骨碎补中总黄酮的提取、含量测定及抗氧化活性研究的答辩
不同提取方法对骨碎补中总黄酮含量的影响比较
不同提取方法对骨碎补中总黄酮含量的影响比较目的考察不同提取方法对生、制骨碎补中总黄酮提取效果的影响。
方法分别采用超声提取法、索氏提取法、回流提取法对骨碎补生品和砂烫品进行提取，通过紫外-可见分光光度（UV-Vis）法检测总黄酮的含量。
结果回流提取法测得的总黄酮含量最高。
结论骨碎补中总黄酮的提取方法以回流提取法为佳。
标签：骨碎补；总黄酮；提取方法骨碎补是较常用中药，具有补肾强骨、养伤止痛之功效，用于肾虚腰痛、耳鸣耳聋、牙齿松动、跌扑闪挫、筋骨伤折等症[1]。
其活性成分是以柚皮苷为主的二氢黄酮类化合物[2]。
笔者采用超声提取法、索氏提取法、回流提取法3种方法提取生、制骨碎补中总黄酮的含量，以比较不同提取方法对总黄酮提出量的影响。
1实验材料1.1仪器752紫外分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司）；电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）。
1.2药品骨碎补药材（购于亳州市药材总公司第二中药批发部）；骨碎补生品和砂烫品均按《中国药典》一部方法制备[1]。
柚皮苷（批号110722-201312，购于中国药品生物制品检定所）；甲醇为AR级。
2方法与结果2.1样品提取方法2.1.1超声提取法取骨碎补生品及砂烫品粗粉于70℃干燥8 h，各精密称取1.0 g，加甲醇80 mL，超声提取1 h。
提取液滤过，置于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至100 mL。
2.1.2索氏提取法取骨碎补生品及砂烫品粗粉于70℃干燥8 h，各精密称取1.0 g，置于索氏提取器中，加80 mL甲醇，抽提1 h，将提取液转移至100 mL 容量瓶中，甲醇定容至刻度。
2.1.3回流提取法取骨碎补生品及砂烫品粗粉于70℃干燥8 h，各精密称取1.0 g，加甲醇80 mL水浴回流提取1 h，提取液滤过，置于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。
2.2总黄酮含量测定2.2.1供试品溶液的制备精密吸取上述三种提取方法提取液各1 mL至25 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，作为供试品溶液。
槐花的黄铜及抗氧化活性测定(毕业答辩)
色体系芦丁标准曲线
2、黄酮提取率及抗氧化活性测定（单因素实验）
图3 不同溶剂条件下的黄酮提取率及DPPH自由基清除率
2、黄酮提取率及抗氧化活性测定（单因素实验）
图4 不同乙醇浓度条件下的黄酮提取率及DPPH自由基清除率
2、黄酮提取率及抗氧化活性测定（单因素实验）
图5 不同温度条件下的黄酮提取率及DPPH自由基清除率
槐花黄酮的提取及抗氧化活性的研究
答辩内容
一、研究背景 二、材料与方法 三、结果与分析 四、结论 五、致谢
一、研究背景
槐花为豆科植物槐(Sophora japonica. L ) 的干燥花及花蕾， 其中花蕾中黄酮含量较高，约为14% 左右。 黄酮类成分具有保护心血管系统，降血糖、血脂，抗氧 化，抗衰老的作用，增加机体免疫力。 优化槐花黄酮的提取条件，确定槐花黄酮的提取工艺，将
率越高。
不同溶剂
不同乙醇浓度
不同温度
不同次数
五、致谢
大学本科的学习生活即将结束，在此，我要 感谢所有曾经教导过我的老师和关心过我的同学 ，他们在我成长中给予了我很大帮助。本文能顺 利完成，特别要感谢我的指导老师—何大俊老师 ，他在实验的顺利完成、论文开题和写作中，给 了我很大的指导，并且非常仔细的评阅了我的论 文，指正很多错误，使我的论文更加完善。
2、黄酮提取率及抗氧化活性测定（正交实验）
表2 黄酮提取率及数据分析
因素 乙醇 浓度 A 1 2 3 4 5 6 7 8 9 均值1 均值2 均值3 极差 1 1 1 2 2 2 3 3 3 7.951 9.035 5.621 3.414 时间 B 1 2 3 1 2 3 1 2 3 7.614 7.679 7.314 0.365 温度 C 1 2 3 2 3 1 3 1 2 7.061 7.557 7.988 0.927 7.595 8.325 7.932 8.885 9.672 8.548 6.361 5.041 5.462 1 2 3 4 5 6 7 8 9 均值1 均值2 均值3 极差 黄酮提取 率（mg/g ）
骨碎补提取工艺的实验研究
总 k1 11.942 10.307 11.114 9.076
黄 k2 11.045 11.879 11.575 11.739
酮 k3 11.244 12.046 11.543 13.416
R 0.897 1.739 0.461 4.340
表 3 柚皮苷的方差分析
方差来源 偏差平方和 自由度 平均偏差平方和 F 比 显著性
摘 要：目的：优选骨碎补提取的最佳工艺条件。方法：以骨碎补中柚皮苷及骨碎补总黄酮的含量为指标，采
用 L9(34) 正交设计法对骨碎补的提取条件进行研究。结果：提取次数是骨碎补有效成分提取的关键因素 , 其次是
溶媒用量，提取时间和乙醇浓度为最次要因素。结论：最佳提取工艺条件是 14 倍量 55% 乙醇回流提取 3 次 ,2 h/ 次。
B
5.527
2
2.7635
4.149
C
0.398
2
0.199
0.299
D
28.745
2
14.3725 21.580 P<0.01
E
1.33
9
注：F0.05(2,9)=4.26，F0.01(2,9)=8.02。
柚皮苷的方差结果分析表明，因素 B因素 A、C 则
无显著性影响，影响强度依次为 D ＞ B ＞ C ＞ A，如
以柚皮苷的含量为指标，骨碎补的最佳提取工艺为
A3B3C2D3; 如以总黄酮的含量为指标，骨碎补的最佳 提取工艺为 A1B3C2D3，综合两种分析结果，因素 D 为 最重要影响因素，其次是因素 B, 因素 A 和 C 为最次
要因素。故确定最佳提取工艺条件应为 A3B3C2D3 或 A1B3C2D3。 2.5.2 验证与比较实验 称取 100g 砂烫骨碎补，按
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黄酮清除O2-·自由基能力的实验结果
28
26
24
22
清除率 (%)
20
18
16
14
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
图5 提取浓度与清除率的关系曲线
由图5可知：在实验浓度范围内，骨碎补中黄酮类化合物对清 除O﹣2·自由基的效果随黄酮浓度的增加而加强。
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黄酮清除·OH自由基能力的实验结果
20
18
16
清除率 (%)
14
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8
6
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
图6 提取浓度与清除率的关系曲线
由图6可知：在一定的浓度范围内，骨碎补中黄酮类化合物对 清除·OH自由基的效果随黄酮浓度的增加而加强。
（3）测定黄酮对自由基的清除能力来研究骨碎补中 总黄酮抗氧化活性 。 并 且 骨碎补中黄酮类化合物 在浓度实的验增浓加度而范加围强内。清除O2-·、·OH效果都随黄酮
骨碎补中总黄酮的提取含量测定及抗氧化活性研究的答辩 PPT课件
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骨碎补中总黄酮的提取含量测定及抗氧化活性研究的答辩 PPT课件
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2.实验部分
黄酮的提取工艺
采用乙醇热回流法提取。 工艺流程：
骨碎补粉碎→过筛（40目）→石油醚脱酯→ 乙醇热回流提取→过滤→滤液浓缩→总黄酮提取 液
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骨碎补总黄酮预防人工关节假体周围骨溶解的实验研究的开题报告
骨碎补总黄酮预防人工关节假体周围骨溶解的实验研究的开题报告标题：骨碎补总黄酮预防人工关节假体周围骨溶解的实验研究研究背景和意义：随着人口老龄化和骨关节疾病发病率的日益增加，全球人工关节置换手术的数量也在逐年增长。
然而，人工关节置换术后出现的假体周围骨溶解问题已经成为了困扰医生和患者的一个难题。
假体周围骨溶解可导致假体松动和关节不稳定，进而影响移动能力和生活质量。
因此，如何有效地预防和治疗假体周围骨溶解已成为了临床研究人员关注的重点。
骨碎补总黄酮是一种天然来源的化合物，已被证明具有一定的骨保护作用，包括可抑制骨吸收和促进骨形成。
然而，其对于假体周围骨溶解的预防作用尚未得到充分研究。
研究内容和方法：本研究旨在探讨骨碎补总黄酮在人工关节假体周围骨溶解中的预防作用。
在实验中，将利用体外实验和动物实验模型，检测不同浓度的骨碎补总黄酮对于假体周围骨溶解的影响。
具体方法如下：1. 体外实验：采用细胞培养技术，将人类骨母细胞（OBs）分为对照组和不同浓度的骨碎补总黄酮处理组，观察骨碎补总黄酮对于OBs细胞增殖、分化和骨基质沉积的影响。
2. 动物实验：选取老年大鼠建立假体置换模型，将大鼠分为对照组和不同剂量的骨碎补总黄酮处理组，观察骨碎补总黄酮对于假体周围骨质疏松、假体松动和假体周围炎症反应的影响。
研究预期成果：本研究期望能够验证骨碎补总黄酮对于假体周围骨溶解的预防作用，并为临床提供新的治疗思路和药物选择。
同时，本实验所采用的体外和动物实验方法也可为同领域研究提供一定的参考价值。
参考文献：1. Gilbert JA, Nodzo SR. The stiff, painful total knee arthroplasty: evaluation and management. J Arthroplasty. 2019 Apr;34(4):658-662.2. Fang Y, Hu X, Liu X, et al. The protective effect of icariin on osteoporosis and bone turnover in ovariectomized rats by regulating the OPG/RANKL/NF-κB pathway in osteoblasts. Life Sci. 2019 Apr 1;222:25-32.3. Li SJ, Liang HW, Zhang Q et al. Effects of total flavonoids of Epimedium on osteoporosis in ovariectomized rats. Chin J Osteoporos. 2019;25(2):159-164.。
内部沸腾法提取骨碎补多糖及其抗氧化活性研究
内部沸腾法提取骨碎补多糖及其抗氧化活性研究作者：梁家灿文慧香梁云贞来源：《安徽农业科学》2022年第14期摘要以骨碎补为试验材料，采用内部沸腾法来提取骨碎补中的多糖，并且测定骨碎补里提取出来的多糖的抗氧化活性，通过设置单因素试验和4因素3水平的正交试验，研究乙醇解吸液体积分数、乙醇解吸时间、水浴提取温度、水浴提取时间对骨碎补多糖提取率的影响。
结果表明，提取骨碎补中多糖的最佳条件为乙醇解吸液体积分数50%、解吸时间15min、水浴提取温度80 ℃、水浴提取时间4 min，在这个条件下的骨碎补多糖提取率为10.90%。
当骨碎补多糖质量浓度为0.5%时，其对DPPH自由基的清除率达74.8%，对羟基自由基的清除率达78.3%。
关键词骨碎补;多糖;内部沸腾法;抗氧化活性中图分类号 R 284;R 285文献标识码 A文章编号 0517-6611（2022）14-0153-03doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2022.14.037开放科学（资源服务）标识码（OSID）：Study on Extraction of Rhizoma Drynariae Polysaccharide and Its Antioxidant Activity by Internal Boiling MethodLIANG Jia-can1，WEN Hui-xiang2，LIANG Yun-zhen3（1.School of Agriculture and Life Sciences，Kunming University，Kunming，Yunnan 650200;2.School of Chemistry and Chemical Engineering，University of South China，Hengyang，Hunan 421000;3.School of Chemistry and Biological Engineering，Guangxi Minzu Normal University，Chongzuo，Guangxi 532500）Abstract Taking Rhizoma Drynariae as the test material，the internal boiling method was used to extract the polysaccharides in Rhizoma Drynariae，and the antioxidant activity of the polysaccharides extracted from Rhizoma Drynariae was determined.The effects of ethanol desorption liquid fraction，ethanol desorption time，water-bath extraction temperature and water-bath extraction time on the extraction rate of Rhizoma Drynariae were studied by setting up single factor experiment and orthogonal experiment with 4 factors and 3 levels.The results showed that the optimal conditions for extracting polysaccharides from Rhizoma Drynariae were 50% ethanol desorption liquid fraction，15min desorption time，80 ℃ water-bath extraction temperature，and 4min water-bath extraction time.Under these conditions，the extraction rate of Rhizoma Drynariae polysaccharide was10.90%.When the mass concentration of drynaria polysaccharide was 0.5%，its scavenging rate for DPPH free radicals reached 74.8%，and the scavenging rate for hydroxyl radicals reached 78.3%.Key words Rhizoma Drynariae;Polysaccharide;Internal boiling method;Antioxidant activity骨碎補（ Davallia mariesii Moore ex Bak.）是一种比较常用的中药，具有补肾、强骨、止痛等功效，用于治疗耳鸣耳聋、牙齿松动、筋骨伤折、肾虚腰痛、跌扑闪挫等症状[1]。
骨碎补总黄酮对成骨细胞增殖作用的实验研究的开题报告
骨碎补总黄酮对成骨细胞增殖作用的实验研究的开题报告
一、研究背景和意义
骨碎补总黄酮是从骨碎补中提取得到的一种天然成分，已被证实具有多种生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等。
近年来，研究表明骨碎补总黄酮也具有相关骨代谢
调节作用，对骨细胞的增殖、分化、矿化等有一定影响。
成骨细胞是骨组织生成和修复的重要细胞类型，对于骨质疏松症、骨折等骨骼疾病的治疗具有重要意义。
因此，本研究旨在探究骨碎补总黄酮对成骨细胞增殖的影响，为寻找新型骨质疏松症治疗剂提供新思路和方法。
二、研究内容和方法
本研究将使用MTT法、CCK-8法、膜片计数法等实验手段，探究不同浓度的骨
碎补总黄酮对成骨细胞增殖的影响，并考查增殖相关的细胞信号通路。
三、预期结果和意义
预计本研究将获得骨碎补总黄酮对成骨细胞增殖作用的实验数据，并明确其作用机制与信号通路，为寻找新型骨质疏松症治疗剂提供实验基础和理论支持。
四、研究难点和创新点
研究难点：成骨细胞增殖与信号通路复杂多变，需找到关键的细胞因子和前驱物质，探讨其与骨碎补总黄酮之间的交互作用。
创新点：本研究将为骨质疏松症治疗剂的发现提供新思路和方法，对成骨细胞增殖的探究也将为骨科学领域提供新的研究深度和方向。
骨碎补不同炮制品中总黄酮与柚皮苷的含量测定-精选文档
骨碎补不同炮制品中总黄酮与柚皮苷的含量测定骨碎补是较常用的中药，具有补肾强骨，活血续伤之功效。
骨碎补活性成分为柚皮苷等二氢黄酮类化合物［1,2］，为了考察不同炮制方法对骨碎补有效成分的影响，我们用分光光度法测定骨碎不同炮制品（生品骨碎补、砂烫骨碎补、酒骨碎补）中总黄酮的含量，用高效液相色谱法测定柚皮苷含量。
1 实验材料1．1 药品骨碎补购自湖北，经鉴定均为水龙骨科植物槲蕨Drymaria fortunei (Kunze)J.sm. 的干燥根茎。
1．2 炮制品生品：（1）除祛杂质，洗净，未去毛。
（2）鲜骨碎补洗净，除祛杂质，去毛。
砂烫骨碎补：取沙子置锅内，用武火加热后，加入净骨碎补或片，不断翻动，烫至鼓起时，取出，筛去沙子，撞去毛，放凉。
酒骨碎补：取去毛骨碎补片，加酒拌匀，用文火炒干为度，每骨碎补１００Ｋg，用酒或白酒１０Ｋg。
1．3 仪器7520型分光光度计，1050型液相色谱仪（惠普公司）；LA-204型电子天平（常熟市衡器厂）。
2、实验方法与结果2．1 总黄酮含量测定方法与结果标准曲线制备精密称取柚皮苷对照品4.9mg，置50ml容量瓶中，甲醇定容至刻度，作为对照品溶液，再分别吸取对照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0ml于10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，以甲醇为空白，在283nm处测吸收度，以吸收度（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标，经回归得标准曲线方程A=0.0292C-0.0577，r=0.9998，线性范围4.9~29.4μg.ml-1.2.2 骨碎补不同炮制品样品溶液制备及测定精密称取骨碎补各炮制品干燥粉末(经80℃干燥4小时,过40目筛)1 g,置索氏提取器中，分别用50毫升甲醇提取12小时，将提取液转移至100毫升容量瓶中，甲醇定容至刻度，精密吸取1毫升于25毫升容量瓶中，甲醇定容至刻度，于283纳米处测定吸收度，按回归方程计算总黄酮含量未去毛的骨碎补甲醇提取液中总黄酮的含量平均值却为4.1，其它四组数据的平均值都在5.0左右，数据相差的很大，可见骨碎补经去毛炮制可使总黄酮在甲醇提取液中的含量增加，从而提示我们经去毛炮制有利于有效成分的溶出。
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黄酮清除·OH能力的测定
采用邻菲罗啉法 在6个25 mL容量瓶中一次加入9 mmol/L FeSO4，9 mmol/L水杨酸各2 mL，不同浓度的黄酮粗提取溶液 1 mL，8.8 mmol/L H2O2启动反应1 h，用蒸馏水定 容，静置，于510 nm处测定吸光度 Ai。以蒸馏水为 空白，测定吸光度A0。 清除率（%）=( A0-Ai)/ A0×100% 其中：A0为空白实验的吸光度； Ai为不同浓度反应液的吸光度。
3.26 3.24
总 黄酮含量 (%)
3.22
3.20
3.18
3.16 1:20 1:30 1:40 1:50 1:60 1:70
料液比 (mL/g)
图3 料液比与总黄酮含量的关系曲线 由图3可知：随着料液比的提高，黄酮得率上升，但超过1:30 后上升趋势不明显，料液比为1:30最好。
提取时间对提取率的影响
黄酮清除O2-· 自由基能力的实验结果
28 26 24 22 20 18 16 14 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
由图5可知：在实验浓度范围内，骨碎补中黄酮类化合物对清 除O﹣2·自由基的效果随黄酮浓度的增加而加强。
清除率 (%)
图5 提取浓度与清除率的关系曲线
黄酮清除· OH自由基能力的实验结果
2.实验部分
黄酮的提取工艺
采用乙醇热回流法提取。 工艺流程： 骨碎补粉碎→过筛（40目）→石油醚脱酯→ 乙醇热回流提取→过滤→滤液浓缩→总黄酮提取 液
乙醇浓度对提取率的影响 单 因 素 实 验 提取温度对提取率的影响 料液比对提取率的影响 提取时间对提取率的影响
正交试验设计
为了全面考查影响因素，设计了4因素3水平 的正交试验，试验因素水平见下表：
20 18 16
清除率 (%)
14 12 10 8 6 0.0
0.2
0 提取浓度与清除率的关系曲线 由图6可知：在一定的浓度范围内，骨碎补中黄酮类化合物对 清除·OH自由基的效果随黄酮浓度的增加而加强。
4.结论
（1）采用乙醇热回流提取法，从骨碎补中提取总黄 酮。 （2）在单因素实验基础上，通过正交试验设计，研 究得到骨碎补中总黄酮提取的最佳工艺条件：乙 醇浓度60%、料液比1:30、提取时间 3 h、提取温 度 60 ℃。在此条件下，用紫外分光光度法测得总 黄酮的含量为3.51%。 （3）测定黄酮对自由基的清除能力来研究骨碎补中 总黄酮抗氧化活性。并且骨碎补中黄酮类化合物 在实验浓度范围内清除O2-·、·OH效果都随黄酮 浓度的增加而加强。
3.实验结果与讨论
乙醇浓度对提取率的影响
3.30 3.25
总 黄酮含量 (%)
3.20
3.15
3.10
3.05 40 50 60 70 80 90
乙醇浓 度 (%)
图1 乙醇浓度与总黄酮含量的关系曲线 由图1得知:随着乙醇浓度的增加，黄酮的得率升高。当浓度 大于60％时，得率的有所降低。故最佳乙醇浓度为60％。
报告内容
CONTENTS
研究背景及意义 实验部分
结果与讨论
结论
1.研究背景及意义
黄酮类化合物是一类分布很广的多酚类天然 产物，几乎存在于所有的绿色植物中，具有多种 明显的药理活性。 目前对骨碎补总黄酮的研究主要在抗炎、抑 制疼痛等方面。同时黄酮也是一种很强的抗氧化 剂，可有效清除体内的超氧阴离子自由基，这种 抗氧化作用可以阻止细胞的退化、衰老，也可阻 止癌症的发生。
骨碎补总黄酮的抗氧化活性研究
黄酮清除O2-· 自由基能力的测定
采用邻苯三酚自氧化法 取 50 mmol/L Tris-HCI 缓冲溶液(pH=8.2)4.5 mL ，与 4.1 mL 蒸馏水混匀后在 25 ℃水浴中保温 20 min ，分别加入 0.1 mL 的不同浓度的黄酮样品液， 取出后立即加入在 25 ℃预热过的 3 mmol/L 邻苯三 酚 0.3 mL ，迅速摇匀后倒人比色杯， 420 nm 下测 定吸光度A i 。以蒸馏水为空白作为对照，测定吸光 度A0 。 清除率的计算： 清除率（%）=( A0-Ai)/A0×100% 式中：A0以蒸馏水为空白实验的吸光度； Ai为加入不同浓度黄酮粗提取液的吸光度。
提取温度对提取率的影响
4.0
3.5
总 黄酮含量 (%)
3.0
2.5
2.0
40
50
60
70
80
90
提取温度 (℃)
图2 提取温度与总黄酮含量的关系曲线
由图2可知：40℃到60℃总黄酮含量有较大的增长, 但60℃到 90℃黄酮含量减小。而60 ℃时总黄酮含量最大。故最佳提取温度 为60℃。
料液比对提取率的影响
比较左表中 4 因素的 R 值的大小，可以看出A因素， 即乙醇浓度为最重要因素。 四因素对黄酮提取量影响 的主次顺序为乙醇浓度>浸 提时间 > 浸提温度 > 料液比， 并且最佳的提取工艺条件 为：乙醇浓度 60% 、料液 比1:30、提取时间3 h、提 取温度 60 ℃，即 A 1 B 2 C 3 D 2 。
3.3 3.2 3.1
总 黄酮含量 (%)
3.0 2.9 2.8 2.7 2.6 2.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5
提取时 间 (h)
图4 提取时间与总黄酮含量的关系曲线 由图 4 可知：黄酮含量随着提取时间的增加而增大，当超过 3 h时，总黄酮含量反而降低。故选用3 h为宜。
正交试验结果