第三章 药物的杂质检查

第三章药物的杂质检查[教学目的]一、掌握一般杂质检查的原理、方法和计算。

二、熟悉特殊杂质检查的方法和原理。

[本章分配学时数]2学时[教学环节与教学内容][复习引入]2分钟在上节课里，我们介绍了药物一般鉴别试验的原理，主要有有机氟化物、有机酸盐、芳香第一胺类、托烷生物碱类、-无机金属盐、无机酸根的鉴别原理；并且还介绍了一般鉴别试验的基本方法有化学鉴别法、光谱鉴别法、色谱鉴别法、生物学法等几个大类；最后还介绍了有关鉴别试验灵敏度的知识点。

通过上节课，同学们已经掌握了药物一般鉴别试验的基础知识，那么今天这节课，我们就要开始介绍有关药物杂质检查的知识。

[教授新课]什么是药物的杂质？药物的杂质是指药物中存在的无治疗作用、或影响药物的稳定性和疗效、甚至对人体健康有害的物质。

杂质的存在不仅影响药物质量、还反映出生产中存在的问题。

进行药物的杂质检查既可保证用药的安全、有效，同时也为生产、流通过程的质量保证和企业管理的考核提供依据。

一、概述1．药物的纯度要求（1）药物纯度的概念：即药物的纯净程度，是反映药品质量的一项重要指标。

在药物的生产和贮藏过程中会引入杂质，如药物的生产中常常要使用盐酸、硫酸等，若洗涤不够，在成品中就会引入氯化物、硫酸盐等无机杂质。

（2）药物纯度的评价应把药物的性状、理化常数、杂质检查、含量测定等作为一个有联系的整体来评价药物的纯度。

（3）人类对药物纯度的认识是在防治疾病的实践中积累起来，并随着分离、检测技术的提高而进一步发现药物中存在的杂质，从而不断提高对药物纯度的要求。

举例：盐酸哌替啶（度冷丁，I）2．杂质的来源与种类（1）杂质的来源1）生产过程引入的杂质a．在合成药的生产过程中，未反应完成的原料、反应的中间体和副产物，在精制时未能完全除去，就会成为产品中的杂质。

b．药物在制成制剂的过程中，也可能产生新的杂质。

c．在药物的生产过程中，常需用到试剂、溶剂。

这些化合物若不能完全除去，也会引入有关杂质。

d．药物中还可能存在一些生物活性与有效成分有很大差异的无效、低效异构体或晶型。

2）贮藏过程引入的杂质药品因保管不善或贮藏时间过长，在外界条件如温度、湿度、日光、空气的影响下或因微生物的作用可能发生水解、氧化、分解、异构化、晶型转变、聚合、潮解和发霉等变化，产生有关杂质。

水解反应是药物容易发生的一种变质反应。

（2）杂质的种类1)按来源分a.一般杂质一般杂质是指在自然界中分布较广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质，如酸、碱、水分、氯化物、硫酸盐、砷盐、重金属等。

b.特殊杂质特殊杂质是指在特定药物的生产和贮藏过程中引入的杂质。

如阿司匹林中的游离水杨酸，甲硝唑中的2－甲基－5－硝基咪唑等。

2)按结构分a．无机杂质氯化物、硫酸盐、硫化物、氰化物、重金属等。

b. 有机杂质有机药物中引入的原料、中间体、副产物、分解产物、异构体和残留溶剂等。

3)按性质分a．信号杂质信号杂质本身一般无害，但其含量的多少可以反映出药物的纯度水平，如含量过多，表明药物的纯度差，提示药物的生产工艺不合理或生产控制存在问题。

氯化物、硫酸盐就属于信号杂质。

b. 有害杂质有害杂质如金属盐、砷盐、氟化物等，对人体有毒害，在质量标准中应严格加以控制，以保证用药安全。

3．杂质的限量检查（1）杂质限量的概念药物中所含杂质的最大允许量，叫做杂质限量。

通常用百分之几或百万分之几（ppm）来表示。

（2）杂质限量检查的方法1）进行杂质的限量检查时，可取一定量被检杂质的标准溶液与一定量供试品在相同条件下处理后，比较反应结果，以确定杂质含量是否超过规定。

使用此方法时，需注意平行原则。

即供试品和标准溶液应在完全相同的条件下反应，所加入的试剂、反应的温度、放置的时间等均应相同。

只有这样，反应的结果才有可比性。

2）不与标准溶液进行对比，而在供试品溶液中加入试剂，在一定条件下反应，观察有无正反应出现，以不出现正反应为合格，即以该检测条件下反应的灵敏度来控制杂质限量。

（3） 杂质限量的计算1）杂质限量的计算公式100%⨯杂质的最大允许量杂质限量＝供试品量当供试品（S ）中所含杂质的量是通过与一定量杂质标准溶液进行比较来确定时，杂质的最大允许量可由杂质标准溶液浓度（C ）与体积（V ）的乘积获得，上式又可以表达为：×100%⨯标准溶液的浓度标准溶液的体积杂质限量＝供试品量，或 ×100%C V L S=g 2）杂质限量计算举例a. 对乙酰氨基酚中氯化物检查已知：S = 2.0g ×25/100；C = 10μg/ml ；V = 5.0ml求： L = ？解：L = C ×V/S ×100%= 10×5.0/2.0×10-6×25/100×100% = 0.01%b. 葡萄糖中重金属检查已知：S = 4.0g ；C = 10μg/ml ；L = 5×10-6求： V = ？解：V = L ×S / C= 5×10-6×4.0/10×10-6 = 2.0(ml)c. 磷酸可待因中吗啡检查已知：V = 5.0ml ；C = 2mg/100ml ； S = 0.10g求： L = ？解： L = C ×V / S= 2.0/100×5.0/0.1×103 = 0.1%二、一般杂质的检查方法1．氯化物检查法（1）原理利用氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银试液作用，生成氯化银白色沉淀物，与一定量标准氯化钠溶液在相同条件下生成的氯化银浑浊液比较，浊度不得更大。

以此来判断供试品中氯化物是否超过限量。

Cl-+Ag+AgCl（2）条件[Cl-] 0.05mg～0.08mg/50ml, 即相当于标准氯化钠溶液5ml～8ml酸度稀硝酸10ml/50ml温度 30～40℃（3）干扰的排除1）供试品溶液混浊可用含硝酸的蒸馏水洗净滤纸中的氯化物后滤过，以消除混浊对氯化物检查的干扰。

2）供试品溶液有颜色可采用内消色法，按中国药典附录规定的方法处理。

即取两份供试品溶液，于其中一份中先加入硝酸银试液1.0ml，摇匀，放置10min，如显浑浊，可反复过滤，至滤液澄清，即得无氯化物杂质又具有相同颜色的澄清溶液，再在其中加入规定量的标准氯化钠溶液与水适量使成50ml，作为对照溶液；另一份中加入硝酸银试液1.0ml与水适量使成50ml，作为供试品溶液，将两液在暗处放置5min后比较，即可消除颜色的干扰。

2．硫酸盐检查法（1）原理药物中存在的微量硫酸盐与BaCl2在盐酸酸性介质中生成BaSO4白色沉淀，与一定量标准KaSO4溶液在相同条件下生成的混浊比较，浊度不得更大。

以此来判断供试品中硫酸盐是否超过限量。

（2）条件[SO42-] 0.1mg～0.5mg/50ml, 即相当于标准硫酸钾溶液1.0～5.0ml 酸度稀盐酸2ml/50ml,pH≈1（3）干扰的排除1）供试品溶液如需滤过，应先用加盐酸使成酸性的水洗净滤纸中硫酸盐，再滤过。

2）有色供试品如富马酸亚铁处理的方法与氯化物检查法相同。

采用内消色法。

3．铁盐检查法（1）原理铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸铵生成红色可溶性硫氰酸铁配位离子，再与一定量标准铁溶液用同法处理后所呈的颜色进行比较，颜色不得更深。

以此来判断供试品中铁盐是否超过限量。

Fe3+6SCN-+H+Fe(SCN)63-（2）条件[Fe3+] 0.01mg～0.05mg/50ml, 即相当于标准硫酸钾溶液1.0～5.0ml酸度稀盐酸4ml/50ml（3）干扰的排除1）当有Fe2+存在时，可加入氧化剂过硫酸铵氧化供试品中的Fe2+成Fe3+。

2）当供试液管与对照溶液管色调不一致时，或所呈硫氰酸铁的颜色较浅不便比较时，可分别移入分液漏斗中，各加正丁醇或异戊醇提取，分别醇层比色。

4．重金属检查法重金属是指在实验条件下与S2-作用显色的金属杂质，如银、铅、汞、铜、镉、锡、锑、铋等，由于药品生产过程中遇到铅的机会较多，铅在体内又易积蓄中毒，故检查时以铅作为代表。

中国药典（2000年版）对重金属的检查一共收载了四种方法：第一法为硫代乙酰胺法；第二法是将供试品在500~600℃炽灼破坏后，再按第一法检查；第三法是检查能溶入碱溶液，而不溶于酸溶液的药物，在碱性条件下用硫化钠作显色剂；第四法为微孔滤膜法，通过微孔滤膜过滤，使试验条件下生成的硫化铅沉淀富集于滤膜上，形成铅斑，比较供试溶液和对照溶液铅斑的颜色，来判断供试品种的重金属是否超过限量。

以下重点讨论第一法。

（1） 原理硫代乙酰铵在弱酸性（pH3.5 醋酸盐缓冲液）条件下水解，产生硫化氢，与微量重金属离子生成黄色到棕黑色的硫化物均匀混悬液，与一定量标准铅溶液经同法处理后所呈颜色进行比较，颜色不得更深。

以此来判断供试品中重金属是否超过限量。

CH 3CSNH 2+H 2O CH 3CONH 2+H 2SH 2S +Pb 2+pH3.5PbS +2H +（2） 条件 [Pb 2+] 0.01mg ～0.02mg/27ml ，即相当于标准铅溶液1～2ml酸度 pH3.0～3.5时，硫化氢沉淀较完全（3） 干扰的排除1) 供试品有色：可采用外消色法消除干扰。

即在加硫代乙酰铵试液前在对照溶液管中滴加少量稀焦糖溶液，使之与供试品溶液管的颜色一致，然后再加硫代乙酰铵试液比色。

2) 供试品中如有微量Fe 3+：在弱酸性溶液中将氧化硫化氢析出硫，产生混浊、影响比色。

可先加Vc 或盐酸羟铵使Fe 3+还原成Fe 2+再检查。

5．砷盐检查法《中国药典》采用古蔡氏法和二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag －DDC ）检查药物中微量的砷盐。

古蔡氏法（1） 原理金属锌与酸作用产生新生态的氢，与药物中微量砷盐反应生成具挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸，产生黄色至棕色的砷斑，与一定量标准砷溶液所生成的砷斑比较，颜色不得更深。

以此来判断供试品中砷盐是否超过限量。

As 3++3Zn +3H +3Zn 2+AsH 3+AsO33-+3Zn+9H+3Zn2++3H+2O AsH3AsH33HgBr23HBr As(HgBr)3++(黄色)+3AsH(HgBr)2(棕色)2As(HgBr)3AsH3As(HgBr)3AsH33HBr++As2Hg3(棕黑色)（2）试剂的作用碘化钾和氯化亚锡的主要作用是将五价的砷还原成三价的砷；醋酸铅棉的作用是消除供试品可能含有的少量的硫化物。

（3）干扰的排除1）供试品若为硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐等，在酸性溶液中生成硫化氢或二氧化硫气体，与溴化汞作用生成黑色硫化汞或金属汞，干扰砷斑检查。

应先加硝酸处理，使氧化成硫酸盐，除去干扰，如硫代硫酸钠中砷盐的检查。

2）供试品若为铁盐，能消耗碘化钾、氯化亚锡等还原剂，影响测定条件，并能氧化砷化氢干扰测定。