量，特制定本管理制度。
第二条菌种保藏室是指一个专门用于菌种资源的保存、管理和利用的实验室。
第三条本管理制度适用于所有使用菌种保藏室的实验室及工作人员。
第四条菌种保藏室的管理原则是" 管理科学、操作规范、保藏严谨、使用安全”。
第五条所有菌种的管理必须符合《微生物实验室安全操作规程》和相关法律法规的规定。
第二章菌种保藏室的设立第六条菌种保藏室设有专门的实验室，实验室应符合微生物实验室的相关要求。
第七条菌种保藏室应设有专门负责菌种管理的工作人员，负责日常的菌种保藏、更新、记录等工作。
第八条菌种保藏室应设有专门的存储设施，保障菌种的安全保存。
第九条菌种保藏室的设立必须经过相关部门的认可和注册。
第三章菌种的采集、保藏及更新第十条采集新的菌种来源必须符合相关规定，取得相关部门的许可。
第十一条采集的菌种必须在规定的时间内用适当的方法保存，保证菌种的纯净性和活力。
第十二条菌种的保藏要有完善的记录，包括菌种来源、采集时间、保存方法等。
第十三条菌种的更新要进行定期检查，确保菌种的活力和纯度。
第十四条菌种的更新要在菌种信息系统中记录，保证信息的完整性。
第四章菌种的使用与管理第十五条使用菌种前必须经过专门人员的审批，确保使用目的明确，操作规范。
第十六条使用菌种时必须遵守相关的操作规程，保证操作的安全性。
第十七条使用菌种后必须按照规定的处理方法进行处理，确保操作的安全性。
第十八条菌种使用后必须及时进行记录，保持菌种的流转记录清晰。
第十九条菌种使用完毕后必须按照规定的处理方法进行处理，确保操作的安全性。
第五章菌种保藏室的安全管理第二十条菌种保藏室应设置专门的安全管理人员，协调安全管理工作。
第二十一条菌种保藏室必须建立健全的安全管理制度，确保菌种的安全保存。
第二十二条菌种保藏室必须进行定期的安全检查，发现问题及时整改。
菌种的管理和保藏课件
•2024/5/26
•菌种的管理和保藏
•25
详细记录
菌种的来源、接收、传代、分离、复壮、使用 和鉴定等均应做好详细记录。包括菌保存位置、 环境(温度)、种传代或使用时间、名称、菌号、 代数、传代或保存形式、分离、复壮方式、使 用内容、鉴定情况等都应进行详细的记录。
•2024/5/26
•菌种的管理和保藏
分离一般采用平板培养基。
分离方法主要有分段划线法、连续划线法、 涂布分离法、倾注分离法等。
•2024/5/26
•菌种的管理和保藏
•16
培养 ：接种后的培养基，根据不同微生物
生长条件的要求，将培养基放在适宜微生物 生长的环境中（温度、湿度、氧气等），使 其生长繁殖的过程。 需气菌培养法 厌氧培养法
•2024/5/26
•菌种的管理和保藏
•13
细菌的接种、分离和培养 常用培养基种类 斜面培养基 半固体培养基。 液体培养基 平板培养基
•2024/5/26
•菌种的管理和保藏
•14
接种方法 涂布法 划线法 穿刺法 直接加入法等
•2024/5/26
•菌种的管理和保藏
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分离：为了获得纯菌种（株），采用的 将细菌分离成单个细胞，使其独立分裂繁 殖形成单个菌落的操作技术。
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菌种不得随意带出实验室，外单位索取、购买 应有证明和登记，并包装严密。 菌种处理应严格按操作规程进行，灭菌处理应 有详细记录。
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菌悬液的制备与保存
菌悬液的制备与保存 参照《中国药典》2010版培养基适用性 试验。
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•菌种的管理和保藏
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谢谢
菌种保藏管理制度
菌种保藏管理制度第一章总则第一条为规范和加强菌种保藏管理，提高菌种资源的利用率和保藏质量，制定本制度。
第二条本制度适用于菌种保藏单位的管理和操作。
第三条菌种保藏管理应遵循法律法规、国家标准和相关管理制度，保障菌种资源的合法、安全、有效性。
第四条菌种保藏管理应遵循科学性、规范性和合理性原则。
第二章菌种保藏管理制度要求第五条菌种保藏单位应有合格的菌种保藏人员，具有相关专业知识和操作技能。
第六条菌种保藏单位应具备完善的菌种保藏设施和设备，满足菌种的质量保护和管理需求。
第七条菌种保藏单位应制定菌种保藏管理规章制度，明确菌种资源的申请、保藏、使用和监管流程。
第八条菌种保藏单位应建立菌种信息数据库，对菌种资源进行准确、完整地记录和管理。
第九条菌种保藏单位应定期组织对菌种资源进行检测和鉴定，确保菌种的纯度和活力。
第十条菌种保藏单位应加强安全管理，确保菌种资源的安全使用和保护。
第十一条菌种保藏单位应建立菌种资源的追溯机制，对菌种资源的来源和去向进行记录和跟踪。
第三章菌种保藏管理流程第十二条菌种保藏单位应依法收集菌种资源，并进行鉴定和分类。
第十三条菌种保藏单位应按照规定对菌种资源进行保存和保藏，确保其质量和活力。
第十四条菌种保藏单位应制定菌种资源的使用管理规定，明确使用范围和条件。
第十五条菌种保藏单位应建立菌种资源的定期更新机制，确保菌种资源的新鲜和多样性。
第十六条菌种保藏单位应建立菌种资源的信息共享平台，促进菌种资源的交流和共享。
第四章菌种保藏管理监督第十七条有关行政部门应加强对菌种保藏单位的监督和检查，确保菌种资源管理的合法性和合规性。
第十八条菌种保藏单位应定期对菌种资源进行抽查和自检，发现问题及时整改。
第十九条菌种保藏单位应接受社会监督，加强与公众的沟通和交流。
第二十条对违反菌种保藏管理制度的单位和个人，依法给予相应的处罚和通报。
第五章附则第二十一条本制度自颁布之日起正式执行。
第二十二条本制度的解释权归菌种保藏管理部门所有。
菌种保藏与管理
菌种保藏与管理第一节概述一、菌种的定义菌种是从事微生物学及生命科学研究的基本材料，也是与微生物有关的生产部门的重要生产资料。
本文所指的菌种，包括可以培养的有一定科学意义或实用价值的细菌、真菌、病毒、细胞等代表株。
二、菌种保藏的意义微生物具有生命活力，其世代时间（generation time）一般很短，在传代过程中易发生变异甚至死亡。
因此，菌种保藏是一项重要的基础工作，是进行微生物学研究和微生物育种工作的重要组成部分。
它既是保护微生物资源的一种手段，又为持久而有效的利用微生物资源提供了保证，受到世界各国的极大重视。
很多国家相继建立了专门的菌种保藏机构，组织科学技术人员从事收集国内外长期利用及新发现的各类菌(毒)种。
实行集中保藏、科学的育种传代以及分类管理，并负责同世界各地相互交流，研究保藏菌(毒)种的科技情报工作，使各类菌种长期满足社会需要，更好的为生产和人类健康服务。
三、菌种保藏的目的和任务菌种保藏是应用及研究微生物工作者的一个必须且重要的一门应用学科技术，不单纯是菌种的分离培养、种株纯化、分类鉴别及储藏保管，还涉及多种学科，如微生物生理学、生物化学、生态学、遗传学、形态学、分子生物学以及微生物种群的分类等。
只有掌握了相关学科的科学技术，才有可能全面做好菌种保藏工作。
菌种保藏的中心任务是将现有菌种或广泛收集的各种有用的微生物菌种，选择最适宜的保藏方法，避免在保藏期间和传代过程中死亡、变异及衰退，以保持菌种原有的各种生物学特性，从而达到保证研究、检验、交换和使用的目的。
如何保持菌种性状的稳定是菌种保藏研究的重要课题。
事实上没有哪一种保藏方法能使菌种的原有性状保持绝对不变，所以菌种保藏研究就是要研究各类菌种最合适的保藏方法，使菌种变异和死亡达到最低限度。
因此，菌种保藏研究不但需要研究原种的营养代谢、生理功能和遗传变异，还需研究菌种衰退后仍可恢复其原来的生物学性状和生理功能的科学方法。
菌种保藏也是食品、药品微生物检验工作中的一项常用技术。
菌种管理规范
菌种管理规范引言概述：菌种管理是生物技术领域中非常重要的一项工作，它涉及到菌种的保存、鉴定、培养和分发等方面。
规范的菌种管理能够保证菌种的纯度和可靠性，为科学研究和工程应用提供可靠的基础。
本文将从菌种的保存、鉴定、培养、分发和记录等五个大点，分别阐述菌种管理的相关内容。
正文内容：1. 菌种的保存1.1 保存条件：菌种保存需要提供适宜的环境条件，包括温度、湿度和光照等。
不同菌种对保存条件的要求不同，因此需要根据菌种的特性进行调整。
1.2 保存方式：常见的菌种保存方式包括冷冻保存、冷冻干燥保存和液氮保存等。
不同保存方式有其优缺点，需要根据菌种的特性和使用需求选择合适的保存方式。
2. 菌种的鉴定2.1 鉴定方法：菌种的鉴定是确定其物种和亚种的过程，常用的鉴定方法包括形态学鉴定、生理生化特性鉴定和分子生物学鉴定等。
鉴定方法的选择应根据菌种的特性和鉴定目的进行。
2.2 鉴定标准：菌种的鉴定需要依据一定的标准和参考物种进行比对。
国际上常用的鉴定标准包括国际菌种保存中心（CBS）和美国类型菌种文化集（ATCC）等。
3. 菌种的培养3.1 培养基选择：菌种的培养需要提供适宜的培养基，包括基础培养基和特定培养基。
基础培养基可根据菌种的需求选择，特定培养基则针对特定菌种的培养需求进行设计。
3.2 培养条件控制：菌种的培养需要控制适宜的温度、pH值和培养时间等条件。
不同菌种对培养条件的要求有所不同，因此需要根据菌种的特性进行调整。
4. 菌种的分发4.1 分发要求：菌种的分发需要满足科学研究和工程应用的需求，同时要保证菌种的纯度和可靠性。
分发过程中需要采取一系列措施，如制备分生孢子、制备冻干粉和制备液体培养物等。
4.2 分发方式：常见的菌种分发方式包括直接分发和间接分发。
直接分发是将菌种直接提供给用户，间接分发是通过菌种库或合作单位进行分发。
分发方式的选择应根据实际情况进行。
5. 菌种的记录5.1 记录内容：菌种的记录需要包括菌种的基本信息、保存和鉴定的结果、培养条件和分发情况等。
微生物菌种常规保藏技术规程
微生物菌种常规保藏技术规程一、前言微生物菌种的保藏是微生物研究中非常重要的一环，它对于保障菌种的长期保存和研究使用具有重要的意义。
本技术规程旨在规范微生物菌种的常规保藏技术，确保其安全、稳定和可持续使用。
二、常规保藏技术1. 冻干法（Lyophilization）：将培养的微生物菌株悬液在前冷冻过程中给予低温、高真空条件，使其中的水分直接从冰态升华为气态，从而避免了常规冻存法中由于结冰时水晶体的生成对菌体的危害，从而达到保存微生物菌株的目的。
操作步骤：a. 微生物培养物经适当稀释后应当倒入试管中，滴入约1ml 20%乳糖溶液在表面形成一层薄膜，待乳糖凝固后，在加入4ml 0.5-0.7%匀浆的2%干燥乳铁粉液，将试管摇匀，再灌入16ml混合液保持无气泡，放置于冰浴上。
b. 待培养物温度达到0摄氏度，再清洗喷雾器，灌入76％露醇20ml，培养物放入冷板上，适当时间后将试管封口放入冷板上经杀菌后真空泵连接，把真空泵打开，通过真空泵提供的条件慢慢降低压强，一般12小时后真空泵关闭。
c. 提供适当温度下作干燥处理，通常使用倍耐安减压干燥器空干40-80小时，干燥后的干燥灸试管，将试管放入吸气瓶中后置入-40—-50摄氏度低温冷冻管内低温保存(一般保存温度为—40摄氏度或更低)，备用空干矿温度—20摄氏度或更低。
2. 酶解冻存法（Enzymatic freezing）：在培养基中添加蔗糖，结合酶解冻存方法，经冻干后的菌种耐冻性和储存时间明显提高。
操作步骤：a. 将微生物分别接种于琼脂平板上，预培养24小时，取2-3份储备品。
菌液于冻干菊花瓶中进行前冷冻，真空抽气消耗20分钟。
b. 平均地用EP管管接受，采用3次“起冻—冷冻”的方法完全冻干，最后0.1至0.3ml真菌液在5摄氏下冷冻6小时，然后在5摄氏下还原18小时。
c. 移除冻存，延长试验保存时间。
必须在-80摄氏下保存。
3. 液氮冻存法（Liquid nitrogen freezing）：液氮冷冻法是现在应用最广泛的冷冻保存方法，在液氮的作用下，微生物菌种在-196摄氏度下冷冻，保持良好的生物活性。
菌种保藏管理
菌种保藏管理菌种保藏管理是指对微生物菌种进行保存、管理、鉴定和利用的一系列工作。
菌种保藏管理的目的是保护微生物资源，促进微生物资源的研究和利用，防止微生物污染和传播，维护科学研究的诚信和公正。
一、菌种保存菌种保存是指将微生物菌株保存在适宜的条件下，以保证其生命活力和遗传稳定性。
常见的菌种保存方式有以下几种：1. 冷冻保存：将菌株在-70℃以下的低温条件下保存，可保存数年至数十年。
2. 干燥保存：将菌株在低湿度条件下干燥保存，可保存数年至数十年。
3. 液氮保存：将菌株在液氮中保存，可保存数十年至数百年。
4. 长期培养：将菌株在适宜的培养基上连续传代培养，可保存数年至数十年。
二、菌种管理菌种管理是指对保存的菌株进行鉴定、分类、记录和更新等工作。
常见的菌种管理工作有以下几个方面：1. 鉴定和分类：对保存的菌株进行鉴定和分类，确定其种属和亚种。
2. 记录和更新：对保存的菌株进行详细的记录和更新，包括菌株来源、保存时间、保存方式、鉴定结果等信息。
3. 质量控制：对保存的菌株进行质量控制，包括检测菌株的纯度、活力和遗传稳定性等指标。
4. 分发和交换：将保存的菌株分发给需要的研究人员或机构，或与其他机构进行菌株交换。
三、菌种利用菌种利用是指利用保存的菌株进行科学研究和应用开发。
常见的菌种利用方式有以下几种：1. 研究应用：利用保存的菌株进行科学研究和应用开发，如发酵生产、药物研发、环境修复等。
2. 教学实验：利用保存的菌株进行教学实验，培养学生的实验技能和科学素养。
3. 保护利用：利用保存的菌株进行保护利用，促进微生物资源的可持续利用和保护。
总之，菌种保藏管理是保护微生物资源、促进科学研究和应用开发的重要工作，需要科学规范的管理和操作。
菌种保藏的方法
菌种保藏的方法菌种保藏是一种重要的微生物资源保护方式，对于研究、应用和开发微生物具有重要意义。
以下是几种常见的菌种保藏方法及其操作步骤。
一、低温冷冻保藏法低温冷冻是一种常用的微生物保藏方法，适用于大多数真菌、细菌和酵母菌。
其主要原理是将菌株保存在低温下，使其生理活动缓慢，以延长菌种的保藏时间。
操作步骤：1. 选择菌株：选择生长良好、菌株特性完整的菌株进行保藏。
2. 菌株处理：将菌株经过预处理，如鉴定鉴别、菌落孤立等。
3. 制备保存液：根据不同菌株的需要，制备适宜的保存液，常用的保存液有甘油、甘露醇等。
4. 菌种保存：将菌株用保鲜膜包裹，放入保存管中，加入保存液，密封保存管。
5. 冷冻保存：将保存管放入低温冰箱或液氮罐中进行冷冻保存。
二、干燥保藏法干燥保藏法是一种简便、经济的保藏方法，适用于真菌、细菌、放线菌等微生物。
其基本原理是将菌种与干燥剂混合，使其水分含量降低，从而实现微生物的休眠状态。
操作步骤：1. 选择菌株：选择生长良好、菌株特性完整的菌株进行保藏。
2. 菌株处理：将菌株经过预处理，如鉴定鉴别、菌落孤立等。
3. 制备干燥剂：根据不同菌株的需要，选择合适的干燥剂，如硅胶、氧化钙等。
4. 菌种混合：将菌株与干燥剂按照一定比例混合均匀。
5. 干燥保存：将混合物均匀地散布在无菌培养基上，置于通风干燥的环境中进行保存。
三、冷冻冻干保存法冷冻冻干保存法是一种较为复杂的菌株保藏方法，适用于难保存的微生物，如厌氧菌、放线菌等。
其主要原理是将菌株在低温下冻结干燥，从而保护微生物的活力。
操作步骤：1. 选择菌株：选择生长良好、菌株特性完整的菌株进行保藏。
2. 菌株处理：将菌株经过预处理，如鉴定鉴别、菌落孤立等。
3. 制备保存液：根据不同菌株的需要，制备适宜的保存液，如甘油、甘露醇等。
4. 冷冻过程：将菌株加入保存液中，放入冷冻机冷冻至低温（通常为-80℃）。
5. 冻干过程：将冷冻的菌株经过真空排气、结冰降温等步骤进行冻干处理。
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2020/8/19
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二、菌种的传代和使用
工作菌种的传代次数应严格控制，不得超过5 代，（从菌种保藏中心获得的标准菌株为第0 代）防止过度的传代造成菌种变异。1代是指 将活的培养物接种到新鲜培养基中，任何亚 培养的形式均被认为是转种或传代一次。必 要时，实验室应对工作菌株的特性和纯度进 行确认。
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标准储备菌株经纯度和特性确认后保存°
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工作菌株不可代替标准菌株，标准菌株的 商业衍生物仅可用作工作菌株。
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不同的微生物，应根据其生物特征来选择最 适宜 的保藏方法，菌种的保藏方法一般分 四个阶段：
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⑴ 挑选特征典型的纯菌菌落 ⑵确定保藏的合适菌体形态 ⑶选择最适宜的方法保藏 ⑷定期对保藏的菌种进行检查
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5
菌种保藏机构
中国菌种保藏管理委员会（CCCCM） 成立于1979年。下设7个菌种保藏管理中
心及有关专 业实验室，共12个单位实行统一领导，按
专业分工管理。 国外的菌种保藏机构
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常用菌种保藏方法
菌种保藏的原则 根据微生物菌种的生理、生化特性， 在人工创造的条件下尽量降低微生物 细胞的代谢强度，使细胞基本上处于 休眠状态，生长繁殖受到抑制但由不 至于死亡，以减低菌种的变异率。
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Байду номын сангаас
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菌悬液的制备与保存
菌悬液的制备与保存 采用经验证的方法制备菌悬液，除另有规定外，微生物限 度试验用菌悬液应按《中国药典2010年版》规定制备
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2、实验室必须建立菌种保存和使用文 件化的程序管理制度. 3、菌种应冷藏或冷冻保存，保存菌种的 冰箱不得放置食品和易挥发性药品，放 置菌种的专门冰箱，应上锁管理。
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4、应由专人按操作规程和有关要求定期进 行传代，并定期对保存的菌种进行检查， 一般每年1～2次，（或定期更换栋干菌 种）。
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三、菌种的检查与复壮
菌种的衰退 菌种经过长期人工传代培养或保藏，由自发突 变的作用而引起某些优良特性变弱或消失的 现象。
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控制菌种的衰退方法 ⑴控制传代次数 ⑵创造适宜的培养条件 ⑶用不同类型的细胞进行传代 ⑷采用有效的保藏方法
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定期检查
菌种在保藏期间必须定期检查，发现变 异或衰退，应及时给予恢复。
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细菌的接种、分离和培养
接种、分离、培养是微生物学实验 的基本
作技术，要求严格的无菌操作和在 无菌环境下进行。
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常用培养基种类 斜面接种
半固体培养基 液体培养基 平板培养基
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接种方法 涂布法 划线法 穿刺法 直接加入法等
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分离：
分段划线法、连续划线法、涂布分 离法、倾注分离法等。
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详细记录 菌种的来源、接收、传代、分离、复壮、使用和鉴 定等均应做好详细记录。包括菌种传代或使用时间、 名称、菌号、代数、传代或保存形式、分离复壮方 式、使用内容、鉴定情况等都应进行详细的记录。
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菌种不得随意带出实验室，外单位索取、购 买应由登记，并包装严密。 菌种处理应严格按操作规程进行，灭菌处理 应有详细记录。
菌种的保藏和管理
2009年10月
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1
菌种保藏
微生物实验过程中，实验菌株可能是最敏感 的，因为它们的生物活性和特性依赖于合适 的试验操作和贮藏条件。
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2
实验室菌种的处理和保藏的程序应
标准化，使尽可能减少菌种污染和 生长特性的改变。按统一操作程序 制备菌株是微生物试验结果一致性 的重要保证。
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7
常用菌种保藏方法
标准菌株的复活或培养物的制备应按供 应商提供的说明或按验证的方法进行。 标准储备菌株-从国内、外菌种收藏机构 获得的标准菌株经复活并在适宜的培养基 中生长后,既为标准储备菌株。
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8
低温、干燥、缺氧、缺乏营养等环境条件 都可以抑制微生物的代谢和生长繁殖，因 此低温、干燥和真空是菌种保藏的重要手 段。
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培养 ：接种后的培养基，根据不同微生物
生长条件的要求，置培养基于适宜微生物生 长的环境中，使其生长繁殖的过程。 需气培养法 厌氧培养法
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培养后微生物的生长判断 固体培养基 液体培养基
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菌种的传代和使用 菌液的制备和使用
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2020/8/19
3
菌种保藏是微生物学检验工作中的一项 常规技术，菌种的科学保藏和管理直接 关系到检验结果的正确性
试验菌种应是从国家菌种中心获得的标 准菌种，经过实验室复活并在适宜的培 养基中生长后保存.
2020/8/19
4
菌种保藏的中心任务是广泛收集各种
有用的微生物菌种，选择最适宜的保藏 方法，避免在保藏和传代过程中死亡、 变异、衰退及活力减弱，以保持菌种原 有的各种生物学特性，从而达到保证研 究、检验、交换和使用要求的目的。
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23
菌种的复壮 使衰退的菌种重新恢复原来的优良特性的 过程。实验室主要采用分离纯化的方法。
2020/8/19
24
四、菌种的管理
1、使用菌种的单位，应具备从事微生
物工作的条件和设备。 菌种应由专人负责管理，管理人员应 具有微生物专业知识和技术水平，并应 具有较强的责任心。
2020/8/19