检测婴幼儿奶粉中的亚麻酸,亚油酸,花生四

Application Note: CM0042
Focus GC-FID检测婴幼儿奶粉中的亚麻酸，亚油酸，花生四 烯酸（AA）和二十二碳六烯酸（DHA）
林玉宙 福州明一乳业有限公司 朱曼洁 赛默飞世尔科技
1.前言 不饱和脂肪酸是人体重要的必需脂肪酸，亚麻酸、亚 油酸、AA 和DHA是常见的几种不饱和脂肪酸。研究表 明，不饱和脂肪酸是大脑和脑神经的重要营养成分， 能提升婴儿智力发育指数、提升视力敏锐度，摄人不 足将影响记忆力和思维力（1）。因此，不饱和脂肪 酸对婴幼儿的发育起着至关重要的作用。本文应用 Thermo Fisher公司Focus GC-FID检测器对婴幼儿配方奶粉 中的亚麻酸、亚油酸、AA和DHA进行检测。方法学的 验证表明该方法准确有效。
回收率 （%） 104.8830338 109.3791008 105.7422256 99.24509428
600000 500000 400000
DHA Y=19577.23X+22382.1
R2 = 0.9996
300000
200000
100000
0
0
10
20
30
Concentration
成分 （#4） 亚油酸 亚麻酸
100 7160693 6732864 6858175 677259
100 6939353 6562439 6806558 666297 2.21% 4.82% 4.37% 4.58% 100 7242667 7198684 7360543 725682
3.4 回收率
向空白样品中分别添加低浓度和高浓度的各种组分，
AA DHA
加标量 （mg/kg）
500 100 1000 250
检测值 （μg/mL） 45.10521317 8.874995232 88.85327911 21.75098038
回收率 （%） 90.21042634 88.74995232 88.85327911 87.00392152
Area
Area
图2
4.结论 本文采用Focus GC-FID (Thermo Fisher Scientific)同时测定 婴幼儿奶粉中的亚麻酸、亚油酸、AA和DHA含量的方 法，采用色谱柱为TR-Wax柱，气相检测器为氢火焰离 子化检测器(FID)。通过对色谱条件的优化，上述四种 脂肪酸得到很好的分离，从而为其定性和定量提供更 准确的结果。
图1 . A: linolenic acid; B: linolic acid; C: AA; D: DHA
3.2 方法的线性和检出限
本方法采用外标法定量，以目标组分的峰面积Y对相
应的质量浓度X（μg/mL）做标准曲线。标准曲线各点
浓度如表1所示。
表1
名称 MTO(μg/ LNA(μg/mL) AA(μg/mL l) DHA(μg/
1 55672 50832 55874 6369 3.71% 1.96% 2.34% 2.69% 1 52163 48943 53430 6043 60 10 597629 562459 577676 62493
10 601469 603046 609678 63448 0.64% 4.14% 3.43% 5.46% 10 593811 561138 572566 57256
回收率 （%） 87.9707794 86.5350151 86.95694732 82.1231232
500000
0 0
50
100
150
Concentration
成分 （#3） 亚油酸 亚麻酸
AA DHA
加标量 （mg/kg）
500 100 1000 250
检测值 （μg/mL） 52.44151688 10.93791008 105.7422256 24.81127357
进样口温度：220℃，不分流进样，不分流时间1min， 分流比50：1 检测器温度：280℃ 程序升温条件：140℃保持1min；以25℃/min升至 230℃，保持8min；再以25℃/min升至245℃，保持6min 载气流速：1.5ml/min
3.结果与讨论 3.1 色谱分离 图1分别显示了在上述程序升温条件下各组分在标样和 样品中的谱图，我们可以看到，各种物质得到很好的 分离。
参考文献 [1] 马文宏等。二十二碳六烯酸（DHA）、二十碳五烯 酸（EPA）、亚油酸、亚麻酸和花生四烯酸（AA）在 婴幼儿配方奶粉中的测定。食品研究与开发：检测分 析，2007，28（8）：142-144 [2] GB/T 5413.4-1997婴幼儿配方食品和乳粉：DHA，EPA 的测定[S]。北京：中国标准出版社 [3] GB/T 21676-2008 乳与乳制品脂肪酸的测定--气相色谱 法[S]。北京：中国标准出版社
AA
500
45.31180573 90.62361146
DHA
125
10.7645731 86.1165848
成分 （#2） 亚油酸 亚麻酸
AA DHA
加标量 （mg/kg）
250 50 500 125
检测值 （μg/mL） 21.99269485 4.326750755 43.47847366 10.2653904
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检测回收率。添加的量和回收率如表3所示。结果
表明，亚油酸，亚麻酸，AA和DHA的回收率范围在
82.1%-105.7%之间。
表3
15
成分
加标量
检测值
回收率
（#1）
（mg/kg） .7422924 90.9691696
亚麻酸
50
4.601750851 92.03501702
R2 = 0.9987
150000
100000
50000
0
0
5
10
Concentration
3000000 2500000 2000000
AA Y=23094.76X+75406
R2 = 0.9987
1500000
1000000
3.3 重复性
重复性检测选择低中高（1μg/mL，10μg/mL和100μg/
mL）三个浓度的样品，每个样品进样三次，以峰面积
计算重复性。重复性的结果如表2所示。
表2
Con.
Area
RSD(%)
(ppm) linolenic linolic AA DHA linolenic linolic AA DHA
acid acid
acid acid
1 52323 49475 55333 6148
浓度
mL)亚油酸 亚麻酸 花生四烯 mL)二十二
std1
10
std2
20
std3
30
std4
40
std5
50
酸 碳六烯酸
2
20
5
4
40
10
6
60
15
8
80
20
10
100
25
亚麻酸，亚油酸，AA和DHA标准曲线和相关系数如图 2所示，检出限按信噪比为3计算，得到亚麻酸，亚 油酸，AA和DHA的检出限分别为0.057μg/mL, 0.06μg/mL, 0.085μg/mL和0.25μg/mL。
Area
Area
1400000 1200000 1000000
linolenic acid Y=23412.27X+46204.7
R2 = 0.9985
800000
600000
400000
200000
0
0
20
40
Concentration
250000 200000
linolic acid Y=20805.17X+8770.256
2.实验方法 2.1 仪器和试剂 Focus GC气相色谱仪（赛默飞世尔科技 Thermo Fisher Scientific公司），带FID检测器；色谱柱为TR-Wax （30*0.25*0.25）；旋转蒸发仪；水浴锅。 各种脂肪酸标准品购置于sigma公司，氢氧化钾甲醇溶 液购置于sigma公司，三氟化硼甲醇溶液（质量分数 为10%）购置于sigma公司，饱和NaCl溶液，无水硫酸 钠，庚烷，正己烷，氨水（体积分数为25%）。 2.2 样品制备 2.2.1 样品提取 准确称取1.0000g样品放入三角烧瓶中，用10ml65℃的 热水溶解，振摇，使样品完全分散，水冷至室温后再 加入2ml体积分数为25%的氨水，至于65℃水浴锅中水 浴15min，取出，轻摇，冷却至室温。之后再加入10ml 乙醇混匀，加入25ml乙醚，塞上塞子振摇1min。离心 或静止，使醚层水层分开。将有机层转入烧瓶中，第 二次提取加入的试剂为5ml乙醇，15ml乙醚和15ml石油 醚，操作同前。第三次提取不加乙醇，只用15ml乙醚 和15ml石油醚，如上操作。 2.2.2 皂化和酯化 合并提取后的醚液于磨口圆底烧瓶中，经旋转蒸发仪 浓缩，用10ml庚烷溶解残留物，加2ml氢氧化钾甲醇溶 液回流5-10min，从球形冷凝器顶部加入10ml三氟化硼 甲醇溶液继续回流2min。停止加热，冷却至室温后取 下球形器，用硫酸溶液调节PH<1.5，加15ml饱和NaCl溶 液，振摇15s静置分层。移取上层有机相，用无水硫酸 钠脱水后，清液作为试剂，用气相色谱仪测定（2，3）。 2.3 色谱条件