第十八章 临床标本的细菌学检验
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临床标本的细菌学检验
临床标本的细菌学检验临床标本的细菌学检验，从各种标本中查找病原菌及其对抗生素的敏感性，在明确诊断、指导用药、预防和流行病学调查等方面具有重要意义。
对各种标本，应根据实际要求和标本特点选择适当的检验步骤及方法，准确、快速地检测病原菌，分析检验结果并报告，同时应注意低耗和安全防护。
分离细菌的目的是查找与疾病相关的病原体及其对抗生素的敏感性，对临床诊断、治疗、预后和流行病学调查很有价值。
1临床标本的采集与送检临床标本的质量对于细菌学检验的结果至关重要，严格按操作规程的要求进行标本采集、运送、保存和处理，才能保证检验结果准确、可靠。
1.1临床标本的采集1.1.1细菌学检验申请单的检查与登记：应仔细检查检验申请单上的内容，如标本类型、来源、送检目的、患者姓名、性别、年龄、临床诊断(如未明确，应注明主要症状)及是否已用抗生素等，并及时登记。
1.1.2标本盛放容器：采集的标本，尤其是采自无正常菌群寄居部位的标本如血液、脑脊液、穿刺液等，必须盛放于无菌容器内[1]。
容器灭菌应采用干热、湿热等物理方法灭菌。
容器上应贴上标签，注明待检患者姓名、床号等信息。
1.1.3无菌操作：在采集血液、脑脊液、穿刺液、骨髓时，应严格进行无菌操作，避免杂菌污染标本。
采集粪便、痰液、咽拭子、肛拭子等标本，虽无需严格无菌操作，但也应尽量避免杂菌污染。
1.1.4采集时间和部位：选择合适的采集时间是很重要的，一般情况下，标本应尽量在疾病早期或在症状、体征明显时，在抗生素治疗之前采集，一些特殊检验的标本应按规定的时间采集。
根据感染的具体情况，选择适当的部位采集标本。
1.1.5安全防护：采集的标本可能含有病原菌，因而采集、运送、保存和处理过程中必须注意安全，防止标本中的病原菌溢出导致污染甚至传播；同时还需防止自身感染。
1.2标本的送检与保存采集标本后，在盛装标本的容器上应贴好标签，并在标签上写明相关信息，立即将标本送至检验室。
标本收集时间应加以准确记录，使检验人员接种时能判断标本是否延误。
临床标本细菌学
生长现象普通平板（示教）
菌落黄色（有时黄色不典型） 怎么区分？
菌落白色或柠檬色
金黄色葡萄球菌： 溶血毒素：溶血环 血浆凝固酶：
在血平板的生长现象（示教）
金葡菌菌落周围 有宽而透明的溶血环 β溶血
表皮/腐生性葡萄球菌 无溶血环
血浆凝固酶试验（示教）
• 鉴别葡萄球菌致病即金黄色葡萄球菌的重要指标 • 原理：凝固酶可催化：
• 抑制性成分：硫代硫酸钠,煌绿,胆盐等抑制革 兰氏阳性菌和大肠菌群生长
• 鉴别性成分：乳糖—分解产酸
• 指示性成分：中性红—酸碱指示剂—产酸变红
可疑的 致病菌
不发酵乳糖菌落
大肠杆菌 发酵乳糖的菌落
挑取可疑的致病菌菌落 接种于半固体双糖铁培养基
上层固体斜面：乳糖+指示剂 下层半固体：葡萄糖+指示剂+FeSO4
？ 肺炎链球菌 溶血，菌落灰白色、细小
溶血 （窄、半透明、
草绿色） 溶血
（宽、透明） γ溶血
（无溶血）
肺炎球菌与甲型溶血性链球菌 的区别试验（示教）
• 胆汁溶菌试验（见实验指导18页） 肺炎球菌（阳性）、 甲型溶血性链球菌（阴性）
• 菊糖发酵试验（见实验指导18页） 肺炎球菌（阳性）、 甲型溶血性链球菌（阴性）
含乳糖、中性红指示剂、胆盐、煌绿等
大肠埃希菌
乳糖 发酵
产酸中 呈性 红红 色 菌落桃红色，乳糖发酵菌落
沙门菌 志贺菌
乳糖 菌落无色透明，乳糖不发酵菌落 不发酵
胆盐、煌绿：抑制大肠埃希菌及G+菌， 提高肠道致病菌检出率
SS琼脂平板（下次实验课示教）
无色、半透明、 光滑、较小
• 基础性成分：牛肉膏,蛋白胨,琼脂
临床标本的细菌学鉴定1 （综合性实验）
菌落黄色（有时黄色不典型） 怎么区分？
菌落白色或柠檬色
金黄色葡萄球菌： 溶血毒素：溶血环 血浆凝固酶：
在血平板的生长现象（示教）
金葡菌菌落周围 有宽而透明的溶血环 β溶血
表皮/腐生性葡萄球菌 无溶血环
血浆凝固酶试验（示教）
• 鉴别葡萄球菌致病即金黄色葡萄球菌的重要指标 • 原理：凝固酶可催化：
• 抑制性成分：硫代硫酸钠,煌绿,胆盐等抑制革 兰氏阳性菌和大肠菌群生长
• 鉴别性成分：乳糖—分解产酸
• 指示性成分：中性红—酸碱指示剂—产酸变红
可疑的 致病菌
不发酵乳糖菌落
大肠杆菌 发酵乳糖的菌落
挑取可疑的致病菌菌落 接种于半固体双糖铁培养基
上层固体斜面：乳糖+指示剂 下层半固体：葡萄糖+指示剂+FeSO4
？ 肺炎链球菌 溶血，菌落灰白色、细小
溶血 （窄、半透明、
草绿色） 溶血
（宽、透明） γ溶血
（无溶血）
肺炎球菌与甲型溶血性链球菌 的区别试验（示教）
• 胆汁溶菌试验（见实验指导18页） 肺炎球菌（阳性）、 甲型溶血性链球菌（阴性）
• 菊糖发酵试验（见实验指导18页） 肺炎球菌（阳性）、 甲型溶血性链球菌（阴性）
含乳糖、中性红指示剂、胆盐、煌绿等
大肠埃希菌
乳糖 发酵
产酸中 呈性 红红 色 菌落桃红色，乳糖发酵菌落
沙门菌 志贺菌
乳糖 菌落无色透明，乳糖不发酵菌落 不发酵
胆盐、煌绿：抑制大肠埃希菌及G+菌， 提高肠道致病菌检出率
SS琼脂平板（下次实验课示教）
无色、半透明、 光滑、较小
• 基础性成分：牛肉膏,蛋白胨,琼脂
临床标本的细菌学鉴定1 （综合性实验）
临床常见标本的细菌学检验
43
痰液的采集
采集指征
下呼吸道感染者可有发热、咳嗽和咳痰 可伴有胸痛、气急甚至呼吸困难，肺部可闻及湿罗音；
X线检查肺部有炎性浸润或胸腔积液 严重可致感染性休克和呼衰。
44
痰液的采集和运送
采集方法
自然咳痰法 支气管镜采集法 防污染毛刷采集 法 支气管肺泡灌洗法 胃内采痰法 小儿取痰法
45
痰液的采集和运送
涂片检查 生化试验 血清学鉴定 药敏试验 动物试验 报告
30
尿液的检验
菌落计数
定量接种尿液培养标本 根据细菌在平板上的生长情况 定量报告每毫升尿液中所含有的细菌数（CFU/ml）
31
尿液标本常见的病原菌
病原菌
正常 菌群
G+
金葡 化脓性链球菌 肠球菌 结核分枝杆菌 葡萄球菌 枯草杆菌 非致病性棒状杆菌
注意培养时间
加做无菌对照
涂片染色检查
结合培养细菌的生长特点对照判断
8
（四）检验程序
标本选择 采集（保存运送）
观察、前处理
直接 涂片
报告
快速 检验
报告
分离培养 （需、厌氧、CO2培养）
可疑菌落 (必要时先做培养)
增菌(需氧、厌氧、 CO2培养)
涂片检查 生化试验 血清学鉴定 药敏试验 动物试验 报告
难辨梭菌
杆菌
G-
沙门菌 大肠埃希菌
志贺菌 霍乱弧菌 副溶血弧菌
弯曲菌 小肠结肠炎耶尔森菌
变形杆菌
41
粪便检验的临床意义
肠道致病菌
霍乱弧菌-霍乱，志贺菌-细菌性痢疾，伤寒沙门菌-伤寒；
食物中毒
沙门菌、弯曲菌、葡萄球菌、副溶血弧菌。
42
第二节 临床常见标本的细菌学检验
痰液的采集
采集指征
下呼吸道感染者可有发热、咳嗽和咳痰 可伴有胸痛、气急甚至呼吸困难，肺部可闻及湿罗音；
X线检查肺部有炎性浸润或胸腔积液 严重可致感染性休克和呼衰。
44
痰液的采集和运送
采集方法
自然咳痰法 支气管镜采集法 防污染毛刷采集 法 支气管肺泡灌洗法 胃内采痰法 小儿取痰法
45
痰液的采集和运送
涂片检查 生化试验 血清学鉴定 药敏试验 动物试验 报告
30
尿液的检验
菌落计数
定量接种尿液培养标本 根据细菌在平板上的生长情况 定量报告每毫升尿液中所含有的细菌数（CFU/ml）
31
尿液标本常见的病原菌
病原菌
正常 菌群
G+
金葡 化脓性链球菌 肠球菌 结核分枝杆菌 葡萄球菌 枯草杆菌 非致病性棒状杆菌
注意培养时间
加做无菌对照
涂片染色检查
结合培养细菌的生长特点对照判断
8
（四）检验程序
标本选择 采集（保存运送）
观察、前处理
直接 涂片
报告
快速 检验
报告
分离培养 （需、厌氧、CO2培养）
可疑菌落 (必要时先做培养)
增菌(需氧、厌氧、 CO2培养)
涂片检查 生化试验 血清学鉴定 药敏试验 动物试验 报告
难辨梭菌
杆菌
G-
沙门菌 大肠埃希菌
志贺菌 霍乱弧菌 副溶血弧菌
弯曲菌 小肠结肠炎耶尔森菌
变形杆菌
41
粪便检验的临床意义
肠道致病菌
霍乱弧菌-霍乱，志贺菌-细菌性痢疾，伤寒沙门菌-伤寒；
食物中毒
沙门菌、弯曲菌、葡萄球菌、副溶血弧菌。
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第二节 临床常见标本的细菌学检验
--临床常见标本的微生物学检验
取新鲜标本分别接种于两个血平板上一个取新鲜标本分别接种于两个血平板上一个血平板按一般的培养方法进行需氧培血平板按一般的培养方法进行需氧培养另或厌氧袋内进行厌氧培养内进行厌氧培养经经3535培养培养2天后认真天后认真观察生观察生长情况和菌落特征并挑取菌落涂片革兰染长情况和菌落特征并挑取菌落涂片革兰染色镜检根据形态特征得出初步印色镜检根据形态特征得出初步印象再按象再按各类厌氧菌的特征进行鉴定
尿液标本 细菌学检验Fra bibliotek标本采集
中段尿采集方法 肾盂尿采集法 膀胱穿刺采集法 导尿法
注意事项
1．尿液标本的采取和培养最大的问题是污染 杂菌，故应严格进行无菌操作。
2．标本采取后应立即送检和接种，放置时间 长，杂菌容易在尿液标本中生长繁殖， 影 响诊断。
3．尿液标本中不得加入防腐剂及消毒剂，否 则会影响阳性检出率。
细菌培养
L 型细菌培养
将尿液接种于血琼脂平皿和高渗液体培养基， 置35 ℃培养，由 于L 型细菌生长缓慢，所 以高渗培养应放5 ～7d ，液体中呈颗粒状生 长，可粘附于管壁 或沉于管底，吸出颗粒镜
下观察，同时转种平皿。无阳性发现可报告 无L 型细菌生长， 根据需要还可做结核菌、 沙门菌、厌氧菌培养。
6．标本的采取应以提高阳性检出率为目的。
血 液 骨 髓 标 本 的 细 菌 学 检 验 程 序
血液骨髓 细菌学检验
一般细菌的检验
标本接种于肉汤培养基后，立即置35 ±1 ℃温箱内 孵育，每天取出一次观察有无 细菌生长，应特别注 意观察肉汤内有无混浊、沉淀、菌膜、色素、血液 变色、指示剂变 色等现象，并记录之。
涂片检查 假丝酵母菌 涂片检查
取尿液离心沉淀物置于玻片上，加盖玻片 后用高倍镜观察，如发现卵圆形芽生孢子 或假菌丝，且革兰染色为阳性，即可做出 初步报告。
尿液标本 细菌学检验Fra bibliotek标本采集
中段尿采集方法 肾盂尿采集法 膀胱穿刺采集法 导尿法
注意事项
1．尿液标本的采取和培养最大的问题是污染 杂菌，故应严格进行无菌操作。
2．标本采取后应立即送检和接种，放置时间 长，杂菌容易在尿液标本中生长繁殖， 影 响诊断。
3．尿液标本中不得加入防腐剂及消毒剂，否 则会影响阳性检出率。
细菌培养
L 型细菌培养
将尿液接种于血琼脂平皿和高渗液体培养基， 置35 ℃培养，由 于L 型细菌生长缓慢，所 以高渗培养应放5 ～7d ，液体中呈颗粒状生 长，可粘附于管壁 或沉于管底，吸出颗粒镜
下观察，同时转种平皿。无阳性发现可报告 无L 型细菌生长， 根据需要还可做结核菌、 沙门菌、厌氧菌培养。
6．标本的采取应以提高阳性检出率为目的。
血 液 骨 髓 标 本 的 细 菌 学 检 验 程 序
血液骨髓 细菌学检验
一般细菌的检验
标本接种于肉汤培养基后，立即置35 ±1 ℃温箱内 孵育，每天取出一次观察有无 细菌生长，应特别注 意观察肉汤内有无混浊、沉淀、菌膜、色素、血液 变色、指示剂变 色等现象，并记录之。
涂片检查 假丝酵母菌 涂片检查
取尿液离心沉淀物置于玻片上，加盖玻片 后用高倍镜观察，如发现卵圆形芽生孢子 或假菌丝，且革兰染色为阳性，即可做出 初步报告。
临床标本的细菌学检查PPT课件
法尿 和液 操标 作本 流细 程菌 检 验 方
Uricult 操作步骤
Uricult 菌落比密图
Uricult 细菌种类标准模式 图
4.特殊菌落培养 （1）淋病奈瑟菌培养 （2）厌氧菌培养 （3）结核分枝杆菌培养 5.报告方式 培养48h无细菌生长，报告“2 天无细菌生长”。查见细菌，报告菌名及 其菌落计数（菌落数/ml）和药敏结果。
（二）检验方法和操作流程
1.涂片检查 （1）革兰染色镜检 （2）梅毒螺旋体涂片检查 2.分离培养 （1）普通细菌培养 （2）淋病奈瑟菌培养 （3）阴道加特纳菌培养 （4）报告方式：如查见淋病奈瑟菌、阴道加特 纳菌等病原菌，报告菌名和药敏结果。
验生 方殖 法道 和标 操本 作细 流菌 程学 检
临床标本的细菌 学检查
（2）男性
（一）标本采集
1. 中段尿标本采集法 （1）女性：
（3）儿童、婴儿
（4）两侧肾盂尿
（5）膀胱穿刺
（二）检验方法和操作流程 ■1.涂片检查 （1）一般细菌及淋病奈瑟菌 （2）念珠菌 （3）结核分枝杆菌 ■ 2.一般细菌培养 如培养2d无细菌生长，即可弃 去。 （1）倾注平板法 （2）平板接种环法 （3）标准接种环法：若定量接种环含量为.001ml， 则整个平板菌落数超过100个，可报告“菌落数 >105/ml”。 （4）Uricult 半定量法
二 生殖道标本
正常的内生殖器是无菌的，而外生殖器 （包括男性尿道口和女性阴道）有多种细 菌寄生。 查见病原菌提示有细菌感染。 常见的病原菌主要有葡萄球菌、肠球菌、 链球菌、淋病奈女性生殖道标本 2.男性生殖道标本 3.梅毒螺旋体标本
常见临床标本的细菌学检验ppt课件
奥梅梁斯基法则：
100cm2 5’→10L A t → A·t *10L
100*50
N
50000N
XX个/M3= A·t
100*5
*1000= *10
→39.32N A·t （49.0；20’）
结果报告应注明 “普通琼脂平板培养”/“血 琼
经营者提供商品或者服务有欺诈行为 的，应 当按照 消费者 的要求 增加赔 偿其受 到的损 失，增 加赔偿 的金额 为消费 者购买 商品的 价款或 接受服 务的费 用
4 、如病人已实施治疗，应在酚红葡萄糖肉汤 经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用 中加入相应对抗剂。
磺胺类药物→对氨基苯甲酸5mg/100ml.
青霉素→2u青霉素酶/ml
其他抗生素→MgSO4 5mg/100ml
（五）痰： 1、先让病人用清水嗉口数次，
以除去口腔内大量杂菌。 2、取清晨第一口咳出的痰，
（晨痰） 3、作结核杆菌培养可收集24h
痰。（冰箱保存）
（六）胆汁： 经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用
1、行十二指肠引 流水收集“胆汁乙”1015ml。
革兰氏染色
球菌 G+杆菌:根据菌落特征,细 菌染色性,形态排列选择恰当 生化反应,免疫学反应及动物 试验 报告
G-杆菌
KIA
菌落描述:颜色,大小,溶血性,透明度,硬度,润 湿度,表面光滑度,粘稠度,凸起度,边缘整齐度
经营者提供商品或者服务有欺诈行为 的，应 当按照 消费者 的要求 增加赔 偿其受 到的损 失，增 加赔偿 的金额 为消费 者购买 商品的 价款或 接受服 务的费 用
临床标本的细菌学检验培训课件
• 3、封闭性脓肿 要求先消毒局部皮肤或黏膜表面 后，用注射器抽取，将脓液注入无菌试管内送检 。疑为厌氧菌感染时，应作床边接种或置厌氧运 送培养基内送检。
•临床标本的细菌 •19
谢谢
•临床标本的细菌 •20
Байду номын сангаас
• （二）标本采集 • １、采集时间 一般以晨痰为好；支气管扩张症患者清晨
起床后进行体位引流，可采集大量痰标本。
• 2、标本采集方法 • （1）自然咳痰法 在留取痰之前，用清水反复漱口，以减
少常居菌的污染，应从气管深部咳出痰，吐入无菌容器内 。
• （2）气管镜下采集法：在病灶附近用导管吸或用支气管 刷直接取得标本。
•临床标本的细菌学检 验
第一节 血液及骨髓标本 一、 血液标本 （一）标本采集 静脉采血，应严格消毒血培养瓶盖和皮肤，用无菌
采血装置采血，不换针头，直接将血液标本注入 血培养瓶中，注入血液后应颠倒混匀以防凝固。 采用真空采血装置可降低污染。
•临床标本的细菌 •2
• 2、采血部位 以无菌操作在患者肘静脉采血。儿童和 婴幼儿其采血的部位多为颈部和腹股沟，这两个部位 皮肤皱褶多，易造成皮肤寄生菌污染，因此必须严格 消毒。消毒过程同成人，但氯己定（洗必泰）不能用 于2个月以下婴儿。成人不建议采集动脉血，不宜从 静脉导管或静脉留置口取血，因其常伴有高污染率。 如果必须从留置导管内采血，必须同时从外周静脉采 集另外一个血培养标本，有助于对比和结果解释。静 脉导管采血时，不要弃去初段血，不要用抗凝剂冲洗 。
• （6）尿标本采集应及时送检，2h内进行接种，否 则应置4~8℃冰箱保存，冷却保存标本时间不得超 过8h。
•临床标本的细菌 •15
• 二、生殖道标本 • （一）标本采集 • 1、女性生殖道标本 由妇产科医师用无菌棉拭采
•临床标本的细菌 •19
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• （二）标本采集 • １、采集时间 一般以晨痰为好；支气管扩张症患者清晨
起床后进行体位引流，可采集大量痰标本。
• 2、标本采集方法 • （1）自然咳痰法 在留取痰之前，用清水反复漱口，以减
少常居菌的污染，应从气管深部咳出痰，吐入无菌容器内 。
• （2）气管镜下采集法：在病灶附近用导管吸或用支气管 刷直接取得标本。
•临床标本的细菌学检 验
第一节 血液及骨髓标本 一、 血液标本 （一）标本采集 静脉采血，应严格消毒血培养瓶盖和皮肤，用无菌
采血装置采血，不换针头，直接将血液标本注入 血培养瓶中，注入血液后应颠倒混匀以防凝固。 采用真空采血装置可降低污染。
•临床标本的细菌 •2
• 2、采血部位 以无菌操作在患者肘静脉采血。儿童和 婴幼儿其采血的部位多为颈部和腹股沟，这两个部位 皮肤皱褶多，易造成皮肤寄生菌污染，因此必须严格 消毒。消毒过程同成人，但氯己定（洗必泰）不能用 于2个月以下婴儿。成人不建议采集动脉血，不宜从 静脉导管或静脉留置口取血，因其常伴有高污染率。 如果必须从留置导管内采血，必须同时从外周静脉采 集另外一个血培养标本，有助于对比和结果解释。静 脉导管采血时，不要弃去初段血，不要用抗凝剂冲洗 。
• （6）尿标本采集应及时送检，2h内进行接种，否 则应置4~8℃冰箱保存，冷却保存标本时间不得超 过8h。
•临床标本的细菌 •15
• 二、生殖道标本 • （一）标本采集 • 1、女性生殖道标本 由妇产科医师用无菌棉拭采
常见临床标本细菌学检验简述
分离培养
将标本接种在适宜的培养 基上进行细菌分离培养。
注意事项
01 确保采集工具的无菌性，避免交叉感染。
02 采集足够的标本量，以保证检验结果的准 确性。
03
及时送检，避免延误检验时间。
04
注意个人防护，避免感染。
PART 02
临床标本细菌学检验方法
分离培养
分离培养
将临床标本接种于适宜的固体或 液体培养基上，在适宜的温度和 环境下进行培养，使细菌得以生
免疫学鉴定
利用抗原-抗体反应的原理 ，通过免疫学方法进行细 菌的鉴定。
药敏试验
纸片扩散法
将含有不同抗菌药物的纸片贴在已接 种细菌的平板上，观察细菌的生长情 况，以判断细菌对抗菌药物的敏感程 度。
稀释法
E试验
将细菌接种在含有抗菌药物的平板上 ，通过测量抑菌圈的大小来判断细菌 对抗菌药物的敏感程度。
通过不断增加抗菌药物的浓度，观察 细菌的生长情况，以判断细菌对抗菌 药物的敏感程度。
结果解读
1 2
解读临床意义
根据细菌培养和药敏试验结果，判断细菌种类、 感染部位及病原体对抗生素的敏感性，为临床医 生提供诊断和治疗依据。
鉴别病原菌
通过细菌形态、染色、生化反应等实验手段，鉴 别不同病原菌，有助于针对性地选择抗菌药物。
3
判断耐药性
监测细菌对抗生素的耐药性，预测治疗效果，为 临床医生提供抗菌药物选择的参考依据。
伤口分泌物标本
用无菌棉签擦拭伤 口表面分泌物。
血液标本
采集静脉血液，常 用无菌注射器抽取 。
呼吸道标本
采集鼻咽拭子或痰 液，用无菌棉签擦 拭鼻咽部或咳痰。
粪便标本
采集新鲜粪便，避 免污染。
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1、革兰阳性菌： 金黄色葡萄球菌、A群链球菌、B群链球菌、肺炎链球菌、肠球菌 草绿色链球菌 产单核细胞李斯特菌、结核分枝杆菌 2、革兰阴性菌
脑膜炎奈瑟菌、卡他莫拉菌
伤寒及副伤寒沙门菌、铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌 3、其他病原菌：念珠菌、新型隐球菌
血培养最佳的采血时机？
最佳采血时机
• 一般于病人发热1-2天内采集血液标本。 • 尽可能在未使用抗菌药物前采集。 • 对已经使用抗菌药物的患者，则在下一次使用抗菌药物之 •
正常人中段尿细菌数≤103 cfu/ml
（一）尿液标本的采集
1.中段尿采集法 最常用 2.直接导尿采集法 易造成逆行感染，尽量不用 3.留置导尿管收集尿液法 注意不能从尿液收集袋中采集标本 4.膀胱穿刺法
（二）尿液标本中常见的病原菌
细菌中80％为革兰阴性杆菌，20％为革兰阳性菌
革兰阴性菌 大肠埃希菌 变形杆菌属 铜绿假单胞菌 克雷伯菌属 肠杆菌属 沙雷菌属 沙门菌属 淋病奈瑟菌 革兰阳性菌 肠球菌 金黄色葡萄球菌 腐生葡萄球菌 表皮葡萄球菌 链球菌 结核分枝杆菌 其他病原菌 真菌 支原体 衣原体 螺旋体
报告 阳性结果：培养出XX细菌 有XX细菌生长 检出XX群XX菌 培养XX天有XX菌生长 阴性结果：未培养出细菌 未检出细菌 培养XX天无细菌生长
第一节、 血液标本的细菌学检验
血液标本的细菌培养是诊断菌血症或败血症的基本方法。
• 如从患者血液中检出细菌，一般应视为病原菌。 • 常见的病原菌主要有：
法尿 和液 操标 作本 流细 程菌 检 验 方
（三）检验方法和操作流程
【细菌培养】 1.一般细菌培养 如培养2d无细菌生长，即可弃去。 尿培养的步骤： （1）收集中段尿 （2）用10μl标准接种环取尿液接种血平板（连续划线）和中国 蓝平板（分区划线） （3）35℃ 培养24h （4）菌落计数 计数血平板上生长菌落，乘以稀释倍数（× 100） 得出cfu/ml。 若整个平板菌落多得无法计数，可报告“菌落 数>105/ml”。 （5）若≤2种菌生长对每种菌进行鉴定和药敏；若＞ 2种菌生长 报告“混合菌群”。
其一、确定标本是否适合作培养，在低倍镜下观察白细胞和上皮细胞 的数目多少来评定(如表)； 其二、初步判定是否有病原菌存在。
痰标本镜下分类 分级 A B C 白细胞（个） >25 >25 <10 上皮细胞（个） <10 <25 >25
注：A、B两种情况的痰标本适合做培养，C不合适，应重新留标本
（1）一般细菌涂片
表5-3 痰标本在平板上的菌落量化指标
分级
第 1区 少见（+） 少量（++） 中等（+++） <10 >10 >10 <5 >5 <5
划线区菌落数目
第 2区 第 3区
多量（++++）
>10
>5
>5
第四节 尿标本
中段尿培养加计数对于泌尿道感染的诊断有重要
价值。
细菌培养必须结合菌落计数辨别是否为病原菌。
（一）痰标本的采集
标本采集方法 (1) 自然咳痰法 (2) 支气管镜采集法 (3) 气管穿刺法 (4) 结核分枝杆菌标本收集法：收集24h痰液 以提高阳性检出率。
验呼 方吸 法系 和统 操标 作本 流细 程菌 学 检
（二）检验方法和操作流程
1. 肉眼观察 包括颜色、粘度、有无血丝或脓。 2. 涂培养 （1）培养标本的选择：应选择粘液脓痰作涂片，排除不合格的标本。 （2）痰标本培养前处理：用无菌生理盐水将痰洗涤3次，加入等量的1% 胰酶溶液（PH7.6)，35º C水浴90min，使痰液均质化后备用。 （3）分离培养 处理后痰液接种于血琼脂平板、巧克力琼脂平板和麦康凯(或EMB ， 中国蓝)琼脂平板，置5%-10%二氧化碳环境中，35℃培养18-24h,根据菌 落及形态特点，作出初步判断然后按各类细菌特征进行生化鉴定，并同 时作药物敏感测定。 4. 报告方式 痰标本培养48小时后仅有草绿色链球菌生长而无致病菌生长， 报告“正常菌群”。查出致病菌，报告菌名和药敏结果，同时报告细菌 的量化指标(表5-3)，如“少量、中等或多量”。
（三）检验方法和操作流程
【涂片检查 】 取离心沉淀物涂片 （1）一般细菌 革兰染色、镜检、报告 （2）淋病奈瑟菌 革兰染色、镜检，如发现肾形双球 菌，可报告“检出革兰阴性双球菌，位于细胞内 （或外），形似淋病奈瑟菌” （3）念珠菌 革兰染色、镜检，如发现芽生孢子和假 菌丝，且革兰染色阳性时，可报告“检出念珠菌”。 （4）结核分枝杆菌 抗酸染色、镜检，如在蓝色背景中 查见红色杆菌，报告“找到抗酸杆菌”。
肠热症患者，病程第1周采集血液、第2周粪便、
第3周尿液
安全采集 注意防止污染、避免自身感染
标本的运送
采样后立即送检，一般不超过1h
痰、尿标本应保存在4℃；脑脊液、滑膜液应25℃保存
检验的基本程序
初次分离选用的培养基类别
血液、骨髓 先增菌后接种血、巧、中 胸腹水 先增菌后接种血、巧、中 脑脊液 先增菌后接种血、巧、中 胆汁 先增菌后接种血、中 尿液 接种血、中 粪便 接种SS、中 痰 、咽拭子 接种血、巧、中 脓、伤口分泌物 接种血、巧、中 白喉棒状杆菌 接种血、胱氨酸亚碲酸钾血琼脂 淋病奈瑟菌 接种血、MTM 真菌 沙保罗琼脂
感染性心内膜炎对血培养检测的特殊要求
• 血培养套数：建议起始采集3套血培养，如果24h内报告阴性，则继续采集2
套血培养，共采集5套血培养。
• 解释：采集多套血培养，
其一，可以帮助判断阳性血培养是真性菌血症，还是由污染菌引起， 因为由污染菌引起的往往在多套血培养中仅有一套报阳性； 其二，多套血培养可以提供更充足的采血量，而血量是影响血中微 生物检出的非常重要的因素； 其三，多套血培养可帮助判断是否为持续性菌血症。
•
第一管作微生物学检验、第二管生化和免疫学检验、第三管脑脊
液常规。
法脑 和脊 操液 作标 流本 程细 图菌 学 检 验 方
（二）检验方法和操作流程
1、涂片检查 (1)一般细菌涂片检查:
化脓性脑膜炎脑脊液大部分明显混浊，可直接涂片，无色、透明的脑脊 液3000r/min ,离心10-15min后涂片，革兰染色后镜检。 根据染色及形态特征,常可初步提示细菌的种类例如，革兰阴性、凹面相 对的球菌，可能是脑膜炎奈瑟菌；链状排列的革兰阳性球菌，可能是链球菌； 长丝状等多形态性的革兰阴性杆菌，可能是流感嗜血杆菌。
检验的报告方式
• 初步报告方式
涂片染色、直接镜检 从染色性、基本形态、排列方式几方面报告 阳性结果： 检出XX性XX菌，形似XX菌 找到XX性XX菌 找到真菌菌丝和孢子 阴性结果：未找到或未检出细菌 未查到抗酸杆菌
未发现真菌菌丝或孢子
检验的报告方式
• 确定报告方式 经分离培养、生化反应及血清学试验后
三、真菌
新型隐球菌 白色念珠菌
（一）标本的采集
• •
由临床医师以无菌操作腰椎穿刺(图5一3)，抽取脑脊液3一5ml,盛
于无菌容器中立即送检，一般不能超过1h。 脑膜炎奈瑟菌离体后能产生自溶素、迅速自溶 ;肺炎链球菌及流感 嗜血杆菌也易死亡。因此脑脊液无论涂片或培养、必须于采集后 立即送检或床旁接种，不宜将其置于冰箱保存、否则影响检出率。
⑵结核分枝杆菌涂片检查:
取脑脊液的离心(3000r/min ,30min)沉淀物作抗酸染色，发现红色杆菌， 报告“找到抗酸杆菌”。如有纤维团，直接取纤维团涂片。镜检必须非常仔 细，因为往往在一张玻片上只能找到1一2个结核菌。
(3)新型隐球菌涂片检查
取脑脊液的离心沉淀物作墨汁负染色，加盖片后高倍镜检，黑色背景 中见有菌体和较宽的荚膜，可能为“新型隐球菌”。
（二）检验方法和操作流程
2. 分离培养
标本离心后接种血平板、巧克力平板，5-10％ CO2 35℃ 18-24h，进一步鉴定。 血平板 CO2 环境培养，易于识别β溶血链球菌和肺炎链球菌 培养
巧克力平板CO2 环境培养，有利于检出肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌、
流感嗜血杆菌。
3. 报告方式
培养48小时，仍无菌生长者报告“培养2天无细菌生长”。 查见细菌报告细菌，报告菌名和药敏结果。
第三节 痰标本
下呼吸道的痰液是无细菌的，而经口腔咳出的痰带有多种上呼吸道的正 常寄生菌（如草绿色链球菌）。若从患者痰标本中查见致病菌或条件致 病菌，提示有下呼吸道感染。
常见的病原菌主要有：
（1）革兰阳性菌 肺炎链球菌、A群链球菌、金黄色葡萄球菌 结核分枝杆菌、白喉棒状杆菌 （2）革兰阴性菌 卡他布兰汉菌、脑膜炎奈瑟菌 流感嗜血杆菌、肠杆菌科细菌 铜绿假单胞菌、嗜肺军团菌 （2）其他病原菌 放线菌、奴卡菌、真菌、肺炎支原体
• 如病人已实施治疗，应在增菌培养液中加入相应拮抗剂：
磺胺类药物→对氨基苯甲酸5mg/100ml. 青霉素→2u青霉素酶/ml 氨基糖苷类、多粘菌素类→聚回香脑磺酸钠 其他抗生素→MgSO4 5mg/100ml
血标本采集的注意事项
• 应从静脉采血，不建议采集动脉血。 • 血培养不宜从静脉导管或静脉留置装置取血。 • 血培养瓶常温保存，不应冷藏；采集血标本后请立即送
挑取脓性或血性痰液制成薄而均匀的涂片， 革兰染色后镜检。 （2）结核分枝杆菌涂片 ①挑取脓性或血性痰液制成薄而均匀的涂片，作抗酸染色镜检。 ②浓集法菌检 根据所见结果报告“找到(或未查到)抗酸杆菌”。
（3）放线菌及诺卡菌涂片 将痰液用生理盐水洗涤数次，挑取黄色颗粒或不透明的着色斑点，置载玻 片上、覆以盖玻片、轻轻挤压，置高倍镜下观察其结构、如见中央为交织的 菌丝，末端呈放线状排列，然后揭去盖玻片。干燥后作革兰和抗酸染色镜检。 如查见中间菌丝部分为革兰阳性，四周放射菌丝为革兰阴性，而抗酸染色 阴性，可报告为“找到染色、形态疑似放线菌”; 如查见革兰染色结果与放线菌相同，而抗酸染色弱阳性者，可报告为 “找到染色、形态疑似奴卡菌”; 肉眼观察未见黄色颗粒，革兰染色与抗酸染色均为阴性，报告为阴性。
脑膜炎奈瑟菌、卡他莫拉菌
伤寒及副伤寒沙门菌、铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌 3、其他病原菌：念珠菌、新型隐球菌
血培养最佳的采血时机？
最佳采血时机
• 一般于病人发热1-2天内采集血液标本。 • 尽可能在未使用抗菌药物前采集。 • 对已经使用抗菌药物的患者，则在下一次使用抗菌药物之 •
正常人中段尿细菌数≤103 cfu/ml
（一）尿液标本的采集
1.中段尿采集法 最常用 2.直接导尿采集法 易造成逆行感染，尽量不用 3.留置导尿管收集尿液法 注意不能从尿液收集袋中采集标本 4.膀胱穿刺法
（二）尿液标本中常见的病原菌
细菌中80％为革兰阴性杆菌，20％为革兰阳性菌
革兰阴性菌 大肠埃希菌 变形杆菌属 铜绿假单胞菌 克雷伯菌属 肠杆菌属 沙雷菌属 沙门菌属 淋病奈瑟菌 革兰阳性菌 肠球菌 金黄色葡萄球菌 腐生葡萄球菌 表皮葡萄球菌 链球菌 结核分枝杆菌 其他病原菌 真菌 支原体 衣原体 螺旋体
报告 阳性结果：培养出XX细菌 有XX细菌生长 检出XX群XX菌 培养XX天有XX菌生长 阴性结果：未培养出细菌 未检出细菌 培养XX天无细菌生长
第一节、 血液标本的细菌学检验
血液标本的细菌培养是诊断菌血症或败血症的基本方法。
• 如从患者血液中检出细菌，一般应视为病原菌。 • 常见的病原菌主要有：
法尿 和液 操标 作本 流细 程菌 检 验 方
（三）检验方法和操作流程
【细菌培养】 1.一般细菌培养 如培养2d无细菌生长，即可弃去。 尿培养的步骤： （1）收集中段尿 （2）用10μl标准接种环取尿液接种血平板（连续划线）和中国 蓝平板（分区划线） （3）35℃ 培养24h （4）菌落计数 计数血平板上生长菌落，乘以稀释倍数（× 100） 得出cfu/ml。 若整个平板菌落多得无法计数，可报告“菌落 数>105/ml”。 （5）若≤2种菌生长对每种菌进行鉴定和药敏；若＞ 2种菌生长 报告“混合菌群”。
其一、确定标本是否适合作培养，在低倍镜下观察白细胞和上皮细胞 的数目多少来评定(如表)； 其二、初步判定是否有病原菌存在。
痰标本镜下分类 分级 A B C 白细胞（个） >25 >25 <10 上皮细胞（个） <10 <25 >25
注：A、B两种情况的痰标本适合做培养，C不合适，应重新留标本
（1）一般细菌涂片
表5-3 痰标本在平板上的菌落量化指标
分级
第 1区 少见（+） 少量（++） 中等（+++） <10 >10 >10 <5 >5 <5
划线区菌落数目
第 2区 第 3区
多量（++++）
>10
>5
>5
第四节 尿标本
中段尿培养加计数对于泌尿道感染的诊断有重要
价值。
细菌培养必须结合菌落计数辨别是否为病原菌。
（一）痰标本的采集
标本采集方法 (1) 自然咳痰法 (2) 支气管镜采集法 (3) 气管穿刺法 (4) 结核分枝杆菌标本收集法：收集24h痰液 以提高阳性检出率。
验呼 方吸 法系 和统 操标 作本 流细 程菌 学 检
（二）检验方法和操作流程
1. 肉眼观察 包括颜色、粘度、有无血丝或脓。 2. 涂培养 （1）培养标本的选择：应选择粘液脓痰作涂片，排除不合格的标本。 （2）痰标本培养前处理：用无菌生理盐水将痰洗涤3次，加入等量的1% 胰酶溶液（PH7.6)，35º C水浴90min，使痰液均质化后备用。 （3）分离培养 处理后痰液接种于血琼脂平板、巧克力琼脂平板和麦康凯(或EMB ， 中国蓝)琼脂平板，置5%-10%二氧化碳环境中，35℃培养18-24h,根据菌 落及形态特点，作出初步判断然后按各类细菌特征进行生化鉴定，并同 时作药物敏感测定。 4. 报告方式 痰标本培养48小时后仅有草绿色链球菌生长而无致病菌生长， 报告“正常菌群”。查出致病菌，报告菌名和药敏结果，同时报告细菌 的量化指标(表5-3)，如“少量、中等或多量”。
（三）检验方法和操作流程
【涂片检查 】 取离心沉淀物涂片 （1）一般细菌 革兰染色、镜检、报告 （2）淋病奈瑟菌 革兰染色、镜检，如发现肾形双球 菌，可报告“检出革兰阴性双球菌，位于细胞内 （或外），形似淋病奈瑟菌” （3）念珠菌 革兰染色、镜检，如发现芽生孢子和假 菌丝，且革兰染色阳性时，可报告“检出念珠菌”。 （4）结核分枝杆菌 抗酸染色、镜检，如在蓝色背景中 查见红色杆菌，报告“找到抗酸杆菌”。
肠热症患者，病程第1周采集血液、第2周粪便、
第3周尿液
安全采集 注意防止污染、避免自身感染
标本的运送
采样后立即送检，一般不超过1h
痰、尿标本应保存在4℃；脑脊液、滑膜液应25℃保存
检验的基本程序
初次分离选用的培养基类别
血液、骨髓 先增菌后接种血、巧、中 胸腹水 先增菌后接种血、巧、中 脑脊液 先增菌后接种血、巧、中 胆汁 先增菌后接种血、中 尿液 接种血、中 粪便 接种SS、中 痰 、咽拭子 接种血、巧、中 脓、伤口分泌物 接种血、巧、中 白喉棒状杆菌 接种血、胱氨酸亚碲酸钾血琼脂 淋病奈瑟菌 接种血、MTM 真菌 沙保罗琼脂
感染性心内膜炎对血培养检测的特殊要求
• 血培养套数：建议起始采集3套血培养，如果24h内报告阴性，则继续采集2
套血培养，共采集5套血培养。
• 解释：采集多套血培养，
其一，可以帮助判断阳性血培养是真性菌血症，还是由污染菌引起， 因为由污染菌引起的往往在多套血培养中仅有一套报阳性； 其二，多套血培养可以提供更充足的采血量，而血量是影响血中微 生物检出的非常重要的因素； 其三，多套血培养可帮助判断是否为持续性菌血症。
•
第一管作微生物学检验、第二管生化和免疫学检验、第三管脑脊
液常规。
法脑 和脊 操液 作标 流本 程细 图菌 学 检 验 方
（二）检验方法和操作流程
1、涂片检查 (1)一般细菌涂片检查:
化脓性脑膜炎脑脊液大部分明显混浊，可直接涂片，无色、透明的脑脊 液3000r/min ,离心10-15min后涂片，革兰染色后镜检。 根据染色及形态特征,常可初步提示细菌的种类例如，革兰阴性、凹面相 对的球菌，可能是脑膜炎奈瑟菌；链状排列的革兰阳性球菌，可能是链球菌； 长丝状等多形态性的革兰阴性杆菌，可能是流感嗜血杆菌。
检验的报告方式
• 初步报告方式
涂片染色、直接镜检 从染色性、基本形态、排列方式几方面报告 阳性结果： 检出XX性XX菌，形似XX菌 找到XX性XX菌 找到真菌菌丝和孢子 阴性结果：未找到或未检出细菌 未查到抗酸杆菌
未发现真菌菌丝或孢子
检验的报告方式
• 确定报告方式 经分离培养、生化反应及血清学试验后
三、真菌
新型隐球菌 白色念珠菌
（一）标本的采集
• •
由临床医师以无菌操作腰椎穿刺(图5一3)，抽取脑脊液3一5ml,盛
于无菌容器中立即送检，一般不能超过1h。 脑膜炎奈瑟菌离体后能产生自溶素、迅速自溶 ;肺炎链球菌及流感 嗜血杆菌也易死亡。因此脑脊液无论涂片或培养、必须于采集后 立即送检或床旁接种，不宜将其置于冰箱保存、否则影响检出率。
⑵结核分枝杆菌涂片检查:
取脑脊液的离心(3000r/min ,30min)沉淀物作抗酸染色，发现红色杆菌， 报告“找到抗酸杆菌”。如有纤维团，直接取纤维团涂片。镜检必须非常仔 细，因为往往在一张玻片上只能找到1一2个结核菌。
(3)新型隐球菌涂片检查
取脑脊液的离心沉淀物作墨汁负染色，加盖片后高倍镜检，黑色背景 中见有菌体和较宽的荚膜，可能为“新型隐球菌”。
（二）检验方法和操作流程
2. 分离培养
标本离心后接种血平板、巧克力平板，5-10％ CO2 35℃ 18-24h，进一步鉴定。 血平板 CO2 环境培养，易于识别β溶血链球菌和肺炎链球菌 培养
巧克力平板CO2 环境培养，有利于检出肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌、
流感嗜血杆菌。
3. 报告方式
培养48小时，仍无菌生长者报告“培养2天无细菌生长”。 查见细菌报告细菌，报告菌名和药敏结果。
第三节 痰标本
下呼吸道的痰液是无细菌的，而经口腔咳出的痰带有多种上呼吸道的正 常寄生菌（如草绿色链球菌）。若从患者痰标本中查见致病菌或条件致 病菌，提示有下呼吸道感染。
常见的病原菌主要有：
（1）革兰阳性菌 肺炎链球菌、A群链球菌、金黄色葡萄球菌 结核分枝杆菌、白喉棒状杆菌 （2）革兰阴性菌 卡他布兰汉菌、脑膜炎奈瑟菌 流感嗜血杆菌、肠杆菌科细菌 铜绿假单胞菌、嗜肺军团菌 （2）其他病原菌 放线菌、奴卡菌、真菌、肺炎支原体
• 如病人已实施治疗，应在增菌培养液中加入相应拮抗剂：
磺胺类药物→对氨基苯甲酸5mg/100ml. 青霉素→2u青霉素酶/ml 氨基糖苷类、多粘菌素类→聚回香脑磺酸钠 其他抗生素→MgSO4 5mg/100ml
血标本采集的注意事项
• 应从静脉采血，不建议采集动脉血。 • 血培养不宜从静脉导管或静脉留置装置取血。 • 血培养瓶常温保存，不应冷藏；采集血标本后请立即送
挑取脓性或血性痰液制成薄而均匀的涂片， 革兰染色后镜检。 （2）结核分枝杆菌涂片 ①挑取脓性或血性痰液制成薄而均匀的涂片，作抗酸染色镜检。 ②浓集法菌检 根据所见结果报告“找到(或未查到)抗酸杆菌”。
（3）放线菌及诺卡菌涂片 将痰液用生理盐水洗涤数次，挑取黄色颗粒或不透明的着色斑点，置载玻 片上、覆以盖玻片、轻轻挤压，置高倍镜下观察其结构、如见中央为交织的 菌丝，末端呈放线状排列，然后揭去盖玻片。干燥后作革兰和抗酸染色镜检。 如查见中间菌丝部分为革兰阳性，四周放射菌丝为革兰阴性，而抗酸染色 阴性，可报告为“找到染色、形态疑似放线菌”; 如查见革兰染色结果与放线菌相同，而抗酸染色弱阳性者，可报告为 “找到染色、形态疑似奴卡菌”; 肉眼观察未见黄色颗粒，革兰染色与抗酸染色均为阴性，报告为阴性。