血液、细胞、组织基因组DNA提取试剂盒步骤
血液基因组DNA提取试剂盒(离心柱型)
血液基因组 DNA 提取试剂盒（离心柱型）
GK1043 20 Preps GK1041 50 Preps GK1042 100 Preps
一. 试剂盒组成
Components 2.0-ml Collection Tube TBP Solution(a) TBM Solution(b) TE (pH 8.0) Proteinase K(c) Boiled RNase A PB Solution Wash Solution(d) Elution Buffer(e) Buffer CBS Protocol
二. 基本原理:
临床常常需要从血液中抽提基因组 DNA， 用于病症的辅助性分析和诊断。 样品经本试剂盒提供的专用裂解液 处理后，在特定的 TBM Solution 中用 Protenase K 和去污剂裂解。gDNA recovery Column 柱膜能选择性吸附样品 中基因组 DNA，而不吸附蛋白质和其它非核酸类物质。经简单的洗涤步骤，即可得到样品基因组 DNA。
七. 储存
常温储存 1.5 年。
Product Use Limitation: This product is developed, designed and sold exclusively for research purpose and in vitro use only.
2
六. 提取基因组 DNA 操作步骤:
柱子准备：在 gDNA recovery Column 中加入 200μl Buffer CBS , 10,000rpm 离心 1 分钟，弃透过液，备用。
全血基因组DNA提取试剂盒使用说明
全血基因组DNA提取试剂盒使用说明一、试剂盒组成及存储条件：1.试剂盒包括蛋白酶K、缓冲液、洗涤缓冲液、脱水溶液等。
2.试剂盒应存放在4℃以下避光干燥处，避免冻结。
二、实验前准备：1.准备所需的实验耗材和设备，如离心管、恒温振荡器、离心机等。
2.取出全血样品，可以是新鲜全血或已离心制备的全血细胞。
三、DNA提取步骤：1.取出全血样品，用洗涤液洗涤细胞沉淀并离心收集，去除红细胞。
2.加入蛋白酶K将细胞裂解，释放DNA。
3.加入缓冲液和脱水溶液，沉淀DNA并洗涤。
4.最终稀释DNA并保存在适当的条件下。
四、实验注意事项：1.操作过程中需注意无菌操作，避免污染。
2.加入蛋白酶K的量应准确控制，不要过多或过少。
3.混合溶液时需轻轻摇匀，避免气泡的产生。
4.稀释保存DNA时，需使用无核酸酶的载体溶液，如TE缓冲液。
五、质控及结果分析：1.可以通过琼脂糖凝胶电泳或比色法检测提取的DNA质量。
2.检测DNA浓度和纯度，确保提取的DNA适用于后续实验。
3.可以保存提取好的DNA样品，以备后续实验使用。
六、应用领域：1.该试剂盒适用于从全血样品中提取DNA，可用于基因分析、疾病诊断、遗传研究等领域。
2.可以用于个体基因检测、种群遗传学研究、药物反应性研究等。
总结：全血基因组DNA提取试剂盒是用于从全血样品中提取DNA的重要工具，操作简便、提取效率高。
在实验中需注意操作规范，保证提取的DNA质量和纯度。
该试剂盒广泛应用于科研领域，为基因研究和临床诊断提供了有力支持。
希望上述使用说明能够帮助用户正确、高效地使用全血基因组DNA提取试剂盒。
血液基因组DNA 提取试剂盒 说明书
广州东盛生物科技有限公司 电话：020-87791356
传真：020-87791381 网址：
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核酸纯化系列
操作步骤-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------1 取血液样本，每 400 μl 血液加入到一只 1.5 ml 离心管中。加入 2 倍体积的红细胞裂解液 RS。漩涡振荡或上下来回颠倒混匀。 5,000 rpm 离心 3min，弃上清，收集白色或淡红色沉淀。
血液基因组 DNA 提取试剂盒（硅胶膜离心柱法）
核酸纯化系列
产品组分
组分
红细胞裂解液 RS 消化缓冲液 DS 裂解液 MS 蛋白酶 K 去蛋白液 PS 漂洗液 PE 纯化液 TE DNA 纯化柱 说明书
N1121
80 ml 15 ml 20 ml 1 ml 30 ml 15 ml 5 ml 50 个 1份
液氮，并在样品未完全解冻前加入含有抑制核酸酶作用的螯合剂的裂解液。
问：提取的基因组 DNA 生物活性差，为什么？
答：1 提取的基因组 DNA 盐浓度过高，沿管壁四周加入漂洗液 PE，这样有利于提高清洗效果；
2 DNA 中含有乙醇，严格按第 8 步的离心速度和时间操作；
3 进行 DNA 洗脱时请一定在膜的中央加入纯化液，尽量不要沾染管壁。
广州东盛生物科技有限公司 电话：020-87791356
从全血和体液中提取基因组DNA的操作步骤(精)
从全血和体液中提取基因组DNA 的操作步骤提取DNA 需要的仪器和试剂：⑴ 1.5ml 离心管⑵ 移液管: 1000ul, 200ul, 40ul 各一支和移液管尖头: 100-1000ul, 1-200ul 各一盒⑶ 微型滤柱（备用）⑷ 小型旋转混合器一台⑸ 小型离心机: 可放入1.5ml 离心管和2ml 收集管.⑹ 恒温水浴⑺ 电冰箱: -20 C, 4 C⑻ 无水乙醇(自备)⑼ 70% 乙醇(自备)⑽ 利普生DNA 提取试剂盒。
内含: ⑴ 裂解液1 ⑵ 裂解液2 ⑶消化液 ⑷纯化液⑸弥散液 ⑹蛋白酶K ⑺ 带钩细玻棒一盒 ⑻ 微型滤柱若干。
提取DNA 前注意：⑴ 使血样品内容物达到室温（15 – 25 C ）。
⑵ 预热水浴到58 C ， 为步骤3作准备。
⑶ 置弥散液于58 C 内，为步骤4或步骤7作准备。
⑷ 所有的离心步骤均在室温下进行。
⑸ lml 全血可提得15-60ug DNA 。
一．从1ml 全血或体液中提取DNA 的步骤：⑴ 裂解1： 取1ml 全血，血桨，血清，淋巴细胞放入到1.5ml 的离心管中，加入400ul 裂解液1。
上下翻转，使沉淀物分散，旋转脉动15秒后放入离心机中离心，离心速率为8000rpm ，1min.。
倒掉上层液，可见离心管底部有血色沉淀。
重复此裂解步骤一次，这次是加入1ml 裂解液1。
最后用移液管吸净所有上层液弃去, 以使离心管底部的血色沉淀不再残留有裂解液1。
⑵ 裂解2: 在上面离心管中加入1ml 裂解液2。
上下翻转，务必使沉淀物分散， 旋转脉动15秒后放入离心机中离心，8000rpm ，1 min.。
倒掉上清液，可见离心管底部有微量淡红色沉淀。
重复此裂解步骤一次，这次仍然是加入1ml 裂解液2，最后用移液管吸净所有上清液弃去，以使离心管底部的灰白色沉淀不再残留有裂解液2。
⑶ 消化： 吸取蛋白酶K 10ul ( = 0.2mg )加入到上面的离心管中，用移液管尖头反复吹打， 使蛋白酶K 与沉淀物均匀接触后， 加入320ul 消化液，上下翻转离心管， 务必使沉淀物分散于消化液中。
全血基因组DNA提取试剂盒使用说明
全血基因组DNA提取试剂盒使用说明DNA提取是生物学、遗传学和分子生物学等领域的一项重要实验操作。
全血基因组DNA提取试剂盒是用于从全血样本中提取DNA的试剂盒，本文将详细介绍其使用说明。
一、试剂准备：1.预先将试剂盒从-20℃的冷冻器中转移到4℃的冰箱中解冻，取出所需试剂。
2.将试剂A和试剂B随机摇匀，避免沉淀的产生。
二、样本处理：1.取出需要提取DNA的全血样本，将其加入离心管中。
2.加入适量的蒸馏水和样本量相等体积的10%梳酸混匀，使血细胞溶解。
三、样本裂解：1.准备离心管和4℃的离心机。
2.加入适量的样本处理试剂（试剂A和试剂B），混匀离心管。
4.将裂解后的样本置于冰上放置10分钟。
四、DNA纯化：1.准备离心管和4℃的离心机。
2.将样本离心管中的上清转移至新的离心管中，并加入适量的试剂C，混匀并置于冰上放置5分钟。
4.弃去上清，避免悬浮细胞的干扰。
五、脱脂：1.准备脱脂离心管和4℃的离心机。
2.加入适量的试剂D，混匀离心管，置于冰上放置5分钟。
4.弃去上清，避免沉淀的干扰。
六、洗涤：1.准备洗涤离心管和4℃的离心机。
2.加入适量的试剂E和试剂F，混匀离心管，置于冰上放置5分钟。
4.弃去上清，避免沉淀的干扰。
七、DNA溶解：1.准备离心管和4℃的离心机。
2.加入适量的试剂G，混匀并置于冰上放置5分钟。
八、DNA浓缩：1.准备离心管和4℃的离心机。
2.加入适量的试剂H，混匀离心管，置于冰上放置5分钟。
4.弃去上清，避免纯化后的DNA丢失。
九、DNA溶解：1.加入适量的蒸馏水，混匀使DNA溶解。
十、质检：1.准备质检相关设备和试剂。
2.使用紫外分光光度计检测DNA纯度和浓度。
3.对提取的DNA进行PCR扩增、酶切鉴定等质检步骤。
以上就是全血基因组DNA提取试剂盒的使用说明，希望对您在实验中提取DNA有所帮助。
在操作中，请严格按照试剂盒说明书和实验室操作规范进行操作，确保实验的准确性和可重复性。
全血DNA提取步骤
从全血中抽提基因组DNA的方法1、取全血700µL离心，5000rpm，5min，弃去上清液。
2、沉淀物用1mL的红细胞裂解液洗涤3次，5000rpm，5min，弃去上清液，倒干。
3、加入450µL细胞裂解液和6µL蛋白酶K（20mg/mL），55℃～66℃水浴4小时。
4、用等体积的酚、氯仿、异戊醇（25︰24︰1）抽提2次，12000rpm，5min。
5、用2倍体积冰预冷的无水乙醇沉淀（无水乙醇），有絮状沉淀后置于―20℃，沉淀30min。
6、沉淀结束后，12000rpm，5min，弃上清液。
7、用800µlL70%的乙醇洗涤沉淀，12000rpm，3min。
8、弃上清液，干燥。
9、加入50µL 1×TE缓冲液溶解，―20℃保存备用。
附：DNA提取相关试剂配制1、红细胞裂解液（PH 7.4）配制量：1L配制方法：（1）、称量NH4CL 0.802g、NaHCO3 0.84g、Na2EDTA·2H2O37.22g，置于1L烧杯中。
（2）、向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。
（3）、加去离子水将溶液定容至1L后，高压灭菌。
（4）、室温保存。
2、细胞裂解液（PH 8.0）配制量：500Ml配制方法：（1）、称量NaCL 2.92g、SDS 5g、Tris 0.61g，置于1L烧杯中。
（2）、向烧杯中加入约300ml的去离子水，搅拌溶解，在溶解过程中用1mL移液器加入10mL的TriTon-100。
（3）、溶解后加入20mg/mL的蛋白酶K 3µL.（4）、加去离子水将溶液定容至500mL后，高压灭菌。
（5）、室温保存。
血液基因组DNA提取标准操作规程
1目的：规范血液基因组DNA提取的操作。
2适用范围：血液基因组DNA提取。
3职责：技术员4内容/程序：4.1仪器及耗材4.1.1 1.5ml、2ml灭菌离心管4.1.21ml、200ul灭菌枪头4.1.3Karroten TM Mini Column柱4.1.4手动移液器4.1.5金属浴4.1.6高速离心机4.2试剂4.2.1Buffer KB平衡液、Buffer KBL14.2.2Buffer KW4.2.370% 乙醇4.2.4KE4.3提取前准备4.3.1详细阅读该SOP熟悉各步骤，并准备好所有的试剂盒组分及温浴条件4.3.2KBL1在低温时可能产生混浊或沉淀，在37-65℃温浴片刻即可4.3.3Buffer KW第一次使用前请按瓶上标签加入50ml70%乙醇，每次使用后，请立即拧紧盖子4.4操作步骤4.4.1取一Karroten TM Mini Column柱装在一个2ml收集管上（已备）。
加入300ulBuffer KB平衡液至柱子内，室温13000rpm离心1min，使平衡液完全流过柱子。
弃收集管中的滤液，将空柱套回收集管内；注意：柱子不平衡，将导致DNA产率的减少。
4.4.2按200ul全血（适合各种抗凝剂，EDTA较好）加入1000ulKBL1的比例加入KBL1，混匀，静置3min。
如果样品是血清等无细胞体液。
应按比例增加体积。
注意：1）.静止时间超过3min不影响DNA抽提2）.取样最佳体积因物种不同有所差异。
人血以100-300ul为最佳，小鼠以50-100ul为最佳。
且当全血体积小于200ul时，KBL1体积不能小于1000ul 4.4.3将混合液转移至已平衡的吸附柱内，室温13000rpm离心30s，使裂解液完全流过柱子。
保留柱，弃去收集管中的过滤液，将柱重新放入收集管；注意：如混合液体积过大，可分数次上柱，每次上样量不要超过700ul。
4.4.4加入700ul Buffer KW，室温13000rpm离心30s，弃去收集管中的过滤液，保留柱。
基因组DNA抽提操作流程
基因组DNA抽提操作流程一、原理与意义先用细胞裂解液对已制备好的组织匀浆充分裂解，然后用蛋白酶去除其中的蛋白，再用氯仿一次抽提（无需用酚抽提）、预备液沉淀、RNase 去除RNA、乙醇再沉淀即可得到完整DNA。
该方法适用于从人或动物的各种组织、血液、培养细胞、G+/G－细菌中快速抽提基因组DNA。
抽提出来的DNA能用于几乎所有的分子生物学实验，如DNA梯度分析、PCR、限制性内切酶反应、克隆、Southern Blot分析等。
二、试剂及其配制抽提试剂盒购于上海生工公司，内含以下试剂：1.TE缓冲液：PH8.0，由10 mM Tris HCl和1 mM EDTA配成。
2.RNase A（3 mg）：使用前加入300 µl无菌双蒸水，煮沸10 min后使其自然冷却后使用，-20 ℃冻存。
3.Proteinase K（12 mg）：使用前加入600 µl无菌水，分装成小份，-20 ℃冻存。
4.Cell Lysis Solution与Precipitation Solution：溶液出现絮状沉淀50 ℃加热溶解后使用。
5. 1.2 mol/L NaCl。
冰冷乙醇和氯仿自备。
三、实验器材水浴锅、普通冰箱、1.5/2 ml离心管、移液器及枪头、紫外分光计、离心管架、剪刀、镊子、滤纸等。
四、操作步骤1.组织匀浆制备：取30 mg左右新鲜组织，加600 μl TE缓冲液，手工匀浆数次。
2.细胞裂解：吸取300 µl匀浆加600 µl Cell Lysis Solution，混匀。
3.消化蛋白：再加入9 µl Proteinase K(可适当增加)混匀，置于55 ℃水浴30 min以上（可达2.5 h），其间上下混匀几次。
4.氯仿抽提：加入600 µl氯仿（用户自备），轻柔上下混匀，不能太剧烈，以保证DNA的完整性。
5.沉淀：在台式离心机上，10000转/分，室温离心2 min。
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血液、细胞、组织基因组DNA提取试剂盒步骤
使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
1. 处理材料
a. 如提取材料为血液，可直接使用200ul新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液，不足200ul可加入缓冲液GA补足；
注意：如需处理更大体积血液，如300ul-1ml，可按以下步骤操作：在样品中加入3倍体积红细胞裂解液（例如300ul血液加入900ul红细胞裂解液），颠倒混匀，室温放置5min，期间再颠倒混匀几次。
10000rpm(~11500×g)离心1min（若离心机最高转数不允许，可3000rpm(~3400×g)离心5min），吸去上清，留下白细胞沉淀，加200ul缓冲液GA，振荡至彻底混匀。
b. 如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核红细胞，因此处理量5-20ul，可加入缓冲液GA补足200ul后进行下面的裂解步骤；
c. 贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液，然后10000rpm(~11200×g)离心1min，倒尽上清，加200ul缓冲液GA，振荡至彻底悬浮；
d．动物组织（脾组织用量应少于10mg）应先打碎处理为细胞悬液，然后10000rpm(~11200×g)离心1min，倒尽上清，加200ul缓冲液GA，振荡至彻底悬浮；
注意：如果需要去除RNA，可加入4ul RNase A(100mg/ml)溶液（客户自备，目录号：RT405-12），振荡15s，室温放置5min。
2. 加入20ul Proteinase K，混匀。
a. 提取血液基因组时，只需加入Proteinase K混匀，即可继续进行下一步。
b. 提取细胞基因组时，只需加入Proteinase K混匀，即可继续进行下一步。
d. 提取组织基因组时，加入Proteinase K混匀后，在56℃放置，直至组织溶解，简短离心以去除管盖内壁的水珠，再进行下一步骤。
注意：不同组织裂解时间不同，通常需1-3h即可完成（鼠尾需要消化过夜）。
不会影响后续操作，每小时颠倒混合样品2-3次，用水浴振荡器也可。
3. 加入200ul缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
注意：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失，不会影响后续实验。
如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，肯能导致提取DNA 量少和提取出的DNA不纯。
当血液体积≤200ul且没有采用红细胞裂解处理，
或是样本储存条件不佳，水浴后颜色可能为深褐色，注意溶液中没有团块等沉淀。
4. 加200ul无水乙醇，充分振荡混匀15s，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12000rpm(~13400×g)离心30s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
6. 向吸附柱CB3中加入500ul缓冲液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm(~13400×g)离心30s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
7. 向吸附柱CB3中加入600ul漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm(~13400×g)离心30s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
8. 重复操作步骤7。
9. 将吸附柱CB3放回收集管中，12000rpm(~13400×g)离心2min，倒掉废液。
将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
10. 将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200ul洗脱缓冲液TE，室温放置2-5min，12000rpm(~13400×g)离心2min，将溶液收集到离心管中。
注意：洗脱缓冲液体积不应少于50ul，体积过小影响回收率。
洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。
若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA 降解。
为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中，室温放置2min，12000rpm(~13400×g)离心2min。
注意事项：
1. 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇。
2. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
3. 若缓冲液GA或GB中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。
4. 所有离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。