线粒体复合体Ⅴ活性检测试剂盒使用说明
细胞线粒体分离试剂盒经验
细胞线粒体分离试剂盒经验细胞线粒体是细胞内的一个重要器官，负责细胞内能量的生产和调控。
由于其结构特殊且与细胞核分离，为了研究线粒体的功能和机制，科学家们开发了一种称为细胞线粒体分离试剂盒的工具。
本文将介绍细胞线粒体分离试剂盒的使用经验，为科研工作者提供参考。
细胞线粒体分离试剂盒的选择非常重要。
市面上有多种品牌的试剂盒可供选择，但不同试剂盒的分离效果和操作方法可能有所不同。
因此，在选择试剂盒时，需要根据具体实验需求和文献研究，选择适合的试剂盒。
准备工作要做好。
在使用细胞线粒体分离试剂盒前，需要准备好所需的实验材料和设备。
常用的实验材料包括培养细胞、培养基、缓冲液等，而设备则包括离心机、显微镜、离心管等。
确保实验材料和设备的质量和干净程度对于细胞线粒体的分离至关重要。
然后，按照试剂盒说明书进行操作。
不同的试剂盒可能有不同的操作步骤，因此在使用前，务必仔细阅读试剂盒的说明书，并按照说明书的要求进行操作。
一般来说，分离线粒体的步骤包括细胞收集、细胞破碎、离心分离等。
在操作过程中，要注意操作的细节，严格控制温度和时间，以获得较好的分离效果。
要注意细胞线粒体的保存和处理。
细胞线粒体是一种易于受到氧化损伤的器官，因此在分离后，应尽快进行后续实验或储存。
常用的线粒体保存方法包括冷冻保存和低温保存。
在保存过程中，需要保持样品的完整性和纯度，避免细胞线粒体的损伤和污染。
对实验结果进行分析和解读。
细胞线粒体分离试剂盒的最终目的是获得纯净的线粒体样品，以进行后续的功能研究。
因此，在分离后，需要对线粒体样品进行质量检测和功能分析，如线粒体呼吸链活性、ATP产量等。
通过对实验结果的分析和解读，可以进一步揭示细胞线粒体的功能和机制。
细胞线粒体分离试剂盒是一种用于研究细胞线粒体的重要工具。
在使用试剂盒时，科研工作者需要选择适合的试剂盒，做好实验准备工作，按照说明书进行操作，并注意样品的保存和处理。
最后，对实验结果进行分析和解读，可以进一步深入了解细胞线粒体的功能和机制。
MTT简介及试剂盒说明
产品简介：1. MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的实验方法。
由于细胞活力与细胞数呈正相关，因此常常用来检测细胞的增殖情况。
MTT可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成结晶状的深紫色产物formazan。
在特定溶剂存在的情况下，可以被完全溶解。
然后通过酶标仪可以测定570nm波长附近的吸光度。
细胞增殖越多越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。
2. 本试剂盒采用了独特的Formazan溶解液配方，无需去除原有的培养液，可以直接加入Formazan溶解液溶解formazan。
从而避免了由于去除培养液时formazan被部分去除而引起的误差。
3. 本试剂盒背景低，灵敏度高，线性范围宽，使用方便提高了可靠性。
4. 本产品为500 次（5个96孔细胞培养板）操作。
产品内容：MTT染色液5mlFormazan溶解液55ml说明书1份保存条件：MTT染色液需-20℃避光保存；Formazan溶解液可以室温保存。
注意事项：1. 由于使用96孔板进行检测，如果你的细胞要养48 h或更长，建议不要吝啬96-孔板的四周边孔，这32个边孔不能使用，建议加入灭菌PBS以饱和中间64个孔的水分。
因为细胞培养过程中，边孔的水分蒸发很快，培养液及里面的药物会出现浓缩现象，细胞的状况就复杂了2. MTT溶剂在低温情况下会凝固，使用前请室温放置或20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。
3. MTT一般最好4ºC避光保存两周内有效，保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解，尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。
4. Formazan溶解液结冻或产生沉淀时可以37℃水浴孵育以促进溶解，并且必须在全部溶解并混匀后使用。
5. 孵育时，须避光6. MTT有致癌性，用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感。
抗坏血酸过氧化物酶(ascorbateperoxidase ,APX)活性测定试剂盒 使用说明
抗坏血酸过氧化物酶（ascorbateperoxidase ，APX）活性测定试剂盒使用说明微量法100T/96S产品简介：APX 是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一，也是抗坏血酸代谢的关键酶之一。
APX 具有多种同功酶，分别定位于叶绿体、胞质、线粒体、过氧化物和乙醛酸体，以及过氧化体和类囊体膜上。
APX 催化H 2O 2氧化AsA，是植物AsA 的主要消耗者。
APX 的活性直接影响到AsA的含量，在胁迫和解胁迫条件下，APX 与AsA 具有一定的负相关性。
APX 催化H 2O 2氧化AsA，通过测定AsA 的氧化速率，可计算得APX 活性。
试验中所需的仪器和试剂：低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、移液枪、研钵、冰和蒸馏水。
产品内容：试剂一：液体×2瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加3mL 蒸馏水充分溶解。
试剂三：液体×1支，4℃保存。
操作步骤：一、粗酶液提取：称取约0.1g 样品，加1mL 试剂一，冰上充分研磨，13000g 4℃离心20min，取上清液。
二、测定操作表：1.分光光度计预热30min 以上，调节波长到265nm，用蒸馏水调零。
2.试剂一在25℃中预热30min 以上。
3.空白管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20µL 蒸馏水、140µL 预热的试剂一、20µL试剂二和20µL试剂三，迅速混匀后在265nm测定10s和130s光吸收。
4.测定管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20µL上清液、140µL预热的试剂一、20µL试剂二和20µL试剂三，迅速混匀后在265nm测定10s和130s光吸收。
APX活力计算：a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下（1）按蛋白浓度计算活性单位定义：每毫克蛋白每分钟氧化1µmol AsA为1U。
全血线粒体DNA萃取试剂盒产品说明书中文版
全血线粒体DNA萃取试剂盒产品说明书（中文版）主要用途全血线粒体DNA萃取试剂是一种旨在通过化学溶解纯化血白细胞、物理或化学破膜及离心处理获得线粒体，然后进一步生物酶处理以获得高质量的线粒体DNA的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种动物血细胞中的线粒体核酸成分处理。
用于后续的杂交、克隆、酶切、PCR 分析等。
产品即到即用，操作简易，性能稳定，无核酶污染，萃取纯度和产量皆高。
技术背景线粒体细胞器的研究是现代细胞生物学的最重要的课题之一。
线粒体成为生物衰老、古生物、细胞凋亡、肿瘤、HIV、老年痴呆症、糖尿病、肌肉疾病等研究的主要对象。
线粒体DNA的分离和定量以及突变分析是研究中必不可少的。
产品内容溶血液（Reagent A）毫升清理液（Reagent B）毫升裂解液（Reagent C）毫升净化液（Reagent D）毫升强化液（Reagent E）毫升保存液（Reagent F）毫升破膜液（Reagent G）毫升去干扰液（Reagent H）微升酶解液（Reagent I）微升萃取液（Reagent J）毫升浓缩液（Reagent K）毫升助沉液（Reagent L）微升沉淀液（Reagent M）毫升纯化液（Reagent N）毫升缓冲液（Reagent O）毫升产品说明书1份保存方式保存净化液（Reagent D）、去干扰液（Reagent H）、酶解液（Reagent I）、萃取液（Reagent J）和助沉液（Reagent L）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于核酸操作的容器15毫升锥形离心管：用于线粒体初步制备的容器50毫升锥形离心管：用于血细胞处理的容器涡旋震荡仪：用于混匀4℃微型台式离心机：用于沉淀细胞和核酸4℃超速离心机：用于分离细胞器成分DOUNCE匀浆器：用于裂解细胞58℃恒温水槽：用于孵育反应物实验步骤一、白细胞分离实验开始前，室温预热血溶液（Reagent A），同时4℃预冷清理液（Reagent B）。
PH0534 CCK8试剂盒操作手册
注 4: 细胞的种类不一样，形成的 Formazan 的量也不一样。如果显色不够的话，可以继续培养，以确认最佳条件。特别是血液细胞形成 的 Formazan 很少，需要较长的显色时间（5-6 小时）。 注 5: 如果颜色不均匀的话，可以轻轻敲击培养板以混匀。 注 6: 建议采用双波长进行测定，检测波长 450-490nm，参比波长 600-650nm。
■ Q & A（常见问题与解答）：
Q1.设定参比波长的目的是什么？必须要设定吗？ A1.不一定要设定。 CCK 试剂在参比波长处没有吸光度。设定参比波长的目的是为了去除由于样品浑浊所带来的吸收。 Q2.如何设定空白对照？ A2.可以在不含细胞，含有药物的培养基中加 CCK，测定 450nm 的吸光度最为空白对照。 Q3.在做加药实验时，药物对测定是否有影响？如何解决？
1
参考图 1
★简单！安全！重现性好！ 无需有机溶剂和放射性同位素，步骤少，无损失，结果准确
CCK 法
还原后的 Formazan 是水溶性的
1
（不需要溶解）
2
重现性好
3
操作简单
4
测定波长：450～490nm
5
为 1 瓶溶液，无需预制，即开即用
MTT 法 还原后的 Formazan 是非水溶性的
（需要加有机溶剂溶解） 重复性差 操作繁琐
Q4.不更换培养基加 CCK 试剂，有没有问题？ A4.一般没有问题。但是如果培养基里有氧化还原性物质的话，有可能会产生误差，必须更换其他培养基。我们发现以下培养基会影响测 定：
培养基
空白吸收
IMDM
1.0
McCoy/s
0.3
Q5.哪些物质会影响 CCK 的测定？ A5.当有还原性物质存在时会影响 CCK 的测定，增加 OD 值；在有氧化性物质存在时会抑制测定反应的发生，减小 OD 值；在有酚红存在 的情况下，会增加空白吸收，但不影响测定，扣除空白吸收即可；血清不影响测定。
纯化线粒体呼吸控制率RCR定量检测试剂盒产品说明书
纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂是一种旨在通过极谱法检测系统（polarographic system）测定新鲜活体线粒体在ADP存在（III态呼吸）与否（IV态呼吸）的情况下溶解氧（dissolved oxygen）的消耗差异，即呼吸控制率（RCR），以评价线粒体结构和功能完整性以及氧化磷酸化效率的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
可以被用于线粒体生理功能和药物作用机制等的研究。
产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。
技术背景线粒体是细胞呼吸链和氧化磷酸化的中心。
电子传递和ATP合成通过质子梯度偶联成一体。
线粒体结构完整，功能正常，底物充分，电子传递形成的质子梯度不断被消耗，电子得以顺畅传递，氧气快速消耗，其耗氧率大，为III态呼吸。
ADP耗竭，质子梯度不能消耗，阻碍电子传递，氧气消耗减少，为IV态呼吸。
呼吸控制率（respiratory control ratio或respiratory control index；RCR），又称呼吸调节比，是指III态（加入ADP）的呼吸速率与IV态（ADP耗竭）的呼吸速率之比。
正常线粒体的RCR为3至10：RCR降低意味着线粒体ATP 合成功能损伤，呼吸障碍；RCR增高意味着细胞活动旺盛，代谢加快。
产品内容介质液（Reagent A）50毫升IV态底物液（Reagent B）400微升III态底物液（Reagent C）400微升产品说明书1份保存方式保存在－20℃冰箱里，有效保证6月用户自备CLARK氧电极仪：用于测定溶解氧浓度实验步骤实验开始前，制备好新鲜的线粒体置于冰槽里备用；同时将－20℃冰箱里的试剂融化，并预热氧电极仪到25℃。
然后进行下列操作。
1．加入2.5毫升介质液（Reagent A）到反应玻璃槽2．使用微型磁力子搅拌，充分混匀3．密封反应槽4．开始记录氧浓度：起始饱和氧浓度值为0.240微摩尔分子氧/毫升（25℃）5．持续记录1分钟后，注射加入20微升待测的线粒体（总量2毫克）（注意：氧浓度可能瞬时变化）6．持续记录1分钟后，注射加入20微升IV态底物液（Reagent B）――开始IV态呼吸（注意：参见注意事项9）7．持续记录2分钟：出现氧浓度缓慢下降8．继续注射加入20微升III态底物液（Reagent C）（注意：氧浓度在10秒钟内开始下滑）――开始III 态呼吸（注意：参见注意事项9）9．持续记录直至出现线性下行斜线出现拐点10．分别测算III态呼吸速率和IV态呼吸速率：氧浓度降低值÷实际时间（分钟）11．计算呼吸控制率：III态呼吸速率÷IV态呼吸速率注意事项1．本产品为20次操作2．操作时，须戴手套3．确保反应玻璃槽洁净，密闭，以免氧气流入4．线粒体样品须新鲜制备，建议不要冻存；制备的线粒体膜须完整，非常重要；建议使用线粒体分离试剂盒－GMS10006.15．注射加入反应槽时，避免气泡和空气注入6．避免乙醇污染；乙醇增加氧浓度；如果底物或抑制剂须使用乙醇溶解，则加注10微升7．保持反应槽温度恒定，温度降低，氧浓度升高8．反应液充分混匀，和环境氧保持平衡9．加注IV态底物液（Reagent B）和III态底物液（Reagent C）前，须充分冻融和混匀10．严格按照规定加注试剂，切莫增加加注试剂容量11．本公司提供系列线粒体检测试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定检测敏感。
线粒体呼吸链复合物I活性比色法定量检测试剂盒产品说明书
线粒体呼吸链复合物I活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途线粒体呼吸链复合物I（NADH－辅酶Q还原酶）活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成辅酶Q同功类似物和特异性抑制剂，通过反应系统测定样品中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）氧化后峰值的降低，即采用比色法测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
其适合于各种纯化线粒体样品（动物、人体、酵母）以及细胞或组织裂解悬液样品的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）－辅酶Q还原酶的特异性活性检测。
其用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。
产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。
技术背景线粒体呼吸链复合物I，通常称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸辅酶Q还原酶（reduced nicotinamide adenine dinucleotide coenzyme Q reductase；NADH-CoQ reductase），又称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶（reduced nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase；NADH dehydrogenase），是线粒体电子传递链中最大的结构成分：含有30至40多个多肽结构。
其特征性的酶活性是鱼藤酮敏感的NADH－辅酶Q还原酶（NADH:Q Reductase）。
复合物I催化线粒体内电子由供体NADH传递到内膜上辅酶Q受体（泛醌；ubiquinone）的能量转移反应，为整个呼吸链反应系统的第一步。
基于辅酶Q底物，在鱼藤酮存在与否的情况下，通过NADH－辅酶Q还原酶的催化，转化成还原型泛醌（CoQH2），同时还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），在分光光度仪下产生吸收峰值的变化（340nm 波长），由此定量测定NADH －辅酶Q还原酶的特异活性。
NAD-NADH比率检测试剂盒说明书
NAD/NADH比率检测试剂盒关键词：NADH，NAD+，Nicotinamide adenine dinucleotide，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NADH，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，还原态，还原型辅酶Ⅰ。
N指烟酰胺，A指腺嘌呤，D 是二核苷酸。
葡萄糖代谢时直接经代谢所产生的ATP是十分的少的，而代谢产生的NADH 或FADH2经由一个电子传递与氧化磷酸反应可产生大量的ATP。
NADH分子是线粒体中能量产生链中的控制标志物。
NADH水平的上升指示代谢失衡的出现。
监视NAD/NADH的氧化还原状态是表征活体内线粒体功能的最佳参数。
紫外光可以在线粒体中激发NADH产生荧光，用来监测线粒体功能。
一般来说，涉及到氧化还原的反应都用得到，比如呼吸作用，光合作用，等等氨会抑制呼吸过程中的电子传递系统，尤其是NADH。
因此NAD/NADH水平的监控是能量传递、细胞核组织氧化还原态等研究的主要兴趣点。
有没有一款可以同时检测，NAD+,NADH，以及NAD+/NADH比率，这三个指标的试剂盒呢？艾美捷科技特向您推荐，已被广泛使用，发布文章不计其数的高品质试剂盒。
*样品通过NAD萃取，同时检测（NAD+NADH）与（NAD）的结果，相减计算得出NADH 含量，以及NAD/NADH的比率。
原理：Amplite 比色法NAD/NADH 比率试剂盒，提供一个比色法原理的检测培养细胞的总NAD/NADH，和NAD/NADH ratio的方法。
在这个实验中，裂解液中NAD可以被NAD萃取液提取，通过酶反应被转化为NADH，然后利用NADH探针反应，产生黄色染料，此染料可以在460nm处测吸收峰，或者加入增强剂后，可以检测635nm吸收峰。
染料产生颜色与细胞裂解液中NAD 或者NADH的浓度呈正比。
《卓越的标准曲线》《发表文章结果：Ren, T., et al. Oncogene 36.42(2017).》引用文献Norisoboldine, a natural AhR agonist, promotes Treg differentiation and attenuates colitis via targeting glycolysis and subsequent NAD+/SIRT1/SUV39H1/H3K9me3 signaling pathwayAuthors: Qi Lv, Kai Wang, SimiaoQiao, Ling Yang, Yirong Xin, Yue Dai, Zhifeng WeiJournal: Cell death & disease (2018): 258Stochastic expression of lactate dehydrogenase A induces Escherichia coli persister formationAuthors: Naoki Yamamoto, RinoIsshiki, Yuto Kawai, Daiki Tanaka, TetsushiSekiguchi, Shinya Matsumoto, Satoshi TsunedaJournal: Journal of Bioscience and Bioengineering (2018)Celastrol attenuates angiotensin II mediated human umbilical vein endothelial cells damage through activation of Nrf2/ERK1/2/Nox2 signal pathway Authors: Miao Li, Xin Liu, Yongpeng He, Qingyin Zheng, Min Wang, Yu Wu, Yuanpeng Zhang, Chaoyun WangJournal: European Journal of Pharmacology (2017): 124--133Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine FermentationAuthors: Fei Yang, Caitlin Heit, Debra L InglisJournal: Fermentation (2017): 61Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferaseAuthors: Min Ling, Peixin Huang, Shamima Islam, Daniel P Heruth, Xuanan Li, Li Qin Zhang, Ding-You Li, Zhaohui Hu, Shui Qing YeJournal: Cell & Bioscience (2017): 27MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cellsAuthors: T Ren, H Zhang, J Wang, J Zhu, M Jin, Y Wu, X Guo, L Ji, Q Huang, H YangJournal: Oncogene (2017)Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferaseAuthors: Li Q Zhang, Leon Van Haandel, Min Xiong, Peixin Huang, Daniel P Heruth, Charlie Bi, Roger Gaedigk, Xun Jiang, Ding-You Li, Gerald Wyckoff Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway Authors: Kazuhiro Saihara, Ryosuke Kamikubo, Kazuto Ikemoto, Koji Uchida, MitsuguAkagawaJournal: Biochemistry (2017)Resveratrol attenuates excessive ethanol exposure induced insulin resistance in rats via improving NAD+/NADH ratioAuthors: Gang Luo, Bingqing Huang, Xiang Qiu, Lin Xiao, Ning Wang, Qin Gao, Wei Yang, Liping HaoJournal: Molecular Nutrition & Food Research (2017)A Snapshot of the Plant Glycated Proteome STRUCTURAL, FUNCTIONAL,AND MECHANISTIC ASPECTSAuthors: Tatiana Bilova, Elena Lukasheva, Dominic Brauch, Uta Greifenhagen, GaganPaudel, Elena Tarakhovskaya, NadezhdaFrolova, Juliane Mittasch, Gerd Ulrich Balcke, Alain TissierJournal: Journal of Biological Chemistry (2016): 7621--7636AMPK activation protects cells from oxidative stress-induced senescence via autophagic flux restoration and intracellular NAD+ elevationAuthors: Xiaojuan Han, Haoran Tai, Xiaobo Wang, Zhe Wang, Jiao Zhou, Xiawei Wei, Yi Ding, Hui Gong, Chunfen Mo, Jie ZhangJournal: Aging cell (2016): 416—427艾美捷科技与国内外优秀的生物试剂供应商保持着密切的合作关系，目前已成为众多国际知名品牌的中国总代理或一级代理，主要包括：Abbkine、Merck Millipore、Origene、AAT Bioquest、Cayman Chemical、Abnova 、Biovision、ProSpec、Hycult Biotech 、Equitech-Bio、Trevigen、Alomone Labs、Epigentek、ImmunoReagents 、Jackson、SouthernBiotech、US Biological 、Caisson Labs等，可以在第一时间为用户提供最前沿的专业资讯、完备的产品及物流服务。
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线粒体复合体Ⅴ活性检测试剂盒使用说明
分光光度法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
货号:BC1440
规格：25管/12样
产品内容：
试剂一：25mL×1瓶，-20℃保存；
试剂二：25mL×1瓶，-20℃保存；
试剂三：1mL×1瓶，-20℃保存；
试剂四：粉剂×1支，-20℃保存；临用前每支加入1.3mL蒸馏水，充分溶解备用，用不完的
试剂仍-20℃保存；
试剂五：6mL×1瓶，4℃保存；
试剂六：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入3mL蒸馏水，充分混匀；溶解后4℃保存一周；试剂七：粉剂×1瓶,4℃保存；临用前加入10mL蒸馏水，充分混匀；溶解后4℃保存一周；试剂八：粉剂×1瓶,4℃保存；临用前加入10mL蒸馏水，充分混匀；溶解后4℃保存一周；试剂九：液体10mL×1瓶，室温保存。
定磷试剂的配制：按H2O:试剂七:试剂八:试剂九=2:1:1:1的比例配制，配好的定磷试剂应为浅黄色。
若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染（请根据需要，用多少配多少）。
注意：配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器，或者一次性塑料器皿，以避免磷污染。
产品简介：
线粒体复合体Ⅴ又称F1F0-ATP合酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，由F1和F0两个亚单位组成。
该酶利用呼吸链产生的质子电化学梯度催化ATP合成，也可逆过程水解ATP。
此外，复合体Ⅴ还存在于叶绿体、异养菌和光合细菌中。
复合体Ⅴ是线粒体氧化磷酸化和叶绿体光合磷酸化合成ATP的关键酶。
复合体Ⅴ水解ATP产生ADP和Pi，通过测定Pi增加速率来测定复合体Ⅴ活性。
试验中所需的仪器和试剂：
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
(1)准确称取0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10uL试剂三，用冰浴匀浆
器或研钵匀浆。
(2)将匀浆600g，4℃离心5min。
(3)弃沉淀，将上清液转移至另一离心管中，11000g4℃离心10min。
(4)上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白，可用于测定从线粒体泄露的复合体Ⅴ（此步可选做）。
(5)步骤（4）中的沉淀即为线粒体，加入800uL试剂二和8uL试剂三，超声波破碎（冰浴，
功率20%或200W，超声3秒，间歇10秒，重复30次），用于复合体Ⅴ酶活性测定。
二、测定步骤：
1、酶促反应
试剂名称（μL）对照管测定管
试剂四5050
试剂五200200
样本250
混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）准确水浴30min
试剂六100100
样本250
混匀，4000g，25℃离心10min，取上清液
2、定磷
上清液250250
定磷试剂12501250
混匀，室温静置10min左右，在660nm处读取A测定管和A对照管，计算ΔA=A测定管-A对照管。
三、复合体Ⅴ活性计算
标准条件下测定的回归方程为y=1.2487x+0.0361；x为标准品浓度（mmol/L），y为A值。
1、组织中复合体Ⅴ活性的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟产生1nmol无机磷定义为一个酶活性单位。
复合体Ⅴ活性（nmol/min/mg prot）=[(ΔA-0.0361)÷1.2487×V反总×106]÷(V样×Cpr)÷T
=64×(ΔA-0.0361)÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
（2）按样本鲜重计算
单位的定义：每g组织每分钟产生1nmol无机磷定义为一个酶活性单位。
复合体Ⅴ活性（nmol/min/g鲜重）=[(ΔA-0.0361)÷1.2487×V反总×106]÷(W×V 样÷V样总)÷T=51.7×(ΔA-0.0361)÷W
（3）按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟产生1nmol无机磷定义为一个酶活性单位。
复合体Ⅴ活性（nmol/min/104cell）=[(ΔA-0.0361)÷1.2487×V反总×106]÷(500×V样÷V样总)÷T=0.103×(ΔA-0.0361)
V反总：反应体系总体积，6×10-4L；V样：加入样本体积，0.25mL；V样总：加入提取液体积，0.808mL；T：反应时间，30min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。