怎样选择色谱柱_液相色谱柱的种类与方法开发
高效液相色谱的色谱柱选择与优化
高效液相色谱的色谱柱选择与优化高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于化学、生物、药物等多个领域。
在HPLC中，色谱柱的选择和优化是至关重要的一步，它直接影响到分析结果的准确性和分离效果的好坏。
本文将探讨HPLC色谱柱选择与优化的相关问题。
一、色谱柱选择的基本原则在选择HPLC色谱柱时，需要考虑以下几个基本原则：1. 样品特性：首先要考虑待分离的样品特性，包括其化学性质、分子量、溶解度等。
不同的样品可能需要不同类型的色谱柱，如反相色谱柱、离子交换色谱柱、手性色谱柱等。
2. 分离效果：色谱柱的分离效果是选择的关键因素之一。
分离效果好的色谱柱能够提供较高的分离度和较好的峰形，从而使得分析结果更加准确可靠。
3. 色谱柱品牌和质量：选择知名品牌和质量可靠的色谱柱是保证分析结果准确性的重要保障。
品牌和质量好的色谱柱通常具有较好的稳定性和耐用性，能够提供稳定的分离效果。
二、色谱柱优化的方法和技巧除了选择合适的色谱柱，还可以通过优化色谱条件来改善分离效果。
以下是一些常用的色谱柱优化方法和技巧：1. 流动相的优化：流动相的选择和组成对于分离效果有着重要影响。
可以通过调整流动相的pH值、浓度、添加剂等来改善峰形和分离度。
此外，还可以尝试使用梯度洗脱法，即在分离过程中逐渐改变流动相的组成，以提高分离效果。
2. 温度的优化：温度对于色谱柱的分离效果也有一定影响。
在某些情况下，调整温度可以改善分离度和峰形。
一般来说，提高温度可以加快分离速度，但也可能导致峰形变宽。
因此，在优化温度时需要综合考虑分离效果和分析时间的平衡。
3. 流速的优化：流速是影响分离效果的重要因素之一。
过高的流速可能导致峰形变宽、分离度下降，而过低的流速则会延长分析时间。
因此，需要根据样品特性和分析要求选择合适的流速。
4. 注射量的优化：注射量的大小也会对分离效果产生影响。
有关物质方法开发色谱柱的筛选
有关物质方法开发色谱柱的筛选全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：色谱柱是色谱分析的重要组成部分，不同的色谱柱适用于不同的样品和分析要求。
对于特定的应用和分析需求，选择合适的色谱柱至关重要。
在物质方法开发中，合适的色谱柱可以提高分析效率和准确性，使分析结果更加可靠和准确。
本文将从色谱柱的选择和筛选等方面探讨物质方法开发中色谱柱的重要性和筛选方法。
色谱柱的选择是物质方法开发中的关键环节。
在选择色谱柱时，首先需要考虑样品的性质和分析要求。
对于极性样品，应选择具有不同极性相的色谱柱；对于非极性样品，应选择C18、C8等反相色谱柱。
还需考虑样品的分子大小和相对溶解度等因素，选择适合的色谱柱孔径和颗粒大小。
还需考虑分析条件（如流速、温度等）对色谱柱的影响，以确保色谱分离的准确性和稳定性。
在物质方法开发中，色谱柱的筛选是一个复杂而重要的过程。
需根据分析需求确定色谱柱的类型和特性，然后通过实验方法对多种色谱柱进行筛选。
在筛选过程中，可以采用不同的色谱方法（如高效液相色谱、气相色谱等）和不同的色谱柱类型（如反相色谱柱、离子交换色谱柱等），以获取最佳的色谱分离效果。
还需考虑色谱柱的耐受性和稳定性，以确保色谱柱在长期分析中的可靠性和耐用性。
物质方法开发中还需要考虑色谱柱的选择和筛选与样品准备和前处理等因素之间的关系。
对于不同的样品和分析要求，可能需要不同的样品前处理方法（如溶剂提取、固相萃取等），以获得所需的分析结果。
在进行色谱柱筛选时，还需考虑前处理方法对色谱分离的影响，以确保色谱分离的准确性和可靠性。
第二篇示例：色谱柱是色谱分析中至关重要的一部分，对于色谱技术的发展起着至关重要的作用。
选择合适的色谱柱对于色谱分析的准确性和稳定性有着至关重要的影响。
而如何开发并筛选出适合的色谱柱，也是一个需要认真研究的课题。
物质方法的开发在色谱柱的筛选中扮演着重要的角色，通过不同的物质方法，可以筛选出适合的色谱柱，从而提高色谱分析的性能和效果。
液相色谱教程液相色谱方法开发
液相色谱教程液相色谱方法开发液相色谱(Liquid Chromatography，简称LC)是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
液相色谱方法的开发是为了解决特定问题和满足特定需求而进行的，本文将介绍液相色谱方法开发的一般步骤和注意事项。
液相色谱方法的开发步骤如下：1.确定分离目标：首先确定需要分离和分析的目标化合物，包括确定化合物的物理化学性质和分离特性等。
2.选择色谱柱：根据分离目标，选择合适的色谱柱。
色谱柱的选择应考虑样品的性质、分离机理、应用要求等因素。
3.选择流动相和梯度条件：根据分离目标，选择合适的流动相（包括溶剂和缓冲剂等）和梯度条件（包括流动相的组成和梯度程序等）。
4.优化色谱条件：通过改变流动相组成、流速、柱温等参数，优化色谱条件，达到最佳分离效果。
5.建立分析方法：根据样品的特点和分析需求，建立分析方法。
包括确定检测器的波长或离子选择器、设置进样量和检测浓度范围等。
6.方法验证：对开发的液相色谱方法进行验证，包括准确度、精密度、线性范围、检出限等指标的确定。
液相色谱方法开发过程中需要注意的事项如下：1.样品制备：样品的制备要充分考虑到样品的性质和分析方法的要求，如需要进行前处理、提取、洗脱、浓缩等。
2.色谱柱保养：液相色谱柱的保养对于保证色谱方法的重复性和稳定性至关重要。
包括定期清洁、适当的保存和使用。
3.流动相准备：流动相的配制要严格按照要求，注意流向的调整、PHA值的调节、气泡和杂质的排除等。
4.柱温控制：柱温对色谱分离的效果有很大影响，需要根据分析需求对柱温进行控制和调节。
5.检测器选择：根据分析的目标和样品的特性，选择合适的检测器，如紫外检测器、荧光检测器、质谱检测器等。
6.数据处理：对色谱结果进行正确的数据处理和解释，包括峰面积计算、峰识别和归一化等。
总结来说，液相色谱方法的开发是一个系统的工程，需要综合考虑样品特性、分析需求和分离机理等因素。
液相色谱柱的选择与使用
液相色谱柱的选择与使用
目录 一、液相色谱柱的选择 1、 分离模式的选择 2、 C-18柱的性能影响因素 3、 保留值与pH的关系 二、液相色谱柱的安装 1 、液相色谱柱的结构 2、 色谱柱的安装 三、液相色谱柱的使用 1 、样品的前处理 2 、流动相的配制 3、 色谱柱的平衡 4、 流动相流速的选择 四、 分析条件调整的影响 五、液相色谱柱的维护
• 可电离的组份的分离可能会随pH变化发生显著变化 —甚至很小的 0.05–0.25 个pH变化单位.
保留值与pH的关系
pH变化： 0.2个pH(7.0~7.2) 保留时间改变： 1.2分钟 (13.6~14.8分钟)
保留时间随pH 改变不明显
保留时间随pH改变 不明显(酸性环境中)
保留时间
保留值与pH的关系
•碳覆盖率 •封端
•硅胶纯度 •色谱柱尺寸 •颗粒形状 •粒径 •表面积 •孔径
C-18柱的性能影响因素：色谱柱物理性质
硅胶纯度 • 填料硅胶的纯度与残留金属离子浓度
色谱柱尺寸 • 填料床的长度和内径
颗粒形状 • 球型或不规则型
粒径 • 平均颗粒直径, 通常3-10µm
表面积 • 颗粒外表面和内部孔表面的总和, 以m2/gram表示
封端 • 键合步骤之后, 用短链将裸露的硅羟基键
合后封闭起来
C-18柱的性能影响因素：键合类型
CH3
键合类型对色谱分离的影响 ： O Si
单齿键合：
CH3
OSi
CH3
提高传质速率, 加快色谱柱平衡
O Si CH3
CH3
OSi
CH 3
双齿键合：
O Si
增加色谱柱稳定性, 增加色谱柱的载
安捷伦液相色谱柱选择指南
安捷伦液相色谱柱选择指南000什么是色谱柱1.简介英文名chromatographiccolumn装填有固定相用以分离混合组分的柱管。
多为金属或玻璃制作。
有直管形、盘管形、U形管等形状。
色谱柱可分为填充柱和开管柱两大类。
液相色谱通常均采用填充柱。
色谱柱的分离效果取决于所选择的固定相，以及色谱柱的制备和操作条件。
色谱是一种分离分析手段，分离是核心，因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。
对色谱柱的要求是柱效高、选择性好，分析速度快等。
市售的用于HPLC的各种微粒填料如多孔硅胶以及以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球(包括离子交换树脂)、多孔碳等，其粒度一般为3,5,7,10μm等，柱效理论值可达5~16万/米。
对于一般的分析只需5000塔板数的柱效;对于同系物分析，只要500即可;对于较难分离物质对则可采用高达2万的柱子，因此一般10~30cm左右的柱长就能满足复杂混合物分析的需要。
柱效受柱内外因素影响，为使色谱柱达到最佳效率，除柱外死体积要小外，还要有合理的柱结构(尽可能减少填充床以外的死体积)及装填技术。
即使最好的装填技术，在柱中心部位和沿管壁部位的填充情况总是不一样的，靠近管壁的部位比较疏松，易产生沟流，流速较快，影响冲洗剂的流形，使谱带加宽，这就是管壁效应。
这种管壁区大约是从管壁向内算起30倍粒径的厚度。
在一般的液相色谱系统中，柱外效应对柱效的影响远远大于管壁效应。
2.色谱柱的构造色谱柱由柱管、压帽、卡套(密封环)、筛板(滤片)、接头、螺丝等组成。
柱管多用不锈钢制成，压力不高于70kg/cm2时，也可采用厚壁玻璃或石英管，管内壁要求有很高的光洁度。
为提高柱效，减小管壁效应，不锈钢柱内壁多经过抛光。
也有人在不锈钢柱内壁涂敷氟塑料以提高内壁的光洁度，其效果与抛光相同。
还有使用熔融硅或玻璃衬里的，用于细管柱。
色谱柱两端的柱接头内装有筛板，是烧结不锈钢或钛合金，孔径0.2~20µm(5~10µm)，取决于填料粒度，目的是防止填料漏出。
液相色谱柱的选择和方法开发
液相色谱柱的选择和方法开发液相色谱（HPLC）是一种高效、准确和灵敏的分离和分析技术，在许多领域中具有广泛的应用。
液相色谱柱的选择和方法开发是HPLC分析中的关键步骤之一，它们直接影响到分离效果和分析结果的准确性和可靠性。
本文将详细介绍液相色谱柱的选择和方法开发的相关内容，并提供一些建议和注意事项。
一、液相色谱柱的选择1.分子排阻柱（SEC）：适用于分离和分析高分子物质，如蛋白质、多肽、聚合物等。
根据目标物分子量的大小选择不同的分子排阻柱。
2.反相柱（RP）：适用于分离和分析非极性、低极性化合物。
常用的反相柱有C18、C8、C4等，根据目标物的亲疏水性选择不同的柱材和碳链长度。
3.离子交换柱（IEC）：适用于分离和分析离子化合物，如酸、碱、金属离子等。
根据目标物的离子性质选择阴离子交换柱或阳离子交换柱。
4.亲合性柱：适用于分离和分析具有特定亲和性的目标物，如抗体、酶、细胞等。
常用的亲合性柱有亲和色谱柱、亲和半制备色谱柱等。
二、方法开发方法开发是指在具体的分析目标下，通过调整柱材、流动相、柱温、检测器等参数，寻找出最佳的分离条件和分析方法。
方法开发的过程中，需要进行实验设计、参数调整和结果评估等步骤。
1.实验设计：按照试验的目的和要求，设计合理的实验方案。
包括选择柱材、柱尺寸、流动相、梯度条件、柱温等参数，并确定荧光标准品的浓度和检测波长。
2.参数调整：根据实验设计，逐步调整各种参数，寻找出最佳的分离效果。
需要注意的是，在参数调整的过程中，要逐步变化，避免一次性调整多个参数。
3.结果评估：通过比较不同条件下的分离效果和结果，评估方法的可行性和可靠性。
主要评估指标包括分离度、保留时间、峰形等。
注意事项：1.根据样品的性质和分析目标选择合适的柱材和柱尺寸。
不同的柱材和柱尺寸对分离效果和分析结果有直接影响。
2.合理选择流动相和梯度条件。
流动相的选择应考虑样品的亲疏水性质，梯度条件应选择合理的温度和时间。
怎样选择合适的液相色谱柱
HPLC色谱柱一、色谱分离模式——正相、反相、离子交换、离子抑制、亲水作用正相色谱是色谱的经典形式，使用极性固定相和非极性流动相。
洗脱物通过其极性基团和固定相上的极性基团作用被保留。
这种应用，经典的是使用未键合的硅胶和氧化铝，但现在使用的极性键合相有以下优点：键合相平衡快，对流动相中微量的水不敏感，和产生不同的选择性。
二醇基键合相比纯硅胶极性小，平衡速度快；氰基键合相是保留能力最小的正相吸附剂；氨基键合相适宜分离芳香族碳氢化合物反相色谱已成为最流行的色谱分离模式。
反相色谱中，固定相非极性，流动相极性。
典型的流动相一般是水或水系缓冲液与甲醇、乙腈或四氢呋喃的混合物。
典型的固定相是用脂肪烃硅完化的硅胶键合相，其它用于反相色谱的基质有石墨化碳和苯乙烯-二乙烯苯基质。
反相色谱的性能还受残留的硅醇基的活性的影响。
硅醇基与洗脱物的极性基团作用。
因此，根据硅醇基的活性不同，填料显示出不同的选择性。
而且，常能观察到碱性物质在硅醇基活性高的填料上产生拖尾峰。
修饰硅醇基活性的一个办法是封端，即用硅烷化试剂把硅醇基转变成三甲基甲硅烷基基团。
不过，即使是作了封端，基质表面的硅醇基密度还是比键合配基的密度大。
硅醇基的活性也和硅胶的预处理（基质灭活）、硅胶纯度有关。
碱性分析物的色谱分析推荐使用高纯度硅胶基质、充分封端的键合相。
未封端的填料在许多应用中有可以获得不同选择性的优点。
使用带有离子电荷的固定相，使根据洗脱物电荷进行分离成为可能。
对于硅胶基质的离子交换填料，离子基团通过标准的硅烷化技术键合到硅胶表面。
对于聚合物基质的离子交换填料，离子交换基团分布于交联聚合物的整体（through the matrix）。
有四种离子交换填料：强/弱阳离子交换填料和强/弱离子交换填料。
弱离子交换填料的特征是电量与pH值有函数关系。
以羧酸基为功能基的离子交换剂是弱阳离子交换剂的代表。
弱阴离子交换剂由一级、二级、三级铵为功能基。
大部分强离子交换剂的电荷与pH值无关。
常用液相色谱柱选择
常用色谱柱简介气相色谱毛细柱（键合，聚二甲基硅氧烷）HP-1，DB-1，P-1，CP-SIL5CB，Ultra-1,007-1,RTx-1,AT-1类似固定相：SE-30，SP-2100，OV-1，OV-101,使用温度：-60℃-320℃应用范围：烷烃，芳烃，多环芳烃，醇，酚，酮，酯，醛，胺，卤代烃，吡啶，糖衍生物，氨基酸衍生物，维生素衍生物，镇痛药，农药，溶剂，胆固SPB-50型中等极性柱醇，香料，咖啡，食品添加剂等。
(键合, 50%二苯基,50%二甲基聚硅氧烷)对照品牌：HP-50，HP-17，DB-17，RTx-50，AT-50 SPB-5型弱极性柱类似固定相：OV-17, SP-2250,使用温度：30℃-310℃（键合，5%苯基，95%甲基聚硅氧烷）应用范围：烷烃，低沸点芳烃，多环芳烃，醇，甘对照品牌：HP-5，DB-5，BP-5，CP-SIL 8CB，油三酸酯，喹啉，卤素化合物，香料，农药，酯，Ultra-2, ,RTx-5,AT-5镇痛药，除草剂等。
类似固定相：SE-54，SE-52，OV-73 使用温度：-60℃-320℃PTE-5，PTE-5QTM型弱极性柱应用范围：烷基苯，多环芳烃，醇，酚，酮，脂肪(MS专用柱,键合,5%苯基,95%甲基聚硅氧烷)酸酯，苯二甲酸酯，硝基芳烃，芳胺，烷基胺，联对照品牌：HP-5 MS，DB-5 MS, DB-5.625，XTI-5，苯胺，卤代烃，多氯联苯，，糖类衍生物，维生素衍BPX625，半挥发污染物分析柱（US EPA方法525，生物，有机酸，镇痛药，农药，抗组胺药，溶剂，625.5，625）生物碱，防腐剂，香料等。
类似固定相：SE-54,SE-52 使用温度：-60℃-320℃应用范围：多氯联苯，胺，有机磷，有机氯农药，SUPELCOWAX 10型极性柱含氯除草剂，酚，苯胺，香料等。
(键合,聚乙二醇二万)对照品牌：HP-Wax，DB-Wax，BP-20，CP-Wax 52CB，SPB-1701型中等极性柱HP-INNO Wax,AT-Wax(键合, 14%氰丙基,86%二甲基聚硅氧烷)类似固定相：PEG-20M, CARBOWAX-20M,使用温对照品牌：HP-1701，DB-1701，RTx-1701，AT-1701，度：35℃-280℃BP-10，CPSil19CB应用范围：低沸点芳烃，醇，酮，酸，酯，醛，醚，类似固定相：OV-1701,SP-2250 使用温度：室温-280乙二醇，丙二醇，甘油，吡啶，胺，亚硝胺，卤代℃烃，胆汁酸衍生物，冰片，薄荷，精油，香料，酒，应用范围：醇，卤素化合物，有机氯农药，酸性药苯乙烯，茶，溶剂等。
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2022/3/23
幻灯片制作：WSY18
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柱填料对C18色谱柱性能的影响：比表面积
每克填料的表面积，与粒度，孔径有关 比表面积大，保留增加，载样量增加，平衡时间
增加(梯度洗脱尤为注意) 根据需要选择合适的比表面积
2022/3/23
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柱填料对C18色谱柱性能的影响：孔径I
mAU
VWD1 A, Wavelength=230 nm (LPF\07091208.D)
mAU
VWD1 A, Wavelength=230 nm (LPF\07090605.D)
2.275 253.288
Area:
2.450 3.471
3.008 4.084
40
50 40
35
30
TF=1.31
30
同一厂家相同硅胶基质的反相柱：
• 保留值随含碳量的增加而增加
• 比表面积越大，保留值越大 • 键合碳链越长，保留越大
C18 ≈ C8>C3>C1，长链之间差别不大
固定相对色谱柱性能的影响：残余硅羟基的影响
硅胶双层表面修饰后
• 新增加表面层硅羟基活性更低－新硅羟基pH=5.2， 普通硅
羟基pH约为3.5 更对称的峰型，提高柱效，提高灵敏度
• 硅胶表面更均匀－硅胶微晶形成过程中的不光滑表面被覆盖
重现性更好
• 表面纯度更高－硅胶金属杂质被覆盖
极性化合物保留和分离更好
色谱原理 色谱分类：气相/液相和高效液相（HPLC）
；反相/正相/离子交换/HILIC/混合固定相 色谱功能：分析（种类/定量），纯化 液相色谱仪器结构及功能：泵，脱气机，混
合器，进样器（阀），色谱柱，柱温箱，检 测器（流通池）
2022/3/23
幻灯片制作：WSY18
4
2022/3/23
分离度
杂化及表面杂化 整体柱 壳层柱
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柱填料对C18色谱柱性能的影响：硅胶纯度II
硅胶纯度－金属含量
d
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幻灯片制作：WSY18
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固定相对色谱柱性能的影响：硅羟基的影响
残余硅羟基的影响
普通硅胶当流动相的 pH 值大于 4.5-5.0 时，表面的硅羟 基会带负电荷，碱性化合物拖尾。
合类型；流动相，温度 灵敏度《 粒径，基质表面特性，键合类型；流动相，温度 稳定性和重现性《 基质表面特性，键合类型；流动相，温
度
流动相 《 pH，缓冲盐种类，溶剂；
2022/3/23
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影响色谱柱性能的主要因素
1、 色谱柱的构型 • 色谱柱内径 • 色谱柱长度
2、 固定相柱填料 • 粒径 • 比表面积 • 孔径 • 孔隙率 • 基质表面特性： - 表面活性：硅胶纯度、硅羟基的酸性、均匀性和数量 - 耐碱性 • 键合类型 - 官能团、是否封尾 - 键合相的保留行为、耐酸性
AUMI Baulo StableBond C18, 2.1×50mm, 5µm
Brand A C18 2.1×50mm, 5µm
Phenomenex Luna C18, 2.0×50mm, 5µm
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双层表面修饰
代表产品：
StableBond C18， PolarBond C18， SurfBond C18
多孔材料的95%以上表面 在孔内部
样品分子直径小于平均孔 径，才能进入微粒内部
孔径至少是样品流体学直 径的4倍
300Ǻ孔径用于：超过50个 氨基酸的肽或25个残基的低 聚寡核苷酸
样品分子直径小于平均孔径， 才能进入微粒内部
2022/3/23
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柱填料对C18色谱柱性能的影响：孔径II
硅胶纯度－金属含量
OH OH
OH
2.3-二羟基萘
HO
2.7-二羟基萘
Venusil MP C18 5μm, 4.6mm×150mm Brand H, C18 Column 5μm, 4.6mm×150mm
Brand W, AQ Column 5μm, 4.6mm×150mm
mAU
VWD1 A, Wavelength=230 nm (LPF\07091702.D)
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键性化合物峰形对比
C18 (non-endcapped, twin-layer
Brand A C18( nonendcapped, )
Test conditions: Column dimension: 4.6 mm x 150mm Sample: doxepin, nortriptyline, trimipramine amitriptyline Mobile phase: Acetonitrile/0.01M sodium phosphate (pH=6) = 70/30 Temperature: 30 oC Flow: 1 mL/min Detection: UV 254 nm
0
2
4
6
8
10
min
流动相： 甲醇：水=65：35
流速：
1 mL/min
温度：
35℃
检测波长： 230 nm
进样量： 20 μL
2022/3/23
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硅胶基质类型及发展史
Type A：原料来源：水玻璃；高金属含量， 高活性，极性化合物容易形成拖尾和死吸附
Type B：原料来源：有机硅烷（四乙氧基硅 烷）水解/烧结/酸洗
TF=1.42
40
25
30
20
20
20
15
10
10
10
A2r.ea8:84900.399
TF=1.39
5
0
0 0
0
1
2
3
4
5
6
7
min
0
1
2
3
4
5
6
7
min
0
1
2
3
4
5
6
min
Brand Z,C18 Column 5μm, 4.6mm×150mm
mAU
VWD1 A, Wavelength=230 nm (LPF\07091202.D)
O CH3 Si O CH3 O CH3
Hydrolysis
OH
Si O Si O Si O Si (CH3)2Si-R
OOO
OH
Si O Si O Si O H
OOO
OH
Si O Si O Si O Si (CH3)2Si-R
OOO
OH
Si O Si O Si O H
OOO
OH
Si O Si O Si O Si (CH3)2Si-R OH
2022/3/23
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Saponins Extract
Zorbax SB C18
ASB C18
4.6x150 mm column, 1% formic acid/MeOH= 80/20
2022/3/23
幻灯片制作：WSY18
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固定相对色谱柱性能的影响：残余硅羟基的影响
0.01 ng/mL Pseudoephedrine
解决方法
封尾 双层表面修饰 表面杂化
2022/3/23
幻灯片制作：WSY18
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固定相对色谱柱性能的影响：残余硅羟基的影响
封尾
键合填料与小硅烷进行后续反应，如三 甲基氯硅烷，反应掉部分残余硅羟基，
以增加表面覆盖率。
缺点：
不能完全反应（仍有50%的硅羟基未被 反应） 在pH<3时，TMS易流失，耐用性，稳定 性不好
灵敏度
2022/3/23
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色谱柱类型、选择和方法开发
2022/3/23
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色谱柱与色谱条件对色谱性能的影响
分离度《 - 选择性 〈 键合类型，基质表面特性；流动相、温度 - 柱效 〈 保留体积，粒径，柱长，基质表面特性；流动相， 温度，上样量，流速
峰对称性《 基质表面特性，键合类型，流动相，温度 保留体积《 柱长，孔隙率，比表面积，基质表面特性，键
2022/3/23
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11Leabharlann 色谱柱的构型对色谱柱性能的影响
2022/3/23
幻灯片制作：WSY18
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色谱柱的构型对色谱柱性能的影响：长度和直径
色谱柱尺寸 对色谱分离的影响：
• 短柱 (15-100mm) - 运行时间短, 柱压低 • 长柱 (150-250mm) - 分辨率高, 运行时间长 • 窄径柱 ( 2.1mm) – 满足检测器和样品量限制 • 宽径柱 (3-7.8 mm) - 载样量高，抗污染，寿命
2022/3/23
幻灯片制作：WSY18
TMS
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固定相对色谱柱性能的影响：残余硅羟基的影响
不同长度和体积的键合相对表面覆盖率的影响
2022/3/23
幻灯片制作：WSY18
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固定相对色谱柱性能的影响：残余硅羟基的影响
双层表面修饰
降低表面硅羟基活性，硅胶表面更加均匀
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Brand U,C18 Column 5μm, 4.6mm×150mm