地贫筛查的检测技术(精)
地中海贫血及新生儿筛查检测项目介绍
福建
湖南 四川 重庆
4.1
2.2 1.9 1.0
1.5
2.0 2.2 2.3
5.6
4.2 4.1 3.3
J Clin Pathol, 2004; Clin Genet, 2010; 中华医学遗传学杂志, 2012.
地中海贫血
基因类型
αα/αα
临床类型
正常人
症状
-α/αα或αTα/αα
--/αα、-α/αTα或 ααT/ααT或-α/-α --/-α或--/ααT --/--
把住“三关” --婚检、孕检和产检
地中海贫血
中国南方α和β地贫的人群携带率
地区 α地贫 广西 云南 17.6 9.8 携带率（%） β地贫 6.4 7.3 合计 24.0部）
12.7
8.5 4.2 3.5
2.7
2.5 5.1 2.9
15.4
11.0 9.3 6.4
地中海贫血及新生儿筛查检测项 目介绍
王冰冰 博士
广东凯普生物科技股份有限公司
地中海贫血检测技术介绍
地中海贫血
地中海贫血（ Thalassemia ），简称地贫，世界上发 病率最高、危害性最大的单基因遗传性疾病，主要分为 α-地贫和β-地贫。 我国以长江以南各省发病率高，多见于广东、广西、海 南、福建、云南、贵州、四川 等地区。
新生儿筛查检测项目
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）缺乏症是最常见的一种遗传性酶缺乏 病,俗称蚕豆病。我国是本病的高发区之一，主要分布在长江以南各省， 以海南、广东、广西、云南、贵州、四川等省为高。G6PD缺乏症发病原 因是由于G6PD基因突变，导致该酶活性降低，红细胞不能抵抗氧化损伤 而遭受破坏，引起溶血性贫血。临床表现为慢性非球形细胞溶血性贫血、 蚕豆病、药物性溶血、新生儿黄疸及某些感染性溶血。
地中海贫血检测方法
地中海贫血检测的方法目前,用于地中海贫血检测的方法的代表性技术大体可分为以下两类:检测基因缺失突变的单管多重跨越断裂点PCR技术和多重连接探针扩增技术(MLPA);检测基因点突变的反向点杂交技术(RDB)、变性高效液相色谱技术(dHPLC)]和DNA序列分析技术等。
此外,最近发展的基于实时荧光PCR平台的新技术,如用于α地贫缺失拷贝数定量的实时荧光PCR直接检测技术、以及用于检测β地贫点突变的基于探针熔解曲线的基因分型技术(PMCA),可能是下一步更新换代的技术选择。
上述胛p PCR、RDB和MLPA等为地贫检测的主流技术。
1.Southern 印迹法优点：分析缺失型α-地中海贫血分子缺陷的可靠技术缺点：操作繁冗，不宜作为常规手段2.联合检测平均红细胞参数（MCV、MCH）+红细胞脆性检测+Hb（血红蛋白）电泳MCV：平均红细胞容积 MCH：平均红细胞血红蛋白量3.PCR-RDB法（PCR/寡核苷酸探针反向斑点杂交法）检测中国南方常见的17种β地贫突变：CD41～42(-TCCT)、IVS-2 nt654 C →T、-28 A→G、CD71～72（+A）、CD71～72（+T）、CD17 A→T、CD26 G→A、CD31（-C）、CD27～28（+C）、CD43 G→T、-32 C→A、-29 A→G、-30 T→C、CD14～15（+G）、CAP、Int及IVS-1 nt5 G→C4.α地中海贫血的基因诊断依据Gap-PCR原理采用单管四重PCR法（多重PCR技术）对其基因组DNA进行扩增，同时检测-α3.7、-α4.2、--SEA和正常对照4种等位基因型，采用1.2％琼脂糖凝胶电泳分离扩增产物，通过片断大小判断患者的基因型。
5.采用PCR-RFLP方法检测非缺失型α地贫Hb Constant Spring(HbCS)。
地贫基因分型 检测技术
地贫基因分型检测技术今天咱们来聊一个很重要的事情，就是地贫基因分型检测技术。
也许这个名字听起来有点复杂，不过没关系，我会讲得很简单，让大家都能明白。
你们知道吗？有一种病叫地中海贫血，这是一种很特殊的病。
有些小朋友得了这个病，就会经常感觉没力气，脸色也不好看，像个没有生气的小木偶一样。
那怎么知道一个人有没有地贫，是哪种地贫呢？这就需要地贫基因分型检测技术啦。
就好比我们在一个神秘的城堡里找宝藏，这个宝藏就是地贫基因的秘密。
检测技术就像一把神奇的钥匙，能打开城堡的大门，让我们看到里面的情况。
我给大家讲个小故事吧。
有一个叫小美的小朋友，她总是比别的小朋友容易累。
她的爸爸妈妈很担心，就带她去医院。
医生怀疑小美可能有地贫，于是就用这个地贫基因分型检测技术来检查。
这个检测就像是给小美的身体里的小细胞们做了一个超级仔细的检查。
医生从她身体里取了一点点血，就那么一点点，就像我们不小心被针扎了一下流出来的那点血。
然后把血送到一个专门的地方去检查。
在那个检查的地方啊，有好多神奇的仪器。
这些仪器就像一个个小侦探，在血液里寻找地贫基因的线索。
它们可聪明啦，能把血液里那些和地贫有关的小秘密都找出来。
比如说，有的地贫基因就像一个调皮的小怪兽，会让身体里的红细胞不能好好工作。
检测技术就能发现这个小怪兽，然后告诉医生这个小怪兽是什么样子的，是很厉害的那种，还是稍微不那么厉害的。
如果没有这个检测技术呢，医生就像在黑暗里摸瞎，不知道小美到底怎么了。
但是有了这个技术，医生就能很清楚地知道小美是不是地贫，是哪一种地贫。
这样就能给小美制定专门的治疗方法啦。
还有一个小朋友叫小阳，他的哥哥有地贫。
小阳的爸爸妈妈很担心小阳也会有。
于是也带小阳去做了这个检测。
小阳一开始很害怕，他想会不会很疼啊。
可是当他知道只是扎一下手指取点血的时候，他就勇敢了。
结果出来后，小阳没有地贫，他的爸爸妈妈松了一口气，小阳也开心地笑了。
这个地贫基因分型检测技术就像一个守护小天使，守护着小朋友们的健康。
地贫的实验室检查究竟有哪些？
地贫的实验室检查究竟有哪些？地贫是一种常见的遗传性血液疾病，主要特征是红细胞内缺乏血红蛋白中的一种重要结构蛋白质——地中海贫血血红蛋白。
地贫的诊断和治疗离不开实验室检查，通过实验室检查可以明确地贫的类型、严重程度和并发症。
本文将详细介绍地贫的常见实验室检查方法。
一、血常规检查血常规检查是最基础的实验室检查方法之一，可以帮助医生了解患者的全血细胞计数和细胞形态学。
对于地贫患者来说，血常规检查最关注的指标是红细胞计数、红细胞压积和平均红细胞体积等。
1. 红细胞计数：地贫患者的红细胞计数通常会偏低，这是由于地中海贫血血红蛋白缺乏使得红细胞的生命力受损所致。
2. 红细胞压积：红细胞压积是血液中红细胞所占据的体积比例，一般情况下地贫患者的红细胞压积也会偏低。
3. 平均红细胞体积：平均红细胞体积反映了红细胞的大小情况，对于地贫患者来说，平均红细胞体积会有所增大。
二、血红蛋白电泳血红蛋白电泳是一种常用的地贫分类诊断方法，通过检测血液中的血红蛋白类型和比例来确定地贫的类型。
地贫主要分为α地贫和β地贫两种类型，而每种类型还有不同的亚型。
血红蛋白电泳可以明确地贫的类型，帮助医生制定合理的治疗方案。
三、骨髓穿刺检查骨髓穿刺检查是一种直观了解骨髓情况的方法，对于地贫患者来说也是必不可少的检查手段之一。
通过骨髓穿刺可以了解骨髓造血功能是否正常、红细胞生成受损的程度以及有无其他造血障碍的存在。
四、铁代谢相关指标检查地贫患者由于长期输血或红细胞寿命缩短，容易引起身体内铁的过多积聚或过严缺乏。
铁代谢相关指标检查包括血清铁、血清铁蛋白、转铁蛋白等指标。
通过这些指标可以了解患者体内铁代谢的情况，以便制定合理的铁剂使用与控制输血量。
五、溶血指标检查地贫患者由于红细胞形态不规则，容易导致红细胞的慢性破坏与溶血。
溶血指标检查包括血清胆红素、血清乳酸脱氢酶等指标。
这些指标的升高可以提示患者是否存在慢性溶血的情况，指导治疗与判断病情。
六、免疫系列相关指标检查地贫患者的免疫功能往往较差，易于发生感染。
地贫诊断标准参考指南
地贫诊断标准参考指南一、概述地中海贫血（简称地贫）是一种遗传性溶血性贫血，由于血红蛋白的珠蛋白β链发生了缺失或突变，导致红细胞结构异常，易于破裂，进而引发贫血。
地贫的诊断需综合考虑多个方面的检查结果，以得出准确诊断。
二、诊断方法1.血常规检测：通过血常规检测，观察红细胞平均体积（MCV）、红细胞平均血红蛋白量（MCH）等指标，初步判断是否存在贫血及可能的贫血类型。
2.血红蛋白电泳：通过血红蛋白电泳，观察血红蛋白的组成，有助于地贫的初步筛查。
3.基因检测：基因检测是地贫诊断的金标准，通过检测β珠蛋白基因的突变位点，可以明确地贫的类型及严重程度。
4.家族史调查：了解患者的家族史，特别是地贫阳性家族史，有助于诊断地贫。
5.临床表现观察：地贫患者通常有面色苍白、黄疸、肝脾肿大等表现，根据临床表现可以辅助诊断。
6.铁代谢评估：由于地贫患者体内血红蛋白代谢异常，可能导致铁过载，因此进行铁代谢评估有助于了解病情。
7.骨髓检查：骨髓检查可以观察红细胞的生成情况，有助于地贫的诊断。
三、诊断标准判定1.若血常规检测、血红蛋白电泳及家族史调查结果均提示地贫可能，建议进行基因检测以明确诊断。
2.若基因检测发现β珠蛋白基因突变，结合临床表现及家族史，可以确诊为地贫。
3.若基因检测未发现β珠蛋白基因突变，但临床表现及实验室检查结果均支持地贫诊断，可以考虑其他类型地贫，如α地贫等。
4.对于临床表现不典型或实验室检查结果与地贫不符的情况，需综合考虑各项检查结果，进行全面评估，以得出准确的诊断。
四、注意事项1.地贫诊断需由专业医生进行，患者切勿自行诊断或治疗。
2.地贫患者需定期进行血常规及血红蛋白电泳等检查，以便及时了解病情变化。
地中海贫血的鉴别诊断
地中海贫血的鉴别诊断
一、引言
地中海贫血是一种常见的遗传性血液疾病，主要发生在地中海沿岸地区。
由于
地中海贫血的临床症状与其他类型贫血相似，鉴别诊断成为临床工作中的重要任务。
本文将介绍地中海贫血的鉴别诊断方法。
二、地中海贫血的病因
地中海贫血主要由α地中海贫血和β地中海贫血两种类型构成，分别由α和β
球蛋白链基因的突变导致。
三、地中海贫血的临床表现
地中海贫血患者主要表现为贫血、溶血性贫血、肝脾肿大等症状，容易与其他
贫血类型混淆。
四、地中海贫血的鉴别诊断
1.实验室检查
–血常规：地中海贫血患者显示出不同程度的贫血和红细胞数量异常。
–血涂片：观察红细胞形态可与其他贫血类型区分。
–血红蛋白电泳：可明确地中海贫血类型。
2.遗传学检查
–基因检测：通过检测α和β球蛋白链基因突变可确定地中海贫血的类型。
五、地中海贫血的治疗
目前地中海贫血的治疗主要是对症治疗和干预治疗，包括输血、脾切除、造血
干细胞移植等方法。
同时，定期随访和遗传咨询也是重要的治疗手段。
六、结论
地中海贫血由于其独特的病因和临床表现，需要进行专门的鉴别诊断。
通过实
验室检查和遗传学检查的综合应用，可以明确诊断和选择合适的治疗方案，提高患者的生存率和生活质量。
对地中海贫血的研究和诊治工作仍需不断加强，以减少患者的痛苦和提高生活水平。
以上就是对地中海贫血的鉴别诊断的简要介绍，希望对您有所帮助。
地中海贫血及新生儿筛查检测项目介绍_培训课件共28页
地中海贫血
基因类型
αα/αα -α/αα或αTα/αα --/αα、-α/αTα或 ααT/ααT或-α/-α
临床类型
正常人 静止型
轻型 （标准型）
--/-α或--/ααT --/--
血红蛋白H病
Hb Bart’s胎儿水 肿综合征
症状
无症状 轻度贫血
溶血性贫血 胎儿水肿
- a3.7< - a4.2 <a2Ta1< - -
—
299N 299M S2168N S2168M
—
正常样本
1494M纯合子
1555M纯合子
良心品质 科学管理
血，如果不治疗，一般5岁左右死亡； ❖ 中间型地贫患儿需长期输血，长大基本丧失劳动力，生存质量明显下降。
地贫难治但可防！
把住“三关” --婚检、孕检和产检
地贫基因携带率不是防控 目标，减少了多少中重度 地贫的出生才是关键！
地中海贫血
中国南方α和β地贫的人群携带率
地区
广西 云南 海南 广东 贵州 江西（南部） 福建 湖南 四川 重庆
结果分析
--SEA/αα βN /βN
--SEA/-α4.2 βN/βN
αα/ ααQS βN /βN
--SEA / ααQS βN/βN
αα/αα β41-42/βN
孕前优生健康检查中地中海贫血筛查的技术方案
孕前优生健康检查中地中海贫血筛查的技术方案目的探讨孕前优生健康检查中新婚待育夫妇地中海贫血筛查在出生缺陷干预应用中的意义，为预防和减少地贫病患儿的出生提供依据。
方法双方均为潮汕平原地区户籍的孕前优生健康检查对象12 092例，所有样品均采用MCV法进行初筛，以静脉血平均红细胞体积（MCV≤80fL）作为诊断地贫的阳性参考指标。
再应用Gap-PCR和反向点杂交技术（RDB-PCR）对部分样品进行α地贫基因和β地贫基因定型。
结果在1679例（MCV≤80fL）血标本中检出7种α-地贫等位基因（染色体）942例，检出9种β-地贫等位基因（染色体）482例，计算上10 413例MCV阴性α-地贫基因推算数205例和10 413例MCV阴性-β地贫基因推算数46例，则潮汕平原地区人群α-基因携带率为9.49%（1147/12 092），β-基因携带率为4.37%（528/12 092）。
结论新婚夫妇地中海贫血系统筛查及基因诊断能及时发现各类地贫异常患者，对预防出生缺陷有着重要意义。
标签：地中海贫血；筛查；出生缺陷；计划生育地中海贫血（简称地贫）是由于α和（或）β珠蛋白基因发生了改变，使得血红蛋白中一种或几种珠蛋白肽链合成速率降低或缺如，导致珠蛋白链生成失衡为特征的遗传性溶血性血红蛋白病[1-2]。
常见有α地贫和β地贫两种类型。
广东省是该病的高发区。
为了解本地区户籍人口地中海贫血的基因类型和频率分布，为开展遗传咨询、产前诊断预防和减少地贫病患儿的出生提供依据。
我们对12 092例双方均为潮汕平原地区户籍的孕前优生健康检查对象进行地贫检查。
1 对象与方法1.1 研究对象广东省潮汕平原地区从2013年1月～2014年3月的新婚夫妇，共12092例（年龄20～34岁，夫妇双方均为最佳生育年龄），调查对象均为潮汕平原地区户籍人口。
1.2 研究方法1.2.1 MCV值测定以平均红细胞体积（MCV）为血液学表型初筛指标（采用日本Sysmex公司K4500型全自动血细胞分析仪进行检测）。
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电泳法
多种方法优缺点的比较
1.检验结果的准确性 2.检验操作技术的难度 3.设备的投入与产出比 4.设备的实用性
ROC Curve
11.0 1.9 1.8 1.7 1.6 1.5 1.4 1.3 1.2 1.1 10.0 -.1 -.0 .1 .2 .3 .4 .5 .6 .7 .8 .9 1.0
3.1高效液相色谱法
Elevated HbA2 -Thalassemia carriers
2.9%
5.6%
3.2血红蛋白电泳法
电泳法是比较普及的方法，我国内地 绝大数单位用电泳法诊断地贫，优于HPLC 的是可用于做新生儿脐血HbBart’s定量， 诊断α地贫，Bart’s达5%-15% 为轻型α 地贫 ，HbBart’s达25%为HbH病 。
3.血红蛋白分析
HbA2量：轻型β地贫和静止型β基因携带者>4%。 HbF量:中间型和重型β地明显增高。 异常波型：各种异常血红蛋。 HPLC不能做HbH和HbBart’s定量，不能以脐血诊断α 地贫。 （所有的β地贫和中间型α地贫（血红蛋白H病）可 明确诊断，静止型α基因携带者、轻型α地贫不能 诊断）
1.红细胞脆性试验
红细胞脆性试验在基层单位可 用，但在有血细胞分析仪的单位就 不应该单用于地贫筛查，此项检测 误漏诊率高，且英美地贫筛查指南 中均没有此项目。
2.血细胞分析
平均红细胞体积（MCV） <79fl为地贫表型阳性，β地贫和中 间型、轻型α地贫和部分静止型α 地贫基因携带者均为阳性，但有部 分静止型α地贫基因携带者是正常 的。
Source of the Curve
电泳法3 电泳法2 电泳法1 高效液相
1 - Specificity
Diagonal segments are produced by ties.
四种血红蛋白分析设备对比
按上述ROC确定的诊断β地贫杂合 子HbA2截断值判断238样本中173例健 康成人误诊例数和65例β地贫杂合子漏 诊例数分别为HPLC为0和1例，Sebia为 各1例，Sang Te为2和4例，醋酸纤维膜 法为32和4例。
T
T
T
静止型α地贫：缺失1个 α基因(αα/α-) 或1 个α基因突变(αα/ααT ) 又叫α地贫2，不会贫血。
T
β地贫：以临床贫血程度分级
重型β地贫：Hb在60g/L以下。纯合子地贫或 双重杂合子地贫。 中间型β地贫：Hb60-100g/L之间。双重杂合 子或杂合子地贫。 轻型β地贫：贫血但在100g/L以上，杂合子 地贫。 静止型β地贫：不贫血，杂合子地贫。
地贫筛查的检测技术
解放军第三0三医院血液科
张新华
背景信息
地中海贫血是广西新生儿出生 缺陷的首位重要遗传病！ 地中海贫血是广西婚前检查医 务人员首位要关注的疾病！
背景信息
健康夫妇生下的胎儿中唐氏 综合症的出生率约为1/750，而重 型和中间型地贫（包括α和 β地 贫）胎儿的出生率超过10‰ ，相 差十多倍。但实际上地贫的受重 视的程度远不如唐氏综合症。
4.基因分析
静止型α基因携带者只有基因分 析才能诊断（ 缺失型的α α/ α-4.2 ,αα/α-3.7 ,非缺失型的HbCs、HbQs 、HbWs）
基因分析的注意事项
基因分析的全过程都很重要，其中的一步出错 都会导致结果的错误。可从下述几方面注意： 1.血标本的采集、运送和储存全过程不出问题。 2.血样处理、DNA/RNA制备、扩增、电泳/杂交不出 问题。 3.结果判断要联系血常规和电泳结果。还要注意医 生开单的项目的准确性。
1.正常新生儿 2.胎儿水肿综合征 3.α地中海贫血1(脐血) 4.HbCS-HbH病型 5.重型β地中海贫血复合HbE 6.轻型β地中海贫血 7.异常HbK杂合子 8.异常HbJ杂合子
9.轻型β地中海贫血 10.异常HbD杂合子 11.异常HbG杂合子 12.轻型β地中海贫血复合HbE 13.正常成人 14.正常成人 15.HbH病
地中海贫血的检测技术
必须掌握的几项地贫相关指标
平均红细胞体积 血红蛋白电泳 血红蛋白A2 α地贫基因 β地贫基因 ＞79fl 未见异常区带 <3.5%或<4% 未检出 未检出
地贫相关的临床检测技术
1.红细胞脆性试验 2.血细胞分析 3.血红蛋白分析 4.地贫基因检测 第1-3项为筛查项目
背景信息
▲广西地贫基因携带率高达25%以上。 ▲新生儿缺陷率高，死亡率高，约有1/2是地贫。 ▲重视不够，措施不得力。 ▲从事地贫防治人员少，投入少。 ▲开展基因诊断的医院也少，开展地贫产前诊断的 医院更少。 ▲各级医院地贫相关设备落后。 ▲地贫防治工作特别。 ▲市民地贫知识匮乏。
认识地中海贫血
1.地中海贫血分类：主要有α地 贫和β地贫两大类。 2.地中海贫血的分级：均分为重 型、中间型、轻型和静止型基 因携带者四级。
α地贫：以缺失α基因数 或突变α基因数分等级
重型α地贫：又叫 HbBart’s水肿综合征， 4个α基因都缺失了 (--SEA /--SEA) ，在孕 后期或出生后即死亡。
地贫的病理基础
α地贫：α珠蛋白基因缺失或缺陷使α珠 蛋白链的合成受到部分或完全抑制，造成α链 的合成减少，过剩的β链聚合成四聚体，在红 细胞内沉积，使红细胞变形性降低，不易通过 微循环及脾窦与脾索间的基膜而造成红细胞的 过度破坏。 β地贫：β珠蛋白基因突变导致β珠蛋白链 合成受到部分或完全抑制，过剩的α链聚合成 不稳定的四聚体，在红细胞内沉积，造成无效 造血和红细胞的过度破坏。
中间型α地贫：缺失3个 α基因(α -/--SEA)或缺 2个α基因另有一个α基 因突变(α αT/--SEA) ， 又叫HbH病，电泳大多可 见HbH区带。Hb大多在 60-100g/L左右。
T
轻型α地贫：缺失2个 α基因(α α/--SEA) (α-/ α-)或2个α基 因突变(α αT /α αT ) 或缺1个α基因另有一个 α基因突变(α-/ α-) ， 又叫α地贫1。轻度贫血 或不贫血。