5-菌种的管理和保藏
5菌种保藏的原理和方法
适用菌种：产孢子的真菌 该法麸皮、大米、小米或麦粒等天然农产品为 产孢子培养基，使菌体产生大量的休眠体（孢 子）后加以保存。 注意：控制适当的水分。 保存期：1-3年
（四）沙土管干燥保藏法
原理：低温、寡营养 保藏期：4-5
℃冰箱 保存期1-2年。 适用菌种：产孢子的丝状真菌和放线菌以及产 芽孢的细菌。 过筛、灭菌并干燥的沙土为保藏介质， 可用硅胶、磁珠或多孔玻璃珠，但适于这些载 体的微生物不多，保存期短，不及沙土实用。
（二）穿刺保藏法
原理：低温、缺氧 保藏期：
4-5℃冰箱 保存期6-12个月 适用菌种：各种好气性细菌 液体石蜡作用：防止培养基失水并隔绝氧气 液体石蜡保藏法 （在斜面菌种上加入灭菌后 的液体石蜡） 适用于不能以石蜡为碳源的菌种，如：固 氮菌、分枝杆菌、沙门氏菌、毛霉、根霉等。
（三）固体曲保藏法
三、菌种保藏的注意事项
1 菌种在保藏前所处状态 休ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ体如孢子或芽胞 培养时间（过短，容易死亡；过长，生产性能 衰退） 培养温度 一般采用生长最适温度培养至孢子成熟的菌种 进行保藏效果好
三、菌种保藏的注意事项
2 菌种保藏所用基质 斜面保藏所用的培养基，碳源比例应少些，营 养成分贫乏些较好； 沙土管保藏需将沙和土充分洗净，以防其中过 多的有机物，影响菌的代谢或经灭菌后产生一 些有毒物质； 冷冻干燥所用的保护剂，有不少经加热分解或 变性的物质，如还原糖和脱脂乳，过度加热易 形成有毒物质。
（五）真空冷冻干燥保藏法
原理：在低温下迅速地将细胞冻结以保持细胞结构完整， 然后在真空下使水分升华（最有效方法之一）。 步骤： ①安瓿瓶的处理：灭菌 ②保护剂:其作用是保持菌种细胞的生命状态，尽量减少冷 冻干燥对微生物引起的冻结损伤。 常采用脱脂牛奶或血清。 ③菌悬液制备：与保护剂混合，放在安瓿瓶内； ④冷冻干燥（用低温酒精或干冰（-15 ℃以下）使之速冻， 在低温下用真空泵抽干） 保藏期：将安瓿瓶熔封，低温4-5 ℃，保藏5-10年。
菌种保藏管理制度
菌种保藏管理制度第一章总则第一条为规范和加强菌种保藏管理，提高菌种资源的利用率和保藏质量，制定本制度。
第二条本制度适用于菌种保藏单位的管理和操作。
第三条菌种保藏管理应遵循法律法规、国家标准和相关管理制度，保障菌种资源的合法、安全、有效性。
第四条菌种保藏管理应遵循科学性、规范性和合理性原则。
第二章菌种保藏管理制度要求第五条菌种保藏单位应有合格的菌种保藏人员，具有相关专业知识和操作技能。
第六条菌种保藏单位应具备完善的菌种保藏设施和设备，满足菌种的质量保护和管理需求。
第七条菌种保藏单位应制定菌种保藏管理规章制度，明确菌种资源的申请、保藏、使用和监管流程。
第八条菌种保藏单位应建立菌种信息数据库，对菌种资源进行准确、完整地记录和管理。
第九条菌种保藏单位应定期组织对菌种资源进行检测和鉴定，确保菌种的纯度和活力。
第十条菌种保藏单位应加强安全管理，确保菌种资源的安全使用和保护。
第十一条菌种保藏单位应建立菌种资源的追溯机制，对菌种资源的来源和去向进行记录和跟踪。
第三章菌种保藏管理流程第十二条菌种保藏单位应依法收集菌种资源，并进行鉴定和分类。
第十三条菌种保藏单位应按照规定对菌种资源进行保存和保藏，确保其质量和活力。
第十四条菌种保藏单位应制定菌种资源的使用管理规定，明确使用范围和条件。
第十五条菌种保藏单位应建立菌种资源的定期更新机制，确保菌种资源的新鲜和多样性。
第十六条菌种保藏单位应建立菌种资源的信息共享平台，促进菌种资源的交流和共享。
第四章菌种保藏管理监督第十七条有关行政部门应加强对菌种保藏单位的监督和检查，确保菌种资源管理的合法性和合规性。
第十八条菌种保藏单位应定期对菌种资源进行抽查和自检，发现问题及时整改。
第十九条菌种保藏单位应接受社会监督，加强与公众的沟通和交流。
第二十条对违反菌种保藏管理制度的单位和个人，依法给予相应的处罚和通报。
第五章附则第二十一条本制度自颁布之日起正式执行。
第二十二条本制度的解释权归菌种保藏管理部门所有。
菌种的管理和保藏
整理课件
液体冷冻保藏法
制备方法 1%蛋白胨 、甘油 ,灭菌,接种、培养18-24小时.
保存条件 -80℃可保存数年.
整理课件
菌种的传代和使用
工作菌种传代次数不得超过5代。 1代 是指将活的培养物接种到新鲜培养基中，任何亚培养的形式均被认为是转种或传 代一次。
整理课件
基本操作技术
细菌的接种、分离和培养 接种：将微生物的培养物接种到培养基上的一种操作技术。
信息。
整理课件
2015版-指导原则
菌种的鉴定
纯菌的分离 微生物的表型 表型微生物鉴定 通过长时间培养对微生物细胞的恢复、增殖是有限的，如有些环境中的微生 物在普通微生物增殖培养基不能恢复。此外，分离出的受损的培养物可能不 能完整表达其表型属性。 基因型微生物鉴定
整理课件
菌种的鉴定
微生物分类中使用的表型特征
整理课件
菌种的保藏
低温、干燥、缺氧、缺乏营养等环境条件都可以抑制微生物的代谢和生长繁殖， 因此低温、干燥和真空是菌种保藏的重要手段。
整理课件
菌种的保藏
标准储备菌株可用于制备每月或每周一次转种的工作菌株。 冷冻菌株一旦解冻转种制备工作菌株后,不得重新冷冻或再 次使用。
工作菌株不可代替标准菌株，标准菌株的商业衍生物仅可用 作
培养时间( h ) 18～24
2～3天
5～7天，或直到获得 丰富的孢子
整理课件
菌液制备用稀释液—2015修定内容
修订前 0.9％氯化钠溶液
修订后 pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液。 0.9%无菌氯化钠溶液。
整理课件
菌液贮存—2015修定内容
修订前
修订后
菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2-8℃，可在24小时内使 用。
菌种保存、传代、使用、销毁管理规程,操作规程完整
菌种管理制度1、目的建立菌种保存、传代、使用、销毁标准操作规程，规范微生物学检定用菌种的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。
2、适用范围本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的购买、保存、传代、使用及销毁等。
3、定义标准菌株是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。
传代用菌种是指用标准菌株制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。
工作用菌种是指用标准菌株或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。
菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代。
4、职责4.1部门主管负责菌种的申购、接收、保存分发。
4.2微生物检验员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。
5、规程5.1菌种的申购部门主管根据菌种的使用情况，提出年度购买计划（包括临时检验需要），填写申购流程，经审批后，向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌种（标准菌株）或传代用菌种，购买时，需确定菌种的代数，以便控制传代代数。
5.2菌种的接收菌种到达实验室后，由部门主管接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在《标准菌株库存记录》上，内容包括：名称、数量、编号（无编号者按检定菌种的编号原则编号）、代数、来源、接收日期、接收人等，并将其暂贮存于4～8℃冰箱中，在一周内必须完成转种。
5.3菌种的保存5.3.1工作用菌种的保存工作用菌种采用斜面低温保存法。
将菌种接种在适宜的琼脂斜面培养基上，待菌生长充分以后，转移至4～8℃冰箱中保存。
此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。
保存时间根据菌种种类而不同，细菌：每个月转种一次；酵母菌及芽胞：3~6个月转种一次；丝状真菌每年转种一次。
菌种保存、传代、使用、销毁管理规程,操作规程
菌种保存、传代、使用、销毁管理规程,操作规程传代用菌种采用甘油冷冻管保存法。
将菌种接种在适宜的琼脂培养基上，待菌生长充分后，将菌液混合甘油并分装至冷冻管中，冷冻管标注菌种名称、代数、保存日期等信息，然后放置于-80℃冰箱中保存。
每年进行一次复苏和传代，保存时间不超过5年。
5.3.2.2液体石蜡保存法对于一些难以保存的菌种，采用液体石蜡保存法。
将菌种接种在适宜的琼脂培养基上，待菌生长充分后，将菌液混合液体石蜡并分装至玻璃瓶中，瓶口用铝箔密封，标注菌种名称、代数、保存日期等信息，保存温度为-70℃。
每年进行一次复苏和传代，保存时间不超过5年。
5.4菌种的传代传代用菌种每年进行一次复苏和传代。
复苏后，将菌种接种至适宜的琼脂培养基上，待菌生长充分后，按照规定的传代代数制备传代用菌种，并及时更新菌种库存记录。
5.5菌种的使用使用菌种前，应先确认菌种的品质和纯度，并按照规定的传代代数制备工作用菌种。
使用后，应及时更新菌种库存记录，并进行相应的消毒处理。
5.6菌种的销毁菌种在使用过程中，如出现变异或污染等情况，应及时进行应灭活处理，并填写《菌种销毁记录表》，经主管部门审核同意后，进行销毁处理。
菌种库存中长期未使用的菌种，应定期进行清理和销毁处理。
菌复苏、复壮；Sabouraud葡萄糖琼脂培养基：用于白色念珠菌复苏、复壮；青霉素-链霉素琼脂培养基：用于铜绿假单胞菌复苏、复壮。
5.4.1.1.3复苏步骤：1.取出保存好的菌种管，用接种针在酒精灯上消毒；2.将接种针在75%酒精中消毒，再用酒精棉球擦拭消毒；3.用接种针在相应的培养基上进行接种；4.置于适宜温度下孵育，待菌落出现后进行传代或进行实验。
5.4.1.2标准菌株的确认通过形态学、生理生化特性、分子生物学等方法进行鉴定，确认菌株的纯度和种属。
5.4.1.3标准菌株的传代将菌株从原始保存方式中转移到新的保存方式中，确保菌株的保存和传承。
传代次数不宜过多，一般不超过10代。
5菌种的管理和保藏
2024/7/3
7
低温、干燥、缺氧、缺乏营养等环境条件都可 以抑制微生物的代谢和生长繁殖，因此低温、 干燥和真空是菌种保藏的重要手段。 标准储备菌株经纯度和特性确认后保存时，可 将培养物等份悬浮于抗冷冻的培养基中，并分 装于小瓶中,建议采用低温冷冻干燥，液氮储存， 超低温冷冻(低于-70℃)等方法保存。
2024/7/3
19
⑵创造适宜的培养条件 ⑶用不同类型的细胞进行传代 ⑷采用有效的保藏方法
2024/7/3
20
定期检查
主要检查项目 菌落形态、革兰染色、显微镜下菌体形
态、生化特性及血清学检查。
2024/7/3
21
菌种的复壮 使衰退的菌种重新恢复原来的优良特性的 过 程验室主要采用分离纯化的方法。
2024/7/3
11
⑴ 挑选特征典型的纯菌菌落。 ⑵确定保藏的合适菌体。 ⑶选择最适宜的方法保藏。 ⑷定期对保藏的菌种进行检查。
2024/7/3
12
二、菌种的传代和使用
工作菌种的传代次数应严格控制，不得超过5代， （从菌种保藏中心获得的标准菌株为第0代）防止 过度的传代造成菌种变异。
1代是指将活的培养物接种到新鲜培养基中，任 何亚培养的形式均被认为是转种或传代一次。必要 时，实验室应对工作菌株的特性和纯度进行确认。
2024/7/3
2
菌种的来源
药品微生物检验用的试验菌应来自认 可的国内或国外菌种收藏机构的标准菌株， 或使用与标准菌株所有相关特性等效的商 业派生菌株。
2024/7/3
3
菌种保藏的中心任务
⒈广泛收集各种有用的微生物菌种。 ⒉选择最适宜的保藏方法。 ⒊研究、检验、交换和使用。
2024/7/3
4
菌种管理规范
菌种管理规范引言概述：菌种管理是生物技术领域中非常重要的一项工作，它涉及到菌种的保存、鉴定、培养和分发等方面。
规范的菌种管理能够保证菌种的纯度和可靠性，为科学研究和工程应用提供可靠的基础。
本文将从菌种的保存、鉴定、培养、分发和记录等五个大点，分别阐述菌种管理的相关内容。
正文内容：1. 菌种的保存1.1 保存条件：菌种保存需要提供适宜的环境条件，包括温度、湿度和光照等。
不同菌种对保存条件的要求不同，因此需要根据菌种的特性进行调整。
1.2 保存方式：常见的菌种保存方式包括冷冻保存、冷冻干燥保存和液氮保存等。
不同保存方式有其优缺点，需要根据菌种的特性和使用需求选择合适的保存方式。
2. 菌种的鉴定2.1 鉴定方法：菌种的鉴定是确定其物种和亚种的过程，常用的鉴定方法包括形态学鉴定、生理生化特性鉴定和分子生物学鉴定等。
鉴定方法的选择应根据菌种的特性和鉴定目的进行。
2.2 鉴定标准：菌种的鉴定需要依据一定的标准和参考物种进行比对。
国际上常用的鉴定标准包括国际菌种保存中心（CBS）和美国类型菌种文化集（ATCC）等。
3. 菌种的培养3.1 培养基选择：菌种的培养需要提供适宜的培养基，包括基础培养基和特定培养基。
基础培养基可根据菌种的需求选择，特定培养基则针对特定菌种的培养需求进行设计。
3.2 培养条件控制：菌种的培养需要控制适宜的温度、pH值和培养时间等条件。
不同菌种对培养条件的要求有所不同，因此需要根据菌种的特性进行调整。
4. 菌种的分发4.1 分发要求：菌种的分发需要满足科学研究和工程应用的需求，同时要保证菌种的纯度和可靠性。
分发过程中需要采取一系列措施，如制备分生孢子、制备冻干粉和制备液体培养物等。
4.2 分发方式：常见的菌种分发方式包括直接分发和间接分发。
直接分发是将菌种直接提供给用户，间接分发是通过菌种库或合作单位进行分发。
分发方式的选择应根据实际情况进行。
5. 菌种的记录5.1 记录内容：菌种的记录需要包括菌种的基本信息、保存和鉴定的结果、培养条件和分发情况等。
菌种保藏管理
菌种保藏管理菌种保藏管理是指对微生物菌种进行保存、管理、鉴定和利用的一系列工作。
菌种保藏管理的目的是保护微生物资源，促进微生物资源的研究和利用，防止微生物污染和传播，维护科学研究的诚信和公正。
一、菌种保存菌种保存是指将微生物菌株保存在适宜的条件下，以保证其生命活力和遗传稳定性。
常见的菌种保存方式有以下几种：1. 冷冻保存：将菌株在-70℃以下的低温条件下保存，可保存数年至数十年。
2. 干燥保存：将菌株在低湿度条件下干燥保存，可保存数年至数十年。
3. 液氮保存：将菌株在液氮中保存，可保存数十年至数百年。
4. 长期培养：将菌株在适宜的培养基上连续传代培养，可保存数年至数十年。
二、菌种管理菌种管理是指对保存的菌株进行鉴定、分类、记录和更新等工作。
常见的菌种管理工作有以下几个方面：1. 鉴定和分类：对保存的菌株进行鉴定和分类，确定其种属和亚种。
2. 记录和更新：对保存的菌株进行详细的记录和更新，包括菌株来源、保存时间、保存方式、鉴定结果等信息。
3. 质量控制：对保存的菌株进行质量控制，包括检测菌株的纯度、活力和遗传稳定性等指标。
4. 分发和交换：将保存的菌株分发给需要的研究人员或机构，或与其他机构进行菌株交换。
三、菌种利用菌种利用是指利用保存的菌株进行科学研究和应用开发。
常见的菌种利用方式有以下几种：1. 研究应用：利用保存的菌株进行科学研究和应用开发，如发酵生产、药物研发、环境修复等。
2. 教学实验：利用保存的菌株进行教学实验，培养学生的实验技能和科学素养。
3. 保护利用：利用保存的菌株进行保护利用，促进微生物资源的可持续利用和保护。
总之，菌种保藏管理是保护微生物资源、促进科学研究和应用开发的重要工作，需要科学规范的管理和操作。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
杜平华
2020/2/9
1
前言
试验过程中，生物样本可能是最敏感的，因 为它们的活性和特性依赖于合适的试验操作和 贮藏条件。实验室菌种的处理和保藏的程序应 标准化，使尽可能减少菌种污染和生长特性的 改变。
按统一操作程序制备的菌株是微生物试验结 果一致性的重要保证。
2020/2/9
2
菌种保藏的重要性
2020/2/9
19
三、菌种的检查与复壮
菌种的衰退 菌种经过长期人工传代培养或保藏，由自发突变 的作用而引起某些优良特性变弱或消失的现象。 控制菌种的衰退方法 ⑴控制传代次数 尽量避免不必要的接种和传代， 降低突变几率。采用良好的传代保藏方法。《中 国药典》2010年版规定，传代次数不得超过5代。
菌种保藏是微生物学检验工作中的 一项常规技术，菌种的科学保藏和管 理直接关系到检验结果的正确性。
2020/2/93Fra bibliotek菌种的来源
药品微生物检验用的试验菌应来自认 可的国内或国外菌种收藏机构的标准菌株， 或使用与标准菌株所有相关特性等效的商 业派生菌株。
2020/2/9
4
菌种保藏的中心任务
⒈广泛收集各种有用的微生物菌种。 ⒉选择最适宜的保藏方法。 ⒊研究、检验、交换和使用。
2020/2/9
23
四、菌种的管理
1、使用菌种的单位，应具备从事微生物工作的 条件和设备。 菌种应由专人负责管理，管理人 员应具有微生物专业知识和技术水平，并应具有 较强的责任心。
2020/2/9
24
2、实验室必须建立菌种保存和使用文件化的程序管理
制度；
包括：每支菌种标注名称、标准号、接种日期、传代 次数、进出、收集、贮藏、保存、确认试验以及销毁 的记录、标准菌种的申购记录、从标准菌株到工作菌 株操作记录，如菌种定期转种传代，鉴定（纯度、特 性）、培养基和培养条件、菌种保存的位置和条件及 其它需要的程序。
2020/2/9
14
细菌的接种、分离和培养 常用培养基种类 斜面培养基 半固体培养基。 液体培养基 平板培养基
2020/2/9
15
接种方法 涂布法 划线法 穿刺法 直接加入法等
2020/2/9
16
分离：为了获得纯菌种（株），采用的 将细菌分离成单个细胞，使其独立分裂繁 殖形成单个菌落的操作技术。
2020/2/9
20
⑵创造适宜的培养条件 ⑶用不同类型的细胞进行传代 ⑷采用有效的保藏方法
2020/2/9
21
定期检查
主要检查项目 菌落形态、革兰染色、显微镜下菌体形
态、生化特性及血清学检查。
2020/2/9
22
菌种的复壮 使衰退的菌种重新恢复原来的优良特性的 过 程验室主要采用分离纯化的方法。
2020/2/9
25
3 、菌种应冷藏或冷冻保存，保存菌种的冰箱不得 放置食品和易挥发性药品，放置菌种应有专用的冰 箱，应上锁管理。 4、由专人按操作规程和有关要求定期进行传代，并 定期对保存的菌种进行检查，一般每年1～2次， （或定期更换冻干菌种）。发现菌种的异常情况应 及时检查。一旦发现菌种污染和变异现象，应立即 报告、研究处理。尤其长期保存时。
2020/2/9
28
菌悬液的制备与保存
菌悬液的制备与保存 参照《中国药典》2010版培养基适用性 试验。
2020/2/9
29
2020/2/9
30
2020/2/9
9
低于-70℃或低温冷冻干燥可以延长菌种的保 存时间.标准储备菌株可用于制备每月或每周一 次转种的工作菌株。
冷冻菌株一旦解冻转种制备工作菌株后,不得 重新冷冻或再次使用。
2020/2/9
10
工作菌株不可代替标准菌株，标准菌株的商业 衍生物仅可用作工作菌株。
2020/2/9
11
不同的微生物，应根据其生物特征来选择最适 宜的保藏方法，菌种的保藏方法一般分四个阶 段：
分离一般采用平板培养基。
分离方法主要有分段划线法、连续划线法、 涂布分离法、倾注分离法等。
2020/2/9
17
培养 ：接种后的培养基，根据不同微生物
生长条件的要求，将培养基放在适宜微生物 生长的环境中（温度、湿度、氧气等），使 其生长繁殖的过程。 需气菌培养法 厌氧培养法
2020/2/9
18
培养后微生物的生长判断 固体培养基 液体培养基
2020/2/9
5
国外的菌种保藏机构
2020/2/9
6
常用菌种保藏方法
菌种保藏的原则
根据微生物菌种的生理、生化特性，在人工 创造的条件下尽量降低微生物细胞的代谢强 度，使细胞基本上处于休眠状态，生长繁殖 受到抑制但不至于死亡，以减低菌种的变异 率。
2020/2/9
7
常用菌种保藏方法
标准菌株的复活或培养物的制备应按供应商 提供的说明或按验证的方法进行。 标准储备菌株-从国内、外菌种收藏机构获得 的标准菌株经复活并在适宜的培养基中生长后, 既为标准储备菌株。
2020/2/9
12
⑴ 挑选特征典型的纯菌菌落。 ⑵确定保藏的合适菌体。 ⑶选择最适宜的方法保藏。 ⑷定期对保藏的菌种进行检查。
2020/2/9
13
二、菌种的传代和使用
工作菌种的传代次数应严格控制，不得超过5代， （从菌种保藏中心获得的标准菌株为第0代）防止 过度的传代造成菌种变异。
1代是指将活的培养物接种到新鲜培养基中，任 何亚培养的形式均被认为是转种或传代一次。必要 时，实验室应对工作菌株的特性和纯度进行确认。
2020/2/9
8
低温、干燥、缺氧、缺乏营养等环境条件都可 以抑制微生物的代谢和生长繁殖，因此低温、 干燥和真空是菌种保藏的重要手段。 标准储备菌株经纯度和特性确认后保存时，可 将培养物等份悬浮于抗冷冻的培养基中，并分 装于小瓶中,建议采用低温冷冻干燥，液氮储存， 超低温冷冻(低于-70℃)等方法保存。
2020/2/9
26
详细记录
菌种的来源、接收、传代、分离、复壮、使用 和鉴定等均应做好详细记录。包括菌保存位置、 环境(温度)、种传代或使用时间、名称、菌号、 代数、传代或保存形式、分离、复壮方式、使 用内容、鉴定情况等都应进行详细的记录。
2020/2/9
27
菌种不得随意带出实验室，外单位索取、购买 应有证明和登记，并包装严密。 菌种处理应严格按操作规程进行，灭菌处理应 有详细记录。