内毒素检测培训PPT
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细菌内毒素检查法培训课件
1/30/2021
细菌内毒素检查法
1
❖ 鲎的图片
鲎的长相既像虾又像蟹，人称之为“马蹄蟹”,是一类与三叶虫(现在只有化 石)一样古老的动物。
鲎的血液中含有铜离子，它的血液是蓝色的。这种蓝色血液的提取物——“鲎试 剂”，可以准确、快速地检测人体内部组织是否因细菌感染而致病；在制药和食品 工业中，可用它对毒素污染进行监测。
毒素。用于标定细菌内毒素工作标准品的效价、复核、仲裁鲎试剂灵 敏度。
1/30/2021
细菌内毒素检查法
4
❖ ②细菌内毒素工作标准品（CSE）：系以细菌内毒素国家标准品为基 准进行标定，确定其质量的相当效价。1ng工作标准品效价应不小于 2EU，不大于50EU。用于鲎试剂灵敏度的复核、干扰试验及设置的 各种阳性对照。
在不超过此稀释倍数的浓度下进行内毒素限值的测定。 MVD=CL/入。
L：内毒素限值；c：供试品溶液浓度，当L以EU/ml表示时，
c=1.0ml/ml；当L以EU/mg或EU/u表示时， c的单位为mg/ml或
u/ml，如：供试品为注射用无菌粉末或原料/mg
Vml C最大有效 L×m/v=L×c样≥入,c样≥入/L
能变。
1/30/2021
细菌内毒素检查法
8
❖ (2)实验准备
❖ A、除去干扰：试验所用器皿需经处理，以除去可能存在的外源性内 毒素，常用的方法是250℃干烤至少1小时，也可用其它确证不干扰 细菌内毒素的适宜方法。若使用塑料器械，如微孔板和微量加样器配 套的吸头等，应选用标明无内毒素并且对试验无干扰的器械。试验操 作过程应防止微生物的污染。
5
❖ B、鲎试剂的规格：是指每支鲎试剂的装量，如：0.1ml、0.5ml。一 般来说，规格是多少就用多少细菌内毒素检查用水复溶。如：0.1ml 就用0.1ml细菌内毒素检查用水复溶。
《内毒素及其去除》课件
利用某些微生物将内毒素作为营养物 质降解，从而降低其毒性，这些微生 物通常被称为“内毒素降解菌”。
05
CATALOGUE
内毒素去除技术的研究进展
新技术的研发与应用
生物膜过滤技术
利用生物膜的吸附作用去 除内毒素，具有高效、低 成本的优势。
免疫亲和技术
利用抗体与内毒素的特异 性结合，实现内毒素的特 异性去除。
纳米材料技术
利用纳米材料对内毒素的 吸附和捕获作用，实现内 毒素的去除。
现有技术的改进与优化
优化活性炭吸附技术
通过改进活性炭的孔径和表面性质，提高其对内毒素的吸附能力 。
强化超滤技术
通过提高超滤膜的孔径和膜材料的亲水性，提高超滤去除内毒素的 效果。
离子交换技术
通过优化离子交换剂的离子配比和粒径，提高其对内毒素的去除效 果。
02
内毒素的致死剂量因人而异，与机体的免疫状态、 健康状况等因素有关。
03
及时诊断和治疗内毒素中毒，可有效降低死亡率， 提高治愈率。
03
CATALOGUE
内毒素的检测与鉴定
内毒素检测的方法
01
02
03
04
鲎试验法
利用鲎变形细胞溶解物与内毒 素反应的原理，通过显色反应 或凝固反应来检测内毒素。
显色基质法
06
CATALOGUE
内毒素去除的实际应用
在医疗领域的应用
医疗设备消毒
通过去除内毒素，可以有效地降 低医疗设备上细菌的数量，从而
降低感染的风险。
药品生产
在药品生产过程中，去除内毒素可 以确保药品的安全性和有效性。
血液透析
在血液透析过程中，去除内毒素可 以降低患者体内的毒素水平，提高 治疗效果。
《细菌内毒素检查》课件
其他检测方法
热原质鲎试剂盒法
利用鲎试剂与内毒素结合后加热，通 过凝胶形成或浊度变化来检测内毒素 的含量。该方法适用于注射剂、输液 等样品。
高效液相色谱法
利用高效液相色谱技术分离内毒素， 通过紫外吸收或荧光检测器来检测内 毒素的含量。该方法适用于生物制品 、血液制品等样品。
03
细菌内毒素检查的应用
实验后的处理和安全防护
废液的处理
实验后产生的废液应按照实验室规定进行处理， 不得随意倾倒或排放。
实验垃圾的处理
实验后产生的垃圾应按照实验室规定进行分类和 处理。
ABCD
仪器的清洗和维护
实验后应对使用的仪器进行清洗和维护，以确保 其性能和精度。
个人防护
实验人员应穿戴个人防护装备，如实验服、手套 、口罩等，以降低交叉污染和感染的风险。
饮用水监测
01
通过细菌内毒素检查，可以检测饮用水中的细菌内毒素含量，
确保饮用水安全。
污水处理监测
02
在污水处理过程中，对出水进行细菌内毒素检查，可以评估污
水处理效果和出水质量。
环境样品监测
03
对土壤、空气等环境样品进行细菌内毒素检查，可以了解环境
中的细菌污染状况，为环境治理提供依据。
04
细菌内毒素检查的注意事 项
开发新型检测方法和技术
开发多组分检测技术
将多种细菌内毒素相关分子同时纳入检测范围，实现多组分的同 时检测，提高检测效率和准确性。
开发新型免疫学检测方法
利用新型免疫学技术，如单克隆抗体、免疫磁珠等，提高检测的特 异性和灵敏度。
开发新型生物信息学技术
利用生物信息学手段，对细菌内毒素相关基因和蛋白质进行高通量 筛选和鉴定，为新型检测方法的开发提供有力支持。
革兰阴性菌脂多糖内毒素检测PPT课件
特性
具有免疫原性和生物活性，可引起发热、休克和内毒素血症等病理反应。
脂多糖内毒素的生物合成
合成过程
脂多糖内毒素的生物合成始于 UDP-葡萄糖，经过一系列酶促反 应，最终形成脂多糖内毒素。
合成部位
脂多糖内毒素主要在革兰阴性菌 的内质网中合成。
脂多糖内毒素的生物学活性
01
02
03
免疫调节
脂多糖内毒素可刺激机体 免疫系统，诱导炎症反应 和细胞因子的释放。
消除某医疗设备中革兰阴性菌脂多糖内毒素的污染，保障患者安全。
清除方法
采用专业的消毒剂和清洗剂，对医疗设备进行彻底清洗和消毒，消除 革兰阴性菌脂多糖内毒素。
清除结果
成功清除医疗设备中的革兰阴性菌脂多糖内毒素，确保设备安全可靠。
结论
医疗设备中革兰阴性菌脂多糖内毒素的清除工作至关重要，必须采取 有效措施进行防控和消除。
革兰阴性菌脂多糖内毒素检测 ppt课件
目录
CONTENTS
• 革兰阴性菌脂多糖内毒素概述 • 革兰阴性菌脂多糖内毒素的检测方法 • 革兰阴性菌脂多糖内毒素的危害与影响 • 革兰阴性菌脂多糖内毒素的防治与控制 • 案例分析
01 革兰阴性菌脂多糖内毒素概述
CHAPTER
定义与特性
定义
革兰阴性菌脂多糖内毒素（Endotoxin）是革兰阴性菌细胞壁外层的一种结构 组分，主要由类脂A、核心多糖和特异性多糖三部分组成。
检测目的
评估某食品中是否含有革兰阴性菌脂 多糖内毒素，保障消费者健康。
检测方法
采集该食品样本，采用微生物学检测 方法，分离培养革兰阴性菌，提取脂 多糖内毒素进行检测。
检测结果
未检出革兰阴性菌脂多糖内毒素。
结论
具有免疫原性和生物活性，可引起发热、休克和内毒素血症等病理反应。
脂多糖内毒素的生物合成
合成过程
脂多糖内毒素的生物合成始于 UDP-葡萄糖，经过一系列酶促反 应，最终形成脂多糖内毒素。
合成部位
脂多糖内毒素主要在革兰阴性菌 的内质网中合成。
脂多糖内毒素的生物学活性
01
02
03
免疫调节
脂多糖内毒素可刺激机体 免疫系统，诱导炎症反应 和细胞因子的释放。
消除某医疗设备中革兰阴性菌脂多糖内毒素的污染，保障患者安全。
清除方法
采用专业的消毒剂和清洗剂，对医疗设备进行彻底清洗和消毒，消除 革兰阴性菌脂多糖内毒素。
清除结果
成功清除医疗设备中的革兰阴性菌脂多糖内毒素，确保设备安全可靠。
结论
医疗设备中革兰阴性菌脂多糖内毒素的清除工作至关重要，必须采取 有效措施进行防控和消除。
革兰阴性菌脂多糖内毒素检测 ppt课件
目录
CONTENTS
• 革兰阴性菌脂多糖内毒素概述 • 革兰阴性菌脂多糖内毒素的检测方法 • 革兰阴性菌脂多糖内毒素的危害与影响 • 革兰阴性菌脂多糖内毒素的防治与控制 • 案例分析
01 革兰阴性菌脂多糖内毒素概述
CHAPTER
定义与特性
定义
革兰阴性菌脂多糖内毒素（Endotoxin）是革兰阴性菌细胞壁外层的一种结构 组分，主要由类脂A、核心多糖和特异性多糖三部分组成。
检测目的
评估某食品中是否含有革兰阴性菌脂 多糖内毒素，保障消费者健康。
检测方法
采集该食品样本，采用微生物学检测 方法，分离培养革兰阴性菌，提取脂 多糖内毒素进行检测。
检测结果
未检出革兰阴性菌脂多糖内毒素。
结论
《内毒素的测定》课件
详细描述
研究表明，内毒素可以诱导炎症反应、细胞凋亡和免疫应答等过程，与败血症、脓毒症、肿瘤等疾病 的发生和发展密切相关。通过研究这些疾病中内毒素的作用机制，有助于发现新的治疗靶点和方法。
05
结论
内毒素测定的临床应用价值
诊断感染性疾病
内毒素测定可用于诊断感染性疾病，尤其是革兰氏阴性菌感染。通 过检测内毒素水平，有助于判断感染的严重程度和指导临床用药。
在医疗器械植入人体之前，如人工关 节、心脏瓣膜等，也需要进行内毒素 检测，以确保产品的安全性。
04
内毒素测定的发展趋势和展望
新型内毒素测定方法的研发
总结词
随着科学技术的发展，新型内毒素测 定方法不断涌现，提高了测定的灵敏 度和特异性。
详细描述
新型内毒素测定方法包括基因组学、 蛋白质组学和代谢组学等方法，这些 方法能够更准确地检测内毒素的含量 ，并且具有更高的灵敏度和特异性。
监控病情变化
内毒素水平的变化可以反映病情的进展情况，有助于监测治疗效果 和调整治疗方案。
评估器官功能
内毒素可引起机体多器官功能损害，通过测定内毒素水平，有助于评 估患者的器官功能状况，预测病情预后。
内毒素测定在科研领域的作用
1 2 3
探索疾病发病机制
内毒素在多种疾病发病过程中发挥重要作用，通 过内毒素测定有助于深入了解疾病的发病机制。
探究内毒素与其他生物标志物的关系
内毒素与其他生物标志物之间的关系对于疾病诊断和预后评估具有重要意义。未来研究应深入探究这些关系，以便更 全面地了解疾病进展和患者状况。
拓展内毒素测定的应用领域
目前内毒素测定主要应用于感染性疾病的诊断和病情评估，未来可进一步拓展其在其他领域的应用，如 肿瘤、免疫系统疾病等。同时，应加强与其他学科的交叉合作，推动内毒素研究的深入发展。
研究表明，内毒素可以诱导炎症反应、细胞凋亡和免疫应答等过程，与败血症、脓毒症、肿瘤等疾病 的发生和发展密切相关。通过研究这些疾病中内毒素的作用机制，有助于发现新的治疗靶点和方法。
05
结论
内毒素测定的临床应用价值
诊断感染性疾病
内毒素测定可用于诊断感染性疾病，尤其是革兰氏阴性菌感染。通 过检测内毒素水平，有助于判断感染的严重程度和指导临床用药。
在医疗器械植入人体之前，如人工关 节、心脏瓣膜等，也需要进行内毒素 检测，以确保产品的安全性。
04
内毒素测定的发展趋势和展望
新型内毒素测定方法的研发
总结词
随着科学技术的发展，新型内毒素测 定方法不断涌现，提高了测定的灵敏 度和特异性。
详细描述
新型内毒素测定方法包括基因组学、 蛋白质组学和代谢组学等方法，这些 方法能够更准确地检测内毒素的含量 ，并且具有更高的灵敏度和特异性。
监控病情变化
内毒素水平的变化可以反映病情的进展情况，有助于监测治疗效果 和调整治疗方案。
评估器官功能
内毒素可引起机体多器官功能损害，通过测定内毒素水平，有助于评 估患者的器官功能状况，预测病情预后。
内毒素测定在科研领域的作用
1 2 3
探索疾病发病机制
内毒素在多种疾病发病过程中发挥重要作用，通 过内毒素测定有助于深入了解疾病的发病机制。
探究内毒素与其他生物标志物的关系
内毒素与其他生物标志物之间的关系对于疾病诊断和预后评估具有重要意义。未来研究应深入探究这些关系，以便更 全面地了解疾病进展和患者状况。
拓展内毒素测定的应用领域
目前内毒素测定主要应用于感染性疾病的诊断和病情评估，未来可进一步拓展其在其他领域的应用，如 肿瘤、免疫系统疾病等。同时，应加强与其他学科的交叉合作，推动内毒素研究的深入发展。
内毒素检查-PPT
鲎试剂灵敏度复核
加样结束后，将鲎试剂用封口膜封口，轻轻振动混匀，垂 直放入37℃±1℃恒温器中，保温60±2分钟。
❖ 结果观察
将试管轻轻取出，缓缓倒转180°，若管内形成凝胶，并 且凝胶不变形、不从管壁滑脱者为阳性，未形成凝胶或形成 的凝胶不坚实、变形并从管壁滑脱者为阴性。
阳
阴
性
性
❖ 计算
当最大浓度2λ管均为阳性，最低浓度0.25λ管均为阴性 ，阴性对 照为阴性 时实验为 有效，按 下式计算 反应终点 浓度的几 何平均值 即为鲎试 剂灵敏度 的复核结 果。
干扰实验
加样 准备好的36支鲎试剂放在试管架上，按下图加样。
干扰实验
0.1ml内毒素标准液 0.1ml检查用水
0.1ml含内毒素的供试品液 0.1ml供试品液
加样结束后，用封口膜封口，轻轻振动混匀，避免产生 气泡，放入37℃±1℃恒温器中，保温60±2分钟，观察 并记录结果。
实 验 结 果 计算 如两组最大浓度2.0λ均为阳性，最低浓度0.25λ均为阴 性，阴性 对照4管均 为阴性时 ，按下式 计算用检 查用水制 成的内毒 素标准溶 液的反应 终点浓度 的几何平 均值（Es ）和用供 试品溶液 或稀释液 制成的内 毒素溶液 的反应终 点浓度的 几何平均 值（Et）。
❖
刻度吸管、凝集管（10×75mm） 、三角瓶 、小试管 （16×100m m）、 试管架、 洗耳球、 封口膜或 金属试管 帽、时钟 、脱脂棉 、吸水纸 、剪刀砂 轮。
❖
耐热器皿常用干热灭菌法（250℃、30 分钟以上）去除，塑料用具应选用标明无内毒素并 且对试验 无干扰的 器械（目 前多为无 热原的一 次性用品 ）。
鲎试剂灵敏度复核
。
2、 按照标准品说明书，加入规定量的细菌内毒素检查用水 溶解其内 容物，用 封口膜将 瓶口封严 ，置漩涡 混合器上 混合15分钟 。然后进 行稀释， 制备成4个浓度的 细菌内毒 素标准溶 液，即 2λ、λ、0.5λ和0.25λ（λ为所复核的鲎试剂的标示灵敏度 ）四个浓 度的内毒 素标准溶 液，每稀 释一步 均应在旋 涡混合器 上混匀30 秒钟
中国药典版《细菌内毒素检查法》(2020年整理).pptx
表 3 凝胶半定量试验溶液的制备
编号
内毒素浓度/配制内毒素的 溶液
稀释用液
稀释倍数
所含内毒素的浓 度
A
无/供试品溶液
检查用水
1
—
平行管数 2
2
—
2
4
—
2
8
B
2λ水
检查用水
1
2
4
—
2
2λ
2
2λ
2
1λ
2
0.5λ
2
8
0.25λ
2
D
无/检查用水
—
—
—
2
注：A 为不超过 MVD 并且通过干扰试验的供试品溶液。从通过干扰试验的稀释倍数
λc=1g-1(∑X/4)
1
学海无 涯
式中 X 为反应终点浓度的对数值（1g）。反应终点浓度是指系列递减 的内毒素浓度中最后一个呈阳性结果的浓度。 当λc 在 0.5λ-2λ(包括 0.5λ和 2λ)时，方可用于细菌内毒素检查， 并以标示灵敏度λ为该批鲎试剂的灵敏度。 干扰试验 按表 1 制备溶液 A、B、C 和 D，使用的供试品溶液应为未检 验 出内毒素且不超过最大有效稀释倍数（ MVD）的溶液，按鲎试剂灵敏 度复 核试验项下操作。 只有当溶液 A 和阴性对照溶液 D 的所有平行管都为阴性，并且系列溶液 C 的结果在鲎试剂灵敏度复核范围内时，试验方为有效。按下式计算系列溶 液 C 和 B 的反应终点浓度的几何平均值（Es 和 Et）。
扰 的供试品溶液来制备溶液 A 和 B。按鲎试剂灵敏度复核试验项下操作
。
编号 A
内毒素浓度/配制内毒素的溶液 表 2 凝胶限量试验溶液的制备
无/供试品溶液
平行管数 2
内毒素的检测及意义.ppt
内毒素定量检测的临床意义
发热原因的快速辅助诊断（< 1小时） 早期判断革兰阴性菌的感染情况 （Gˉ菌所致）重症疾患的早期诊断 帮助临床医生快速合理筛选适当的抗生素 判断抗感染治疗效果及预后 肠源性内毒素血症的预判及评估
发热原因的快速辅助诊断
发热
结缔组织 病毒
感染 细菌
恶性肿瘤 真菌等
Gˉ
G+
帮助临床医生快速筛选合理抗生素
科室
脑外科 ICU ICU ICU
肾内科 肝移植科 肝移植科
内毒素结果(EU/ml)
0.4808 0.2136 0.5904 0.1408 13.4727
2.1 16.8792
血培养结果
大肠埃希菌 大肠埃希菌 鲍曼不动杆菌 鲍曼不动杆菌 大肠埃希菌 大肠埃希菌 大肠埃希菌
内毒素超标,血培养阳性
内毒素与痰培养的结果比较
BET检测标本范围
腹腔积液
尿液
透析液和透析用水
脑脊液
胸腔积液
血液
检测内毒素的方法
定性检测
定量检测
凝胶法
光度（浊度）法 显色（比色）法
动
终
动
终
态
点
态
点
浊
浊
显
显
度
度
色
色
法
法
法
法
几种检测方法的比较
凝胶法检测的特点
“限量”检测，是一种传统 经典的检测方法；
凝胶法是以试管内反应物凝 胶牢固程度为判断标准， 易受人为因素影响；
内毒素血症的预防和治疗
总体原则：
减少吸收、促进排泄、治疗原发病、增强免疫力
针对病 原菌合
使用敏 感抗生 素
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鲎试剂灵敏度复核
• 目的： 考察鲎试剂的灵敏度是否准确、考察检验人员操作方法是否正确 及实验条件是否符合规定。
• 当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生可能影响检验结果的改变时，应
进行鲎试剂灵敏度复核试验。
鲎试剂灵敏度复核
加样结束后，将鲎试剂用封口膜封口，轻轻振动混匀，垂 直放入37℃±1℃恒温器中，保温60±2分钟。
内毒素危害
• 1、致热性。
• 2、致死性毒性。 • 3、Shwartzman反应。（使单核吞噬细胞系统清除激
活的凝血因子能力降低，导致局部坏死）
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
• 4、白细胞减少。 • 5、降低血压，休克 • 6、激活凝血系统。
检测方法
2015年版 中国药典 第四部 1143细菌内毒素检查法 规定： • 利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌 内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
扰细菌内毒素检査的适宜方法（如180℃，2h）。
• 若使用塑料器具，如微孔板和与微量加样器配套的吸头等，应选用标明无内毒素
并且对试验无干扰的器具（30% H2O2 处理4h 有效）。
试验的干扰
• 该反应极其灵敏、凝胶形成速率与内毒素浓度成正比
• PH值影响细菌内毒素的检测
试验的最适pH在6～8，为宜，可使用适宜的酸、碱溶液或缓冲液调节pH值 • 温度 • 反应物中Ca2+/Mg2+离子浓度
试验有效 • 若溶液A的两个平行管均为阴性，判定供试品符合规定。若溶液A的两个平行管均 为阳性，判定供试品不符合规定。若溶液A 的两个平行管中的一管为阳性，另一 管为阴性，需进行复试。复试时溶液A 需做4 支平行管，若所有平行管均为阴性 ，判定供试品符合规定，否则判定供试品不符合规定。 • 若供试品的稀释倍数小于MVD而溶液A 出现不符合规定时，需将供试品稀释至
• MVD=cL/λ
• 式中L 为供试品的细菌内毒素限值；
• c 为供试品溶液的浓度，当L以EU/mg或EU/U表示时，c的单位需为mg/ml或
U/ml ,当L 以EU/ml表示时，则c等于1.0ml/ml。如需计算在MVD时的供试品浓
度，即最小有效稀释浓度，可使用公式c=λ/L ; • λ为在凝胶法中鲎试剂的标示灵敏度（EU/ml) ，或是在光度测定法中所使用的标 准曲线上最低的内毒素浓度。
内毒素检查
V16.2
内毒素
• 是G-菌细胞壁个层上的特有结构，内毒素为外源性致热原。
• 内毒素只有当细菌死亡溶解或用人工方法破坏菌细胞后才释放出来 • 内毒素耐热而稳定，抗原性弱。 • 细菌内毒素的主要化学成分为脂多糖 • 它可激活中性粒细胞等，使之释放出一种内源性热原质，作用于体温调节中枢引 起发热
凝胶法
鲎试剂法 光度测定法 显色基质法 浊度法
鲎试剂
• 从海洋无脊椎动物“鲎”的蓝色血液中提取的变形细 胞溶解物，经低温冷冻干燥精制而成的生物制剂。 鲎试剂的生物活性以其能检出细菌内毒素的最低有效
浓度表示，即鲎试剂的灵敏度，单位为EU/ml。
• 当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生可能影响检验
结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核试验。
• 结果观察
将试管轻轻取出，缓缓倒转180°，若管内形成凝胶，并且
凝胶不变形、不从管壁滑脱者为阳性，未形成凝胶或形成
的凝胶不坚实、变形并从管壁滑脱者为阴性。
鲎试剂灵敏度复核
• 计算：当最大浓度2λ 管均为阳性，最低浓度0.25λ 管均为阴性，阴性对照为阴性
时实验为有效，按下式计算反应终点浓度的几何平均值即为鲎试剂灵敏度的复核 结果。 • λc=lg-1（ΣX/4）
• M 为人用每千克体重每小时的最大供试品剂量，以ml/(kg•h) , mg/(kg.h)或U/(kg•h)
表示，人均体重按60kg计算，人体表面积按1.62m2计算。注射时间若不足1小时，按1 小时计算。供试品每平方米体表面积剂量乘以0.027即可转换为每千克体重剂量(M)
最大有效稀释倍数(MVD)
标定其效价，用于试验中鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及各
种阳性对照。 • 细菌内毒素检查用水 指内毒素含量小于0.015EU/ml（用于 凝胶法）或0.005EU/ml（用于光度测定法）且对内毒素试 验无干扰作用的灭菌注射用水。
注意事项
• 试验所用的器皿需经处理，以去除可能存在的外源性内毒素。
• 耐热器皿常用干热灭菌法（250°C、3 0分钟以上）去除，也可采用其他确证不干
供试品溶液来制备溶液A 和B。按鲎试剂灵敏度复核试验项下操作。
编号 A B C D 内毒素浓度/配置内毒素的溶液 平行管数 2 无/供试品溶液 2λ/供试品溶液 2 2λ/检查用水 2 2 无/检查用水
凝胶限度试验
• 结果判断：保温60分钟±2分钟后观察结果。若阴性对照溶液D的平行管均为阴性
，供试品阳性对照溶液B的平行管均为阳性，阳性对照溶液C的平行管均为阳性，
鲎试剂反应原理
内毒素 C因子 B因子 活化C因子 Β-葡聚糖 活化G因子 G因子
活化B因子
凝固酶原
凝固蛋白原
凝固酶
凝固蛋白原
• 细菌内毒素国家标准品 系自大肠埃希菌提取精制得到的内毒 素，用于标定细菌内毒素工作标准品和标定，仲裁鲎试剂灵
敏度。
• 细菌内毒素工作标准品 系以细菌内毒素国家标准品为基准
MVD 重新实验，再对结果进行判断。
谢 谢！
扰作用，为能否使用细菌内毒素检查法提供依据。
• 当进行新药的内毒素检查试验前，或无内毒素检查项的品种建立内毒素检查法时，
须进行干扰试验。
• 当鲎试剂、供试品的配方、生产工艺改变或试验环境中发生了任何有可能影响试 验结果的变化时，须进行干扰试验。
凝胶限度试验
制备溶液A 、B、C 和D。使用稀释倍数不超过M V D并且已经排除干扰的
药品、生物制品的细菌内毒素限值( L )一般按以下公式确定：
• L = K /M
• 式中 L 为供试品的细菌内毒素限值，一般以EU/mlEU/mg或EU/U (活性单位）表示；
• K 为人每千克体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以 EU/(kg·h )表示，注射剂K=
5EU/(kg•h)，放射性药品注射剂K=2.5EU/(kg•h)，鞘内用注射剂K= 0.2EU/(kg·h)；
式中 X 为反应终点浓度的对数值（lg）。 反应终点浓度是指系列递减的内毒素浓度中最后一个呈阳性结果的浓度。 • 结果判断：当λ c 在0.5λ ～2λ （包括0.5λ 和2λ ）时，方可用于细菌内毒素检查， 并以标示灵敏度λ 为该批鲎试剂的灵敏度。
干扰实验
• 目的 ：确定供试品在多大的稀释倍数或浓度下对内毒素和鲎试剂的反应不存在干