最新基因操作原理
基因编辑技术CRISPR的原理和应用
基因编辑技术CRISPR的原理和应用CRISPR基因编辑技术，是近年来科学界掀起的一股热潮。
它能够改变人类基因，具有革命性的意义，可能带来人类医学领域的新突破。
本文将对CRISPR技术的原理及其在医疗、农业等领域的应用做详细介绍。
一、CRISPR技术的原理CRISPR（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）是一种存在于细菌和其他细胞中、可能提供抵御外来病毒和其他物质侵袭的防御机制。
CRISPR/Cas系统可被看作是一种基于RNA引导、以利用菌体完整性的系统，因为它可以将干扰的RNA（crRNA）与适配蛋白（cas蛋白）配对，将此“小型核酸导弹”引导至外来DNA上进行切除。
在CRISPR系统中，病毒攻入时，它的基因组被注入到细胞的DNA中，细胞通过CRISPR系统发现这一情况，并留下一份该基因组序列以供后续识别病毒。
CRISPR按照进入细胞的顺序存储有序的DNA片段。
这些片段之间通过一些共同的DNA序列进行连接。
当病毒再次攻入细胞时，细胞会利用这些先前留下的DNA片段与可编码特定信息的crRNA配对，继而将活性Cas蛋白引导至病毒基因组上，并用针对性切除的方式使其失活。
在CRISPR技术中，便运用了这种能力，将Cas系统与指向特定的DNA序列的crRNA互相作用来实现有针对性的DNA编辑。
二、CRISPR技术的应用1.遗传性疾病治疗CRISPR技术能够通过修饰DNA序列，从而潜在地纠正与特定疾病有关的遗传缺陷。
例如，革兰氏氏症（cystic fibrosis）就是一种常见而致命的遗传性疾病，它的发病率较高，能对多个器官和组织产生影响。
利用CRISPR技术，已经有研究者成功纠正了在胚胎期间造成的一种导致革兰氏氏症的基因突变。
相信未来，这种技术将有助于治疗基因变异所导致的多种遗传疾病。
2.农业和食品科学CRISPR技术也将有着深远的影响，能够通过改变特定的基因表达，从而使植物更快的生长，更抗虫、耐旱等。
基因工程的原理和过程是什么
基因工程的原理和过程是什么基因工程是一门利用现代生物技术方法对生物体的遗传物质进行编辑、改变和操控的学科。
通过基因工程，科学家们可以改变生物体的基因组，进而实现对其性状、功能和特性的调控。
本文将详细介绍基因工程的原理和过程。
基因工程的原理基因工程的原理基于以下几个重要概念：DNA的结构和功能DNA（脱氧核糖核酸）是构成生物体遗传信息的分子基础。
它由四种碱基（腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶和鳞嘧虫嘧啶）和磷酸二酯键组成。
一个DNA分子由两条互补的链以螺旋结构相互缠结而成，形成了一个双螺旋结构。
碱基之间通过氢键相互连接，A与T之间形成两个氢键，C与G之间形成三个氢键。
DNA的结构使得它能够通过碱基配对的规则进行复制和传递遗传信息。
基因是DNA上的特定序列，携带着特定的遗传信息，决定了生物体的性状和功能。
DNA重组技术DNA重组技术是基因工程的核心方法之一。
通过DNA重组，科学家可以将不同生物体中的基因片段组装到目标生物体的DNA中，实现基因的转移和插入。
一般情况下，DNA重组技术包括以下步骤：1.DNA的提取：从不同生物体中提取目标基因的DNA。
2.DNA切割：利用酶切技术，将目标基因和载体（如质粒或病毒）的DNA切割成特定的片段。
3.DNA连接：将目标基因片段与载体的DNA片段通过DNA连接酶连接在一起，形成重组DNA。
4.DNA转化或转染：将重组DNA导入到宿主细胞中，使其成为宿主细胞的一部分。
5.遗传选择：通过筛选和分离，选择出携带目标基因的宿主细胞。
6.基因表达：将目标基因在宿主细胞中表达，并产生所需的蛋白质。
外源基因的表达在基因工程中，外源基因是从不同生物体中获取的，将其插入到目标生物体的DNA中。
为了使外源基因能够在目标生物体中表达，需要通过合适的调控序列将其与目标生物体的基因组连接起来。
调控序列是一段DNA序列，可以启动、增强或抑制目标基因的表达。
在基因工程中，科学家需要选择适当的启动子、转录因子结合位点和终止子等调控序列，以确保外源基因能够在目标生物体中正确地表达。
基因编辑技术的原理与实验方法
基因编辑技术的原理与实验方法基因编辑技术是一种能够精确改变生物体基因组的方法，它在医学、农业、生物研究等领域具有重要的应用价值。
本文将重点介绍基因编辑技术的原理和实验方法，以帮助读者了解该技术的基本原理及其实验操作。
一、基因编辑技术的原理基因编辑技术是指通过针对生物体基因组进行特定位点的改变，来实现对目标基因的修饰。
目前最常用的基因编辑工具是CRISPR-Cas9系统。
CRISPR是一种细菌天然免疫系统，它能够识别并切割入侵细菌的外源基因组（如病毒基因组）。
Cas9是CRISPR系统中的一种酶，它作为一个“剪刀”，可以精确切割特定序列的DNA。
基因编辑的主要步骤如下：1. 选择目标基因：首先确定要编辑的目标基因，并确定编辑的目的，如基因突变、插入或删除等。
2. 设计引导RNA（gRNA）：根据目标基因的序列，设计合适的gRNA，可以指导Cas9酶精确识别目标序列。
3. 载体构建：将gRNA和Cas9基因组装到载体中，以便在细胞内表达。
4. 导入细胞：通过转染或病毒载体等方式将构建好的基因编辑复合物导入目标细胞。
5. 基因编辑：在细胞内，Cas9酶与gRNA结合，形成一个复合物。
复合物会识别目标位点，引发DNA双链断裂。
细胞为了修复断裂的DNA链，会启动其自身的修复机制。
二、基因编辑技术的实验方法1. CRISPR-Cas9系统CRISPR-Cas9系统的使用便捷、高效且成本相对较低，因此成为最流行的基因编辑工具。
具体操作步骤如下：（1）设计gRNA：选择目标基因组的特定序列，设计合适的gRNA，以便Cas9酶能够识别和切割。
（2）载体构建：将gRNA和Cas9蛋白基因构建到相应的表达载体中。
（3）细胞培养：培养目标细胞（如细胞系或原代细胞）至适当的生长状态。
（4）转染：通过转染方法（如细胞培养基添加转染试剂、电穿孔等方法），将构建好的CRISPR-Cas9复合物导入目标细胞。
（5）筛选和鉴定：筛选转染细胞并分离单克隆，通过PCR、测序等方法检测基因编辑效果。
基因编辑的原理和方法
基因编辑的原理和方法基因编辑是一种人工改变DNA序列的技术，可以使基因按照我们的意愿进行修改，这种技术具有非常广阔的应用前景。
例如，基因编辑可以用于创造更为健康的生育环境，培育肥沃的作物和食品来满足人类不断增长的需求，还可以对一些人类遗传疾病进行治疗。
基因编辑的原理基因编辑技术主要基于“CRISPR-Cas9系统”， CRISPR是“Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats” 的缩写，即“短反向重复间隔区簇”，是一种细菌和古菌天然的免疫系统，可以识别并清除入侵的病毒基因。
而Cas9则是CRISPR反应的核心酶。
CRISPR-Cas9系统基于RNA-DNA互补对原理，通过依靠CRISPR-Cas9切割引物将外源DNA选择性地剪切，来实现基因编辑。
基因编辑的方法1.基因敲除法通过敲除Gene来验证其重要性，敲除只能删除基因或其部分序列，不能精确编辑。
2.基因点突变法通过在DNA序列内添加或删除单个碱基或数个碱基，来精确定位要修改的基因位点，然后插入、删除、替换外源DNA，并通过Cas9导向这种行为，使得基因序列随之发生改变。
3.基因插入法通过外源DNA在特定的基因位点上插入一个新的基因，使得原基因序列受到影响，随之发生改变。
4.默认激活然后禁用法通过使基因内部的元素初始隐形存在，然后将其激活，以使外源DNA嵌入基因序列中，发挥其正常功能。
基因编辑技术已经是许多学科技术的热点研究方向，但是目前仍存在许多可优化的地方。
需要更多的科学家加入和致力于这项技术的研究和发展，使得我们的生活变得更为美好。
基因编辑技术原理
基因编辑技术原理基因编辑技术是一种革命性的生物技术，它可以精确地修改生物体的基因组，为生物学研究、医学治疗和农业生产带来了巨大的变革。
基因编辑技术的原理主要基于DNA序列的精准编辑，其核心工具是CRISPR/Cas9系统。
CRISPR/Cas9系统是一种天然存在于细菌中的免疫系统，它能够识别并剪切入侵的病毒基因组。
科学家们发现，通过改变CRISPR/Cas9系统的结构，可以使其识别和切割任意DNA序列，从而实现基因组的精准编辑。
CRISPR/Cas9系统由两部分组成，一部分是CRISPR RNA（crRNA），它能够与目标DNA序列特异性结合；另一部分是Cas9蛋白，它具有切割DNA的酶活性。
当crRNA与目标DNA序列结合后，Cas9蛋白将被激活，切割目标DNA，从而实现基因组的编辑。
基因编辑技术的原理可以简单概括为三个步骤，识别、切割和修复。
首先，CRISPR/Cas9系统通过crRNA识别目标DNA序列，然后Cas9蛋白将切割目标DNA，形成双链断裂。
接着，细胞内的修复机制会介入，尝试修复DNA断裂。
修复过程中可能会出现插入、删除或替换碱基的情况，从而实现基因组的精准编辑。
基因编辑技术的原理虽然简单，但在实际操作中需要高度的精准性和技术水平。
科学家们必须选择合适的crRNA序列，确保其与目标DNA特异性结合；他们还需要设计适当的实验条件，确保Cas9蛋白能够准确地切割目标DNA。
此外，基因编辑技术的应用还需要考虑到细胞的修复能力和外源DNA的导入等因素，以确保编辑效果的稳定和可靠。
基因编辑技术的原理虽然简单，但其应用却十分广泛。
在生物学研究领域，科学家们可以利用基因编辑技术研究基因功能、模拟疾病模型，从而揭示生物体内部的奥秘。
在医学治疗领域，基因编辑技术可以用于治疗遗传性疾病、癌症等疾病，为患者带来新的治疗选择。
在农业生产领域，基因编辑技术可以用于改良作物品质、提高产量，为粮食安全和农业可持续发展作出贡献。
基因工程的原理与应用例题和知识点总结
基因工程的原理与应用例题和知识点总结基因工程，这个听起来充满科技感的词汇，其实已经在我们的生活中发挥着越来越重要的作用。
它就像是一把神奇的钥匙，打开了生命奥秘的大门，让我们有能力对生物的基因进行改造和重组，从而实现各种奇妙的目标。
接下来，让我们一起深入了解基因工程的原理，并通过一些例题来巩固知识，同时总结其广泛的应用。
一、基因工程的原理基因工程，简单来说，就是在分子水平上对基因进行操作的技术。
它基于几个关键的原理：首先是“中心法则”。
我们知道，遗传信息从 DNA 传递到 RNA，再从 RNA 翻译成蛋白质，这是生命遗传信息传递的基本规律。
基因工程就是要在这个过程中进行干预。
其次，基因是具有特定碱基序列的 DNA 片段。
通过特定的工具，我们能够识别、切割和连接这些片段。
再者，不同生物的基因具有相同的化学本质，这意味着我们可以将一种生物的基因转移到另一种生物中，并使其发挥作用。
而实现基因工程操作的关键工具包括限制酶、DNA 连接酶和载体。
限制酶能够识别特定的碱基序列，并在特定的位点切割 DNA 分子；DNA 连接酶则负责将切割后的 DNA 片段连接起来；载体，如质粒、噬菌体等，能够将目的基因运送到受体细胞中。
二、基因工程的例题为了更好地理解基因工程的原理，让我们来看几个例题。
例 1：假设我们要从一种细菌中获取一个具有抗药性的基因，并将其转移到一种植物细胞中，使其获得抗药性。
首先，我们需要使用特定的限制酶来切割含有抗药基因的细菌 DNA 和植物细胞的 DNA。
然后，用 DNA 连接酶将抗药基因与植物细胞的 DNA 连接起来。
最后，通过适当的方法将重组后的 DNA 导入植物细胞。
例 2：给定一段 DNA 序列，要求找出可能的限制酶切割位点。
这就需要我们熟悉常见限制酶的识别序列，并运用相关知识进行分析。
三、基因工程的应用基因工程的应用范围极其广泛，给人类带来了诸多的好处。
在农业领域，基因工程使得我们能够培育出具有优良性状的农作物。
了解CRISPR基因编辑技术的原理与应用
了解CRISPR基因编辑技术的原理与应用随着科技的不断发展，CRISPR基因编辑技术越来越受到广泛关注。
本文将介绍CRISPR基因编辑技术的原理以及其在科学研究、医学治疗和农业改良等领域的应用。
一、CRISPR基因编辑技术的原理CRISPR（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）基因编辑技术是一种利用细菌天然免疫机制的技术。
它最早被发现于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌中，用于抵御病毒侵袭。
CRISPR系统主要包括CRISPR序列和Cas蛋白两部分。
CRISPR序列是由一系列重复序列和间隔序列组成，间隔序列中夹杂着自然界中的病毒DNA片段。
而Cas蛋白则是CRISPR系统中的重要组成部分，具有核酸以及外切酶活性。
CRISPR基因编辑技术的原理主要分为三个步骤：识别、切割和修复。
首先，CRISPR-Cas9复合物通过指导RNA (sgRNA)的引导，将Cas9蛋白精确地定位到目标DNA的特定序列上。
这一过程需要依靠CRISPR序列的间隔序列与靶向基因的DNA序列互补配对。
一旦配对成功，Cas9蛋白就能够通过酶活性切割目标DNA，引起DNA序列的断裂。
接下来，细胞会启动DNA修复机制来修复这些断裂。
有两种常见的DNA修复途径：非同源末端连接 (NHEJ) 和同源重组 (HDR)。
在非同源末端连接途径中，细胞会通过直接连接断裂的DNA末端来修复断裂位点，导致插入缺失或错义突变。
而在同源重组途径中，细胞通过利用同源染色体或DNA模板来修复断裂位点，实现精确的基因修饰。
二、CRISPR基因编辑技术的应用1. 科学研究：CRISPR基因编辑技术在科学研究中扮演着重要的角色。
科学家们可以利用该技术研究基因功能，探索疾病的发生机制等。
通过针对特定基因进行编辑，科学家能够了解基因在不同生物过程中的功能，进而为疾病的治疗提供指导。
2. 医学治疗：CRISPR基因编辑技术有望成为治疗多种基因相关疾病的突破。
基因操作的原理和过程
基因操作的原理和过程基因操作（Genetic engineering）是一种利用基因技术对生物体的遗传物质进行修改和重组的技术手段。
通过基因操作，可以对生物的基因进行剪接、修饰或移除，并向生物中引入新的基因或基因片段，从而改变生物的遗传特征和表现形式。
基因操作在农业、医学、生物工程等领域都有广泛的应用，它不仅可以提高生物的抗病性、耐性和产量，还可以用于研究基因的功能和调控机制。
基因操作的原理是基于对生物体的基因组进行修改和优化，具体分为以下几个步骤：1. 选择目标基因：首先需要确定要操作的基因，可以是现有生物体中的某个基因，也可以是外源基因。
有时也会选择修改某个特定区域的基因片段。
2. 基因克隆和构建载体：利用分子生物学技术，将目标基因从生物体中分离提取。
然后，将目标基因插入到载体DNA中，构建成重组载体。
常用的载体包括质粒和病毒。
3. 转化目标细胞：将构建好的重组载体导入到目标细胞中。
可以通过多种途径实现细胞的转化，如化学转化、电转化、冷冻复苏等。
4. 基因表达和筛选：在转化成功后，目标基因会在细胞内进行表达，从而改变生物的遗传特征和表现形式。
为了筛选出表达目标基因的细胞，可以在重组载体中引入选择标记基因，如抗生素抗性基因。
5. 验证和分析：在筛选出表达目标基因的细胞后，需要对其进行验证和分析。
可以通过PCR、酶切、同源重组等技术手段来验证基因操作的结果，并进一步分析基因的功能。
基因操作的过程中有一些关键技术和工具，如PCR技术、限制性内切酶、连接酶、DNA测序等。
这些技术和工具的应用使得基因操作的过程更加高效、准确。
基因操作的应用领域广泛，涉及农业、医学、生物工程等多个领域。
在农业领域，基因操作可以用于改良农作物的品质和产量，提高抗病虫害的能力，延长保存期限等。
比如，通过引入抗病虫害基因，使植物对害虫和病毒的侵害产生免疫反应。
在医学领域，基因操作可以用于治疗遗传性疾病、癌症等疾病。
比如，通过修正患者的遗传突变，可以恢复正常的基因功能。
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基因操作原理《基因操作原理》课程教学大纲课程编码：13019课程名称：基因操作原理课程英文名称：Princeples of Gene Manipulation先修课程：生物化学、遗传学、分子生物学等适用专业：生物技术生物科学总学时：56 讲课学时 56 实验学时 0 实习学时 0 总学分：3.5一、课程性质、地位和任务“基因操作原理”是伴随着生物学尤其是分子生物学的飞速发展而兴起的一门新学科。
重点介绍基因操作中的工具酶及其种类、活性和用途；质粒载体、λ噬菌体载体和表达载体等的基本构成、种类和用途；重组DNA导入细菌和真核细胞的方法；DNA、RNA和蛋白质的分离及检测技术；定点诱变技术； PCR技术原理及其应用；cDNA文库和基因组文库的构建；分子杂交原理和技术； DNA序列分析的原理，通过Internet进行序列分析处理以及数据的获取。
本门课程开设的指导思想在于使学生在掌握一般生物学以及分子生物学知识的基础上，掌握DNA重组，转移、表达和检测等技术的基本概念和基本原理，为日后从事基因工程和分子生物学研究打下技术操作方面的理论基础。
”分子克隆技术”是与本课程配套的实验课程。
二、课程基本要求能对以基因克隆和表达为主线的基因操作自行设计技术路线，要求学生随着科学研究和技术的发展，及时掌握新的知识和方法。
本课程涉及到生物学的一些重要课程，如：普通生物学、生物化学、微生物学、遗传学和分子生物学，因此要学生选修这些课程之后，再选修本课程。
如果能做到理论与实验并至，将能巩固所学知识。
重点要求学生掌握在核酸水平上进行研究的基本方法。
三、教学内容及安排绪论：基因操作的理论基础（2学时）本章重点与难点: 掌握与基因操作有关的基本概念0.1基因的概念0.1.1 什么是基因0.1.2基因与其产物的共线性及非共线性0.1.3 基因的重叠与可变性0.2基因的结构组成0.2.1启动子0.2.2 SD序列0.2.3 转录终止区0.2.4 其它0.3基因克隆的通用策略0.3.1 基本步骤0.3.2 亚克隆第1章基因操作工具酶 (10学时)本章重点与难点:要求掌握和了解限制酶与常用工具酶的种类\活性和用途, 让学生知道“基因操作原理”是靠什么“工具”来完成的。
1.1 限制酶1.1.1限制酶的发现及其命名1.1.1.1 现象1.1.1.2 限制酶的发现及其命名1.1.1.3 限制与修饰系统的种类1.1.2限制酶识别的序列1.1.2.1长度1.1.2.2结构1.1.2.3切割位置1.1.2.4特殊系列1.1.3 限制酶产生的末端1.1.3.1粘性末端1.1.3.2平端1.1.3.3非对称突出端1.1.3.4同裂酶1.1.3.5同尾酶1.1.4末端长度对切割的影响1.1.5位点偏爱1.1.5.1现象1.1.5.2原因1.1.6酶切反应条件1.1.6.1缓冲液1.1.6.2反应温度 / 时间1.1.6.3反应终止1.1.7星星活性1.1.8单链DNA的切割1.1.9酶切位点的引入(酶切水平)1.1.9.1方式1.1.9.2沉默突变1.1.10 影响活性的因素1.1.11 酶切位点在基因组中分布不均一性1.2甲基化酶1.2.1甲基化酶的种类1.2.1.1dam/dcm甲基化酶1.2.1.2Eco RI甲基化酶1.2.1.3Sss I甲基化酶1.2.1.4其它甲基化酶1.2.2依赖于甲基化的限制系统1.2.3甲基化对限制酶的酶切影响1.2.3.1修饰酶切位点1.2.3.2产生新的酶切位点1.2.3.3甲基化位点的分布及对基因组作图的影响1.3 DNA聚合酶1.3.1大肠杆菌DNA聚合酶1.3.2 Klenow 酶噬菌体DNA聚合酶1.3.3 T41.3.4 T噬菌体DNA聚合酶71.3.5 耐热DNA聚合酶(第7章中详细介绍)1.3.6反转录酶1.3.7末端转移酶1.4其它工具酶1.4.1 RNA聚合酶1.4.2 连接酶DNA连接酶1.4.2.1 T41.4.2.1大肠杆菌连接酶1.4.2.3Taq DNA连接酶1.4.2.4TRNA连接酶4多核苷酸酶1.4.3 T41.4.4碱性磷酸酶1.4.5核酸酶1.4.5.1 DNA酶1.4.5.2 RNA酶1.4.6 RNA酶抑制剂1.4.7琼脂糖酶1.4.8 DNA单链结合蛋白1.4.9其它第2章分子克隆载体(14学时)本章重点与难点:重点掌握质粒、λ噬菌体、粘粒和M13噬菌体的组成结构和用作基因克隆的工作原理，了解其它克隆载体，表达载体和其它功能性载体的种类及其工作的基本原理。
2.1.质粒载体2.1.1 质粒的基本特性2.1.1.1 概念2.1.1.2 质粒的复制和不相容性2.1.1.3 转移性2.1.2 标记基因2.1.2.1选择标记2.1.2.2α-互补2.1.3 质粒载体的种类2.1.3.1克隆载体及其类群2.1.3.2其它载体2.2λ噬菌体载体2.2.1λ噬菌体的分子生物学2.2.1.1发育调节2.2.1.2可置换区2.2.2λ噬菌体载体的选择标记2.2.3 代表性λ噬菌体载体2.2.3.1插入型载体2.2.3.2置换型载体2.3粘粒载体2.3.1粘粒的结构特征2.3.1.1概念2.3.1.2组成与大小2.3.2用作基因克隆的原理性步骤2.3.3 用途2.3.4 粘粒克隆载体2.3.4.1单-cos位点粘粒载体2.3.4.2双cos位点的粘粒载体2.3.4.3[charomid]卡隆粒9载体系列3.1.1克隆中常见的问题2.4单链丝状噬菌体载体2.4.1 M13噬菌体的生物学2.4.1.1结构组成2.4.1.2增殖过程和方式2.4.2 M13噬菌体载体2.4.2.1插入区域2.4.2.2M13mp载体2.4.2.3宿主菌2.4.2.4用途2.4.2.5克隆中常见的问题2.4.3 噬菌粒2.4.4 M13KO72.5高通量克隆载体2.5.1 酵母生物学简介2.5.2 酵母人工染色体2.5.2.1复制的必需成份2.5.2.2选择标记2.5.2.3筛选模型2.5.2.4工作原理2.5.3 细菌人工染色体2.5.3.1 F质粒生物学2.5.3.2 载体的必需成分2.5.3.3 工作原理2.5.3.4 用pBeloBAC11构建苏云金芽胞杆菌YBT1520全基因组文库2.5.4 PAC载体2.5.4.1 P1噬菌体2.5.4.2 P1载体和 PAC载体2.6大肠杆菌表达载体2.6.1非融合蛋白表达载体2.6.1.1Lac启动子系列2.6.1.2Trp/tac 启动子系列2.6.1.3启动子2.6.2融合蛋白表达载体2.6.2.1GST 基因融合蛋白载体2.6.2.2蛋白A融合蛋白载体2.6.2.3 His融合蛋白载体2.7其它功能性载体2.7.1 穿梭载体2.7.1.1 E.coli/gram+2.7.1.2 E.coli/yeast2.7.1.3 E.coli/plant cell2.7.1.4 E.coli/Mammalian2.7.2启动子克隆载体2.7.3复制子克隆载体2.7.4整合载体2.7.4.1 无复制子整合载体2.7.4.2 温度敏感复制子整合载体2.7.4.3 转座子载体2.7.5解离载体第3章基因操作中的分离与分析技术(6学时)本章重点与难点:重点掌握大肠杆菌质粒DNA分离纯化,琼脂糖凝胶电泳和DNA片段回收的方法性原理以及RNA分离纯化的注意事项和分离及电泳方法。
要求掌握印迹分析的种类、原理和方法，特别要求掌握这些方法的运用对象，达到能灵活运用这些方法的目的。
3.1 DNA的分离3.1.1质粒DNA的分离纯化3.1.1.1小质粒的分离3.1.1.2大质粒的分离3.1.2单链DNA的分离纯化3.1.3凝胶电泳分离DNA3.1.3.1琼脂糖凝胶电泳3.1.3.2聚丙烯酰胺凝胶电泳3.1.3..3脉冲电场电泳3.1.4 DNA的回收3.1.4.1低熔点琼脂糖3.1.4.2透析袋3.1.4.3 Glass milk3.1.4.4 Qiagen 柱3.1.4.5其它3.2 RNA的分离3.2.1 RNA的分离纯化3.2.1.1注意事项3.2.2.2分离方法3.3 染色体DNA的分离3.4 探针制备3.5 印迹分析（杂交）3.5.1 Southern杂交3.5.1.1目标DNA的转移3.5.1.2杂交和检测3.5.2 Northern 杂交3.5.2.1 RNA的提取和电泳3.5.2.2目标RNA的转移3.5.2.3杂交和检测3.5.3 Western“杂交”3.5.3.1 SDS-PAGE3.5.3.2 蛋白质转移至固相支持体3.5.3.3 靶蛋白的检测3.6 基因芯片3.6.1基因芯片3.6.1.1基因芯片的定义3.6.1.2基因芯片分析流程3.6.1.3基因芯片技术的发展史3.6.1.4基因芯片技术的特点3.6.2基因芯片的分类3.6.2.1 Array3.6.2.2 Microarray3.6.2.3 DNA chip3.6.2.4 Lab on a chip3.6.3基因芯片技术的理论基础3.6.3.1 DNA分子在刚性表面的固定3.6.3.2 探针的标记3.6.3.3 杂交3.6.4基因芯片的制作3.6.4.1基因的分析与选择3.6.4.2点样3.6.4.3固定3.6.5 DNA芯片的应用3.6.5.1 RNA 表达分析3.6.5.2比较基因组分析3.6.5.3单核苷酸多态性（SNP）分析3.6.5.4临床检验第4章PCR技术及应用(6学时)本章重点与难点: 要求重点掌握PCR技术的基本原理、基本操作程序以及引物设计方法，了解利用PCR技术原理所衍生出来的技术方法的种类和工作原理，达到能够自觉合理地利用PCR技术为研究和应用服务。
4.1 PCR的基本原理4.1.1 PCR运行的基本原理4.1.2 热稳定DNA聚合酶的种类和用途4.1.2.1 Taq DNA聚合酶4.1.2.2保真热稳定DNA聚合酶4.1.2.3其它热稳定DNA聚合酶4.1.3 引物的设计4.1.3.1 长短4.1.3.2 Tm值4.1.3.3 其它4.1.4 运行程序4.1.4.1 温度4.1.4.2 时间4.1.4.3 平台效应4.2 PCR技术的应用4.2.1 PCR克隆4.2.1.1 AT克隆4. 2.1.2 平末端克隆4.2.1.3 反向PCR4.2.2 反转录相关PCR4.2.2.1 反转录PCR4.2.2.2 5’RACE4.2.2.3 3’RACE4.2.3 PCR鉴定和多态性4.2.3.1 PCR鉴定4.2.3.2 RAPD4.2.3.3 AFLP4.2.4实时定量PCR4.2.4.1 实时荧光定量PCR原理4.2.4.2 检测模式4.2.5其它PCR方式（略）4.2.5.1 PCR介导的诱变 (详见后文)4.2.5.2 PCR介导的DNA序列测定(详见后文)第5章DNA序列分析(4学时)本章重点与难点:要求掌握DNA序列分析的基本原理和基本步骤, 能够做到自行设计和按排测序工作；同时要求能对所测得的序列进行常规分析, 了解如何利用因特网进行数据处理和分析。