茶树及其绿茶加工中酶的研究进展

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茶叶水解酶的研究进展_唐颢

茶叶水解酶的研究进展_唐颢

44茶 叶 通 讯2002年 收稿日期:2002茶叶水解酶的研究进展唐 颢 杨伟丽(湖南农业大学茶学系·长沙·410128)摘 要 本文简述了近二十年来国内外茶叶中水解酶的研究及应用情况,并展望了其今后的研究方向和应用前景。

关键词 茶叶;水解酶;固定化;增质效果 水解酶是催化水解反应的一类酶,茶叶中研究得比较多的水解酶主要有果胶酶、纤维素酶、糖苷酶、蛋白酶和淀粉酶等。

茶叶加工实质上是一个生物化学和物理化学的过程,其主要技术环节都与酶的控制和利用有关[1]。

许多研究表明,水解酶与茶叶中的可溶性糖、氨基酸及醇类香气物质等的形成关系密切。

因此,研究水解酶在茶叶加工过程中的作用机理和活性变化动态,对于提高茶叶及茶饮料的香味品质具有重大的理论和实践意义。

随着酶学的进展,茶叶中的酶学研究也在逐步深入和系统化。

本文就近二十年来国内外茶叶水解酶的研究状况作一综述。

1 水解酶的研究概况1.1 糖苷酶随着茶叶香气研究的不断深入,茶叶内源水解酶作为与茶叶醇类香气物质的形成密切相关的酶类而倍受关注。

自20世纪80年代以来,国内外对茶叶内源及外源糖苷酶陆续进行了深入的研究。

(1)β—葡糖苷酶。

自然界许多植物籽实内部存在β—葡萄糖苷酶。

它还存在于一些酵母、曲霉菌和木霉菌属及细菌体内[2]。

人们最初是在甜杏仁中发现了这种酶,称之为“杏仁酶”。

直到今天,人们主要还是从杏仁中获得这种酶。

β—葡萄糖苷酶不仅可水解纤维二糖和寡糖,而且可解除纤维二糖对β—1,4—内切葡聚糖酶和外切葡聚糖酶的抑制,提高水解速率和程度。

茶叶中的糖苷酶研究始于20世纪80年代初期,Takeo.T[3](1981)在去除挥发物的蒸青茶鲜叶匀浆中加入外源β—D—葡萄糖苷酶共同培养,结果发现有大量的芳樟醇和香叶醇生成。

随后,他又将茶鲜叶匀浆物置40℃下培养30min后同样发现有大量的芳樟醇和香叶醇产生,当加入β—葡萄糖苷酶的抑制剂Hg+和特异性抑制剂葡萄糖酸—1,4—内酯后,芳樟醇和香叶醇的生成受阻。

酶及酶技术在茶叶深加工中的应用

酶及酶技术在茶叶深加工中的应用

酶及酶技术在茶叶深加工中的应用茶叶作为我国的传统经济作物,已经在国内和国际市场上占有着很高的比重。

茶叶市场竞争激烈,深加工技术作为提高茶叶附加值的重要手段,具有广泛的发展前景。

酶及酶技术可被广泛应用于茶叶深加工工艺中,能够使茶叶产生更好的品质特征和提高茶叶的商品价值。

本文将探讨酶及酶技术在茶叶深加工中的应用。

一、酶及酶技术在茶叶深加工中的基本原理酶是一种特殊的生物催化剂,它能够促进生物体内的化学反应进程,降低反应活化能,加速反应速率。

茶叶深加工中,茶叶中的多种酶类活性具有重要的作用,包括多酚氧化酶、过氧化物酶、多酚酶、脱氢酶等。

这些酶类活性会受到茶叶加工方式的影响而发生变化,以此改变茶叶的口感和色泽。

酶及酶技术就是运用酶类促进并控制茶叶加工过程中发生的化学变化。

基本原理是将经过采摘清洗、茶青材料经过杀青工艺后,开展发酵过程,即将茶青材料在适宜温度、湿度等条件下辅以天然植物酶类进行微生物发酵,使之产生一系列化学变化,从而得到各种口感的茶叶。

发酵过程中需要适宜的酶的参与,这些酶在茶叶中天然存在,影响茶叶的发酵特性和品质特点,而利用酶提高茶叶品质和附加值,成为了当前茶叶深加工中非常重要的工艺手段。

二、酶及酶技术在茶叶深加工中的应用1. 杀青阶段茶叶生产中,杀青是一个很重要的步骤。

杀青的目的是抑制酶类活性的继续发展,并通过此过程来锁定茶叶的气味、色泽、口感等特征。

在杀青阶段,经常使用的酶类有过氧化物酶和多酚氧化酶。

过氧化物酶能够促进杀青过程中的化学反应,保证抑制茶叶中的多酚氧化酶并最大限度地保留茶叶的天然香气。

多酚氧化酶可以使茶叶提前发生氧化,使茶叶表面的酚类物质更容易溶解,茶叶中的多酚得到释放,增加了茶叶的苦涩味和麦芽气味。

2. 发酵阶段发酵是茶叶深加工中最重要的工艺步骤。

不同种类的茶叶需要具有不同特定的酶活性,以使其在发酵过程中产生所需的化学反应和改变。

茶叶发酵过程中酶类的代表有多酚氧化酶、过氧化物酶、多酚酶和脱氢酶等。

茶叶酶研究的方法与进展

茶叶酶研究的方法与进展

福建农林大学学报(自然科学版)第32卷第1期Journal of Fujian A griculture and Fo restry U niversity(N atural Science Editi on)2003年3月茶叶酶研究的方法与进展刘乾刚1,林 智2,蔡建明3(1.福建农林大学园艺学院,福建福州350002;2.福建省茶叶进出口有限责任公司,福建福州350001; 3.安溪县农业与茶果局,福建安溪362400)摘要:对茶叶酶研究方法、动态及成果进行了概述.随着研究技术、思路的拓宽,茶叶酶研究与应用领域已从内源酶扩展到外源酶,从酶的性状表现追踪到遗传特性,从酶活性的环境调控措施深入到化学干预,从自然状态下酶的利用发展到经过加工处理后酶的应用阶段.关键词:茶叶;酶;研究方法;进展中图分类号:S571.1文献标识码:A文章编号:100627817(2002)0420074205M ethods and progress on the research of tea enzy m esL I U Q ian2gang1,L I N Zh i2,CA I J iang2m ing3(1.Co llege of Ho rticulture,Fujian A griculture and Fo restry U niversity,Fuzhou,Fujian350002,Ch ina;2.Fujian T eaI mp.&Exp.Co.,L td.,Fuzhou,Fujian350001,Ch ina;3.A nxi A griculture&T ea2F ruit A dm inistrati on,A nxi,Fujian 362400,Ch ina)Abstract:R esearches on enzym es of tea in ter m s of the m ethods and their app licati ons as w ell as the trends w ere review ed and discussed.R ecently,the m ethods,technical o r ideo logical,have been so m uch developed and extended that the p rogress has been speeding in exp lo rati on and utilizati on of bo th internal and external enzym es,in inquisiti on into the rela2 ti onsh i p s betw een genetic characters and enzym e behavi ours,in chem ical and environm ental regulati on of enzym atic activi2 ties and in extensi on of the utilizati on of enzym es in the natural state to that of specially treated and i m p roved ones.Key words:tea;enzym e;research m ethod;p rogress酶的研究方法一直受到茶叶化学界的关注.酶的基本研究内容包括分子结构、反应类型和动力学特性分析等,与此相关的酶提取纯化、结构分析、活性测定等技术,已经成为酶研究中经常采用的方法.随着这些方法的应用,与茶树代谢、制茶转化及品质有关的重要酶类不断被发现和研究,通过调控酶活性来提高鲜叶质量和制茶品质的栽培与加工措施也日益完善.酶的研究方法也由过去单一的常规分析发展到同功酶、分子标记和酶工艺化学等技术并举的多元化格局.1 茶叶酶研究的基本方法1.1 酶的提取纯化 通过对酶的提取和纯化,去除酶制剂中的杂质或干扰成分,提高目标酶的浓度,从而有利于酶学研究试验条件的控制和结果的分析比较.红茶发酵“红变”曾一度被认为与微生物或细胞色素氧化酶的作用有关[1].但在对相关氧化酶的纯化过程中发现,随着酶纯度的提高,Cu含量提高,而Fe含量逐渐降低;当除去Cu离子或使用铜酶抑制剂时,发酵进程受阻.这项试验表明铜酶与“红变”之间存在着某种内在联系,为最终确立多酚氧化酶在红茶发酵中的地位起到了重要的推动作用[1,2].Roberts[3]将纯化的多酚氧化酶与各种组合的儿茶素底物混和,进行模拟氧化试验,并对氧化产物与红茶茶汤色素的种类和结构进行比较分析,提出了关于红茶发酵机理的经典学说.目前,茶叶生物化学在儿茶素合成途径、茶氨酸代谢、香气成分转化及制茶过程大分子物质水解等相关化学机理的研究方面已取得明显进展[2,4-11].然而,对于其机理(酶系存在与否、反应类型等)的最后阐明还须进行深入的酶学研究,也离不开酶提取纯化技术的运用.收稿日期:2002-04-29作者简介:刘乾刚(1962-),男,讲师,硕士.研究方向:茶叶品质化学,市场推广.1.1.1 酶的提取 茶叶酶的提取主要有丙酮和匀浆2种方法[12].由于茶组织中多酚类含量丰富,在未使用多酚吸附剂之前,茶叶中酶的提取率一直处于较低水平[13].后来发现,如果在茶叶酶提取过程中加入多酚吸附剂,则能有效防止多酚类物质对酶蛋白的凝固沉淀作用,从而降低离心沉淀部分的酶活性,提高上清液中酶的含量[14,15](表1).15000g 离心时未加聚酰胺处理的上清液中多酚氧化酶的活性几乎等于零,但加入聚酰胺之后,其活性则恢复到总活性的26%[14];另外,聚酰胺处理能大幅降低1400g 沉淀部分的酶活性,与不处理比较降幅达71%.Sanderson [15]的结果还表明,多酚吸附剂可明显提高上清液中蛋白质含量.以上试验说明,在茶组织酶的提取过程中,加入适当的多酚吸附剂可以提高酶提取率.此外,茶组织充分破碎或根据酶存在部位进行细胞自溶、采用有机溶剂和表面活性剂处理等都能使酶得到最大限度的释放[16],从而提高酶的提取率. 离心处理是制备“粗酶液”时常采用的一个步骤,主要是为了除去细胞器、细胞组织碎片等体积较小的悬浮物.究竟采用多大离心力,要视试验目的来作选择.通常,供层析(纯化)用的酶提取液应尽量去除其中小颗粒悬浮物,一般采用较大离心力进行离心.如用作可溶性酶活性的测定,则理论上不允许酶供试液中存在任何细胞组织碎片.在一些试验中,离心处理用于分离各种细胞器,这时离心力大小应以细胞器质量为依据,操作程序和时间也是其考虑的重要因素.分离物及其离心条件见表1. 表1 细胞器、细胞碎片的离心沉淀条件 T able 1 Centrifugal separati on fo r cell o rgans and p ieces 沉淀部分离心力时间 m in 文献细胞壁碎片300g -[17]叶绿体600-800g 10[14,17,18]1500g 151400g 5线粒体15000g 60[14]微粒体30000g 30[18]所有颗粒80000g 120[19]1.1.2 酶的纯化 酶的纯化是为了制备高含量高纯度的酶制剂,因使用目的不同,对酶制剂纯度的具体要求也不一样,因而采用的方法也不同,主要有以下几种. 透析法:主要用于去除酶液中的小分子物质,如盐分、辅酶、化学试剂、反应底物和产物等. 超滤法:由于采用了真空、加压或离心等,分离效率较高,可用于较小分子质量酶蛋白的分离,也常用来进行酶液的浓缩处理. 柱层析法:是将一定的载体装填于柱内,按上样、洗脱、洗脱监测和分步收集等程序,对不同酶蛋白进行分离纯化的方法.该方法技术性强、设备专业且性能要求较高,常用于酶蛋白组分的分离和测定.载体类型和型号、洗脱液及洗脱条件都是柱层析技术构成中的基本要素.进行实际操作时,可参阅有关专著[18].T akeo et al [19]对茶叶中的多酚氧化酶进行了提取和纯化,并将该酶分离为3个组分.在其方法应用方面,较早使用了多酚吸附剂(吐温80)和抗氧化剂(异抗坏血酸),这已被后来的许多试验设计所借鉴.其中“粗酶液”的制备是在较大离心力下(15000g )重复进行了3次离心,以去除小颗粒悬浮物,为随后的柱层析作准备.T akeo et al [19]认为,采用80000g 离心是为了确保其上清液中的酶活性全部来自可溶酶,而不含任何细胞碎片上的结构酶.试验同时使用了3种层析柱,G 225柱主要用于多酚氧化酶的纯化,而D EA E 和C M 纤维素离子交换柱则使该酶组分达到进一步分离.1.2 酶分子质量的测定 酶分子质量是酶学研究的一项基本内容.研究酶分子质量需要一定的技术手段,同时其成果又在工作参数选择上为酶的其他分析方法的应用提供了必要的依据.例如,分子筛柱层析方法中,目标酶的分子质量决定了载体孔径(型号)的选择. 研究酶分子质量可采用超速离心法、凝胶过滤法(分子排阻法)和SD S 凝胶电泳法[18,20].到目前为止,已对多种茶叶酶的分子质量进行了测定,其中重要的酶类有多酚氧化酶、过氧化物酶、叶绿素酶、乙醇脱氢酶、核酸酶、苹果酸脱氢酶等[6,21].1.3 酶反应动力学 酶的动力学研究是酶学研究中最基本、最核心的内容.酶的动力学研究的目的是了解一种酶在不同因子影响条件下所表现出来的作用特点和规律,具有普遍的指导意义.研究的因子包括底物、产物、pH 、温度、抑制剂和激活剂等,主要从对酶的结构及其活性的影响入手.1.3.1 底物 主要研究底物浓度、多底物竞争及底物与酶分子之间的亲和力对酶促反应的影响.迄今为・57・第1期刘乾刚等:茶叶酶研究的方法与进展止,已对多种茶叶酶底物的专一性进行了深入研究[6,21].1.3.2 产物 主要研究产物积累对酶活性的反馈抑制作用.有关茶叶方面有少量的研究报道.1.3.3 pH 研究pH 变化对酶活性的影响.有关茶叶方面已有大量报道[6,9,11,21,22],并对多种酶的最适pH 进行了研究[6,21],其部分成果已用于指导生产.1.3.4 温度 研究温度对酶活性的影响.目前,已经确定了多种茶叶酶的最适温度和部分茶叶酶的热变性温度[6,21,23],其成果已应用于红茶发酵和绿茶杀青温度条件的制定[1,23].另外,已在气温和年积温对茶树碳、氮化合物整体代谢水平的影响方面做了大量工作.1.3.5 抑制剂 已对茶叶酶的大量相关试验研究作了总结[6,21].抑制剂的运用也已成为一种酶学方法,在探索茶树代谢和制茶转化机理方面发挥了重要的作用[1,24].1.3.6 激活剂 已确定了多种茶叶酶的辅酶(基)[6,21].近年来,稀土元素广泛应用于茶叶的增产增质[25],但其作用机制尚待探明.1.4 同功酶分析 自1966年T akeo et al [19]报道分离出了茶多酚氧化酶的同功酶以来,过氧化物酶同功酶的研究也取得了明显进展.1986-1990年,许多研究者对红茶、乌龙茶制造过程中多酚氧化酶和过氧化物酶同功酶谱带及活性变化进行了研究[26-28].结果表明,各种同功酶在儿茶素氧化及色素形成中的作用有所不同[26].1992年,鲁成银等[29]对103个茶树种质资源的酯酶同功酶的比较分析结果:茶树进化的途径是大叶种→中叶种→小叶种,并确定了它们之间的亲缘关系.此前,还研究了超氧化物歧化酶、过氧化物酶同功酶谱带数目和总活性与茶树抗寒性的关系[30]等.同功酶分析技术在揭示茶树生物学特性、遗传关系及制茶化学原理等方面显示出越来越重要的作用. 同功酶分析可采用柱层析、薄层层析等方法.但目前以使用凝胶电泳、等电聚焦2种方法较为普遍.1.4.1 凝胶电泳 常以聚丙烯酰胺凝胶作为载体.合适的凝胶浓度、制胶质量、上样操作等是决定分离效果的关键[18].1.4.2 等电聚焦 是在凝胶电泳方法基础上改进而成的[18].它与凝胶电泳的不同之处在于:等电聚焦在凝胶柱内注入了两性电解质,从而使凝胶柱形成了一定的pH 梯度.当带电荷的酶蛋白分子泳动至等电点(pH )区域时,因其净电荷为零而停止泳动.该方法分离效果较好,但要求目标酶蛋白在等电点条件下不产生沉淀或变性.1.5 酶的分布及其活性变化 研究酶的亚细胞定位、组织分布及在物候交替、茶树生长发育和制茶过程中的活性变化.1.5.1 酶的亚细胞定位 迄今,已对植物细胞内光合作用、呼吸代谢、脂肪转化等相关酶系的定位进行了卓有成效的探索,对于进一步阐明生物反应机制及不同代谢途径之间的关系具有重要意义.有关茶树研究中,最早因茶树多酚氧化酶很难被提取而引起了对茶叶酶细胞内定位的关注和讨论[13-15].1947年前后,普遍认为茶的多酚氧化酶是一种结构酶[13].后来的试验则表明该酶大部分是可溶性的,广泛分布于各种细胞器中[31].到目前为止,有关报道主要集中在多酚氧化酶、过氧化物酶、脂质降解酶等少数几种酶的定位方面,其主要目的是为了对这些酶进行有效的利用或控制. 通常,酶的亚细胞定位采用组织化学观测和离心分离检测2种方法.其中,离心分离检测法的应用较为广泛,但仍存在不足[17,31]:其一是离心收集部分的纯度及各部分之间的相互污染问题;其二是细胞器破损带来的基质和碎片损失,即最终收集到的细胞器不能真实反映某种细胞器的整体酶活性问题.对此,有报道提出了离心分离与同功酶分析相结合的酶定位方法,并就该方法的试验结果及应用作了说明和讨论[31].1.5.2 酶的组织分布 酶在茶树根、茎、叶及叶表皮、叶脉、叶梗中的活性分布是制茶原料、制造化学及基础生理生化研究的一项基本内容,其中针对叶片组织的研究尤为重要.在绿茶制造中防止叶梗的红变、红茶制造中促进某些发酵产物的积累、乌龙茶做青中通过“走水”对叶梗和叶脉内酶的利用等实践中,首先涉及到相关的主要酶类,以及这些酶的活性分布与制茶工艺及品质的关系11.5.3 酶的活性变化 目前,已对物候交替、生长发育及制茶过程中茶叶酶的活性变化进行了广泛的研・67・福建农林大学学报(自然科学版)第32卷究[1,2,7,9,11,22-24,26-28,32].2 酶的获取、加工和利用 随着茶饮料加工工业化进程的加快和新产品的不断开发,茶内源酶的含量及自然属性已经不能满足生产上日益增长的各种需求.另外,传统茶加工过程中各种成分转化之间的交互作用和平衡,使其加工工艺不宜针对某一突出问题(如滋味苦涩、茶汤沉淀)或为实现某种成分的超常积累(如茶黄素、萜烯类)而采取“极端”措施.因而,酶的获取、加工及利用的重要性便由此凸显出来.2.1 酶的获取 早在速溶茶的生产中,就采用了单宁酶制剂“转溶”的处理方法,以提高速溶茶的溶解性和消除茶汤的“冷后浑”现象.目前,酶制剂的种类除单宁酶外,还有多酚氧化酶、蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶、Β2糖苷酶等多种类型[33];用于酶提取的植物材料也从土豆、果实等发展到今天经过特殊改良和培养的微生物菌群.饮料、食品加工业用酶制剂有严格的卫生要求.增加酶提取率、降低成本及提高酶制剂的稳定性是今后需要重点研究和解决的问题.2.2 酶的加工和利用 酶的加工是指对酶的自然属性(工作状态、酶学性质)进行处理改造或化学修饰.酶的固定化便是其中的一种.据研究[34],Β2葡萄糖苷酶经壳聚糖固定化之后最适温度提高10℃,酶最高活性温度范围加大为40-60℃.在室温下保存3个月,经检测表明,这种固定化酶的活性并无明显下降.另据报道[35],将一定的 图1 酶固定处理方法 F ig .1 M ethods of i m mobilizing enzym es酶固定在膜上可起到茶汤浓缩、转溶和增香的效果.酶固定化的方法较多,总体上可分为3种处理方式(图1).提行酶的化学修饰是一门酶化学工艺学.它的理论基础是酶反应动力学原理,其主要目标为:保持酶结构的完整性;增强酶蛋白空间结构的稳定性;维持和保护酶催化基团的工作状态和微域环境. 经过加工后的酶在耐热、抗酸碱、抵御抑制因子及催化效能等方面都得到了全面的提高和改善.随着酶生产工业的发展,酶的加工技术必将达到新的水平,各种酶制剂(或酶反应器)的应用也会更加普及、有效.参考文献:[1]王汉生.红茶制造生物化学[A ].安徽农学院.茶叶生物化学(第2版)[M ].北京:农业出版社,1988.210-258.[2]李荣林,方辉遂.一个世纪以来茶多酚氧化酶研究的进展[J ].福建茶叶,1997,(4):10-14.[3]ROBER T S E A H .Econom ic i m po rtance of flavono id substances :tea fer m entati on [A ].GE ISS M AN T A .The Che m -istry of Flavono id Co m pounds [M ].New Y ork :Pergam on Press I nc ,1962.649-699.[4]萧伟祥.茶叶中儿茶素的生物合成途径[A ].安徽农学院.茶叶生物化学(第2版)[M ].北京:农业出版社,1988.103-109.[5]SA I JO R ,TA KEO T .Som e p roperties of the initial four enzym es invo lved in sh ik i m ic acid bi o synthesis in tea p lant[J ].Agr i B iol Che m 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酶工程技术在茶叶深加工与应用及展望

酶工程技术在茶叶深加工与应用及展望

酶工程技术在茶叶深加工中的应用及展望王 斌1,2, 江和源1, 张建勇1, 王 岩1, 黄永东(1. 中国农业科学院茶叶研究所,农业部茶及饮料作物产品加工与质量控制重点实验室, 杭州310008;2.中国农业科学院研究生院,北京 100081)1,2摘要:根据前人研究成果从酶工程技术的研究角度出发,总结近年来其在茶叶深加工领域的应用,包括茶黄素、茶氨酸、儿茶素衍生物等茶叶天然产物的合成;茶多酚、茶多糖等天然产物的提取;速溶茶的加工和茶饮料的澄清、保香增香等方面,并对其应用前景作以展望。

关键词:茶学;酶工程技术;茶叶深加工;合成;提取;天然产物Application of Enzyme Engineering Technology in TeaDeep-Processing and Its ProspectivesW ANG Bin 1,2, JIANG Heyuan 1, ZHANG Jiangyong 1, W ANG Yan 1HUANG Yongdong ,(1.Key Laboratory of Tea and Beverage Crops Processing and Quality Control, Tea Research Institute, Chinese Academy of Agriculture Sciences, Hangzhou 310008, China;2.Graduate School of ChineseAcademy of Agriculture Sciences, Beijing 100081,China)1,2Abstract: This paper summarized the application situation of enzyme engineering technology in the biosynthesis of theaflavins, theanine and catechins(EGCG) derivatives, the extraction of polyphenols and polysaccharide, the clarification and flavor preservation of tea beverage in recent years, and discussed the prospectives of enzyme engineering technology applying in tea deep-processing in the coming future.Keywords: tea science, enzyme engineering, tea deep-processing, biosynthesis, extract, natural products酶工程技术是现代五大生物工程技术之一,是利用酶或者微生物细胞、动植物细胞、细胞器等所具有的某些功能, 借助于工程学手段来提供产品或服务于社会的一门科学技术。

酶工程技术在茶叶方面的应用研究进展

酶工程技术在茶叶方面的应用研究进展

酶工程技术在茶叶方面的应用研究进展一、本文概述茶叶,作为中华民族的传统饮品,承载着深厚的历史文化底蕴,同时也是世界范围内广泛消费的饮料。

茶叶的品质与口感,深受其生产过程中各种酶的影响。

随着生物技术的飞速发展,酶工程技术在茶叶生产中的应用逐渐显现出其独特的优势。

本文旨在综述近年来酶工程技术在茶叶方面的应用研究进展,以期为茶叶产业的科技创新和品质提升提供理论支持和实践指导。

本文将首先回顾酶工程技术在茶叶加工过程中的应用,包括茶叶发酵、杀青、揉捻等环节,分析酶对茶叶品质的影响及其作用机制。

随后,将重点介绍酶工程技术在茶叶功能成分提取和转化方面的研究进展,如茶多酚、儿茶素等关键成分的酶法提取和改性技术。

本文还将探讨酶工程技术在茶叶深加工产品开发中的应用,如茶饮料、茶食品等。

对酶工程技术在茶叶领域的应用前景进行展望,以期为未来茶叶产业的发展提供新的思路和方法。

通过本文的综述,我们期望能够为茶叶产业的科研工作者和从业人员提供酶工程技术在茶叶方面的应用研究进展的全面认识,为推动茶叶产业的科技创新和品质提升贡献力量。

二、酶工程技术在茶叶加工中的应用酶工程技术在茶叶加工中的应用,已经取得了显著的研究成果。

这些技术不仅优化了茶叶的生产过程,提高了茶叶的品质,还丰富了茶叶的种类和口感。

在茶叶的初制过程中,酶工程技术被广泛应用于提高茶叶的发酵程度。

通过调控茶叶中的酶活性,可以有效地控制茶叶的发酵速度和程度,从而得到不同风味和品质的茶叶产品。

例如,通过利用特定的酶制剂,可以促进茶叶中的多酚类物质氧化,加速茶叶的发酵过程,使茶叶呈现出独特的香气和口感。

酶工程技术还在茶叶的精制过程中发挥着重要作用。

在茶叶的精制过程中,酶可以用于改善茶叶的色泽、提高茶叶的香气和滋味。

例如,通过利用某些酶制剂处理茶叶,可以有效地降解茶叶中的色素物质,使茶叶的色泽更加鲜亮;同时,这些酶制剂还可以促进茶叶中香气物质的形成,使茶叶的香气更加浓郁。

除了上述应用外,酶工程技术还在茶叶的深加工中发挥着重要作用。

酶工程技术在茶叶方面的应用研究进展

酶工程技术在茶叶方面的应用研究进展

2021年2月Feb.2021第41卷第2期Vol.41,No.2热带农业科学CHINESE JOURNAL OF TROPICAL AGRICULTURE酶工程技术在茶叶方面的应用研究进展武珊珊1)丁其欢1)周雪芳2)马占霞1)杨雪梅1)邵宛芳1)苏建美1)(1滇西应用技术大学普洱茶学院云南省普洱市665000;2云南省绿色食品发展中心云南省昆明市650000)摘要综述近年来不同酶工程技术,如酶的化学修饰、固定化酶技术、生物酶传感器等在茶叶中天然酶的获取、各类茶的初加工、茶叶的深加工及茶叶检测等方面的国内外应用研究成果,并对酶工程技术在茶叶方面的应用发展前景进行展望。

关键词酶工程技术;茶叶初加工;茶叶深加工;茶叶检测;茶叶保鲜中图分类号S188+.3文献标识码ADOI :10.12008/j.issn.1009-2196.2021.02.019Application of Enzymes in Tea PreparationWU Shanshan 1)DING Qihuan 1)ZHOU Xuefang 2)MA Zhanxia 1)YANG Xuemei 1)SHAO Wanfang 1)SU Jianmei 1)(1College of Tea,West Yunnan University of Applied Sciences,Pu'er,Yunnan 665000,China;2Yunnan Green Food Development Center,Kunming,Yunnan 650000,China)Abstract The recent researches in application of enzymes in preparation of teas,such as tea natural enzyme extraction,tea preliminary processing and deep processing and tea detection were reviewed,based on which an outlook for application of enzymes in tea preparation in the future is put forward.Keywords enzyme ;tea preliminary processing ;tea deep processing ;tea detection ;preservation of tea酶工程是于1971年第一届国际酶工程会议上首次命名的一项技术,即将酶学基本原理与化学工程技术及基因工程有机结合形成的新型应用技术,是基因工程、蛋白质工程、细胞工程、发酵工程以外的现代五大生物工程技术之一,主要研究酶的生产纯化、固定化技术、酶分子结构的修饰与改造等,在工农业、医药卫生等领域广泛应用。

酶工程在茶饮料中的应用及研究进展

酶工程在茶饮料中的应用及研究进展

苹果中提取的酶制剂直接加工成速溶茶的制造工 艺,并取得了专利[24]。日本人竹元万寿美曾用简单 经济的方法制造富含茶黄素类的发酵茶饮料,并 获得了专利[25]。此外,多酚氧化酶还可用于茶饮料 生产过程中异味的去除、独特风味物质的形成、 解决浑浊现象等方面[26]。 1.4 β-葡萄糖苷酶
β-葡萄糖苷酶(Beta-Glucosidase,EC3.2.1.21) 又称 β-D-葡萄糖苷水解酶,它能水解结合于末端 非还原性的 β-D-葡萄糖键,同时释放出 β-D-葡 萄糖和相应的配基。香气形成机理研究结果表明, 内源糖苷酶对茶叶花香形成起着很重要的作用 。 [27] 比如茶叶中具有百合花香或玉兰花香味的芳樟醇、 具有玫瑰香气的香叶醇等,这些芳香物质的形成 是由糖苷类水解酶的作用而产生的。Su E. Z.等人对 固定化 β-葡萄糖苷酶在茶饮料的增香效果中得出 经固定化 β-葡萄糖苷酶处理的不同茶饮料,绿茶、 乌 龙 茶 和 红 茶 的 香 精 油 总 量 分 别 增 加 20.69% 、 10.30%、6.79%[28]。李平等人将黑曲霉 β-葡萄糖苷 酶应用于果汁、茶汁、果酒等食品的增香,显示 出较好的增香效果[29]。吕连梅用固定化的 β-葡萄糖 苷酶处理 5 种茶汤,其香气释放总量、醇系香气 总量都有不同程度的提高[30]。β-葡萄糖苷酶不仅对 茶叶增香有显著的效益、在果汁风味的改良和果 酒增香中也有广泛的应用[31]。 1.5 其他酶制剂
还有一些酶类物质可以应用在茶饮料的生产 加工中,葡萄糖氧化酶可作为护色酶应用于茶饮 料生产中,溶菌酶防止茶饮料因微生物污染而引 起的变质,用蛋白酶可降低浑浊度等。宁井铭等 对绿茶饮料护色技术的研究时指出加入一定量的 葡萄糖氧化酶,消耗以部分的游离氧,从而减小 的游离氧,可以使茶汤中茶多酚、维生素、芳香 成分等对氧敏感的物质变得稳定,因而起到了护 色作用[32]。茶饮料中的沉淀除了茶内含成分的作用 之外,也有可能是由细菌等微生物污染而引起的, 加入溶菌酶则可以起到溶菌防腐的作用[33]。茶汤中 添加蛋白酶可分解蛋白质,防止蛋白质的沉降, 提高茶饮料的澄清度[34]。

酶工程技术在茶叶深加工中的应用

酶工程技术在茶叶深加工中的应用

溶绿茶提取率30%左右,并具有保香效果好、冲溶后茶水口味鲜醇的优
点。
液态茶饮料
近几年来,茶饮料在我国饮料市场所占的地位越来越重要,茶饮料中多酚类 物质的存在及茶饮料注重茶叶的香气成分,存在如营养物质的损失、芳香物质 逸散、后混浊的产生等问题,酶工程技术可以较好的解决这些问题,给茶饮料 产业的发展提供技术性的革新。 研究人员将酶技术应用于茶饮料的澄清,其利用单宁酶在一定的条件下使得 茶汤中茶乳酪的形成量最少。而对于单宁酶处理后茶汤滋味容易变酸问题,研 究人员采用单宁酶与β-CD共处理茶汤,问题得以解决。将单宁酶与β-葡萄糖苷 酶进行共固定化处理,应用于茶饮料的除混和增香,效果很好,未经共固定化 酶处理的绿茶饮料低温时的浊度比经共固定化酶处理的要高, 贮藏3个月,经共固 定化酶处理的绿茶的澄清度一直很高,而未经共固定化酶处理的绿茶在60d后有 少许沉淀产生。 同时,考察单宁酶与β-葡萄糖苷酶进行共固定化对茶汤增香效果的影响,考 察对绿茶、红茶、乌龙茶3 类茶的香精油总量的影响,结果表明3 类茶的香精 油总量均有所增加,其中以绿茶的香精油总量增加最多,增长率达 20.69%,乌龙 茶和红茶分别为10.30%和6.79%。
参考文献
1、 王斌、江和源、张建勇王岩、黄永东 《酶工程技术在茶叶深加工中的
应用及展 望》 中国农业科学院茶叶研究所 2、武永福 张 宁 《酶在速溶绿茶浸提中的应用研究》陇东学院 3、刘晓东 汤周斌刘玉芳 杨 春 韦玲勇《利用现代生物技术提高茶叶品质》 广西桂林茶叶科学研究所 4、向珊 《茶叶加工中的外的应用 在液态茶饮料 加工上的应用
固体速溶茶
速溶茶的生产存在制率低,制成的茶饮料稳定性差。其加工是将茶
叶中内含物及各种芳香物质提取出来并使芳香物质最大程度的得到保持。 茶叶中的多酚类、氨基酸、咖啡碱、可溶性糖等有效成分在干茶里由于
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内P P O活 性 完 全被 迅 速 破 坏 。 而 温 度 太 高 时 ,酶 反 应 和 热 化
3 _ 3 研 究 外 源 酶 与 内源 酶之 间 的 相 互 关 系 ,各 种 外 源 酶 在 茶
叶 中 的作 用 及 内源 酶 对 外 源 酶 活性 的影 响 。 参 考加 工 中的 酶 学研 究 与应 用 U 】. 蚕 桑 茶 叶通
地 阐述 了茶 树 生 理 、遗传 中 各 种 酶 的 研 究 进 展 以及 绿 茶 加 工 中这 几 种酶 的变 化 规 律 和 对成 茶 品 质 的 影 响 。
1 茶树 生理 、遗 传 中 酶 的 研 究进 展 多 酚氧化 酶 ( P P O )和 过 氧 化 物 酶 ( P O D )是 茶 树 中两 种 极 为 重 要 的 氧 化 酶 。 由 于 它们 在 茶 树 生理 代 谢 过 程 以及 茶 叶
位 叶 片 的酶 活 性 并 与 对 照 相 比较 ,结 果 表 明 :稀 土 处 理 的茶
2 . 1 绿 茶 加工 过 程 中酶 的 变化 规 律 的 研 究 ( 1 )绿 茶 加 工 中鲜 叶 摊 放 过 程 ,酶 的变 化 规 律
树 过 氧 化物 酶 、多 酚 氧化 酶 在 第 1 叶位 的活 性 、总 活性 均 得 到 提 高 ,而在 第4 叶及 老 叶 部位 酶 活 性 与 对 照 相 比 ,未 呈现 规律 性 。 龚 志 华 等 在 对 衰 老 茶 树 进 行 重 修 剪 中 保 护 酶 的 活 性 研
外 形 等 品质 产 生重 要 影 响 。 不 同 的绿 茶 可 能 对 某 些 工 序 有 所
取 舍 ,但 一 般 都要 经过 鲜 叶 摊 放 、杀 青 这 两 道 工 序 。其 中 通 过 摊 放 过 程 ,酶 活 性 增 强 ,叶 绿 素 略 有 破 坏 ,儿 茶 素 轻 微 氧
化 ;而 杀 青 过 程 , 通过 高 温 使 多 酚 氧 化 酶 、过 氧 化 物 酶 等 酶 产生 变 性 ,及 时 阻 止 了 鲜 叶 中氧 化 酶 的活 动 。 因此 ,在 摊 放 过 程 中和 杀 青 初 期 ,酶 的作 用 对 绿 茶 品 质 特 征 形 成 是 很 关 键
( 6 . 5 ) ,对 焦 化 没 食 子 酸 和 儿 茶 酚 的亲 合 力 很 强 , 以及 受 氢 化
钾 、二 乙基 硫 代 氨 基 甲酸 钠 , L _ 胱 氨 酸 、2 一 巯 基 乙醇 、抗 坏 血 酸 的抑 制 呈 现 不 同 的强 度 。 近 年 来 ,赵 东 E l 4 ] 等 人 采 用n e s t P C R
的。
树 抗 寒 性 强 弱 之 间 无 明 显 规 律 可 循 ,S O D , C A T 活 性 、可 溶 性 蛋 白质 含 量 可 用 作 鉴 定 茶 树 抗 寒 性 强 弱 的 生 理 生 化 指 标 ,为 茶 树 抗 寒性 鉴定 提 供 实 用 指 标 。石 锡 林 等 以 安徽 农 业 大学 茶 业 系 品种 园的 安农 早 抗 1 号为材 料 ,稀 土 处 理 后 测 定 不 同 部
修 剪 处 理 与 对 照 的酶 活 性 差 异 达 到 极 显 著 水 平 ( P < 0 . 0 1 ) 。重 修 剪后 茶 树 S O D 活性提高C A T 活 性 下 降 ,P O D 活 性 变 化 既 与 叶 龄 有 关 又 与 品种 有 关 。S h i n H . K . 等 。 研 究了P P O的 最 佳 p H值
究 中 ,探 明 :重 修 剪 对 衰 老 茶 树 的 保 护 酶 活 性 影 响 较 大 ,重
鲜 叶 适 当摊 放 ,在 避 免 高 温 和 细 胞 组 织 机 械 损 伤 造 成 叶 片 红 变 的 前 提 下 ,酶 的 活 性 增 强 , 多 酚 氧 化 酶 ( 邻苯二 酚 ,
O 氧化 还 原 酶 ) ,开 始起 作 用 ,儿 茶 素 轻 微 氧化 ,减 轻 了 茶 汤
2 绿 茶 加 工 中 一 的 变化 及 对 茶 叶 品 质 的 影一
氧 化 物 酶 、B 一 糖 酵酶等 ,涉 及 到 它们 的 性 质 和 对 茶 叶 品 质 尤
其是 对 绿 茶 品质 形 成 的作 用 。 笔 者 收 集 了 近 十 多 年 以来 国 内外 研 究 的相 关 资 料 ,系 统
制造 中 对 多 酚 类 物 质 的氧 化 变 化 、茶 叶 品 质 的 形 成 均 起 关 键
作 用 ,因 而 早 在 本 世 纪 初 便 成 为 茶 叶研 究 的 热 门 领 域 。屠 幼 英 等 通 过 对 不 同茶 树 品 种 的P P 0 活 性 研 究 发 现 ,P P O 活 性 的 大 小 与 茶 类 的 适 制 性 有 关 , 同一 品种 的不 同部 位 其 活 力 也 有 差 异 ,其 根 系 的 酶 活 力 强 于 地 上 部分 器 官 ,新 梢 中 酶 活 力 以 嫩 茎最 强 。罗 军 武 等 一 选 用 正 常 栽 培 条件 ,不 同 抗 寒 性 品种 的 成 熟 叶 片 为 材 料 ,对 其 保 护 酶 类 超 氧 化 物 歧 化 酶 ( S O D ) 、 过 氧化 氢酶 ( C A T ) 、过 氧 化物 酶 ( P O D )活 性 以 及 可 溶 性 蛋 白
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综 述
茶树及其绿茶加工 中酶 的研究进展
林 郑 和
( 福 建省 农 业 科 学 院茶 叶 研 究 所
福 建福 安
3 5 5 0 0 0 )
摘 要 系统 地 阐述 了近 年 来 国 内外 在 茶树 活 体及 绿 茶加 工 中 多酚氧 化 酶 、过 氧 化 物 酶 、B 一 糖 苷 酶 等 酶 类 的研 究进 展 。
关键 词 茶 叶 ,多 酚氧 化 酶 ,过氧 化 物 酶 ,B 一葡 萄糖 苷 酶 ,绿茶
酶 是 一 种 复 杂 且精 巧 的 生 物 催 化 剂 ,具 有 催 化 效 率 高 、 专 一 性 强 的 特 征 , 是茶 叶与 化 学 界 一 直 关 注 的话 题 口 】 。 随 着
茶 树 代 谢 、制 茶 转 化 及 其 品质 有 关 的 重要 茶 叶 酶 类 不 断 被 发
今 后 开 展 茶 树分 子 育 种 奠 定 了 良好 的基 础 。 在 茶 树 的 品 种 鉴定 上L e l y v e l d L . J . V . 等 发 现 无 性 系 茶 树 的 叶 片 中P P O和P O D活 力及 其 制 成 品 的 茶 黄 素 、茶 红 素 含 量 均 比 实 生 茶 树 高 ,这 对 育 种 工 作 很有 指 导 意 义 。吴 伯 千 等 的 研 究 表 明 :耐 旱 茶树 具有 较 高 的 水 分 利 用 效 率 ,在 一 定 的水 分 胁 迫 范 围 内. 叶 片P O D 活 性 相 对 较 低 ,超 出 这 一 范 围则 维 持 相 对较 高 的P O D活性 。付 乾 堂 等 。 应 用 聚 丙 烯 酞胺 凝 胶 电泳 分 析 了 冬青 属 苦 丁 茶 的过 氧化 物 酶 同工 酶 酶 谱 ,分 析 结 果 表 明 , 所有 不 同 物 种 的供 试 材 料 均 有两 条 共 同 的 特 征 谱 带 ,同 时 又 有 丰 富 的 酶 带 多 态 性 , 同一 物种 的 不 同 种 质 材 料 的 过 氧 化 物 酶 同 工 酶 酶 谱 也 显 现 出一 定 的差 异 。 过 氧 化 物 酶 同工 酶 酶 谱 分 析 结果 可 以 作 为 判 定 不 同物 种 问 的 亲 缘 关 系 及 冬 青 属 苦 丁 茶 种 级 水 平 分 类 的依 据 之 一 。
的 苦 涩 ;蛋 白质 在 蛋 白 酶 的 作 用 下 ,分 解 成 氨 基 酸 , 与 儿 茶
素 氧 化 过 程 中产 生 的邻 醌 作 用 后 形 成 苹 果 香 的香 味 ;淀 粉 在 水 解 酶作 用 下 ,转 化 为糖 类 ,使 得 茶 汤 略带 甜 味 。
2 0 0 7  ̄
2期
质 、丙 二 醛 含 量 进 行 测 定 ,结 果 表 明P O D、丙 二 醛 含量 与 茶
绿 茶 加 工 是 塑 造 绿 茶 优 良品 质 的过 程 。 在 此 过 程 中 ,鲜 叶 中所 含 有 多 酚 氧 化 酶 、过 氧化 物 酶 、蛋 白酶 、B 一 糖 苷 酶 等 多 种 酶 类 作 用 于 鲜 叶 内 含 物 ,对 绿 茶 的 香 气 、 滋 味 、汤 色 、
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综 述
B 一 糖 苷 酶 是 目前 研 究 得 比较 多 的 一 类 水 解 酶 。 在茶 叶 中
究 发 展 新 工 艺 、开 发 合适 的 酶制 剂 有 很 重 要 的 指 导意 义 。
B 一 糖 苷 酶 位 于 细 胞 质 中 。在 绿 茶 加 工 的 开 始 阶 段 , 即鲜 叶 摊 放 和杀 青初 期 ,B 一 糖 苷 酶 水 解 鲜 叶 中 的 糖 苷 类 化 合 物 ,使 黄 酮 类 和 萜 烯 类 配 糖 体 部 分 解 离 下 来 ,这 对 于 绿 茶 的 香 气 、滋 味 、汤 色 都 是 很 有 利 的 。骆 耀 平 等 人 [ I 发 现 ,龙 井 茶 鲜 叶摊 放2 h ,B 一 糖 苷 酶 活性 达 到 最 高 水平 。 B 一 糖 苷 酶 的水 解 作 用 能 释放 萜 烯类 香 气 成 分 ,该 实 验 进 一 步 证 明 了通 过 鲜 叶 摊 放 处 理 ,利 用 水 解 酶 活性 对 增 进 绿 茶 品 质 的 重 要作 用 。 ( 2 )绿 茶 加工 中杀 青 过 程 ,酶 的 变化 规律 鲜 叶 在 摊 放 一 段 时 间 以 后 ,要 采 用 高 温 杀 青 以 迅 速 破 坏 酶 活性 。据 报 道 ¨ l ” ,多 酚 氧 化 酶 的 活 性 在 低 于3 5 ℃时随 着 温 度 的升 高 ,活 性 提 升 ,而 超 过 4 0 ℃ 以后 就 开 始 明显 降 低 ,另 外 ,在 超 过 5 5 — 6 5 ℃时 出 现 活 性 急 剧 下 降 的现 象 。而 过 氧 化 物 酶在3 5 ℃就 开 始 明显 下 降 ,4 5 ℃与 3 5 ℃比减 少 近2 7 %。 胡振长“ ] 等 对 不 同杀 青温 度 、不 同 杀 青 时 间 的 杀 青 效 果 研 究 表 明 :采 用 低 温 和适 温 杀 青 ,使 叶 温 达 到 8 0 ℃左 右 ,可 以 破 坏 大 部 分 的 酶 活 性 而 不 至 于 出 现 红 梗 红 叶 ,且 杀 青 叶 中 仍 残 留 着 2 0 % 左 右 的 酶 活 性 ;采 用 高 温 杀 青 ,使 叶 温 达 到 9 0 o C以上 时 ,叶
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