激素检测方法及注意事项(精)
内分泌激素检验
内分泌激素检验一、甲状腺功能检验(一)血清三碘甲状腺原氨酸检验1．英文或缩写：Triiodothyronine，T3。
2．标本采集：清晨空腹采静脉血，一般检验甲状腺功能3-6 项的，一次抽血3.0ml 即可，若单项检验则需抽血2ml，置普通试管内送检。
3．正常参考值：0.79-1.49ng/ml。
4．临床意义：增高：(1)T3 是人体内生物火星最高的甲状腺激素，T3、T4 均为诊断甲状腺功能变化较为敏感的指标，但T3 较T4 更为敏感。
(2)甲亢时T3 高于正常4 倍，而T4 高于正常2 倍。
甲亢复发时T3 升高比T4 要早。
(3)甲状腺功能降低时，T3 不降低，甚至可代偿性增高。
降低：常见于高热患者及严重肝病患者。
5．注意事项：T3 检验受甲状腺结合球蛋白的影响明显，有此情况时，应通过检验游离T3 和游离T4 来判断甲状腺的功能。
(二)血清游离三碘甲状腺原氨酸检验1．英文或缩写：Free triiodothyronine，FT3。
2．标本采集：清晨空腹采静脉血，一般检验甲状腺功能3-6 项的，一次抽血3.0ml 即可，置普通试管内送检。
3．正常参考值：1.54-6.09pg/ml。
4．临床意义：FT3 同T3 的4．临床意义基本相同，但由于FT3 不受甲状腺结合蛋白的影响，而直接反映甲状腺功能状态。
血清FT3 是研究低T3 综合症和甲状腺激素代谢的重要指标。
(三)血清反三碘甲状腺原氨酸检验1．英文或缩写：Reverse triiodothyronine，rT3。
2．标本采集：清晨空腹采静脉血，一般检验甲状腺功能3-6 项的，一次抽血3.0ml 即可，置普通试管内送检。
3．正常参考值：0.15-0.65。
4．临床意义：rT3 无生物活性，是T4 在外周血中脱碘降解的产物，反映T3 、T4 间互相转化的水平，其血中浓度变化与T3 、T4 维持一定比例，与T4 一致明显。
甲状腺激素微小的变化可引起rT3.活性的较大变化，所以rT3 较T3 、T4 更能反映甲状腺的代偿功能。
植物激素检测方法
植物激素检测方法一、什么是植物激素？植物激素是植物体内合成的一系列痕量有机化合物，它在植物的某一部位产生，运输到另一个或一些部位，在极低的浓度下便可引发生理反应，几乎参与了调控植物从种子休眠、萌发、营养、生长和分化到生殖、成熟和衰老的每个生命过程，既可调控植物自身的生长发育，又通过与植物所生存的外部环境互相作用调节其对环境的适应。
通过调控如细胞分裂素、油菜素内酯和生长素等植物激素的代谢可显著地改良作物的株型结构和产量构成，从而大幅度提高作物产量和品质。
植物激素主要包括生长素(auxin)、赤霉素(gibberellin，GA)、细胞分裂素(cytokinin，CTK)、脱落酸(abscisic acid，ABA)、油菜素甾醇类(brassinosteroids，BRs)、茉莉酸(jasmonic acid，JA)及其甲酯(MeJA)、水杨酸类(salicylic acids，SA)、乙烯(ethylene)和多肽激素(peptide hormones)等。
二、检测方法科标生物检测中心可以提供各种植物样品检测服务，中心是通过权威认证的第三方机构，检测后出具权威检测报告。
三、主要分析技术1、生物鉴定法是一类经典的植物激素检测方法，它利用激素作用于植物的组织或器官时产生的特异性反应对植物激素进行测定。
2、免疫检测技术是测定植物激素的常用方法。
该方法是基于抗原和抗体的特异性结合，因此有较好的专一性。
采用放射性元素标记的方法，即放射免疫分析(radioimmunoassay，RIA)，其检测灵敏度高，重复性好，但对实验条件的要求较高。
3、气相色谱火焰离子化检测法(GC-FID)和气相色谱质谱法(GC-MS)能够对所分析样品进行准确、高灵敏度测量，但由于气相色谱对样品的特殊要求，使得待测组分需具有一定挥发性，因此在植物激素样品的前处理过程中需对样品进行衍生化。
4、高效液相色谱紫外检测法(HPLC-UV)、高效液相色谱荧光检测法(HPLC-FL)和高效液相色谱质谱检测法(HPLC-MS)也大量用于植物激素的纯化及定量分析，其中MS因为具有良好的选择性和灵敏度，并且能够给出化合物的结构信息，在实际检测中得到了更普遍的运用。
【2017年整理】各种激素最新检测方法
浅谈内分泌科室常见激素的检测方法1.糖化血红蛋白离子交换高效液相色谱分析法-检测糖化血红蛋白HbA1c的金标准。
基于血红蛋白b链N末端缬氨酸糖化后所带电荷不同而建立。
在中性pH条件下，HbA1c 携带的正电荷相对较少,因此可通过HPLC法将其与其它组(HbA1c，HbA1b，HbA1a，HbF，HbA0)区分开，得到分离。
此方法曾应用于美国DCCT的研究，是目前检测HbA1c的金标准。
2.肾素-血管紧张素-醛固酮系统2.1放射免疫学方法：这是历史最长也是目前应用最广泛的方法。
基本原理是通过测量肾素催化血管紧张素原反应产生血管紧张素I的速度来评价RAS的活性。
现在我国普遍使用的是由北方生物技术研究所生产的放射免疫法制剂，肾素的线性范围0.19-6.10ug/L，灵敏度是0.1ug/L。
2.2高效液相色谱法：目前这种方法仅用于科研，还未对人类得标本的检测报道。
2.3酶联免疫吸附法：这种方法的局限性是测得总的肾素含量，包括无活性的肾素。
由于ELISA的灵敏性不如放射免疫法，而血浆中的肾素含量又比较少，限制了ELISA方法在肾素检测中的应用。
2.4荧光免疫法：近年来有人用荧光免疫法测肾素的浓度，而且与放射免疫法和ELISA的方法比较，敏感度更好，检测限为0.1mU/L的肾素，样品回收率>90%，标准差比放射免疫法低32%，而且延长全血在室温下放置的时间不影响结果。
虽然目前有许多方法可以测RAS的活性，但是，各自都有一些局限性限制了它们的广泛应用。
放射免疫法是现在RAS检测中的金标准。
它测的是有活性的肾素，而其他方法测得是总的肾素。
但实验中需要用到放射性物质，不可避免地会损害实验人员的健康。
酶联免疫法操作简便，对实验室要求也不高，并且生物素和亲和素的应用也提高了ELISA试剂的敏感度，有取代放射免疫法的趋势，但是由于开发RAS ELISA试剂的公司较少，且缺乏权威机构的有效评价，目前只用于科学研究，临床检测中还没有广泛应用。
检测生长激素的流程
检测生长激素的流程引言：生长激素（GH）是一种由垂体腺体分泌的多肽激素，对人体的生长和发育起着重要的调节作用。
为了检测生长激素的水平，科学家们开发了一系列的实验和检测方法。
本文将介绍检测生长激素的流程，包括样本采集、实验室检测和结果解读等环节。
一、样本采集：1.选择合适的样本：生长激素的浓度在不同时间和不同生理状态下会有差异。
通常情况下，早晨的生长激素水平较高，因此建议在清晨采集血液样本进行检测。
2.采集血液样本：使用无菌注射器采集静脉血液样本，并将其放入抗凝剂管中。
确保采集过程中的无菌操作，以避免外界污染对结果的影响。
3.保存和运输样本：采集的血液样本应放置在冰上，尽快送至实验室进行后续处理。
在运输过程中，需避免剧烈震动，以防止血液凝固或样本破坏。
二、实验室检测：1.血清分离：将采集的血液样本置于离心机中，以一定的速度离心，将血液分离为血浆和红细胞。
2.生长激素测定：使用酶联免疫吸附法（ELISA）或放射免疫分析法（RIA）等方法，测定血浆中生长激素的浓度。
这些方法基于生长激素与特定抗体的结合反应，通过测定反应产生的光信号或放射性信号来确定生长激素的浓度。
3.质控检验：为了确保实验结果的准确性和可靠性，实验室通常会进行质控检验。
这包括使用已知浓度的生长激素标准品进行标定，以及进行质控样本的检测，以验证实验结果的准确性。
4.数据分析：根据实验结果，计算生长激素的浓度。
通常情况下，实验室会提供一个参考范围，根据参考范围来判断个体的生长激素水平是否正常。
三、结果解读：1.正常范围：根据不同年龄段和性别，生长激素的正常范围会有所差异。
通常情况下，成年人的正常生长激素水平为0.4-10 ng/mL。
2.异常结果：如果生长激素的浓度超出了正常范围，可能意味着生长激素分泌异常或某种疾病的存在。
进一步的检查和分析可能需要进行，以确定具体的原因和诊断。
结论：检测生长激素的流程包括样本采集、实验室检测和结果解读等环节。
人绒毛膜促性腺激素(hcg)的检测及临床意义
人绒毛膜促性腺激素(HCG)的检测及临床意义一、概述1、人绒毛膜促性腺激素( hCG）是一种主要由人体胎盘滋养层细胞产生的糖蛋白类激素，某些低分化的肿瘤细胞也可少量合成。
2、hCG由α和β两个亚基组成，亚基与FSH、LH、TSH的结构相似，可产生交叉反应，β亚基主要参与hCG与受体的相互作用并产生生物学效应。
3、hCG的主要功能是促进卵巢黄体转变为妊娠黄体，调节类固醇类激素的合成，使受精卵着床胚胎免受排斥。
在妊娠早期，母体血液和尿中hCG即可迅速升高，并随着孕期的进展逐步升高，8~10周达到峰值。
4、目前，化学发光和电化学发光免疫测定法可特异性地识别β亚基，避免了FSH、LH、TSH对测定结果的干扰，不仅可以检测完整的hCG，同时也可检测出样本中游离的β亚基，对于某些异位分泌hCG的肿瘤患者的诊断和疗效监测具有重要意义。
二、检测方法hCG的测定一般用 CLHA法和ECLIA法。
1、CLIA法的注意事项(1)标本类型及稳定性：推荐使用血清和肝素抗凝血浆样本进行检测。
样本2-8℃下可稳定保存5天，-20℃下6个月内稳定，避免反复冻融。
(2)结果报告：在介于检测下限和最高定标品值之间的分析范围内，可进行样本的定量测定。
对于hCG 含量在1000~200 000的样本，可选择仪器自动稀释模式或机外预稀释模式重新测定，稀释方法和稀释倍数见试剂说明书。
若总hCG水平与临床情况不相符，必须通过hCG测定的其他方法或尿液测定确认结果。
(3)干扰因素：应注意某些患者体内可能存在的异嗜性抗体对测定结果的影响。
2、ECLIA 法的注意事项(1) 标本类型及稳定性：血清和抗凝血浆均可用作为检测样本。
样本2~8℃下可稳定保存3天，- 20℃下12个月内稳定，避免反复冻融。
检测前离心去除样品中的沉淀。
冷藏的试剂和样本应在室温中平衡至20~25℃。
(2) 干扰因素：对于接受高剂量生物素治疗的患者（>5mg/d），必须在末次生物素治疗8小时后采集样本;少数病例中极高浓度的分析物特异性抗体、链霉亲和素或钉抗体会影响检测结果。
植物激素的测定方法-精品文档
二、免疫球蛋白的分子结构
免疫球蛋白的基本结构
• 四肽链结构 ，链间二硫键连接 • 两条重链（H）和两条轻链（L） • 氨基端和羧基端。
可变区与恒定区
• 根据氨基酸排列顺序的不同分为： 可变区（V）和恒定区（C） • 可变区（V区）：氨基酸组成、排列顺序变化较 大 • 恒定区（C区）：氨基酸数量、种类、排列顺序 及 含糖量都比较稳定
注意事项 ：
（ 1 ）微量加液器应注意保养并定期校正，否则结果误差 较大，同时加样时不可出现气泡，以免反应物间不能充分 混匀反应。 （ 2 ）洗涤时力求次数足够，且避免形成气泡，否则洗涤 不完全。 （3）温育时要力求受热均匀，同时避免液体蒸发。 （ 4 ）比色时反应管内不能留有气泡，管底不能存有水滴， 否则出现较大误差。
测定标准物各浓度和各样品490nm
处的OD值。
数据分析
在波长 450nm 处分别读取各标准孔和样本孔 OD 值， 以 OD值为横坐标，“标样激素含量的对数”为纵坐
用酶标仪进行比色，以0 ng/ml标准孔为空白孔，
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ标，在半对数坐标纸上画出标准曲线，以测定孔的
利用反对数求得ABA的绝对含量。
OD值在标准曲线上查出待测样品的 ABA含量的对数。
植物激素的酶连免疫分析法
几种酶标分析仪
DNM-9602G酶标分析仪
DNM-9602A酶标分析仪
DNM-9602 标配酶标分析仪
操作步骤
包被---温育---洗涤---竞争--温育---洗涤---加二抗---温育--
-洗涤---显色---比色---计算
包 被
• 每小孔中加入100μl包被缓冲液，然后
植物激素的测定方法？
生物活性法 气相色谱（气-质联机） 液相色谱（液-质联机） 酶连免疫法（ ELISA 法）
植物激素的测定方法
加 抗体
➢在微孔中加入一定量的抗体,混匀后每孔加 50μl，然后将酶标板加入湿盒内开始竞争。
➢竞争条件37℃左右0.5h。
洗板
将反应液甩干并在报纸上拍净。第一 次加入洗涤液后要立即甩掉。然后再接着 加第2次。共洗涤3次。
加“二抗”
将适当的酶标二抗，加入10ml样品稀释 液中（比如稀释倍数1:1000就加10μl），混 匀后，在酶标板每孔加100μl，然后将其放入 湿盒内，置37℃下，温育0.5h。
4、制备生物导弹用于肿瘤、 移植等的临床治疗。
六、人工制备的抗体
• 多克隆抗体：多个抗原决定基——机体—— 多种抗体的混合物
• 单克隆抗体（monoclonal antibody, mAb）：由一个B细胞克隆产生的、针对 某一特定抗原决定簇的高度特异性抗体
• 基因工程抗体
用标记物标记抗体或抗原进行抗原抗体反应借以提高免 疫学诊断的敏感性
植物激素的酶连免疫分析法
几种酶标分析仪
DNM-9602A酶标分析仪
DNM-9602G酶标分析仪 DNM-9602 标配酶标分析仪
操作步骤
包被---温育---洗涤---竞争--温育---洗涤---加二抗---温育--洗涤---显色---比色---计算
包被
• 每小孔中加入100μl包被缓冲液，然后 将酶标板放入内铺湿纱布的带盖瓷 盘内。
间接ELISA
双抗夹心法
放射性同位素：
125I、131I 酶：辣根过氧化物 酶、硷性磷酸酶
荧光素 ：异硫氰酸荧光素（黄 绿色荧光）、藻红蛋白、 罗丹 明（红色荧光）
放射免疫检测法（RIA） 酶免疫检测法（EIA） 免疫荧光检测法（IFA） 液相（ELISA）、固相（免疫组化技术）
临床检验性激素六项具体指标、抽血注意事项、在卵巢周期中分泌规律及指标解读
临床检验性激素六项指标、抽血注意事项、在卵巢周期中分泌规律及指标解读雌二醇：1pg/ml=3.67pmol/L、孕酮：1ng/ml=3.18nmol/L抽血除孕激素（P）以外，其它五项抽血时间是在月经周期的第2-4天，空腹、上午抽血为宜。
抽血前静坐半小时以上，避免激素水平因为运动而产生波动。
孕激素（P）应该在月经周期的第22-24天抽血。
睾酮（T）和泌乳素（PRL）不受月经周期的限制，也就是说在任何一天抽血均可。
泌乳素抽血最好在上午9:00至10:00之间，抽血之前静坐半小时以上方好。
闭经3-6个月以上，没有怀孕可以任何一天抽血均可。
怀孕只查孕激素和雌激素（和HCG），其它激素就不必查。
六项激素在卵巢周期中分泌规律雌二醇（E2），月经期和早卵泡期通常维持在较低的水平。
在排卵前有一个高峰，黄体期则维持较长时间的平台期，月经来潮则迅速下降。
孕激素（P）在排卵前始终维持低水平。
排卵后黄体逐渐成熟并分泌大量孕激素。
排卵后8-9天（就是周期的第22-24天）黄体达到成熟的高峰。
激素六项解读1、雌二醇E2。
早卵泡期雌激素均值是40.68±19.55pg/ml，通常在20-50pg/ml之间。
早卵泡期（月经期）E2>100pg/ml表明卵巢功能欠佳，如数值超过100pg/ml则代表卵巢储备功能较差。
E2>9pg/ml 为性腺功能启动标志，青春期前测定可辅助判断是否为性早熟；绝经期E2<30pg/ml；对于卵巢早衰者，E2亦低于正常水平。
2、孕激素P。
非孕期P是卵巢分泌的，主要是黄体分泌。
P在早卵泡期均值为0.92±0.52ng/ml，排卵前始终维持<2ng/ml低水平。
排卵后黄体逐渐成熟分泌大量孕激素，孕激素维持在高水平并持续10-14天。
在月经周期第22-24天测量P值，如>3ng/ml可有排卵。
正常育龄非孕期妇女的孕激素水平：（1）卵泡早中期：<1ng/ml。
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下丘脑-腺垂体-内分泌腺(细胞)—激素系统的 反馈调节，是内分泌的主要调控机制。多数 激素并非每日均衡分泌，而存在生理性节律 (昼夜节律、不同发育阶段节律、月经周期节 律等)或脉冲式分泌。甲状腺激素、糖皮质激 素、性激素等和血浆蛋白结合率高，其血浆 (清)总浓度受相应结合蛋白浓度影响大，但 只有游离激素才能发挥包括对上述调节轴的 反馈调控在内的作用。理解掌握各种激素的 分泌调控机制、分泌方式和血浆运输特点， 是正确解释激素及其结合蛋白和代谢物检测、 动态功能试验的基础。
(一)常用激素检测方法及评价 常用激素检测方法有生物活性法、受体 结合竞争法、HPLC、高效毛细管电泳法 (HPCE)及免疫法。其中生物活性法一方面 仅为半定量，另一方面受影响生物反应性 因素的影响，现已趋于淘汰。受体结合竞 争法因需复杂的受体制备，难以在临床常 规检测中应用。HPLC和HPCE由于需特殊 仪器及大多要进行样品预处理，亦未能在 国内临床常规检测中推广。因此，免疫法 为临床激素常规检测的主要方法。
(三)正确评价单次激素水平测定的意义 不少激素分泌存在生理性昼夜节律及随生长发育 阶段不同而改变，性激素在不同的发育阶段及女性 月经周期的不同时相差别甚大。因此应根据取样时 间所处的昼夜节律、发育阶段及月经周期时相，具 体分析。对昼夜节律明显者，最好分别在同一天的 高峰期和低谷期取样测定，观察其昼夜节律。而对 GH等主要以脉冲式分泌的激素，单次测定结果实 无多大意义，必需结合动态功能试验等做出诊断。 对甲状腺激素、皮质醇、性激素等高血浆蛋白结合 率的激素，最好直接测定游离激素浓度。若测定总 激素水平，结果解释时要充分考虑各种影响其蛋白 结合率生物化学检验广泛应用于内分泌疾病诊断、 病情评估和疗效监控。
1．由于生长激素(GH)每日仅数次脉 冲式分泌方式和半寿期短的特点， GH紊乱疾病的生物化学诊断，首选 检测项目不是GH，而是半寿期长并 依赖GH生成的作用介导物IGF-1或其 结合蛋白IGFB-3。仅GH异常无多大 意义，只有同时至少两项相关动态功 能试验异常方可做出诊断。
2．甲状腺功能紊乱是内分泌病中最常见者。 其首选筛查项目是血清TSH测定，特别是新 生儿尽早发现甲减及时治疗，避免呆小症发 生，意义重大。确诊甲状腺功能紊乱的种类、 严重程度及疗效监控，可同时测定血浆(清) 甲状腺激素。由于甲状腺激素高血浆蛋白结 合特点，甲状腺激素测定包括TT4、TT3、 FT3、FT4，随着检测技术的可靠性提高， 推荐将FT3、FT4，尤其是FT3作为甲状腺激 素测定常规项目。
小
结
1. 了解内分泌的概念、内分泌系统和神经 系统的调节机制及有关内分泌紊乱性疾病 的临床生化检查方法 2．熟悉主要内分泌激素的生理、生化功能 及生化诊断 3.掌握甲状腺激素、肾上腺激素的代谢、 调节及生化诊断
3．肾上腺由皮质和髓质两个独立的内分 泌腺组成。肾上腺皮质功能紊乱诊断的首
选项目是血浆(清)总皮质醇、唾液及尿游
离皮质醇测定。若能同肘检测血浆ACTH
及进行必要的动态功能试验，则有助于病
变部位及性质判断。
尿 17-OHCS 、 17-KS 测定因干扰因素多， 诊断效率较低，已趋于淘汰。嗜铬细胞瘤 是肾上腺髓质的主要病变，其临床生物化 学检验首选血浆肾上腺素和去甲肾上腺素 测定。尿中该两种激素代谢物3-甲氧-4-羟 杏仁酸检测因干扰因素多，特异性差，已 较少使用。由于嗜铬细胞瘤的激素释放可 为间发性，必要时可进行高血糖素刺激试 验协助诊断。
激素免疫法检测根据标记物的性质、检测方法 不同，有多种试剂盒可供选用。但对检测结果 影响最大的是所用抗体的质量。前已述及，一 些激素如 TSH 、 FSH 、 LH 、 hCG 间存在交叉 抗原性；PRL在血液中存在有交叉免疫性但活 性不同的单体和多聚体形式；一些激素的代谢 物及药物，亦可和激素有程度不等的交叉免疫 反应性。同一样本用抗体质量不同的试剂盒检 测，将有较大差异。此亦是有关激素参考值各 家报告差别大，较难统一的主要原因。因此， 最好能坚持使用质量可靠的同一种试剂盒，并 建立以该试剂盒测定的参考值。
多数甲状腺功能紊乱都有自身免疫机制参 与，甲状腺自身抗体检测在国内较普及。 但这些自身抗体多缺乏特异性，亦见于部 分正常人尤其是老年人、其他自身免疫性 内分泌病者，尚有部分自身免疫性甲状腺 炎患者不能检测出。因此，在甲状腺功能 紊乱的诊断上，甲状腺自身抗体检测仅有 助于自身免疫性甲状腺炎的诊断，而不能 说明甲状腺功能有无紊乱及种类。
(二)重视分析前干扰因素 多数激素在安静状态和应激反应时分泌量差 异巨大，如E和NE仅由卧位变为立位，血浆浓 度便可增加一倍以上。因此供激素测定的血样， 一般都主张在空腹安静平卧状态，置人保留式 取血导管半小时以上采集。以减小因活动、对 疾病和静脉穿刺的恐惧等引起的分泌量剧变。 生长激素可迅速被血液中的肽酶水解，E和NE 可迅速被氧化破坏。因此，血样采集后应迅速 低温分离血浆，必要时可加入肽酶抑制剂或抗 氧化剂。而ACTH易被玻璃器皿吸附，从血样 采集到分析都应避免接触。
ACTH和肾上腺素、去甲肾上腺素测定只 能用血浆作样本，严格按照前面介绍的方
法采集血样和迅速低温分离血浆，尽快检
测，减少分析前干扰因素，对保证结果的
准确可靠极为重要。
4．内分泌性性功能异常的诊断很大程度上依 靠生物化学检验。单纯检测血浆 ( 清 ) 性激素 水平提供的信息有限，同时检测性激素和促 性腺激素 (FSH、 LH)则对性激素紊乱的有无 及种类做出初步诊断。但由于性发育及女性 月经周期存在较大的个体差异，对性激素和 促性腺激素异常者，应通过兴奋或抑制动态 功能试验，准确了解性腺及其调节系统的功 能状况，并协助病变部位和性质的确定。这 在青春期延迟和性幼稚症的鉴别、男性青春 期后性功能减退症及女性继发性闭经的病因 诊断、治疗决策上，尤为重要。
第六节 激素检测方法及注意事项
• 常用激素检测方法及评价
• 重视分析前干扰因素 • 正确评价单次激素水平测定的意义
现在激素多用较灵敏特异的免疫法和 HPLC、HPCE检测，但除受方法技术本身 影响外，激素测定结果受多种分析前因素， 如取样时间、方法、样品预处理等的影响 大，在激素测定和结果解释中应特别注意。