反相高效液相色谱法测定茶叶中咖啡因的含量
HPLC法测定市售可乐和茶叶中咖啡因的含量
实验一HPLC法测定市售可乐和茶叶中咖啡因的含量
(1) 实验目的
掌握液相色谱法测定市售可乐和茶叶中咖啡因的含量的原理、色谱分析的参考条件及各项操作。
(2) 原理
样品经过前处理后，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱柱分离后，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。
(3) 试剂
色谱纯甲醇、超纯水
(4) 仪器设备
Agilent1200系列液相色谱
(5) 样品处理：
市售可乐饮料经超声脱气15 min, 先用普通漏斗过滤, 再经0. 45 μm 滤膜过滤
准确称取预先烘干的茶叶1. 000 g 于100 mL 锥形瓶中，加约90 mL 水，在100 ℃水浴锅中浸提1 h 后冷却至室温，过滤，滤液转移到100 mL 容易瓶中，洗涤残渣3 次一并转入容易瓶，定容至刻度线，再经0. 45 μm 滤膜过滤上样分析
(6)色谱条件：
本实验采用1200系列高效液相色谱仪带紫外检测器; 色谱柱:AgilentC18( 4.6 mm ×250mm，5 μm) ; 流动相: 甲醇:水( 55：45，V /V ) ; 流速: 1.0 ( mL·min －1 ) ; 检测波长: 272 nm; 柱温: 35℃; 进样量: 10 μL。
(7) 实验结果计算
样品中咖啡因的含量按下式计算：
式中：X——样品中咖啡因的含量，g/kg；
A——进样体积中咖啡因的质量，mg；
V2——进样体积，mL；
V1——样品稀释液总体积，mL；
m——样品质量，g。
反相高效液相色谱法测定可乐,茶叶中的咖啡因
可乐 、 叶样 品 中的咖啡 因含量 茶 １ 实验 部分 １１ 仪器 与试剂 ．
Hale Waihona Puke 。同时， 它也是某些抗癌药物和中枢神经药物的
２０ ／８Ａ Ｔ Ｒ Ｏ Ｉ液相色谱仪 （ ０Ｂ７５ ／ Ｕ Ｂ Ｅ 珀金． 埃尔 默公 司 ， Ｓ ）７５ Ｕ Ａ ；８Ａ紫 外． 见分 光 光 度 计 （ 金 ． 可 珀 埃尔默公 司， Ｓ ）５７双波长双光束分光光度计 ＵＡ ； ５ （ 本 日立）Ａ ６ 超声清洗器（ 日 ； Ｓ ００ ２ 奥特赛恩斯仪器 有限公司， 天津）微孔溶剂过滤器 （ ； 津腾过滤器件 厂， 天津 ） 咖啡因标准 品（ 口分装 ） 甲醇， 进 ； 冰醋酸等试 剂均为 分析纯 以上 ， 为去 离子水 水
帅 琴 ， 龚 宇． 杨 薇， 王 丽
（ 中国地质大学材料科学与化学工程学院， 武汉 ４０ ７） ３０４
摘 要 ： 究 了反 相 高效液相 色谱 ＇ （ Ｐ Ｈ Ｌ ） 研 ￣ Ｒ － Ｐ Ｃ 直接 测 定茶 叶水 提鼠 物 、 乐饮 可
料 中的咖啡 因的新 方法 ， 用 Ｐ —１ ， ｃ １Ｈ． ０Ｉ （０６ ． ：．８ 溶 采 ＥＣ ８柱 以 ＨＯ ．Ａｅ３ ：９９ ００ ） － ２ 液作流动 相 ， 紫外捡 测波 长为 ２０ｎ ６ ｍ。可在 ８ｍｎ内将咖啡 因与基体 分 离， 啡 ｉ 咖
１２ 色谱条件 ．
基础结构单元 。因此 ， 研究简便 、 快速分离和测定 咖啡因的分析方法在生化、 医学 、 药物和食品研 究 中都具有很重要的意义 可乐 、 茶叶等饮料 中都含 有一定量的咖啡因 ， 对其中咖啡因进行有效分离与 准确测定将有助于对饮料的生产工艺、 产品质量进 行准确监控 ， 有利于产 品真伪 的辨别 ， 同时也有利
茶叶中咖啡因的HPLC分析
茶叶中咖啡因的高效液相色谱分析一、实验目的：⑴ 了解反相色谱的原理和应用⑵ 掌握标准曲线定量法二、实验原理：咖啡因又称咖啡碱，属黄嘌呤衍生物，化学名称1,3,7-三甲基黄嘌呤，可由茶叶或咖啡中提取而得的一种生物碱。
它能兴奋大脑皮层，使人精神兴奋。
咖啡中含咖啡因1.2%－1.8％，茶叶约含2.0%－4.7％。
其分子式为C 8H 10O 2N 4，结构式：N NN N CH 3CH 3CH 3OO样品在碱性条件下，用氯仿定量提取，采用反相液相色谱柱进行分离，以紫外检测器进行检测，以咖啡因标准系列溶液的色谱峰面积对其浓度作工作曲线，再根据样品中的咖啡因面积，由工作曲线算出浓度。
三、 实验仪器与药品⑴仪器Waters2695型高效液相色谱仪操作软件色谱柱（EconosphereC18）自动进样器⑵药品①甲醇（色谱纯）双蒸水氯仿（A.R）1mol/LNaOH;NaCl(A.R.) Na2SO4(A.R.)咖啡因（A.R.）茶叶②1000mg/L咖啡因储备液将咖啡因在110℃下烘干1小时，准确称取0.1000g咖啡因，用氯仿溶解，转移至100mL容量瓶中，定容至刻度。
四、实验步骤：⑴色谱条件：柱温：室温流动相：甲醇／水＝60：40流量：1.0mL/min检测波长：275nm⑵咖啡因标准系列溶液配制：分别用吸量管吸取0.40、0.60、0.80、1.00、1.20、1.40mL咖啡因储备液于六只容量瓶中，用氯仿定容至刻度，浓度分别为40、60、80、100、120、140mg/L⑶样品处理：①准确称取茶叶0.3g,加蒸馏水30mL煮沸10min，冷却后将清液转移至100mL容量瓶，并按此操作重复两次，定容至刻度。
将3份样品溶液分别进行干过滤，弃去前过滤液，取后面的过滤液。
②分别取上述三份样品溶液25.0mL于125mL分液漏斗中，加饱和氯化钠溶液，溶液，然后用氯仿分三次萃取。
将氯仿提取液分离后经装有无水硫酸钠小漏斗，过滤至容量瓶中，最后用少量氯仿多次洗涤小漏斗，定容至刻度。
高效液相色谱法测定饮料中咖啡因的含量
烷烃）键合到硅胶基质上，分离过程中以极性溶剂为流 动相，实现弱极性化合物的分离。与其他组分（如：单 丁酸、咖啡酸、蔗糖等）相比，咖啡因为弱极性化合物 。
高效液相色谱法测定饮 料中咖啡因的含量
2020年8月1日星期六
102.2 实验原理
• 咖啡又称咖啡碱，属黄嘌呤衍生物，化学名称 为l,3,7-三甲基黄嘌呤，是由茶叶或咖啡中提取而得的 一种生物碱。它能兴奋大脑皮层，使人精神兴奋。咖啡 中含咖啡因约为l.2%～1.8%，茶叶中约为2.0%～4.7%。 可乐饮料、APC药片均含咖啡因。其分子式为C8H10O2N4, 结构式为：
•102.4 注意事项
• （1）钢瓶的工作压力，一定要控制在所规定范围 内，不得超压工作。必须切记，保障安全。 • （2）实验结束后，检查仪器是否正常，关闭是否 正确。
•102.5 问题讨论
•
（1）解释用反相柱n-C18测定咖啡因的原理。
•
（2）在色谱分析中为什么常采用相对校正因子
fi？
•102.6 参考答案
• 5．将进样阀从装载（LOAD）位转向进样（ 1NJECT0位，同时按标记钮(MARKER)，使在记录纸上打 开进样信号。 • 6．当咖啡因的色谱峰出完后，按照步骤4～5连续 操作2次，使最低浓度的标准试液获得3张色谱图。 • 7．按标准试液浓度增加的顺序，按步骤4～6操作 ，使每一种标准样获得3个数据。 • 8．取2 mL咖啡饮料试液放入25 mL容量瓶中（或 取5 mL茶液放入50 mL容量瓶中），分别用流动相稀释 至刻度。 • 9．按步骤4～6操作，分析饮料试液（咖啡或茶） 。
作曲线法（即外标法）测定饮料中的咖啡因含量。
[新版]试验4高效液相色谱法测定茶叶中咖啡因含量
![[新版]试验4高效液相色谱法测定茶叶中咖啡因含量](https://img.taocdn.com/s3/m/60bb0020a22d7375a417866fb84ae45c3b35c2e0.png)
高效液相色谱法测定茶叶中咖啡因含量一目的要求：1 学习高效液相色谱定性和定量分析的方法；2 熟悉高效液相色谱仪的结构；3 熟悉高效液相色谱分析操作和条件的设置。
二实验原理：茶叶中咖啡因的含量是衡量茶叶质量的重要指标之一，也具有多种药理活性，咖啡因又名咖啡碱，属甲基黄嘌呤化合物，具有提神醒脑等刺激中枢神经的作用。
对于茶叶中咖啡因含量测定的常用方法有紫外分光光谱法，高效液相色谱法。
茶叶中的成分较多，色谱法具有分离和检测双重功能，用色谱法更好。
目前茶叶中咖啡因含量的测定采用反相高效液相色谱法较普遍。
本实验采用紫外检测器，水提取茶叶中的咖啡碱，用0.45的滤膜过滤，用0.2%H3PO4：CH3OH(80:20)流动相，检测波长276nm，用咖啡因对照品的保留时间进行定性，用外标法定量。
三试剂和仪器：LC-2010AHT高效液相色谱仪(日本岛津)，自动进样系统和紫外检测器；KQ3200E型超声波清洗器；0.45μm的水系滤膜和有机滤膜；TDL-40B离心机。
100mL的容量瓶。
对照品工作溶液为：咖啡碱标样，乙醇；磷酸；纯净水；甲醇；茶叶样品四茶叶样品的处理准确称取茶叶样品1 g（0.0001 g）于100 mL容量瓶，加入约70mL纯净水，在超声波中超声20min，平行3份，定容至100mL。
0.45μm的水系滤膜抽滤，取续滤液与比色管（或者用5000转/min以上的离心机离心15min，取上清液），待用。
五色谱条件（实验时自己记录）色谱柱：流动相体系：0.2%磷酸–甲醇（体积比为80 : 20）(注意：在做样品时用梯度洗涤，咖啡因出峰后用100% CH3OH冲洗7-8min的柱子，再用0.2%磷酸–甲醇（体积比为80 : 20）平衡7-8min柱子才能进下一样品)流速：1.000 mL/min柱温：30.0 ºC进样量：5 µL 检测波长：276 nm六咖啡因标准曲线绘制和样品测定用相同浓度的咖啡碱标准溶液，按照下表1中的不同体积进样。
06 反相高效液相色谱法测定茶叶提取物咖啡因的纯度.doc
实验反相高效液相色谱法测定茶叶提取物咖啡因的纯度一、目的要求1.理解反相高效液相色谱的分离原理。
2.掌握HPLC定性定量方法。
3.了解流动相组成对样品组分保留时间的影响。
二、方法原理反相键合相色谱法是一种最常见的高效液相色谱法，70％以上的HPLC分离分析工作是用它完成的。
这种方法特别适用于同系物、苯并系物等的分离。
十八烷基键合相（ODS或C18）是一种最常用的非极性化学键合固定相，而甲醇－水或乙腈－水体系是最常见的极性流动相。
反相键合相色谱法的保留机理目前多用疏溶剂理论解释。
疏溶剂理论假定羟基键合相表面是一层均匀的非极性羟类配位基，并认为极性溶剂分子与非极性溶质分子或与溶质分子中的非极性部分互有排斥力，溶质与键合相的结合是为了减少受溶剂排斥的面积，而不是由于非极性溶质分子或与溶质分子的非极性部分与键合相烷基之间的作用力，也就是说反相键合相的保留机理主要是疏水效应起主导作用。
在反相键合相色谱法中，溶质的疏水结构差异是分离的基础。
对非离子型化合物，溶质极性愈大，保留值愈小；对非极性化合物，溶质的表面积愈大，保留值愈大；对同系化合物，链长愈长或苯环愈多，保留值愈大。
在反相键合相色谱法中，溶剂的组成对样品组分的保留值有很大的影响。
溶质的保留值随流动相表面张力的减小而减小。
常用的溶剂中以水的表面张力最大。
若流动相中有机溶剂含量增加，流动相的表面张力将下降，则溶质的保留值减小。
利用保留值tR定性：在相同条件下，通过对比试样中具有与纯物质相同保留值的色谱峰，来确定试样中是否含有该物质及在色谱图中的位置，初步定性。
定量则采用峰面积进行计算。
三、仪器与试剂仪器：岛津液相色谱仪；六通进样阀；反相C18柱；20μLHPLC微量注射器；微孔滤膜杯式滤器；超声波清洗器及玻璃器皿一套。
试剂：咖啡因标准，采用色谱纯甲醇配制浓度为10mg/mL的咖啡因储备液（准确称取0.5g定容于50mL）；取1.00mL 10mg/mL的咖啡因标准再用甲醇稀释至100mL的浓度为100μg/mL咖啡因标准中间液。
反相高效液相色谱法测定茶叶中的咖啡因
反相高效液相色谱法测定茶叶中的咖啡因
陈中道;朱军;王琳;孙建生
【期刊名称】《济宁医学院学报》
【年(卷),期】2004(027)001
【摘要】目的研究了反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定茶叶中咖啡因的新方法.方法采用ODS-C18柱,以CH3OH-H2O(35:65)溶液做流动相,紫外检测波长为275nm.结果咖啡因含量与峰面积在15ug/mL-140ug/mL范围内成线性关系,回归方程为:Y=0.6718X+1.9577,r=0.996.结论该法可用于茶叶中咖啡因含量的测定.【总页数】2页(P48-49)
【作者】陈中道;朱军;王琳;孙建生
【作者单位】济宁医学院机能实验室;济宁医学院机能实验室;济宁医学院机能实验室;济宁医学院机能实验室
【正文语种】中文
【中图分类】TS272.7
【相关文献】
1.反相高效液相色谱法同时测定碧螺春茶中4种儿茶素类化合物及咖啡因含量 [J], 刘臣;张雷;刘婧;刘建玲;李邦玉
2.ISO10727茶和固态速溶茶—咖啡碱含量的测定——反相高效液相色谱法 [J], 钟萝
3.拟反相高效液相色谱法测定茶饮料中咖啡因含量 [J], 董丽丽;王彩君;胡章记;王秀玲
4.反相高效液相色谱法测定可乐中咖啡因的含量 [J], 武开业
5.反相高效液相色谱法测定可乐、茶叶中的咖啡因 [J], 帅琴;龚宇;杨薇;王丽因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
茶叶提取物中咖啡因含量的测定
茶叶提取物中咖啡因含量的测定一、试验原理当前茶饮料因其具有一定的保健功能而十分流行，其中主要的有效成分是茶叶提取物，茶叶（Tea）提取物中含有咖啡因（Caffeine)。
是一种生物碱化合物，有提神醒脑的作用，是一种中枢神经高兴剂。
同样含有咖啡因成分的咖啡、可乐等软饮料及能量饮料在市场上亦非常畅销，但长久、大量饮用有成瘾的趋势。
此外，咖啡因也是世界上最普遍用法的精神药品之一，我国将咖啡因列为“精神药品”加以管制。
咖啡因的测定办法以高效液相色谱法为主，通过色谱柱将咖啡因与样品基体组分分别，用紫外检测器测定其含量。
在高效液相色谱法中应用最为广泛的是反相色谱，即流淌相的极性大于固定相。
本试验以非极性的C18键合相色谱柱、极性的／水流淌相分别样品中咖啡因，用法紫外检测器，以色谱峰面积为定量分析指标，计算饮料中咖啡因的含量。
二、主要仪器和药品高效液相色谱仪（C18反相键合相色谱柱4.6 mm x15 cm，微量注射器）、紫外检测器（波长254 nm)。
流淌相：：水＝60:40，流速0.5 ml·min-1. （分析纯）、储备液（配制成咖啡因1000 mg·ml-1的甲醇溶液）、（色谱纯）、试验用水用法纯水机制取。
三、试验步骤 1．标准溶液配制将咖啡因储备液用甲醇稀释成浓度分离为20、40、80、120、160 mg·L-1的标准系列，备用。
2．样品处理依据样品状态不同，实行相应的处理办法。
常用的样品处理办法如下：①取100 ml液态饮料（特殊是可乐等碳酸饮料）于250 ml 干燥烧杯中，经超声脱气5 min,驱除其中C02等气体，依其含量适当稀释。
②精确称取固态咖啡0.25 g（精确至0.0001g)，水溶解，定容100.0 ml，摇匀备用。
③精确称取茶叶0.3 g（精确至0.0001g) ,30 ml水煮沸10 min，冷却后将上清液转移至100 ml容量瓶中，重复上述过程两次，定容并摇匀备用。
实验二 高效液相色谱法分析饮料中咖啡因的含量
高效液相色谱法分析饮料中咖啡因的含量1. 实验目的和要求1.1 熟悉高效液相色谱仪的结构。
1.2了解反相高效液相色谱的原理与应用。
1.3掌握外标定量法。
2. 实验原理咖啡因属黄嘌呤衍生物，化学名称为1，3，7-三甲基黄嘌呤，是从茶叶或咖啡中提取的一种生物碱。
咖啡因能兴奋大脑皮层，使人精神亢奋。
咖啡因在咖啡中的含量约为1.2%~1.8%，在茶叶中约为2.0~4.7%。
可乐饮料、止痛药等含咖啡因。
咖啡因的分子式为C8H10O2N4，其化学结构式如下图：在化学键合相色谱法中，若采用的流动相的极性大于固定相极性，则称为反相化学键合相色谱法。
该方法是目前应用最为广泛的色谱方法。
本实验采用C18键合相色谱柱分离饮料中的咖啡因，即为一种反相色谱法。
通过紫外检测器进行检测，以咖啡因标准系列溶液的色谱峰面积对其浓度以最小二乘法进行线性回归，作出标准曲线，在根据试样中的咖啡因峰面积，由标准曲线计算出试样中咖啡因的浓度。
3. 实验仪器与试剂3.1 仪器高效液相色谱仪（带自动进样器，或配置微量进样器）超声波清洗仪分析天平3.2 试剂咖啡因对照品甲醇（色谱纯）纯净水3.3 试样市售可乐。
4. 实验步骤4.1 色谱条件色谱柱：C18，4.6×150mm，5μm流动相：甲醇-水（60：40，v/v）流速：0.8mL·min-1检测波长：254nm柱温：30℃进样量：10μL4.2 操作步骤●精密配制含咖啡因浓度为约1mg·mL-1的咖啡因甲醇溶液。
●将上述溶液用甲醇稀释为含咖啡因浓度分别为20、40、80、160、320 μg·mL-1等5份对照品溶液。
●根据前述色谱条件，将仪器调节至进样状态，待仪器流路与电路条件达到平衡状态后，色谱工作站记录的基线呈平直，即可进样分析。
●依次分别吸取10μL的5份对照品溶液进样分析，记录色谱数据。
●将可乐试样20mL经超声波脱气后，精密吸取10μL可乐试样，进样分析，记录色谱数据。
高效液相色谱法测定六安茶叶中的咖啡因
高效液相色谱法测定六安茶叶中的咖啡因摘要：用高效液相色谱仪分别测定金寨、霍山、舒城、独山等产地茶叶中咖啡因的含量，比较咖啡因含量与地区及与茶叶采摘期的关系。
方法采用ods-c18柱,以ch3oh-h2o(35:65)溶液做流动相，紫外检测波长为275nm。
可在5min内将咖啡因与基体分离，咖啡因含量与峰面积在30μg/ml -180μg/ml范围内成线性关系,回归方程为：y=21470x+1962620，相关系数r=0.9992。
方法线性良好，平行样测定rsd≤1.1℅，加标回收率为97.5℅～106℅。
结果表明，六安地区同一种茶采摘期不同咖啡因的含量不同，不同产地的茶中其咖啡因的含量也不同。
关键词：咖啡因； hplc；茶叶中图分类号：x830.2 文献标识码：a 文章编号：1007-0370 (2012) 01-0145-03igh performance liquid chromatographic method for the determination of caffeine in tea of lu’anyu min1， feng xinzhang2, zhang li-li 2(1.lu’an jin an district environmental protection bureau，anhui 237002；2. lu’an environmental monitoring center，anhui 237001)abstract：were determined by high performance liquid chromatography jinzhai、huoshan、shucheng、dushan and other origin tea caffeine content, caffeine content compared with the region’s relationship and the relationship with the tea picking period.the methods ods-c18,pillar, ch3oh-h2o (35:65) solution is mobile phase, uv detection wavelength of 275nm. in 5min and the substrate within the isolated caffeine, caffeine content and the peak area of 30μg/ml -180μg/ml linear range, regression equation: y = 21470x +1962620, r = 0.9992. the linear sound and rsd≤1.1℅.spiked recoveries between 97.5℅ and 106℅.the results show that tea picking period lu’an different regions the same caffeine content is different in different areas of its caffeine content of tea is different.key words：caffeine； hplc； tea茶叶中含有一定量的咖啡因，对其中咖啡因进行有效分离与准确测定,将有助于对产品质量进行准确监控，常用来测定咖啡因的方法有薄层层析法[1]、气相色谱-质谱法[1]等。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
啡因标准溶液 的吸光度值 ，咖啡因浓度在 ｌ～１０ ０ ５ ｕ 范 围 内与 峰 面 积 值 呈 良好 线 性 关 系 ，Ｙ＝ 扎 １ ６ ０ Ｘ＋ ．５ ０ 相 关 系数 为 ０ ９ ８ ． ×１ ９ ８ ｘ１ ３ ． ９ ，方法 检 出 ９
，
【３ Ｔｕ ｅｂ Ｔ ｅ ｋ ， ｈｕｅｒ ０ １Ｊ １】 ｅ ｔｎｅｒ ｇ ｕ Ｈｏｌ ａｓ ｒＪ ｚ Ｍ， ａ． ｔ
精神萎顿、浑身困乏疲软等各种戒断症状 ，甚至导 致吸食者下一代智能低下， 肢体畸形， 因此也被列入 受国家管制的精神药品范围。 茶叶是 常见 的饮 品 ，不 同品种的 茶叶含 有 的咖
二酮 ，纯的咖啡因是白色 的，具有强烈苦味的粉状 物 ，熔 点 ２ ８，升 华温 度 １８，易 溶于 水 、乙醇 、 ３。 ７。
Ｃ ｍ ａ ｏ ｒ ２ ０ ， ｌ （ ／） １ ７ ｈｒ ｏ ｔｇ Ａ， ０ ６ ｌｌ９ １２ ： ９
限为为Ｉ ｇｍＬ ｕ／ ．
【４ Ｈ ｃ ， ｏ ｃ Ｌ Ｊ ｈｔｍ ｇ ， ０ ９ １ 】 ｅｉ ｉ ｈＳ Ｒ ａＪ ． ａ ｏ ｒ ２ ０ ， ｎｓ ｃ Ｃ ｏ ｔ Ａ １ １ ４： ６（ ） ２
Ｃ ｅ ， ０ ０７ ６ ： ５ ｈｍ ２０ ， ２（） ｌ ３ ２
【 ｌＮ ｃ Ｊ Ｄ ｕ ｐＣ Ｍｃ ｏ ｍ ｉ ， ａ１ ｌ】 ａ ｒ ｋｉ ， ｎｌ ， Ｃ ｋＡ ｅ ｗ ｏ ａ ｒ ｃ ｔ ．
Ｊ ｈｒｍ ｔｇ Ａ， ０ ４ ｌ ２ １ ： ａ ｏ ｒ ２ ０ ， ８（） １ Ｃ ｏ ０
２３ 实际样 品 测定 ． 我们 以不 同品种 的茶 叶 为 实验 对象 ，测定 其 中
【５ Ｚ ｕ Ｇ ｏＹ Ｙ Ｌ ｅ Ｊ ｈｒｍ ａｔｇ １】 ｈ ｕ ｃＭ ， ａＩ ｒ ｔ ．Ｃ ｏ ｏ
Ａ， ０ ５ １０ ５ １ ３ ２ ０ ， ８ ： ４
含有的咖啡因，含量见表一 。
【】 ３ 黄雪松，温丽儿，宴 日安．反相高压液相色谱 法测定鲜蒜中的蒜氨酸【 ．食品与发酵工业 ， Ｊ 】
２ ０ ：３ （） １ ６１ ９ ０ ５ １ ５－ ０ —０
【】 ４ Ａｍａｕａ ＯｋｄＭ， ｓｊＳＴ ｎ ｇｉ ｋｒ ａａ Ｔｕｉ ， ｏｏ ａＹ Ｃ ｒｍ ｈｏ
ａｏ ￣ ２ ０ ， ９ （） １ ３ｌ ７ ｔｇ． Ａ， ０ ０ ８ １ １ ： ８ 一８
ｔｍ ｔｇ Ａ，０ ７ ｌ１２（） １ ｏ ａ ｏ ｒ ２ ０ ， ７ １ ： 【】 ｎ ｉ Ｈｏｒａｔ ． ｈｔｍ ｇ， ９ ８ ９ Ａ ＦＤ， ｖ Ｃ ＪＣ ａｔ ｒ １ ８ ， ｍ ｈ ｏ ｏ
４ ５（） １ ３ １ ： 【０ Ｙ ｈＢ Ｗ ｈ ｎ Ｈ， ｏ Ｓ ｅｔ Ａ ａｌ １】 ａ Ｚ ａ ｇＪ Ｂ ｒｗ ｎＪ ， ａｌ ｎ ＿
化 学工 程 与装 备
ｌ ４２
Ｃ ｅ ｃ Ｅ ｇ ｎ ｅ ｉ ｇ ＆ Ｅ ｕ ｐ ｎｔ ｈ ｍｉ ａｌ ｎ ｉ ｅ ｒ ｎ ｑ ｉ ｍｅ
２１ ０ ０年 第 ５期 ２１ ０ ０年 ５月
反相 高效液相 色谱法测定茶叶 中咖啡 因的含量
武开业
（ 榆林市环境监测总站，陕西 榆林 ７１０ ０ ０） ９
摘 要 ：建 立了用反相高 效液 相色谱法 （ Ｐ Ｃ）测定茶叶 中咖啡因的方法 。茶叶经预 处理后， 过 ＨＬ 通
Ｄｉｍ ｎ ｉＣ１（）ｕ ｏ ｏ ｓ ８２５ 色谱柱分离， ｌ 以甲醇＋ 水混合溶液为流动相进行洗脱，于２ ６ｎ 波长下紫外检测，一 ８ ｍ
次进 样 分 析 仅 需４ｍ ｉ，咖 啡 因 在 １￣ １０ ｇｍＬ 范 围 内 的线 性 关 系 良好 ，在 加 标 水 平 为２ 、３ 、５ ｇ ｎ ０ ５ ／ ｕ Ｏ ０ ０ｕ
方法 的相 对标 准 偏 差 为 （ Ｓ Ｒ Ｄ）在 ０ ６ ． ％ ３ １９ ． ％之 间 ， 同 时 做 回 收 率 实 验 ，加 标 回 收 率 为 ８
９ ９ ～ ｌ ３． ％ 。 ７．％ ８ Ｏ 、
【６ Ｆｒ ｉ ｒ Ｉｎ ， ｏｌ ｅｔ ＪＣ １】 ｚｅ Ａ，ｎ ｓＥ Ｌ Ｎ ｉ Ｄ， ａｌ ｈ ａ Ｒ ｃ ｏ ＿
１实验部分
甲烷 （ 析纯） 分 ；无 水硫 酸钠（ 析纯） 分 ；氯化 钠（ 分析
武 开业 ：反相 高效液相色谱法测定茶叶中咖啡因的含 量
水 。 ８２ －
１ 色谱 条 件 ． ２ Ｄｉｍｏ ｓ （） ｕ 谱 柱 （ ５ ｍｍｘ ．ｍｍ， ｏ ｎ ｉ Ｃ１ ２５ 色 ｌ ８ ２０ ４６ 柱温３ ℃ ） 流动 相为 甲醇／ （ ： ， ０ ； 水 ４ １流速 １ １ ｎ ； ｍ ． ） ｍｉ
Ｃ１（）ｕ ８２５ 色谱 柱 ，实 验 表 明该 色 谱 柱对 咖 啡 因有 很
好 的分离 性 能 。
【】Ｌ ａ ｄｏＣ Ｃ Ｆ ｓｅｌ Ｋｅｌ ． Ｃ ｒｍ ６ ｅｎ ｒ ， ｕｓｌ Ｒ Ｊ， ｅｙＢ Ｊ ｈｏ
ａｏ ￣ ２ ０ ， ０ ５（） ２ ７２ ２ ｔｇ． Ａ， ０ ５ １ ８ ２ ： ０ －１
三氯甲烷，重复上述萃取操作步骤 ，合并二次萃取 液 ， 入少 许无 水 硫酸 钠 和５ 饱 和 氯化钠 ，过滤 ， 加 ｍＬ 然 后用 三 氯 甲烷 定容 至 １０ ０ ｍＬ，取 １ｍＬ ０ 滤液 通 过
０ ５ｒ滤 膜 过滤 ，弃 去最 初 的５ ．ｕ ４ ｎ ｍＬ，保 留后５ 备 ｍＬ
用。
紫外检 测 器 。 １ － 品采集 及 前 处理 ３样 称 取 ２ 已经 粉 碎 且 小 于 ３ ｇ Ｏ目的均 匀样 品放 入
１０ 烧杯 中 ，先 加２ ｍＬ 纯水 ，再 ￣ ５ ｍＬ ５ ｍＬ ～３ 超 ｌ ０ 三 ｌ ： １
【】 Ａｎｓ ｓｉｄ ｓ ２ ａｔ ｓ ｅＭ， Ｌ ｈ ｔｙ Ｊ Ｌ ｊｂｈ ｒ ａ ａ ｅ ｏａ Ｓ ， 协 ｎ ａｅＤ，
２结果 与 讨论
【】Ｓ ｈ ｎ ｋＦ Ｊ， ｅ ｏａ ． Ｃ ｒｍ ａｏ ￣Ａ ， ５ ｃ ｅｃ Ｌ ｈ ｔ Ｓ Ｊ ｙ ｈｏ ｔ ． ｇ
２０ ，６ １ ： １ １ ０ ０ ８ ８（） ５ — ６
２ ． １色谱条件的选择优化 本 方 法 的主 要 目的就 是检 测 茶 叶 中 咖 啡 因 的 含 量 ， 我 们 采 用 美 国 沃 特 斯 公 司 的 Ｄｉｍｏ ｓ ｏ ｎｉ ｌ
司） ；万分之一电子分析天平（ 梅特勒． 托利多公司） ；
２ ｕ 微量注 射器（ ｕｔ ｌ ） ５Ｌ Ａ ｓ ａｉ ：ＫＱ ５ Ｂ ｒ ａ ．０ 超声 仪 （ 昆山
市超 声仪器 有限公 司 ） 啡因标准 品：纯度 ９％以 ：咖 ９ 上（ 广佛 精细化工 公 司） Ｈ３ （ ；Ｃ ＯＨ 色谱纯 ） ；三 氯
作 为流动 相 ，咖 啡 因 在 ４ 分钟 内完 全 出峰 （ ）。 图２ ２ 方法 的精 密 度 、线 性 关 系 和检 出 限 ． ２ 配制 浓度 为 １ 、３ 、５ 、 １０ ５ ｇｒ Ｏ Ｏ ０ ０ 、１０ｕ／￣的咖 ｒ
［】 ｅｒ ＇ ｈｉ Ｖ ｅｅ ’ ａ１ ｈ ８ Ａｌ ｓ Ｍａｔ ｓ ａ ｔＧ ｔ ｊ Ｎ， ｅ ｂｋ Ｖ ｅ ＪＣ ｒ Ｊ ｔ ．
【】 ｈｎ Ｋ ｎ ， ｕＸ ｅｔ Ｊ ｈｔｍ ａ ７ Ｃ ｅｇＸ Ｇ ｏ ｇＬ Ｓ ａＩ ．Ｃ ｏ
ｔｇ Ａ， ０ ４ｌ ４ ２ ： ６ ｏ ｒ ２ ０ ， ０ ０（） １９
通过选择 比较 不同的淋洗液体系 ，发现 甲醇／ 水体系能够很好的分离咖啡 因 ，不会出现峰拖尾 ， 鬼峰以及其他峰不完全分离的情况，经过不同的浓 度 选择 ，本方 法选 择 甲醇／ （ ：ｌ 水 ４ ，流速 ｌ ． ｉ＂ ｍ１ ｎ’ ａ ｒ ）
丙酮及 氯仿 等有 机溶剂 。适 度地 使用 咖 啡因有祛 除 疲 劳 、兴奋神 经 的作用 ，临床上 用 于治疗 神经衰 弱 和 昏迷复 苏。但 是 ，大剂量 或 长期 使用 也会对人 体
啡因含量也不同，反应在 １感上也不向，所 以对茶 ２ １
叶中含 有的咖 啡因进 行测定 是非常 必要 的 。
／ 时． 测物 的回收率为９ ．％～１３８ ｍＬ 被 ７９ ０． ％。 关键词 ：高效液相色谱 ；茶叶 ：咖啡因
咖啡 因 （ ８ ０ ４ Ｃ Ｈｌ ０２）是 从茶 叶 、咖啡 果中提 Ｎ
造成损 害 ，特别 是它 也有成 瘾性 ，一 旦停用 会 出现
炼 出来的一 种 甲基黄嘌 呤 的生物 碱 ， 化学 名是 １ ， ，７ ３－ 三 甲基黄 嘌 呤或３７二氢．，７ 甲基 一Ｈ一 呤－， ， 一 １ ，－ ３ １ 嘌 ２６ －
快速 、准 确地测 定 茶叶 中 的咖 啡因 ，可 满足食 品安
全 中对茶叶质 量检 测 的要 求 。 参 考文 献 【】 ｈ ｎ Ｋ ｎ ， ｕＸ ｅｔ ＪＣ ｏ １ Ｃ ｅｇＸ Ｇ ｏ ｇＬ Ｓ ａ１ ｈｒｍ ａ ．
ｔ Ａ ２ ０ ， ０ ０ ２ ： ６ ｏ ， ０ ４ｌ ４ （） １９
Ｓ ｈｎ ｋ Ｆ Ｊ ｃ ｅｃ ．
４１ － ３１ ２４
氯 甲烷 ，摇 匀 ，超 声萃取 ｌ ｎ ｍｉ，静置 ３ ｍｉ，分层 ， ０ ｎ 将 萃取液 倾入 另一 １０ 烧 杯 。 样 品中再 加５ｍＬ ５ｍＬ 在 ０
ＡＯ Ｃ Ｉ， Ａ ｎ．，２ ０ ，８ （） ： ０３ ６ ２
表 ｌ 实际样 品测定结果及 回收率
Ｔ ｂ ｅ ｌ Ｃ ｎ ｅ ｔ ｆ ａ ｅ ｎ ａ ｌｓ ａ ｌ ｏ ｔ ｎｓ ｏ ｃ ｆ ｉ ｅ ｉ ｓ ｍｐ ｅ ｎ
１１仪 器与试剂 ．
Ｗａｅｓ ５５ ｔ ２双泵 高效液 相色谱 仪 （ ｒ１ 美国沃 特斯 公 司 ） ．５ｒ滤膜 过滤装置 （ 海摩速有 限 责任 公 ；０ ｕ ４ ｎ 上
３ 小结
通过对实际样 品的测定 ，本方法可 以同时进样
啡因标准溶液 ，每个浓度 测定６ 次峰面积响应值 ，
Ｒ Ｄ在Ｏ２ ％・ １ ５ Ｓ ．ｌ ． ％之 间 。分别 测 定不 同浓度 的咖 ２
【２ Ｍ ｌ ｒ Ｈａ ｔｏｍｅＳ Ｂ Ａ ａｌ ｈｍ ， １］ ｉｅ Ｊ， ｗ ． ｎ Ｃ ｅ ｌ Ｄ ｈ