酿酒酵母载体质粒
酵母载体
500 元 酵母菌
500 元 400 元
宿主菌
1600 元 Clontech，6 个质粒，YBZ
1000 元 酵母表面展示系
质粒（2ug）或甘油 菌（500ul）
质粒（2ug）或甘油 菌（500ul）
质粒（2ug）或甘油 菌（500ul）
质粒（2ug）或甘油 菌（500ul）
质粒（2ug）或甘油 菌（500ul） 质粒（2ug）或甘油 菌（500ul） 甘油菌（500ul） 质粒（2ug）或甘油 菌（500ul） 质粒（2ug）或甘油 菌（500ul）
酵母单杂交系 统
pGBKT7
pGADT7
pCL1
pGBKT7-53
pGADT7-T
pGBKT7-Lam
宿主菌 AH109
宿主菌 EBY100 酵母三杂交系 统 pYD1 （Invitrogen）
质粒（2ug）或甘油 菌（500ul）
质粒（2ug）或甘油 菌（500ul）
质粒（2ug）或甘油 菌（500ul）
酿酒酵母表达质粒
酿酒酵母表达质粒
酿酒酵母宿主菌
毕赤酵母表达质粒
毕赤酵母表达质粒
毕赤酵母表达质粒
毕赤酵母表达质粒
毕赤酵母表达质粒
毕赤酵母表达质粒
毕赤酵母表达质粒
毕赤酵母表达质粒
毕赤酵母表达质粒 毕赤酵母宿主菌 毕赤酵母宿主菌 毕赤酵母宿主菌 毕赤酵母宿主菌 毕赤酵母宿主菌 毕赤酵母宿主菌 毕赤酵母宿主菌 毕赤酵母宿主菌
产品包装 质粒（2ug）或甘油 菌（500ul） 质粒（2ug）或甘油 菌（500ul） 质粒（2ug）或甘油 菌（500ul） 质粒（2ug）或甘油 菌（500ul） 质粒（2ug）或甘油 菌（500ul） 质粒（2ug）或甘油 菌（500ul） 质粒（2ug）或甘油 菌（500ul） 质粒（2ug）或甘油 菌（500ul） 质粒（2ug）或甘油 菌（500ul） 质粒（2ug）或甘油 菌（500ul） 质粒（2ug）或甘油 菌（500ul） 质粒（2ug）或甘油 菌（500ul） 质粒（2ug）或甘油 菌（500ul） 质粒（2ug）或甘油 菌（500ul） 质粒（2ug）或甘油 菌（500ul） 质粒（2ug）或甘油 菌（500ul） 质粒（2ug）或甘油 菌（500ul） 甘油菌（500ul） 甘油菌（500ul） 甘油菌（500ul） 甘油菌（500ul） 甘油菌（500ul） 甘油菌（500ul） 甘油菌（500ul） 甘油菌（500ul）
12-198 酿酒酵母EBY100菌种使用手册v1点0
天净沙系列CAT#:12-198低温运输和-80℃保存酿酒酵母EBY100 Saccharomyces cerevisiae EBY100使用手册V1.0 北京天恩泽基因科技有限公司北京市海淀区上地信息路26号北京市留学人员海淀创业园中关村创业大厦506 网址：；电话：400-6765278；电邮：order@产品及特点EBY100是酿酒酵母菌株，属于真核细胞，具有氨苄和卡那霉素抗性。
质粒转化条件为电转化，应用于酵母表面展示。
此菌株必须生长在营养丰富的培养基中，例如YPD培养基，无法在minimal media中生长。
在GAL1启动子的作用下，此菌株能够表达AGA1基因。
EBY100的配套载体是pYD1载体。
此菌株的基因型如下：MATα ura3-52 trp1 leu2∆1 his3∆200pep4::HIS3 prb1∆1.6R can1 GAL (pIU211: URA3)。
规格及成分成份编号热封袋包装酿酒酵母EBY100 12-198 1 mL使用手册1份运输及保存低温运输，-80℃保存，有效期一年。
自备试剂YPD培养基、TE缓冲液（pH 7.5）、乙酸锂、DTT、山梨醇、超纯水等使用方法本手册提供一个质粒转化酵母的电转化方法，供参考。
一、感受态细胞制备1.挑一环酵母菌接种于5 mL YPD培养基中，30℃、250-300 rpm培养过夜；2.取适量的过夜培养液分别接种于两瓶50 mL YPD培养基中，30℃、250-300 rpm培养约16-18小时（OD：1.3-1.5）；3.于4℃，4000 g离心收集菌体，用25 mL冰浴的无菌水洗涤一次后，细胞用10 mL冰浴的无菌水重悬，可换成较小的离心管；4.加入1 mL的10×TE缓冲液（pH 7.5），摇晃均匀，再加入1 mL 10×乙酸锂，旋转摇匀，于30℃轻轻摇动45分钟；5.再加入0.4 mL 1 mol/L DTT，并同时旋转摇动，于30℃轻轻摇动15分钟；6.于4℃，4000-6000 g离心，弃上清（用枪吸），再用25 mL冰浴的无菌水洗涤后4℃离心，收集菌体；7.用2.5 mL冰冷的1 mol/L山梨醇重悬细胞，离心收集菌体，弃上清（用枪吸）；8.每管用100 uL 1 mol/L的山梨醇溶解，分装于EP管中（80 uL/管），于-70℃冰箱保存。
delta位点 酿酒酵母
delta位点酿酒酵母
酿酒酵母的delta位点是一种基因组重复率较高的区域，通常包含多个反向重复序列。
这些重复序列可以转录为RNA，并被逆转录酶识别和逆转录为双链DNA拷贝，插入到靶位点。
在酿酒酵母中，delta位点的高拷贝插入可以提高外源基因的表达量。
具体来说，delta位点可以被视为一种载体，用于构建多拷贝表达型整合型表达质粒。
通过将外源基因插入到delta位点高拷贝插入的细胞中，可以实现外源基因的高效表达。
这为代谢工程、合成生物学和基因治疗等领域提供了新的工具和策略。
然而，值得注意的是，酿酒酵母的delta位点也存在一些潜在的风险和限制。
例如，由于delta位点的重复序列结构，可能会导致染色体不稳定性和重组率增加。
此外，由于delta位点的插入会导致基因组扩增，可能会对细胞的生长和代谢产生负面影响。
因此，在使用酿酒酵母的delta位点进行基因表达时，需要综合考虑各种因素，并进行充分的实验验证和安全性评估。
同时，对于delta位点的应用和潜在风险，还需要进一步的研究和探索。
酿酒酵母ARS304及其侧翼序列重组质粒的构建与鉴定
酿酒酵母ARS304及其侧翼序列重组质粒的构建与鉴定摘要：采用PCR扩增酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）Ⅲ号染色体ARS304序列（S1）及以ARS304为核心上下游延伸1 kb的侧翼序列（S2），并将目的片段分别构建到酵母整合载体pRS405中，获得重组质粒pRS1和pRS2。
质粒电转化试验发现重组质粒pRS2的转化率大于pRS1，说明ARS304侧翼序列能显著提高ARS304在酿酒酵母中自主复制的能力。
关键词：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）；自主复制序列（ARS）；重组质粒；复制起始活性Construction and Identification of Recombinant Plasmids of Saccharomyces cerevisiae ARS304 and Its Flank SequenceAbstract：ARS304 gene（S1）and its flank sequence（S2）of Saccharomyces cerevisiae were cloned by PCR，and then connected into the shuttle vector pRS405. Recombinant plasmids pRS1 and pRS2 were successfully constructed and used for electroporation of S. cerevisiae. Results showed that the electricity transformation rate of pRS2 was higher than that of pRS1，indicating that flank sequence could improve the autonomously replicating activity of ARS304 in S. cerevisiae.Key words：Saccharomyces cerevisiae；autonomously replicating sequence （ARS）；recombinant plasmids；replication origins activity复制起始的调控涉及细胞周期的调控、基因扩增、肿瘤发生等重大生物学问题，是真核生物基因表达调控的重要内容。
基因工程：第四章-酵母基因工程
100-1400bp
UAS：上游激活序列 URS：上游阻遏序列
TATA盒：富含AT DAS：下游激活序列
酿酒酵母表达系统常用启动子：
① 糖酵解途径中关键酶的强启动子，受 葡萄糖诱导：
甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(GAPDH) 磷酸甘油激酶基因(PKG) 乙醇脱氢酶基因(ADH)
② 半乳糖激酶启动子(GAL1)
泛素降解途径衰减的酿酒酵母
UBI4缺陷型： 在酿酒酵母菌中，泛素主要由UBI4基因
表达。 UBI4突变株能正常生长，但细胞内游离
泛素分子的浓度比野生株低得多，是外源基 因表达的理想受体。
UBA1缺陷型：
UBA1编码泛素激活酶E1，是一种看 家基因。
UBA1突变株是致死性的，但其等位 基因缺陷是非致死性的，且能削弱泛素介 导的蛋白降解。
甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH) 磷酸甘油激酶(PKG) 乙醇脱氢酶(ADH)
✓它们对应于异常活跃的高组分tRNA, 而低 组分tRNA基本上不会被使用。
✓酵母tRNA与外源基因的密码子的不匹配性 ，影响了异源mRNA的翻译速率，更重要的 是降低了mRNA的结构稳定性。
酵母蛋白质的分泌运输机制
3、提高外源蛋白表达产率的突变宿主菌
能提高外源基因表达或分泌的突变类型
突变类型 生物效应 ssc1 改善外源蛋白分泌 ssc2 提高外源基因表达 rgr1 提高外源基因表达 ose1 提高外源基因表达 ssc11 改善外源蛋白分泌 rho 提高外源基因表达
作用位点 钙离子依赖型ATP酶 转录后加工 转录水平 转录水平 羧肽酶Y 转录水平
UBC4-UBC5双突变型：
UBC4-UBC5双突变型能大幅度削弱泛
素介导的蛋白降解。
质粒的酿酒酵母转化实验报告
酿酒酵母转化实验报告摘要本文介绍了酿酒酵母转化实验的实验步骤和实验结果。
首先，介绍了实验所使用的材料和器材，以及实验的准备步骤，包括菌株的提取、培养基的种植和抗生素的添加等。
其次，介绍了质粒转化的步骤，包括提取质粒、构建质粒等。
最后，介绍了实验结果，包括质粒转化后酵母菌株的抗性检测和质粒转化效率的估算等。
关键词：酿酒酵母，质粒转化，抗性检测，质粒转化效率1. 实验简介酿酒酵母转化实验是一种常用的基因工程实验，它是将外源基因转入酿酒酵母中，以改变酵母的生理特性和功能的一种方法。
通过质粒转化，可以将外源基因转入酿酒酵母，从而改变酵母的生理特性和功能，为酿酒酵母的改良和研究提供了便利。
2. 实验材料和器材（1）材料：酿酒酵母菌株，质粒，抗生素，营养培养基，细胞溶解剂；（2）器材：离心机，离心管，烧杯，热水浴，烧杯架，离心瓶，烧杯支架，温度控制器，离心管支架，摇床，培养箱等。
3. 实验步骤（1）菌株提取：将酿酒酵母菌株放入营养培养基中，摇床培养24小时，然后用离心机离心提取菌液；（2）培养基种植：将菌液滴入营养培养基中，放入培养箱培养24小时；（3）抗生素添加：将抗生素添加到营养培养基中，放入培养箱培养24小时；（4）质粒提取：将质粒放入烧杯中，加入细胞溶解剂，热水浴溶解，然后用离心机离心；（5）构建质粒：将质粒和菌液混合，放入烧杯中，加入CaCl2，放入热水浴37℃反应30min，然后用离心机离心；（6）质粒转化：将离心后的质粒液滴入培养基中，放入培养箱培养24小时；（7）抗性检测：将质粒转化后的酵母菌株放入营养培养基中，添加抗生素，放入培养箱培养24小时，观察菌株是否有抗性。
4. 实验结果（1）质粒转化后酵母菌株具有抗性：质粒转化后的酵母菌株在抗生素的作用下仍能够正常生长，表明质粒转化后的酵母菌株具有抗性。
（2）质粒转化效率估算：通过对质粒转化后的酵母菌株的抗性检测，估算出质粒转化的效率为85%。
5. 结论通过本实验，我们可以得出结论：酿酒酵母质粒转化实验成功，质粒转化后的酵母菌株具有抗性，质粒转化效率估算为85%。
木糖醇脱氢酶基因高拷贝表达载体构建及在酿酒酵母中的表达
木糖醇脱氢酶基因高拷贝表达载体构建及在酿酒酵母中的表达摘要：木质纤维素的主要组分是纤维素（20％-30％），其次是半纤维素（20％一30％）和木质素（10％-25％），其中木糖是半纤维素的主要组成部分，以木糖为底物转化乙醇的研究，是乙醇途径工程研究的热点之一。
关键词：木糖醇脱氢酶基因；酿酒酵母一、酵母表面展示系统酿酒酵母为单细胞真核微生物，细胞壁主要由甘露糖蛋白和葡聚糖组成。
细胞壁分为两层，内层由葡聚糖与少量几丁质组成，提供细胞壁的强度；外层由甘露糖蛋白组成，决定了大多数细胞的表面特性；甘露糖蛋白共价连接到内层的葡聚糖上，连接方式主要分为两种类型：一种是通过非共价键松散连接构成细胞壁，能够用SDS提取；另一种甘露糖蛋白通过葡聚糖酶消化细胞壁的葡聚糖层获得，它不能用SDS提取。
絮凝素是一种在絮凝中起重要作用的酵母细胞壁蛋白，拥有高水平糖基化而形成杆状结构，因此能够覆盖长达300nm的距离，与酵母细胞壁的厚度相当。
具有1200个氨基酸残基的重复区域，可以设计不同长度的锚定点。
包含有分泌信号、絮凝功能区，GPI锚定粘着信号和膜锚定区，其中絮凝功能区接近N 末端，能够识别并且以非共价键连接到细胞壁复合物上，如a。
甘露聚糖，引起可逆的细胞絮凝f22l。
酵母表面展示技术由于其具有转录后修饰，蛋白有效的空间折叠等优势，使其在真核生物蛋白展示和直接利用上具有独特优势。
包括乙醇发酵、新药筛选、生物吸、抗原表面展剥、蛋白质分子的相互识别、定向进化、酶的固定化等。
但是同时酵母展示系统也存在许多不利因素，如重组酵母缺少选择性标记，生长条件苛刻；如果配体对细胞有毒性作用，有可能导致酵母死亡，无法得到目的克隆。
相信随着技术的不断发展和完善，多不利因素会被克服，酵母表面展示在进一步的生物科学研究和实际应用中发挥重要作用。
二、木糖醇脱氢酶基因高拷贝表达载体构建及在酿酒酵母中的表达1.表达载体的构建。
第一，PCR反应。
成功获得目的基因和质粒之后，要进～步将目的基因构建到相关的表达载体；这需要在目的基因的两端加上相应的酶切位点，因此设计带有酶切位点的引物，进行PCR反应，其中设以水为模板的阴性对照管。
所有质粒载体汇总
pEZZ18 pkk232-8,pkk 233-3,pACYC184,pBR322,pUC119 pTYB1,pTYB2,pTYB4,pTYB11 pBlueScript SK（+）,pBlueScript SK（-） pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C, 大肠杆菌冷激质 粒： pColdI pColdII pColdIII pColdTF 原核共表达质粒：pACYCduet1,pETduet-1,pCDFduet-1，pRSFduet-1 Takara公司大肠杆菌分子伴 侣： pG-KJE8 pGro7 pKJE7 pGTf2 pTf16 大肠杆菌宿主细胞： DH5a JM101 JM103 JM105 JM107 JM109 JM110 Top10 Top10F BL21（DE3） HB101 ER2529 E2566 C2566 MG1655 XL-10gold XL blue M15 JF1125 K802 SG1117 BL21（AI） BL21（DE3）plysS TG1 TB1 DH5a（pir） Tuner（DE3） Bl21 codonplusRIPL Novablue（DE3） Rosetta Rosetta（DE3） Rosetta（DE3）plys Rosetta-gami（DE3） RosettagamiB（DE3）, Rosetta-gamiB（DE3）plysS Orgami（DE3） OrgamiB（DE3） HMS174（DE3） 植物表达/RNAi载体农杆菌pBI121,pBI121-GFP,pBI101,pBI221,pSN1301, pUN1301,pRTL2 , pRTL2-GFP , pRTL2-CFP, pRTL2-RFP , pRTL2YFP,pCAMBIA 1300, 1301, 1302,1303,1304,1305, 1381Z,1391Z,2300, 2301,3300,3301,pCAMBIA super1300,pCAMBIA super1300GFP,pPZP212,pPZP2121,pPZP212-GFP,pGDG,RNAi载 体pART27,pHANNIBAL,pKANNIBAL, pFGC5941,pTCK303, pTRV1,pTRV2, T-DNA插入载体（随机突变体库）pSKI015,pSKI074,真 菌ATMT载体pBIG2RHPH2-GUS-GFP,pBHt1 枯草芽孢杆菌表达载体pWB980,pHT43,pHP13,pHP43, pBE2,pMUTIN4,pUB110,pE194,pMA5, pMK3,pMK4,pHT304,pHY300PLK, pBest502,pDG1363,pSG1154,pAX01, pSAS144,pDL,pDG148-stu,pDG641, pAL12,pUCX05-bgaB,pHT01， 配套 菌株BS 168,WB600,WB800,WB700, WB800N,1012,FZB42,1A747,广宿主 质粒pVLT33
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酿酒酵母载体质粒
酿酒酵母载体质粒是指用于将目的基因引入酿酒酵母细胞中的质粒。
质粒是一种环状的双链DNA分子，可独立于染色体存
在并繁殖。
酿酒酵母载体质粒通常包含以下元素：
1. 原核起始子（promoter）：用于启动目的基因的转录，使其
产生蛋白质。
2. 选择性标记基因（selectable marker gene）：常用的选择性
标记基因包括对抗生素的抗性基因（如抗生素抗性基因）或与缺失酵母株的互补基因（如RNA聚合酶II基因）。
选择性标
记基因能够在酵母细胞中提供抗性，使得只有表达该基因的转化细胞能够生长。
3. 多克隆位点（multiple cloning site，MCS）：用于将目的基
因插入质粒中，一般由多个限制性内切酶切割位点组成，方便将外源基因插入质粒。
4. 酿酒酵母起始子（promoter）：用于应用在酿酒酵母细胞中
工作的目的基因。
5. 终止子（terminator）：用于终止目的基因的转录。
通过插入目的基因到酿酒酵母载体质粒中，并经由转化等方法将质粒引入酿酒酵母细胞中，可以使得酵母细胞表达目的基因，从而进行相应的功能研究和应用实验。
这种酿酒酵母载体质粒在酿酒酵母遗传工程中起到了重要作用。